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[成果] 1700240656 广西
R57 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:肝脏疾病是中国常见病、多发病,其中肝硬化是重要的致死原因。骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell, BMSC)是骨髓内的一种非造血干细胞,既有自我复制和高度增殖的能力,又有多向分化的潜能,在体内外均可有效促进肝星状细胞的凋亡。BMSC移植是近年来发展较快的一项新治疗手段,大大提高了肝硬化等肝脏疾病治疗的可行性、安全性、有效性。国内有关BMSC诱导分化的方法、移植细胞的筛选、移植时间的确定、评价原型的标准及移植后受体疗效的评价尚未形成共识。鉴于此,开展HGF诱导骨髓造血干细胞分化为肝细胞的研究成为临床亟需解决的重要课题。该课题来源于广西教育厅基金项目“桂教科研[2002]316号 自筹第13号”。该项目使用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor ,HGF)体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs),分别观察细胞形态特征;将培养出的细胞进行碱性磷酸酶染色;免疫细胞化学法检测甲胎蛋白、细胞角质蛋白18及白蛋白的表达;糖原染色检测细胞糖原的表达;结果显示HGF诱导后,细胞从长梭形逐步转变为圆形,失去放射状排列的特点;培养至第7d的细胞进行碱性磷酸酶染色呈阳性。电镜下发现细胞呈肝索样排列,细胞间有大量的微绒毛,细胞内可见到丰富的粗面内质网、线粒体、溶酶体、吞饮泡,极类似于大鼠肝细胞电镜下的结构。提示BMSCs 在 HGF诱导下分化为肝样细胞,肝细胞标志物表达与肝细胞发育过程吻合;其形态学上符合肝细胞的超微结构。该项目的完成建立BMSC的分离培养鉴定和诱导分化体系,应用HGF诱导大鼠BMSC分化为肝样细胞,为临床应用奠定理论是实验基础。由于BMSC具有来源充足,体外增殖能力强,可以大量扩增,并可完全克服免疫排斥,因此有极好的发展前景。因此,该项目的研究成果具有广阔的临床应用前景和社会效益。该项目具有较高的先进性和创新性,科学性和逻辑性强,涉及学科广泛,技术手段先进,技术路线合理,结果可靠。该项目完成后已公开发表国家正式期刊论文7篇,培养博士1名,硕士7名。并以此为基础,2012年广西自然科学基金3项,2010年获得广西高校人才小高地创新团队项目“慢性肝病临床治疗”。
[成果] 1700240657 广西
R44 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:胆道和胰腺疾病的准确诊断一直是临床上的难点和重点,这对于指导治疗方案和判断患者预后有重要意义。超声内镜引导下细针穿刺(EUS-guide fine needle aspiration, EUS-FNA) 是一种准确和安全的诊断方法。对EUS-FNA的穿刺标本行细胞学(smear cytology)检查,可以显著提高疾病的诊断准确性。除了传统细胞涂片法外,新近还出现了液基细胞学(liquid-based cytology)、细胞块(cell block)检查等方法。然而,多项研究表明,细胞块联合免疫组化技术(细胞块技术)后能够显著的提高疾病的诊断准确率,尤其是恶性肿瘤诊断方法优势更为明显。课题组前期研究表明对胰腺实性假乳头状肿瘤(SPTP)及胰腺内分泌肿瘤(PETs)的诊断,细胞块显示出绝对优势,细胞块行免疫组化染色后,其诊断准确率均达100%。国内外研究均表明,EUS-FNA可以安全、有效获取病灶组织标本,而细胞块染色以及细胞块技术对于准确诊断胆胰疾病有极高的临床价值。然而,迄今为止国内尚未见有EUS-FNA及细胞块技术在诊断胆胰疾病的研究报道,而且国外报道样本量较小。该研究的完成将深化对EUS-FNA及细胞块技术对于胆胰疾病诊断价值的认识,对制订胆胰疾病的正确治疗方案有重大的临床意义。该项目系广西壮族自治区教育厅高校科研项目(项目编号: LX2014076)。该项目历时近3年,收集胰腺实性占位性病变72例,均行超声内镜引导下细针穿刺活检取材,分别行常规涂片、液基涂片及细胞块结合免疫组化检查。结果72例患者中,最终确诊胰腺肿瘤61例,良性病变11例。课题组证实了细胞块结合免疫组化诊断准确率高于常规涂片细胞学及液基细胞。术后患者均无出血、感染、急性胰腺炎等并发症。结论:细胞块结合免疫组化对胰腺肿瘤的诊断准确率明显高于常规涂片和液基涂片。对于胰腺假乳头状瘤和胰腺内分泌肿瘤,细胞块结合免疫组化的诊断准确率亦高于常规涂片和液基涂片细胞学。该项目结果显示超声内镜引导下细针穿刺是一种安全有效的诊断胰腺占位病变的方法,具有高敏感度和特异度。胆道和胰腺疾病的准确诊断一直是临床上的难点和重点,这对于指导治疗方案和判断患者预后有重要意义。但国内未见有超声内镜穿刺活检(EUS-FNA)及细胞块联合免疫组化染色(细胞块技术)在胆道和胰腺疾病诊断价值的研究报道。该研究的结果将极大提高胆胰疾病诊断价值准确度,并对制订胆胰疾病的治疗方案提供病理学依据。该项目完成后共发表相关论文4篇(其中SCI收录1篇,国内核心期刊3篇),培养硕士2名。
[成果] 1700240658 广西
R54 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:经静脉留置针途径给予化疗药物治疗恶性肿瘤已被临床广泛应用,由于化疗疗程长、化疗药物毒性大、浓度高及静脉留置针的机械性刺激易使血管内膜损伤,平滑肌痉挛,常引起不同程度的静脉炎。静脉炎的发生,往往造成静脉通道建立困难,并且随着用药次数的增加,静脉损伤的程度会越来越严重,不仅给患者造成痛苦,而且也给护理人员增加了静脉穿刺的难度和工作量,还会使化疗疗程不能顺利完成而影响疾病治疗的效果。因此,肿瘤化疗患者静脉保护问题一直为护理界所关注。恶性肿瘤化疗患者化疗性静脉炎发生率远高于其他疾病输液的患者,这是由于恶性肿瘤患者本身易出现继发性高凝状态以及强刺激的化疗药物易对血管内皮造成损伤等因素有关。尽管临床工作者进行了多种中西医结合方式干预,山莨菪碱作为临床成熟用药对防治化疗性静脉炎也有较好疗效,但研究对象多为患者,观察判断的指标也多为患者主诉及血管外观变化,有很大主观性,由于缺乏相应的基础研究支持,作用机制不明确,使得各种措施针对性不强。该课题选择无疾病动物、输注化疗药物建立化疗性静脉炎动物模型,选择知情同意临床置管化疗患者为研究对象,通过山莨菪碱进行干预,应用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)、免疫透射比浊法、全自动生化分析仪等技术手段检测干预前后血清中相关分子标志物血管内皮生长因子(VEGF)、D-二聚体(DD)、血管假性血友病因子(vWF)的表达,炎性因子TNF-α的表达,凝固法检测凝血指标及相关血液流变学指标FIB、APTT、PT、TT、PLT、PCT、MPV、PDW、白细胞计数等,从血管内皮损伤、凝血状态、血流动力学及炎症因子影响等角度对比分析药物干预效果,以期更深入地了解山莨菪碱对静脉血管的保护作用机制,为临床合理选择有效防治化疗性静脉炎发生的方法、延长血管的使用寿命提供理论依据,从而最大限度地降低化疗的副反应,减轻化疗病人的痛苦,提高生活质量。