成果简介：课题研究建立了高效防治鸡呼吸道传染病纯中药制剂-板青颗粒和甘草颗粒的生产工艺和生产线并进行产业化开发，在石家庄主要养殖区域建立了产品应用示范基地5个，举办养鸡技术培训，培训技术标兵15个，技术骨干30个，技术能手300个。通过对该技术的示范推广，不仅有效防治鸡呼吸道疾病的发生，提高鸡的成活率和产蛋率，还可减少抗生素的使用，避免残留，具有明显的经济效益和社会效益。

成果简介：中国是世界家禽第一大生产与消费国，家禽产业是该省农业经济的重要支撑。家禽传染病是制约产业健康发展的重要因素。该项目针对家禽新发频发的10种重要传染病，从诊断、预防和治疗三个防控核心环节，历经26年科技攻关，取得了一系列创新性成果。1、在全球首次发现鸭产蛋下降综合征、鸭传染性窦炎的原发病因，发现鸭呼肠孤病毒的跨种感染能力，引领国内外家禽疫病的病原学与诊断技术研究，为快速诊断新发家禽传染病提供理论支撑。及时确诊病因是有效防控家禽新发传染病的首要前提。该项目在国际上首次确诊新发鸭产蛋下降综合征的原发病原为鸭坦布苏病毒，并在国际上首次证实黄病毒可跨种感染水禽致病；通过反向遗传技术首次成功拯救出鸭坦布苏病毒，阐明了病毒的致病性和基因组特征。首次确诊鸭传染性窦炎的原发病原为支原体，发现鸭呼肠孤病毒可跨种感染鸡，并具有较强的致病性。2、针对中国频发的禽流感、鸭瘟、鸭传染性浆膜炎、鸭大肠杆菌病等家禽重要传染病，创制并产业化推广疫苗类新兽药4项，其中全球首创3项，为有效预防家禽传染病提供产品支撑。对15个省份85株H9亚型禽流感病毒HA基因序列分析，筛选优势流行毒株并创制出灭活苗，解决了疫苗毒株对流行毒株交叉保护效果差的关键技术难题。通过传代获得鸭瘟病毒鸭胚适应毒AV1221株，病毒滴度较常规培养提升3倍，突破了抗原生产过程中病毒产量低的技术瓶颈，创制出全球首个鸭瘟灭活疫苗；同时筛选获得免疫原性良好的鸭H9流感疫苗株D1和效检用强毒株YZG4并建立效检标准，集成运用上述鸭瘟灭活疫苗生产技术和工艺，创制全球首个鸭瘟、禽流感(H9)二联灭活疫苗。首次采用蜂胶佐剂技术创制出全球首个鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗，为危害养鸭业最严重的两种细菌病防控提供了强力的产品支撑。3、针对鸡鸭鹅3种可治疗的传染病(鸡传染性法氏囊病、鸭病毒性肝炎及小鹅瘟)创制并产业化推广抗体类新兽药3项，市场占有率均稳居国内第一，为确切治疗家禽传染病提供产品支撑。通过表达制备亚单位抗原代替组织毒抗原创制出鸡传染性法氏囊病蛋黄抗体，成本降低95%，解决了高免抗原制备环节生物安全风险大、成本高的关键技术难题。发明了集热灭活、化学灭活与物理灭活为一体的综合灭活技术，可100%杀灭鸡胚中的微生物，打破了鸭病毒性肝炎抗体生产过程中外源微生物难以有效灭活的技术瓶颈。从分离的69株小鹅瘟病毒筛选出HN株研制蛋黄抗体，发明了酸化水稀释法结合辛酸法抗体纯化工艺，解决了提取过程中难以有效去除脂类等杂质的关键技术难题。该项目获授权国家发明专利7项；国家新兽药证书5项，其中二类新兽药1项；取得农业部生产批准文号9个；发表SCI论文10篇，核心期刊论文46篇。项目成果在全国25个省份推广应用11年，共计45.41亿羽份，累计销售2.19亿元，总经济效益达293.43亿元。