动物实验研究结果表明:随静脉留置针留置时间延长,静脉留置针导致静脉炎发生增加,且程度越严重;同时,静脉血栓形成增加及严重程度加重。静脉留置针致血栓形成情况不可以肉眼观判断,实际上血管及其周围组织的病理性损伤早在局部可见反应出现前已经发生变化。vWF 和DD 浓度的测定对预测留置针致静脉血栓形成有一定的参考价值,静脉留置针置入后应尽早进行干预,防止静脉血栓形成。皮下注射低分子肝素可明显降低兔静脉留置针致血栓形成模型血清vWF 和DD 浓度,动态观察vWF、DD 值变化可以作为预防留置针致静脉血栓的给药时机参考及干预效果的评价。山莨菪碱干预可以引起TNF-α、DD、VEGF 浓度变化,从而影响血栓的形成,其中VEGF 变化出现较早,对血栓形成有提示作用。山莨菪碱干预对血液PT、APTT、TT、FIB 和PLT、MPV、PDW、PCT 凝血相关指标影响不明显。留置针致血栓形成与DD、TNF-α、VEGF、PT、APTT、TT、FIB、PLT、MPV、PDW、PCT 指标相互间有一定相关关系。临床研究结果表明:山莨菪碱霜在降低化疗性静脉炎的发生率、减轻患者局部疼痛方面的效果均优于喜疗妥,且提高患者预防的主动性和局部皮肤的舒适度。课题研究对临床静脉导管及化疗药物的安全使用、提高静脉炎的发现率、保证化疗的顺利进行有积极的促进作用,将药物干预防护应用到医院的肿瘤、化疗科,使病人受益。通过参加全国静脉输液会议大会发言、医院临床科室护理人员培训、护理专业学生培训、专科护士班培训,让护理工作者获取更全面的化疗药物使用知识,在让病人受益的同时护理人员对患者的保护意识也有所提高,受益人员共1100多人次。课题的开展,培养4名护理学研究生掌握科研的基本方法,并具有一定的实践和实验技能,已有3名护理学研究生获硕士学位,1名研究完成临床观察研究。在国内《中文核心期刊要目总览》核心期刊发表科研论文1篇,中国科技核心期刊录用1篇,获“中华护理学会全国静脉输液治疗护理学术交流会议”优秀论文三等奖1篇。
[成果] 1700240659 广西
R739.8 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:课题来源与背景: 口腔癌绝大多数为鳞状细胞癌,包括发生于舌,颊,口底,唇,牙龈等粘膜的癌瘤,其产生通常经历由正常上皮—上皮单纯性增生—上皮异常增生—癌—转移癌的过程。口腔癌发病率高,且浸润和转移出现较早,一旦转移出现,但临床尚无好的治疗方法,要想提高口腔癌的治愈率和生存率,研究出新的、行之有效的治疗方法,首先需要一个与人类口腔癌发生发展尤其是淋巴道转移过程及病理表现类似的动物模型。该课题组前期实验通过采用4NQO饮水法喂养Balb/c小鼠,观察和总结诱癌剂4NQO对Balb/c小鼠口腔粘膜的诱癌作用,确定其致癌的情况,已成功获得方法简便,重复性好,与人类口腔癌发生、发展、转移类似的Balb/c小鼠口腔癌及淋巴道转移模型,其中淋巴道转移率达100%。通过不同种属的比较研究,探索癌发生发展转移的机理成为一种可靠的研究方法。在构建模型成功的基础上,课题组选择了一些认为在人类口腔癌发生发展转移过程中起了重要作用的因子进行比较研究,试图获取它们参与口腔癌生物学进化过程中的证据以及探索其重要性。研究目的与意义: 肿瘤具有高度的基因异质性和由此导致的生物学行为多样性,肿瘤基因表达谱的异常复杂性阻碍了肿瘤关键基因的定位. 现认为各种肿瘤累及的基因改变可能高达数百个, 其中既含有肿瘤形成所必需的关键性基因事件, 也含有仅因肿瘤基因组的不稳定性而产生的伴随性改变,而如何将那些影响肿瘤发生发展的关键性分子改变从伴随性改变中识别出来,则是肿瘤研究领域面临的重要挑战。近年来人们开始意识到那些跨种属保守存在的共同基因改变,可能具有更重要的功能。跨种属的肿瘤基因比较研究策略遂基于这一认识而产生。国外学者认为这种高性价比的研究策略极有希望加速发现人类肿瘤基因的进程。其原因在于基因编码区和调控元件这样的重要生物序列在物种进化中是保守的,即生物学功能重要的分子应当是在生物进化过程中的保守分子。可通过比较人和小鼠的口腔癌发生发展转移过程中的一些基因表达功能差异,利用小鼠模型作为一滤器,鉴别这些基因在肿瘤形成中起关键作用或只是伴随作用的, 并由此筛选出在人类肿瘤发生发展中起关键作用的分子。为进行口腔癌前病变、口腔癌及其转移机制的研究,以及预防和治疗口腔癌提供有力的工具和指标。创新之处:首次完整的从口腔癌发生、发展、到淋巴结转移连续过程的动物模型上进行相关癌发生、淋巴道转移机理研究。首次有条件进行人与小鼠的口腔癌发生、发展、到淋巴结转移连续过程的比较研究。首次在小鼠口腔癌发生、发展、到淋巴结转移连续动态过程中,进行N-cadherin、TGF-β1、TP53、RB1CC1、HIF-1α、E-cadherin的表达研究,成果的科学意义和应用前景: 通过实验选取了合适的参数,采用免疫组化方法检测了人和小鼠各组织中N-cadherin、TGF-β1、TP53,RB1CC1、HIF-1α、E-cadherin的表达和分布情况。采用合适的统计学方法,分析比较不同种属间(人与小鼠)各指标的表达差异性,探讨其在口腔癌发生、发展及转移中的作用,并进一步验证了课题组的动物模型与人类的癌发生发展、转移过程的相似性、差异性及可靠性,为进行口腔癌前病变、口腔癌及其转移机制的研究,以及预防和治疗口腔癌提供有力的工具和指标。该研究已发3篇论文,均为国内核心期刊。
[成果] 1700240881 广西
R59 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:中华眼镜蛇咬伤病情急,发展变化快,临床表现多样,是急诊的一种常见危重病症;中华眼镜蛇咬伤中毒极易导致皮肤软组织局部坏死和多器官功能障碍综合征(MODS),如何有效的防止中华眼镜蛇咬伤中毒导致的局部皮肤软组织坏死以及MODS 仍然是当今世界性的医疗难题;在伤口的近心端进行局部绷扎一直是毒蛇咬伤后阻止毒素吸收的一种常规方法之一,然而中华眼镜蛇咬伤主要是以细胞毒素表现较为明显,局部皮肤及软组织肿胀坏死显著而全身中毒严重较轻,如果中华眼镜蛇咬伤也常规进行局部绷扎可能会加重局部皮肤以及软组织的肿胀与坏死。该项目得到了广西自然科学基金的资助,总共发表相关文章16篇,其中SCI6篇;国内中文核心期刊论著8篇,科技核心期刊2篇,成功培养硕士研究生一人。通过对该院中华眼镜蛇咬伤的完整临床资料进行分析,其中两项成果均为国内外首次发现,具备显著的创新性与先进性:其一、发现中华眼镜蛇咬伤后进行局部绷扎反而加重局部皮肤和软组织的肿胀、坏死,增加植皮率,进而提倡中华眼镜蛇咬伤后不宜进行局部绷扎治疗,该成果系已经发表在SCI 收录期刊[Wang W(王威), Chen QF, Yin RX, et al. Clinicalfeatures and treatment experience: a review of 292 Chinesecobra snakebites. ENVIRON TOXICOL PHAR. 2014; 37(2): 648–655. (IF=2.005)] ;其二、磺胺嘧啶银霜可快速、高效减轻中华眼镜蛇咬伤导致的局部皮肤和软组织的肿胀和坏死,成果发表在SCI 收录期刊[Chen QF, Wang W *(王威)(通讯作者), Li QB, et al. Effects of JiDesheng anti-venom tablets externally applied skin and soft-tissue necrosis following Chinese cobra bite: Aretrospective study. J TRADIT CHIN MED.2014; 34(2):150-154. (IF=0.589)]。该两项成果对临床治疗中华眼镜蛇咬伤中毒的指导意义重大,经在广西白色市、玉林市、合浦县,昭平县等地进行推广应用后,获得了医务工作者的肯定和患者的广泛好评,效果显著,大大的减轻了中华眼镜蛇咬伤导致的局部皮肤和软组织的肿胀和坏死范围,降低了植皮率和住院时间,节约了医疗费用。该治疗方法适用于所有中华眼镜蛇咬伤中毒的病例、安全性高、操作容易、疗效肯定,极具推广前景。