成果简介：水生动物疫病严重威胁中国水产养殖业及水产贸易的健康发展。为解决水生动物疫病检测工作中存在的“方法不统一、标准不一致、结果不可靠”等技术问题，该项目拟建立一套适合中国国情的水生动物检疫技术标准体系，并将其推广入各口岸出入境检疫机构、农业部各级水产技术推广站等相关单位，使水生动物疫病检测“有法可依”，满足中国重要水生动物疫病防控需求。 历经8年攻关，该项目取得如下突破： （1）该项目在国际上首次从患病的中国大鲵体内分离出大鲵虹彩病毒;首次将危害中国海域菲律宾蛤的派琴虫确定为奥尔森派琴虫；首次从中国海域检出包拉米虫，从国内石鲽鱼中分离获得了牙鲆弹状病毒，从虹鳟鱼中分离鉴定出传染性胰脏坏死病毒新毒株。流行病学调查结果显示这些新发和外来疫病病原已开始感染中国水产，对水产贸易构成潜在威胁，必须及时研制检测方法和检测标准，对疫病进行防控。 （2）制/修定了17项水生动物疫病检测标准。其中国家标准2项，行业标准15项。涵盖了世界动物卫生组织（OIE）《水生动物疾病诊断手册》列举的鱼类、两栖爬行类和甲壳类大部分疫病，以及中国农业部《一、二、三类动物疫病病种名录》中收录的大部分水生动物疫病，填补了中国在该领域的空白。 （3）制备了12种水生动物疫病病原参比物质，为相关病原检测标准的推广应用打下了物质基础。此外，还建立了荧光定量PCR、ELISA、LAMP等8种新型检测方法，为相关疫病检疫技术标准的制/修订提供了技术支撑。 该项目获得国家标准样品证书7项，国家发明专利授权6项，发表研究论文14篇（其中SCI论文7篇），出版著作2部。 项目研究成果在国家水生动物疫病防控、口岸检疫把关等工作中得到了广泛推广应用。从2009年至2013年，先后在北京召开5次水生动物疫病检测技术培训班，培养检验检疫技术人员200余人次；从2011年至2015年，国家认监委和农业部，使用该项目制定的标准和标准样品，先后开展了8次水生动物病原检测的能力验证工作，每年筛选出包括20余家有能力进行水生动物疫病监测的实验室；新病原的发现及系列检测技术的研究为进境动物检疫疫病名录修订提供了科学依据；项目研究成果有效保障了自2010年以来开展的《全国进出境水生动物疫病监测》计划的顺利进行，口岸进口水生动物样品检出率从2010年的2.67％提升至2012年的12.53％。综上所述，该项目对完善中国水生动物疫病检疫标准体系、推动中国水生动物疫病防控工作起到了巨大的技术支撑作用。

成果简介：该项目在分析中国水产养殖的发展及养殖水质的监控现状的基础上，提出了水质在线监控的必要性和实用性，该项目设计的系统主要针对规模化水产养殖，系统可以对水体温度、溶解氧、pH、电导率进行在线监测，对溶解氧、NH3-N和NO2-N具有智能化控制系统，可以进行实时在线控制。该系统在嘉兴南湖区对虾养殖基地进行了试验测试，测试结果表明，基于CAN总线的水质监控可以稳定有效地获取实时的水质参数，实现了对水质中溶解氧、NH3-N和NO2-N的自动控制。智能化渔业养殖在线水质测控系统给水产养殖技术人员提供了监测和控制方式，大大节省了劳动力，降低了养殖成本，提高了养殖的生产效率。

成果简介：该项目受国家自然基金面上项目-新发人兽共患虫种-兔隐孢子虫宿主适应性遗传基础研究(31172311，62万元)、国家科技重大专项-艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治子课题-重要寄生虫病检测和监测技术研究(2008ZX10004-011，30万元)部分资助和自筹经费的基础上完成的。寄生虫病在中国流行广泛，在中国畜禽上已查清的寄生虫就有2169种，很多是人兽共患寄生虫。近年来，随着畜牧业的发展，对家畜家禽的寄生虫病流行情况和防控研究很多，获得了富有成效的成果：和传染病比较起来，鲜有畜禽规模暴发寄生虫病的报道。而对动物园动物和野生动物保护中心等处的动物寄生虫流行情况和人兽共患病原缺少综合调查和防制研究，该项目自2005年初至2015年底，先后采用寄生虫形态学检测、PCR、多位点序列分型等方法对来自河南、广西、云南等8省/直辖市动物园、野生动物保护中心66种鸟类、22种灵长类、22种草食动物、40种野生动物等共6825份粪便或血液样品进行了寄生虫流行病学调查、虫种鉴定及部分原虫的基因分型。1、发现被调查动物寄生虫感染率为11.9%-100%，且混合感染在野生动物中普遍存在。监测到的寄生虫种类分别属于4纲29个种，其中原虫8种、线虫14种、绦虫6种和吸虫(未鉴定到种)。其中球虫、线虫是多数动物优势流行种类。2、在国际上发现8个寄生虫新种：水貂单孢子囊球虫，南非长颈鹿嗜吞噬无浆体、泰勒虫，灵长类等孢球虫，蛇住肉孢子虫和3个艾美尔球虫新种。发现毕氏肠微孢子虫17个新基因型，其中，非人灵长类7个(CM1-CM7，其中4个新基因型属于人兽共患种类)、蛇4个(CRep-1～CRep-4)，羊驼、虎、狮、袋鼠、牦牛、黑熊、孔雀等多种动物的6个新基因型(CHALT1, CHP1, CHY1, CHB1, CHK1、CHK2)。3、在国内首次发现宠物丝毛鼠存在4种人兽共患寄生虫(泛在隐孢子虫、微小隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫、短膜壳绦虫)，仓鼠中6种(隐孢子虫、贾第虫、短膜壳绦虫、长膜壳绦虫、管状线虫和四翼无刺线虫)，太行猕猴中5种(阿米巴原虫、鞭虫、泡翼线虫、蛲虫、和蛔虫)。4．研究制定了不同动物肠道寄生虫综合防制方案，与郑州市、北京市、上海市动物园等省内外十余家单位进行合作推广，通过检查动物用药前后粪便虫卵数或卵囊数的变化评价用药效果。综合防治方案经多次实施验证，驱虫效果显著：动物寄生虫感染率和感染强度逐年明显降低，避免了动物因寄生虫发病甚至死亡的发生。在控制人畜共患寄生虫感染、减少动物园经济损失等方面，取得了显著的社会效益和经济效益。5.项目获得实用新型专利1项，已经推广应用到全国20余家科研单位和若干养殖场家；发表论文29篇，其中SCI论文7篇(其中一篇在JCR1区)，SCI论文合计影响因子16.2，被引用次数90次；中文核心期刊论文19篇，被引用133次。项目实施过程共培养研究生5名、博士生3名。2016年9月，受河南省科技厅委托，河南省教育厅组织有关专家对该项目进行了成果鉴定。鉴定委员一致认为该项目选题正确、创新性强，技术线路合理，整体达到国内领先水平，其中隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫种类和基因型鉴定研究居国际先进。