[成果] 1700450570 广西
R56 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:立项背景:关于ALI的药物的治疗研究均没有什么实际的临床意义(包括激素,组织因子单抗及活化的蛋白C等),该研究发现甘草酸二铵对ALI具有一定抗炎作用,可使肺组织糖皮质激素受体表达上调,并能下调NF-κB的表达。该研究为中药治疗ALI提供理论依据,具有一定的科学意义,如能进一步明确其具体作用机制,可能为临床药物治疗ALI提供理论依据。研究内容及方法:研究内容:建立急性肺损伤大鼠动物模型,检测大鼠核转录因子-кB活性水平和mRNA表达水平;以及TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10等细胞因子组织浓度和mRNA表达水平;同时观察肺组织的光学及电镜病理变化;采用甘草酸二铵干预后,检测上述指标的变化和动物成活率。研究方法:采用失血性休克法建立建立ALI大鼠动物模型,采用迁移率改变电泳法检测核转录因子-кB活性水平,ELISA检测TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10等细胞因子浓度;提取肺组织中的mRNA,逆转录为cDNA,设计NF-кB、TNF-α、IL-10基因引物,进行半定量RT-PCR,电泳后采用凝胶成像分析系统进行量化分析其表达水平。研究成果和创新点:研究发现甘草酸二铵对ALI具有一定抗炎作用,可使肺组织糖皮质激素受体表达上调,并能下调NF-κB的表达。ALI组NF-κB mRNA和蛋白的表达水平明显高于生理盐水组,而GR mRNA和蛋白的表达则明显低于生理盐水组;GL组NF-κB mRNA和蛋白的表达水平明显低于ALI模型组,GR mRNA和蛋白的表达则明显高于ALI组。ALI组mRNA的表达水平明显高于生理盐水组和GL干预组。ALI组肺组织出现充血、水肿、中性粒细胞浸润,GL组肺部炎症较ALI组减轻。研究结果表明,甘草酸二铵可能通过下调NF-κB的表达,并抑制TGF-β1及HMGB1 mRNA表达,同时提高GR的表达,进而调节TNF-α及IL-10的表达,从而起到减轻ALI的作用。研究为中药治疗ALI提供理论依据,具有一定的科学意义,如能进一步明确其具体作用机制,可能为临床药物治疗ALI提供理论依据。首次发现甘草酸二铵对急性肺损伤具有良好保护作用,其机制可能与调节炎症失控反应有关。该项目使用甘草酸二铵防治肺损伤的研究为国内外首创。应用推广及社会经济效益:项目负责人参加国内学术会议交流2次,且该方法在国内10余家医院推广应用,并取得良好的社会效益及经济效益,深受医护人员的好评。已完成预期研究目标,在《中华急诊医学杂志》、《中国急救医学》核心期刊发表论文3篇,普通期刊发表论文2篇。2篇研究论文参加国内急诊会议,其中1篇获得2010北京协和国际急诊高峰论坛优秀论文奖。培养博士研究生1名。
[成果] 1700450571 广西
R54 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:研究解决的问题:该研究拟对30例风湿性心脏病合并房颤患者使用药物或者电转复,再经房间隔穿刺成功后,将LASSO电极送入左、右肺静脉,行肺静脉电生理检查,研究风湿性心脏病合并房颤患者左心房、右心房、冠状静脉窦及肺静脉的有效不应期及其离散度。在窦性心律时分别于右心房、左心房、冠状静脉窦、各个肺静脉行S1S2及S1S2S3或者猝发(burst)刺激刺激,诱发心房颤动发作,64导生理记录仪同步记录高位右心房(HRA)、His束、冠状静脉窦(CS)、肺静脉电位等,根据不同部位刺激后是否诱发出房颤来确认房颤起源部位。技术关键:LASSO电极送至左房之前需行房间隔穿刺术,经皮静脉房间隔穿刺术存在心包填塞、大动脉穿孔导致大出血等风险;将LASSO电极送至左房行肺静脉及左房三维建模后将电极送至左、右肺静脉行电生理检查存在一定难度;入组病人术前药物或电转复房颤,保证可在窦性心律下行肺静脉电生理检查并诱发心房颤动。创新内容:国内外均未见肺静脉标测的风湿性心脏病患者的房颤起源研究。研究目标:确定风湿性心脏病房颤患者的房颤起源部位,与房颤相关部位如左心房、右心房、肺静脉的电生理特点,观察肺静脉起源的心房颤动所占的比例,课题完成后在省级刊物发表学术论文两篇,其中核心期刊1篇。
[成果] 1700450572 广西
R56 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:立项背景:急性呼吸窘迫综合征(ARDS)缺乏特效治疗手段,而该研究发现甘草酸二铵具有一定抗炎作用,能明显减轻内毒素诱导的大鼠急性肺损伤程度。临床应用甘草酸二铵治疗急性肺损伤亦取得一定疗效,提示应用甘草酸二铵防治ALI可能有较好的应用前景。当然,对于甘草酸二铵防治ALI的详尽机制尚未完全明了,有必要进一步深化机制研究。研究内容、方法及结果:研究内容:项目观察甘草酸二铵对ALI大鼠糖皮质激素激素受体(GR)及晚期炎症介质HMGB1表达变化。采用失血性休克复合内毒素注射手段建立ALI大鼠模型,予内毒素(LPS)2mg/kg腹腔注射,LPS注射前1h,分别给予DG20mg/kg或地塞米松2mg/kg腹腔注射,ALIR组和HLGR组大鼠肌肉注射受体阻断剂RU486。采用RT-PCR检测GR mRNA,western blot测GR蛋白的表达,ELISA测定TNF-α、IL-10浓度。研究结果:ALI组TNF-α明显高于S组、HLGR组和HLG组,ALI组IL-10明显高于S组但低于HLG组和HLGR组。ALI组GR mRNA和蛋白的表达明显低于S组,HLG组GR mRNA和蛋白的表达则明显高于ALI组。ALI组肺组织出现充血、水肿、中性粒细胞浸润HLG组肺部炎症较ALI组减轻。研究结果表明,DG可能通过上调GR及IL-10的表达,同时抑制TNF-α的过度表,达从而起到减轻ALI的作用。项目创新点:首次发现甘草酸二铵能上调急性肺损伤大鼠HSP70和糖皮质激素受体水平,同时能下调晚期炎症因子HMGB1的表达;首次临床应用甘草酸二铵治疗急性肺损伤患者并取得一定疗效;首次发现甘草酸二铵对人肝癌细胞增殖及P53表达有抑制作用。应用推广及社会经济效益:已完成预期研究目标,在《中华急诊医学杂志》、《中国急救医学》核心期刊发表论文5篇,参加国内学术会议交流2次。
[成果] 1700450286 广西
R56 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种不完全可逆气流受限为特征的慢性呼吸系统疾病。COPD的治疗既往主要以内科治疗为主,而对于劳力性呼吸困难的改善却不是很理想。外科肺减容术治疗COPD取得了显著的近期疗效,得到了推广应用,但是肺减容术仍具有较高的并发症和病死率。国外有学者提出了纤维支气管镜注入生物蛋白胶行肺减容术。该项研究基于此,对肺减容术所使用的胰蛋白酶进行调整,用糜蛋白酶替代,并且调整用药的剂量及种类,以期找到能临床应用的费用低、有效的肺减容术方法。该研究通过对纤支镜生物性肺减容术的动物实验研究,发现了纤支镜生物肺减容术时,糜蛋白酶可以替代胰蛋白酶,706代血浆+糜蛋白酶+生物蛋白胶B'配伍用药时可使实验动物靶目标肺段塌陷和肺纤维化,并且未见严重并发症的发生,从而达到了肺减容的目的,这可以对临床肺减容术提供新思路。
[成果] 1700450287 广西
R-33 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2017
成果简介:该课题为广西科技厅青年基金项目,受广西科技厅专项资金支持和广西医科大学第一附属医院配套资金支持。课题立项之时,国外少数学者提出对未控制出血的创伤性失血性休克宜采用限制性液体复苏和低温复苏的新观点,与经典液体复苏理论及防治低体温医疗原则明显不同,引发国内外学术界热议,但一直缺乏高质量的临床研究或有力的实验研究对这一新理论的进行支撑或者否定。该研究用动物实验的方法观察创伤性休克浅低温限制性液体复苏与传统常温充分复苏的效果并初步探讨其内在机制,旨在为临床合理制定创伤性休克液体复苏策略和体温控制策略提供重要证据支撑。研究结果表明,对出血未控制的创伤性休克进行限制性液体复苏能够降低早期病死率,与国外最新大样本临床回顾性研究和动物实验研究结果一致。该研究进一步揭示了其内在机制:小剂量液体复苏相对于快速大量补液能够更长时间维持较低水平平均动脉压、有利于缓解组织无氧代谢、红细胞动员和抑制心肺损伤有关,而浅低温虽然不能显著提高生存率,但可以明显抑制心肺脑病理损伤,且对凝血纤溶系统功能无显著影响。该研究的创新点:理论创新:该项目立足于现代创伤救治新理念,对学术界存在争议的问题进行科学实验,研究工作一开始便站在了学术前沿。方法创新:用动物实验的方法探索了临床上由于伦理学局限性和混杂因素多而难以解决的治疗方法学问题,结论有说服力。技术路线创新:在休克兔模型上综合研究了限制性液体复苏、浅低温复苏这两种最具实用价值的急救措施对创伤性休克多器官损伤的影响及其机制,对指导临床有重要参考价值。该项目培养硕士研究生4名,在国内核心医学期刊等杂志发表论文多篇,主要学术成果在中华急诊医学分会创伤学组研讨会上交流,项目负责人参与了中华急诊医学分会创伤学组《血流动力学不稳定骨盆骨折急诊处理的专家共识》(2011版)中休克液体复苏相关内容的讨论和修订,2013年在广西南宁、柳州、贵港、玉林、河池等市县医院巡回讲座,结合国内外研究新发现,推广限制性浅低温液体复苏新理念,在区内外获得良好学术影响,使得大量创伤性休克患者获益。以该项目研究为基础,延伸研究《性激素干预血管内皮应激在创伤性休克DIC进程中的作用》已获得广西自然科学基金2015年度立项资助。
[成果] 1700450288 广西
R734 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:肺癌是常见的恶性肿瘤之一,而且肺癌的发病率与病死率逐年上升,因此,提高生存率的关键在于早期发现、早期诊断及早期治疗。但临床上缺少快速、准确的无创或创伤相对较小的诊断方法。表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术在肺癌的诊断方面已取得了明显进展,但主要是针对血清的研究。BALF可从肿瘤病变部位直接获取标本,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术检测BALF中的肿瘤标志物,其敏感度和特异度可能高于血清学检测,对肺癌早期诊断具有重要的临床价值。该研究应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术通过WCX-2芯片分别检测肺癌患者和肺部良性病变患者血清和BALF中蛋白质质谱图,筛选出差异性表达蛋白。该研究结果显示表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术可筛选出肺癌患者血清及BALF中差异蛋白,并且其诊断的敏感度、特异度好,尤其是BALF中差异性蛋白的测定可能具有较好的临床应用前景。并且该项研究筛选周围型肺癌患者血清、肺组织活检前后BALF中的差异蛋白,发现活检前后BALF中的差异蛋白较血清中更多,而且活检后BALF中的差异蛋白较活检前多。这些都对肺癌的早期诊断提供新方法和新思路。发表论文:周继红柳广南黄斯明等,表面增强激光解析电离飞行时间质谱法筛选肺癌患者血清和肺泡灌洗液中标志蛋白的研究,中华结核和呼吸杂志,2011,34(4):274-2772.周继红柳广南黄斯明等,表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术对周围型肺癌差异蛋白表达的研究,中华结核和呼吸杂志,2011,34(1):30-33。
[成果] 1700450289 广西
R56 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:气管狭窄是临床常见病,导致气管狭窄的主要原因是支气管结核和气管插管或气管切开。患者常因气管的狭窄、阻塞而出现反复肺部感染,出现活动后胸闷、呼吸困难等,甚者出现窒息,该情况需要紧急处理,但球囊扩张操作时,病人需闭气,但一般只能30-60秒,使扩张的时间不够,影响治疗的效果,因此,有必要研究一种简单、安全和有效的辅助球囊扩张治疗的方法。在以往的临床工作中发现,在球囊扩张时,用射流呼吸机通过球囊的导丝孔注入氧气不能缓解患者憋气时的缺氧状况,能否在球囊一侧放置一大小合适的导气管,使其在球囊扩张时提供给患者足够的生理所需氧气,由不影响球囊扩张,该研究拟先行动物实验,研究不同管径(内径3-6mm)导气管在气管球囊夸张时对通气的影响,找出合适管径的通气管,临床试验,验证其有效性和安全性,为良性气管狭窄治疗提供简单、安全、有效的方法。该研究显示应用通气管辅助气管气囊扩张成形术的患者球囊扩张持续时间明显延长,长期有效率显著升高。通气管辅助下纤支镜球囊扩张为治疗良性气管狭窄开创一种新的方法。发表主要论文:1.Liang YL,Liu GN,Li Y,Zheng HW.Management of benign trachealstenosis bysmall-diameter Tube-assisted bronchoscopic balloon dilatation.Chin Med J(Engl), 2015 ,125(17):3183-31872.梁毅林郑厚文,柳广南等,通气管辅助下气管球囊扩张成形术治疗良性气管狭窄——与常规气管球囊扩张成形术的比较,国际呼吸杂志,2015,35(16):1219-1225。
[成果] 1700450292 广西
R65 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:线粒体具有维持活体细胞生化、氧化和能量产生的重要功能,是反映心肌细胞损伤的敏感指标。线粒体凋亡途径是心脏直视手术后细胞凋亡的主要途径,抑制线粒体凋亡通路成为研究心肌保护的热点。该项目通过基础和临床二方面研究心脏不停跳技术对心肌线粒体的保护作用:基础研究部分:设计大鼠供心不停跳和供心停跳心脏移植模型,比较二组线粒体损伤的严重程度;临床研究部分:研究不停跳技术对心肌线粒体凋亡通路的影响:观察不停跳组与停跳组患者心肌线粒体通透性转换孔道(mPTP)开放情况,细胞色素C从线粒体的释放,心肌细胞Caspase-3蛋白的表达情况,检测二组心肌细胞的凋亡;研究心脏不停跳技术对围手术期线粒体偶联因子6(CF6)表达的影响。缺血再灌注损伤是体外循环心脏直视手术后发生心功能不全等并发症的主要原因,细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)后心肌细胞死亡的最主要的形式。认为,线粒体在对抗MIRI中起重要作用,抑制线粒体核分裂可起到心脏保护作用,抑制线粒体凋亡通路已成为研究心肌保护的热点。认为线粒体凋亡通路的分子基础是线粒体通透性转换孔道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP),mPTP在维持线粒体膜电位,保护线粒体结构和功能方面发挥着重要作用,MIRI中,氧化应激,细胞内Ca2 +超载等均是诱导mPTP开放的因素,这些刺激因素诱导凋亡过程中,打开细胞的生死开关mPTP,线粒体跨膜电位下降,线粒体可通过释放线粒体通路激活的标志蛋白细胞色素C(CytoC)等促凋亡因子至胞浆,再激活其下游的半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)介导细胞的凋亡。许多研究已将抑制mPTP的开放作为心肌保护新的作用靶点,抑制线粒体凋亡通路已成为研究心肌保护的研究方向。浅低温度心脏不停跳心内直视手术,改变了心脏手术低温高钾停跳心肌保护的传统概念,在体外循环术中仅阻断上下腔静脉,不阻断冠脉循环,适当降温,不使用心脏停跳液,使心肌得到持续的氧合血灌注,理论上最大程度地减轻了心肌缺血缺氧损伤,也避免了再灌注损伤,产生最理想的心肌保护效果。但是,浅低温心脏不停跳心内直视手术的心肌保护理论有待进一步完善,研究表明不停跳心内直视手术比停跳手术能明显抑制氧自由基产生及细胞凋亡,但其具体机制尚未明确,有深入研究的必要。线粒体偶联因子6(CF6)是线粒体ATP合酶柄区的一个亚单位,是基本的能量转导物质,是迄今为止发现的惟一内源性PGI合成抑制因子,是一种缩血管多肽。有研究表明心肌梗死一周内血浆CF6水平持续增高,并与心肌梗死的严重程度相关,CF6可能参与了心肌梗死的发展进程。研究表明CF6是缺血性心脏病、糖尿病和末期肾衰的独立危险因子,但在围体外循环期的表达规律尚不清楚,其表达与哪些因素有关,是心肌还是内皮细胞或者二者均表达尚不明确,而动物实验与临床已证明低温心脏不停跳心内直视手术无再灌注损伤过程,对心肌和其他器官有明显的保护作用,因此推测该技术对CF6的表达可能有一定的影响,有待深入研究。浅低温心脏不停跳心内直视手术的心肌保护理论有待进一步完善,研究表明不停跳心内直视手术比停跳手术能明显抑制氧自由基产生及细胞凋亡,具有明显的心肌保护效果,但其具体机制尚不明确,有深入研究的必要。该研究成果可丰富心脏不停跳技术对心肌保护作用的理论依据,为该技术在临床的使用和进一步推广提供更直接的理论支持,从而使该技术使用于更多患者,更好地服务于广大人民群众。该项目增强了广西医科大学第一附属医院心血管外科的科研能力,巩固心血管外科在国内不停跳技术领域的领先地位,成为国内该领域内较大的科研与临床中心之一。以该研究为基础培养各层次人才,其中培养博士1人,硕士4人。该研究成果在国内外省级或以上级别期刊公开发表3篇科研论文。
[成果] 1700450293 广西
R59 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:课题来源与背景:人类获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是感染人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的免疫功能障碍性疾病,已成为危害人类健康最为严重的传染病之一。HIV感染的治疗以鸡尾酒疗法为代表的高效抗逆转录病毒综合治疗成为主流的治疗方案,而针对HIV包膜蛋白等的疫苗治疗则为艾滋病的治疗展现了新的希望,然而还没有根治该病的特效药物或疫苗,因此开发新的抗病毒药物仍是一项十分紧迫的任务。研究目的与意义:研究目的:促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在HIV-1 Tat诱导紧密连接蛋白破坏中的作用机制。该项目的完成将首次在信号传导和转录水平阐明MAPKs的JNK信号通路调节Tat诱导的紧密连接Occludins蛋白破坏的作用机制,并研究其抑制剂对Tat诱导的血脑屏障(BBB)破坏的干预作用,这在尚未有根治HIV感染药物的今天有重要的意义。主要论点与论据:Tat蛋白是HIV-1编码的重要调控蛋白,可以在病毒感染的细胞内反式激活病毒基因组转录的起始和延伸,高效率启动病毒复制。Tat结构的高度保守使它成为新的抗艾滋病药物的新靶点。BBB是由脑血管内皮细胞及细胞间紧密连接、基膜、周细胞和星形胶质细胞足突共同组成,是存在于脑和脊髓内的毛细血管与神经组织之间的一个动态的调节界面,其中紧密连接是保持BBB完整的重要因素。课题组前期细胞和动物实验发现HIV-1 Tat导致脑血管内皮细胞通透性增加,炎症细胞迁移,紧密连接蛋白降解,最终BBB功能失调。MAPKs信号通路与BBB的完整性密切相关。MAPKs由3个组成成分:细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38 MAPKs。HIV-1 gp120介导的脑血管内皮细胞的细胞毒性和通透性依赖p38 MAPKs信号传导通路。可卡因通过MAPKs信号传导调节HIV感染的人血管内皮细胞通透性和炎性细胞的趋化性,从而导致血脑屏障的破坏。由此可见,MAPKs信号传导在维持血管内皮细胞的功能稳定以及血脑屏障的完整中起着重要的作用,但其作用机制尚未清楚。课题组既往研究虽发现HIV-1 Tat蛋白诱导的ZO-1和Claudin-5破坏依赖MMP-2/MMP-9、MAPKs信号传导的PI3/Akt和ERK1/2的磷酸化,但还没系统研究MAPKs的JNK信号通路与HIV-1 Tat蛋白诱导的Occludins破坏的关系。研究表明JNK信号通路在CD40配体诱导的粘附分子、单核细胞的粘附和跨血管内皮细胞迁移起着重要的作用。因此该项目重点研究JNK信号通路在HIV-1 Tat诱导紧密连接Occludins蛋白破坏中的作用机制。
[成果] 1700450294 广西
R36 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2017
成果简介:该课题来源于广西壮族自治区教育厅立项课题(2009桂教财经150号):广西复杂性疾病数量性状的全基因组扫描关联研究。经过课题组不懈努力,该项目已完成:建成高通量全基因组扫描技术平台及稳定的操作流程;培训技术娴熟的实验技术与分析人员;建立了5943人的FAMHES队列,以及2018例健康队列广西人群公共全基因组SNP和CNV数据库;发现一批与数量性状有关的基因位点;发表SCI论文45篇,单篇影响因子最高13.3,累计影响因子151.4,中文论文6篇,核心期刊3篇,专利授权1项;合作发表SCI论文4篇,单篇影响因子最高29.6,累计影响因子72.7;培养硕士、博士研究生、博士后共22人,广西八桂学者1人,广西特聘专家1人,广西杰出青年基金获得者2人,教育部新世纪优秀人才2人。依托该项目,还获批广西自然科学基金创新研究团队项目、广西高校重点实验室以及广西高校协同创新中心。该项目主要的创新指出在于如下两个方面:对FAMHES中的2018例男性研究对象进行了全基因组扫描和基因分析,结合其数量性状进行了全面系统的创新性研究。首次在中国健康男性人群中找到影响免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA、IgE)、补体C3、C4水平的遗传位点。位于TNFRSF13B基因与IgG水平相关。位于TNFRSF13基因的位点rs11552708与IgM水平相关,rs3803800与IgA水平相关。CCDC50基因则可能参与IgE水平的调控。C3、CFH基因与补体C3水平相关。染色体6p21.3上的大片基因区域与补体C4水平相关。首次在亚洲人群中找到影响维生素B12、铁蛋白水平的新的基因位点。MS4A3、CLYBL、FUT6基因及5q32区域与血清维生素B12水平有关。位于PMS1基因5’非编码区的位点rs5742933,与铁蛋白水平显著相关。这些基因位点的发现为更好地阐述其与疾病的关系提供一定的理论依据,为后续的功能研究打下坚实基础。首次发现饮酒与血脂的交互作用,验证了一批与血脂、体重指数有关的遗传位点。ALDH2基因上的位点rs671与饮酒量对血清甘油三酯水平存在交互作用。提示饮酒对甘油三酯的作用呈双面性。同时在中国男性人群中重复验证了之前已被报道的欧美人群中与血脂相关的基因。首次在中国人群中找到影响血清性激素及性激素结合球蛋白水平的基因位点。首次发现位于CYP19A1基因的rs2414095、rs2445762与血清雌二醇和水平相关,同时在中国人群中验证了之前报道的与雄激素和性激素结合球蛋白相关区域17p13.1,为后续研究激素与疾病的关系提供了线索。发现了新的影响血清肿瘤标志物水平的遗传位点。建立并完善了大规模高质量流行病学研究队列:前列腺相关疾病方面。发现和证实了前列腺液中白细胞数量与前列腺炎症状指数评分均无相关性;炎症因子hs-CRP在下尿路症状组与对照组中分布存在明显的差异,同时高血清hs-CRP人群患下尿路症状综合征(LUTS)中的尿急和夜尿单个症状的风险明显增加。代谢相关疾病方面。首次在中国男性人群中发现骨钙素与代谢综合征呈正相关关系。并且骨钙素水平与血清激素水平呈正相关,并受到性激素结合球蛋白及中心性肥胖程度的影响。首次发现雌二醇是非酒精性脂肪肝的保护因素。该项目对后续的研究已经应用都有很好的前景:为地方高发的复杂性疾病的基因组学研究奠定了基础,可以作为后续开展疾病易感基因关联研究的共同对照组,节省大量的人力、物力和财力。将具有市场价值的遗传基因科研成果进行工程化研究和系统集成,将基因科研成果转化为适合规模生产的技术,催生医药健康新模式。发现一些新的易感基因位点,从而建立合适广西人的易感基因库,将来开发更具有针对性的个体化预防和治疗方法。
[成果] 1800040006 广西
R24 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:该项目根据腰椎间盘突出症作为脊柱骨科常见病、因发病机制未明、疗效亟待提高等背景,基于蛋白质组学(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)新技术,同时结合(multiple reaction monitoring, MRM)质谱技术,采用病例对照等研究方法开展研究,筛选LIDP血瘀证的血清差异表达蛋白质,并初步构建了LIDP血瘀证蛋白质组学基础。实验采用iTRAQ技术对LIDP患者血清蛋白质进行标记,然后对样品信息进行SDS-PAGE电泳、酶解和肽段定量、肽段标记;用软件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4(thermo)对结果进行质谱分析原始数据;查库使用Mascot软件版本为Mascot 2.2。查库时将RAW文件通过Proteome Discoverer提交至Mascot服务器,选择已经建立好的数据库,然后进行数据库搜索。采用Proteome Discoverer1.4软件对肽段报告离子峰强度值进行定量分析。最终得出蛋白质定量表、肽段定量表、蛋白质显著分析列表、以及差异蛋白表等等。并对患者治疗前后进行GO分析和KEGG分析,得出相应的图表。再通过进一步的分析,鉴定出22个显著差异血清蛋白表达,其中有15个蛋白表达水平较原先上升,7个蛋白表达水平下降(p≤0.05)。项目申报、研究及实施过程完成了任务书中原定培养硕士研究生、发表研究论文等既定指标,在相关专业领域产生了一定的影响。项目组在取得相关研究成果的基础上,申报了1项国家自然科学基金项目并成功获立项资助,为继续深入研究相关问题创造了良好的条件,取得了预期研究成果。项目研究成果为诊断和治疗LIDP提供了新的视角,丰富了LIDP中医症候学的内涵,为今后应用生物标志物进行辨证、寻求靶标中药治疗该病有较好的参考价值,并为提高中医药治疗该病的疗效、尽快恢复患者的劳动能力、提高社会生产力服务。故有较大的科学意义和临床指导价值。
[成果] 1800040053 广西
S85 应用技术 畜牧服务业 公布年份:2017
成果简介:课题来源与背景:引起流感爆发流行的甲型流感病毒均来源于动物,其跨种间传播人的途径主要有:一是猪作为中间宿主,不同宿主流感病毒可在其体内进行基因重配产生新毒株而跨越种间屏障感染人;二是禽流感病毒可跨种间从禽类直接感染人。H9N2禽流感病毒在多种陆禽流行并反复感染哺乳动物猪和人,其对公共卫生安全呈潜在巨大威胁,该项目在国家自然科学基金(31260033)资助下探讨H9N2病毒如何跨种间屏障传播人,筛选病毒跨种间屏障传播的特异分子标记。技术原理及性能指标:该项目自2012年以来围绕流感病毒的生态学、进化演变的机制开展研究,其技术原理及性能指标:如下:禽类流感病毒SA,受体在流感病毒生态系统中的分布及其作用:鹅呼吸道和消化道同时表达SAα-2,3Gal受体,有助于禽流感病毒复制部位由消化道扩展到呼吸道以及各亚型禽流感病毒之间的基因重配,提示鹅在禽流感病毒的起源和进化中可能起重要作用;陆禽鹧鸪和火鸡同时表达唾液酸α-2,6Gal和α-2,3Gal受体,提示陆禽类可能也是重要流感病毒“基因混合器”,有助于病毒重配和形成大流行株的潜能。陆禽鹧鸪有助于水禽类流感病毒从水禽动物传递到陆禽动物:水禽鸭H9N2亚型禽流感病毒可在陆禽鹧鸪复制并引起明显炎症反应,表明鹧鸪易于感染水禽源性禽流感病毒,鹧鸪呼吸道是H9N2亚型禽流感病毒复制的主要部位,提示鹧鸪在流感病毒生态系统中起中间宿主作用。禽流感病毒H9N2在鹧鸪反复复制形成变异病毒株可在猪肺组织复制:H9N2病毒在鹧鸪体内反复复制后形成的变异病毒株有潜在感染猪的可能,但未能感染人。基因进化分析、比较子代H9N2变异病毒与亲代鸭H9N2病毒各节段基因片段的变化,结合感染试验和基因测序、基因进化分析结果,H9N2变异病毒毒株具有人流感病毒H2N2、H3N2特性,其HA受体结合部位的226位点为亮氨酸(L226),其HA受体结合部位的226位点为亮氨酸(L226),L226有助于病毒与人流感病毒SAα-2,6Gal受体结合;PB2的253、591位点分别为天门冬酰胺和赖氨酸,具这一特性的H9N2病毒可引起哺乳动物致病增强。该研究结果提示陆禽在流感病毒进化演变及跨种间传播中起中间宿主的作用,同时为流感病毒的监测提供分子学基础。 技术的创造性与先进性:通过研究,课题组课题组发现了禽流感病毒H9N2在陆禽反复复制后形成的变异病毒毒株具有人流感病毒的潜能。同时,建立了体外流感病毒感染复制的模型,解决了不能直接在人体内进行流感病毒感染实验的问题,为探究流感病毒在人的复制及其致病机理提供实验模型。技术的成熟程度,适用范围和安全性:该研究采用的免疫组化和原位杂交技术方法相对而言比较成熟,病毒感染方法和基因测序分析为国内外应用多年的经典方法,课题负责人及参与人员已应用于相关科研工作。该课题组由掌握以上技术的成员组成,相关技术已熟练掌握,同时在生物安全二级实验室(BSL-2)进行,确保实验的安全性。 应用情况及存在的问题:应用情况:该项目在流感病毒的跨种间传播的研究成果,在该领域引入认识病毒与宿主关系的崭新概念。因此,该项目的研究成果推动了流感病毒跨种间传播基础理论的发展,为流感病毒的监测提供依据,具有重要的科学价值。课题组在国内首次成功建立了体外流感病毒感染复制的模型。该实验的目的是观察流感病毒是否可在人组织感染、复制,弥补不能直接在人体内进行流感病毒感染实验。利用这一技术平台,课题组课题组先后应用新甲型H1N1、人季节流感病毒H1N1、禽流感病毒H5N1、H9N2体外感染人呼吸道组织。 存在的问题:流感病毒反复感染实验是该项目能否顺利实施、获取变异病毒株的关键一步。课题组在用鸭流感病毒H9N2反复感染陆地禽类鹧鸪和火鸡,观察、检测病毒在陆禽感染、复制情况这一关键阶段,因流感病毒感染受宿主屏障的限制,水禽鸭H9N2流感病毒很难跨越屏障感染陆地禽类动物,在这一阶段,经反复行动物感染实验,历经3个月时间,最后病毒才顺利感染陆禽类动物,比原计划多用2个月时间。在鸭H9N2亚型流感病毒反复感染鹧鸪实验中,课题设计需反复感染20组次以上,每组需20天时间,所需要的时间比预期更长。经过努力,课题组课题组于2014年12月完成这一关键阶段。
[成果] 1800040054 广西
R730 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:该项目获得国家自然科学基金资助,立项编号:81260657,资助金额49万元,于2013年1月开展,2016年12月顺利完成并结题。 化学药物治疗是肿瘤综合治疗的主要方法之一。但随着化疗的开展,肿瘤细胞对化疗药物的耐药,尤其是多药耐药(multidrug resistance,MDR)问题,已成为制约化疗效果的严重障碍。MDR是指由一种药物诱发肿瘤细胞对其产生抗药性的同时,对结构和作用机制迥异的其他抗肿瘤药物也产生交叉耐药。克服肿瘤临床MDR已经成为化疗领域迫切需要解决的问题。项目通过研究NC(氯化两面针碱)逆转MDR的机制,为NC以MDR逆转剂用于临床提供依据,并了解到植物抗肿瘤活性成分的逆转MDR的机制,为今后高通量筛选药用资源中的靶向逆转MDR活性成分提供指导方向。DNA拓扑异构酶(Topoisomerase,Topo)是细胞内重要的核酶,主要通过催化作用改变DNA的拓扑结构,真核细胞的拓扑异构酶主要分为Topo I和TopoⅡ。切断一个链而改变拓扑结构的为Topo I,通过切断二个链来进行的为TopoⅡ。这类酶被药物损伤和抑制可妨碍DNA的复制和转录,最终导致细胞的死亡。以Topo I和TopoⅡ为靶点开发抗肿瘤药物是研发的热点之一。随着Topo抑制剂在临床上的广泛应用,多药耐药问题也随之出现,由Topo I或TopoⅡ介导的耐药不同于经典的P-糖蛋白耐药,称不典型的多药耐药(at-MDR)。TopoⅡ是近年来研究最多的与染色质凝集和结构有关的核蛋白。TopoⅡ有两种类型的同工酶,TopoⅡα和TopoⅡβ,它们由不同基因编码。其中同工酶TopoⅡα作为细胞内的重要核酶参与了MDR的形成,其活性降低亦可影响许多抗癌药药效。文献报导,当白血病细胞对TopoⅠ抑制剂发生耐药时,对TopoⅡ抑制剂的敏感性增加,反之亦然,即所谓侧路敏感性。因此,同时应用两种Topo抑制剂不仅可以清除敏感的肿瘤细胞,还可以防止对Topo抑制剂产生耐药性。这类逆转剂能够稳定TopoⅡ和DNA形成的复合物,抑制DNA的复制,从而导致细胞的死亡。因此,开发同时靶向TopoⅠ、TopoⅡ的化合物,是逆转肿瘤MDR的思路之一。 该课题组从两面针植物中开发了单体活性成分氯化两面针碱(nitidine chloride,NC),对NC的抗肿瘤活性检测中发现,其对肝癌HEPG-2、肾癌Ketr-3、结肠癌SW480、宫颈癌Hela、鼻咽癌CEN-1、口腔鳞癌KB等细胞均有抑制作用。前期研究显示,NC还可明显抑制肝癌细胞中Topo I、TopoⅡ的催化活性。NC在体外具有良好的抗肿瘤MDR作用,或具有逆转肿瘤MDR作用,抑制Topo I、TopoⅡ可能是其作用机制之一。此外,NC对癌细胞抑制作用明显强于正常组织细胞,提示NC毒性可能较小,具有开发潜力。该项目得资助后即开始进行多药耐药细胞的构建与筛选,从多株耐药细胞中筛选出对NC最敏感的耐药细胞株及其相应的亲本细胞,以该多药耐药细胞及相应的亲本细胞为模型进行实验。研究通过NC作用于多药耐药细胞及多药耐药细胞裸鼠移植瘤模型,检测NC对细胞及裸鼠移植瘤MDR的逆转活性及Topo在细胞内表达量的改变,明确NC对MDR的逆转作用及与其与Topo的相关性;分子对接技术验证NC与Topo相互作用;采用慢病毒转染技术构建TopoⅡα稳定转染细胞系,研究NC对TopoⅡα高表达细胞KB/TopoⅡα及亲本细胞KB的增殖抑制效应及NC体外逆转TopoⅡα介导多药耐药作用,采用RNA干扰(RNAi)技术下调TopoⅡα基因表达,并构建TopoⅡαshRNA稳定转染细胞系,研究NC对TopoⅡα低表达细胞及亲本细胞的增殖抑制效应,以明确NC对多药耐药细胞的逆转活性的作用机制,研究为NC以MDR逆转剂用于临床提供了依据。 课题按计划完成实验并取得较好的预期结果,发表了正式论文7篇,其中SCI收录1篇,中文核心期刊收录3篇;课题的开展为培养科研人才发挥了积极作用,培养了药理学、药剂学方向博士研究生2名,硕士研究生5名,同时也提高了参与该项目研究的中青年教师和技术人员的科研水平。
[成果] 1800040255 广西
R730 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:鼻咽癌是广西高发肿瘤,治疗以放疗为主;对放射线抗拒是其局部治疗失败及预后不良的主要原因。增加肿瘤细胞对放射治疗的敏感性是提高鼻咽癌放射治疗效果的关键;近年来,从分子基因组学的角度寻找高效的新型功能性分子(例如功能性microRNAs)增加肿瘤细胞对放疗的敏感性,已经成为国内外研究的热点问题之一。课题组在前期研究基础上,通过体外细胞实验以及体内裸鼠移植瘤实验,得出以下结论:鼻咽癌组织和细胞中miR-24的表达明显下调,且miR-24表达下调与鼻咽癌病人的临床分期及T分期、N分期有关;在体外实验中证实miR-24对鼻咽癌细胞具有放射增敏作用;在体内实验中证实miR-24对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤具有放射增敏作用;阐明miR-24的放射增敏作用与靶向调控SP1有关,SP1是miR-24的直接作用靶标,参与鼻咽癌细胞的增殖及放疗敏感性。项目的完成明确miR-24对鼻咽癌放疗敏感性的调节作用及分子机制;证实了miR-24作为鼻咽癌预后新的评估指标的可能性,内源性microRNA分子有更高的稳定性和更好的组织相容性,更低的毒副作用,因此,该项目的完成也将有助于进一步探讨microRNA作为新型分子药物或新靶点应用于鼻咽癌的临床治疗。该项目共发表SCI论文3篇,通过该项目的实施,项目申请人进一步获得了国家自然科学基金(81460460)和广西自然科学基金面上项目(2016GXNSFAA380252)的资助。培养博士研究生和硕士研究生各一名。
[成果] 1700241078 广西
R735 应用技术 医院 公布年份:2017
成果简介:课题来源与背景:课题来源:该课题属广西科学研究与技术开发计划项目,合同编号:桂科攻1355005-3-2。课题背景:肝癌是全世界最高发的恶性肿瘤之一,中国也是肝癌的高发区。但是,肝癌的发病机制尚未完全清楚,其起病隐袭, 早期缺乏特异性症状, 确诊时大多数患者已达局部晚期或已出现远处转移, 只有约15%的患者适合手术切除,且术后易复发和转移严重制约了肝癌的疗效。对于失去手术机会和术后复发的晚期肝癌患者,药物治疗是最主要的治疗手段。但是,肝癌传统化疗药物最大缺点是缺乏组织选择性,在体内广泛分布,疗效差,且在发挥疗效的同时往往产生明显的全身性毒副作用,从而严重影响了治疗效果。因此,寻找疗效高而毒副作用小的新型抗癌疗法已成为肝癌治疗研究中的重点和热点。肝癌在其癌变增殖转移等一系列过程中伴随着不同阶段的癌基因或抑癌基因变异, 引起相关因子表达的紊乱,针对这些生物学特性, RNA干扰( RNA interference, RNAi)因其特有的高效性、特异性、低毒性, 为肝癌基因治疗的研究开辟了一条新的途径。RNAi不仅成为研究基因功能强有力的工具,而且在治疗病毒感染、肿瘤以及靶向药物研究中具有广泛的应用前景。肝癌的发生和发展是多因素、多阶段、多基因相互作用的结果, 包括病毒感染、致癌物的作用、癌基因的激活和抑癌基因的失活、信号转导通路的异常、细胞的凋亡和增殖调节失控等。 课题组的研究和文献报道均证实尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体(uPAR)在肝癌的发生、发展及侵袭迁移中起重要作用。在课题组前期研究中发现uPA及uPAR的变化与肝细胞癌变密切相关,尤其在门静脉栓、肿瘤的侵袭和转移的病例中,uPA与uPAR过度表达与肝癌的演进、侵袭和转移密切相关。uPA及uPAR系统在肿瘤细胞侵袭迁移中发挥着重要作用。整合素(integrin)家族是uPAR信号通路中最重要的跨膜受体。由于uPAR缺乏跨膜结构和胞内段, 信号转导的实现必须有跨膜受体的参与, 因此,研究uPAR信号通路中的辅助受体与uPAR协同作用机制, 对阐明uPAR信号通路是十分必要的。组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)属半胱氨酸蛋白水解酶,能在酸性环境中分解蛋白质,刺激肿瘤细胞生长,参与肿瘤血管生成,溶解基底膜、细胞外基质和结缔组织,还可激活uPAR。Cathepsin B和uPAR对细胞外基质的酶解相互联系、协同促进,其可能是由于Cathepsin B高表达诱导激活uPA,uPA 又上调uPAR 的表达,进而促进uPA介导的纤溶酶系统降解细胞外基质和基底膜的连续过程而导致侵袭与转移。uPAR和Cathepsin B相互关联、协同促进,在肝癌的发生、发展及侵袭迁移中起重要作用,然而,RNAi联合沉默uPAR和Cathepsin B基因靶向治疗肝癌尚未见报道。因此,通过RNAi沉默肝癌细胞的uPAR和Cathepsin B基因,研究其对肝癌的靶向治疗及机制,进一步探讨肝癌的发病机理,为肝癌治疗的新策略提供理论依据,具有重要的临床意义。技术原理及性能指标:技术原理:siRNA的合成。 细胞培养、siRNA转染SMMC-7721肝癌细胞。RT-PCR 检测uPAR和CathepsinB基因表达。Western blot检测uPAR和CathepsinB蛋白表达。MTT 法测定细胞增殖。FACS(fluorescence-activated cell sorting) 分析细胞周期。原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。Transwell细胞侵袭试验。免疫沉淀法和Western blot法分别检测uPAR、CathepsinB、MMP9、ERK、PI3K和Integrinα6蛋白表达。性能指标:uPAR和Cathepsin B siRNA转染7721细胞转染效率在低浓度siRNA的转染效率最高,可达85%,而且此时细胞的生长状态良好。 uPAR siRNA(A、B、C)和Cathepsin B siRNA(A、B、C)转染效率的鉴定,si-uPAR-C是uPAR基因的最佳沉默剂,si-CTSB-B是cathepsin B基因的最佳沉默剂。 uPAR siRNA-C和Cathepsin B siRNA-B联合沉默组沉默效果最佳。 细胞增殖的监测发现在24h节点si-CTSB 组和si-UC组的细胞增殖被明显抑制了,而si-uPAR组在48h节点被明显抑制。 Transwell侵袭实验显示单独和联合沉默uPAR 和 cathepsin B后,siRNA沉默能抑制癌细胞增殖,联合沉默效果最佳。流式细胞术实验显示单独或联合沉默uPAR 和 cathepsin B后,单独和联合沉默组细胞在细胞凋亡中晚期阶段明显增加,而联合沉默组增加最为明显。 细胞迁移能力检测:细胞划痕实验显示单独或联合沉默uPAR 和 cathepsin B后,单独和联合沉默组肿瘤细胞迁移能力下降,联合沉默组下降最为明显。 RT-qPCR检测结果显示:单独和联合沉默组肿瘤细胞Integrins α 6mRNA、MMP-9 mRNA明显下降,联合沉默组下降最为明显。 Western blot检测Integrinα6蛋白表达的结果显示:单独和联合沉默组肿瘤细胞Integrins α 6、p-PI3K 、p-ERK明显下降,联合沉默组下降最为明显。流式细胞术检测细胞周期显示:单独和联合沉默组肿瘤细胞G1期(合成前期)细胞明显增加,联合沉默组增加最为明显。发表论文:完成论文7篇,发表论文5篇,其中SCI期刊3篇,核心期刊2篇,硕士研究生毕业论文2篇。 培养研究生:培养了研究生4名。团队建设促进了该院肝癌研究团队的发展。技术的创造性与先进性:该课题首次研究了siRNA联合沉默uPAR和Cathepsin B基因对肝癌的治疗作用及其作用机制,探讨了肝癌靶向治疗的新策略和新技术。技术的成熟程度,适用范围和安全性:该项目的技术和方法成熟、稳定,安全性好,适用于肝癌的靶向治疗。应用情况及存在的问题:在区内外多家医院推广应用。历年获奖情况:无。
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