成果简介：1、所属科学技术领域：养禽业、动物疫病防控技术。2、主要技术内容：该项目通过对规模化蛋鸡场的饲养管理关键技术、生物安全技术体系研究，新城疫、禽流感H9亚型、禽流感H5亚型、传染性支气管炎、传染性法氏囊病和鸡痘等疫病母源抗体消长规律、免疫抗体消长规律、免疫效果评价、不同免疫技术的对比研究等，构建了河南省蛋鸡疫病防控的关键技术集成。项目含以下关键技术：(1)规模化蛋鸡场的饲养管理关键技术，研究出蛋鸡在不同生长阶段的需求和饲养管理技术要点，解决了蛋鸡饲养管理环节的关键问题；(2)生物安全技术，起草形成了河南省畜牧局文件《河南省规模化蛋鸡场生物安全技术规范》(豫牧医[2015]76号)；(3)新城疫防控技术，研究出活毒疫苗最佳首免日龄、二免日龄，最佳免疫剂量及免疫途径，制定出规模化蛋鸡场鸡新城疫优化免疫程序，形成地方标准(新城疫免疫技术规范DB4117/T182-2015)；(4)禽流感(H9亚型)防控技术，研究出灭活油乳剂疫苗最佳首免日龄、二免日龄及最佳剂量等，制定出规模化蛋鸡场禽流感(H9亚型)优化免疫程序，形成地方标准(H9亚型禽流感抗体检测操作规程DB4117/T183-2015)；(5)禽流感(H5亚型)防控技术，研究出最佳首免日龄、最佳免疫时间间隔，最佳免疫剂量等，制订出禽流感(H5亚型)优化免疫程序；(6)传染性支气管炎防控技术，研究出活毒疫苗(H120株、H52株)最佳首免日龄，二免日龄及加强免疫日龄，最佳免疫剂量等，制定出传染性支气管炎优化免疫程序；(7)传染性法氏囊病防控技术，研究出活毒疫苗(MB株)最佳首免日龄、二免日龄、免疫剂量等，制定出传染性法氏囊病优化免疫程序；(8)鸡痘防控技术，研究出最佳首免日龄、二免日龄、免疫剂量、最佳接种方法等，制定出鸡痘优化免疫程序；(9)大肠杆菌防控技术,建立了鸡源大肠埃希菌快速、直接药敏试验方法，从而科学用药防治鸡大肠杆菌病，转变了规模化、集约蛋鸡养殖场定期药物预防蛋鸡大肠杆菌病和经验用药、轮换用药治疗大肠杆菌病的传统理念。技术经济指标、应用推广及效益情况：蛋鸡场的管理、免疫和细菌病的防控关键技术在驻马店、漯河、南阳、商丘、洛阳、新乡等地推广应用后，不仅能有效防控规模化蛋鸡场的疫病，显著提高鸡群的生产性能，而且还有力地推进了蛋鸡场禽流感H5亚型和新城疫净化工作的开展等。该项目实施过程中，发表论文18篇,其中中文核心期刊论文8篇；编写论著2部；形成了河南省畜牧局文件(豫牧医[2015]76号)；取得国家实用新型专利4项；制定地方标准2项，获省市科技进步奖4项。应用以来创造经济效益78065.3214万元，其中近3年推广应用蛋鸡19430.68万羽次，创造直接经济效益31849.5565万元。若在全省乃至全国推广应用潜在经济效益每年达数亿元，社会效益和生态效益也尤为显著。

成果简介：该项目属于兽医传染病领域。主要内容：该成果基于明确法氏囊新分离活性五肽BP5免疫调节功能的基础上，利用基因工程技术，参照大肠杆菌偏嗜密码子优化设计重组法氏囊免疫融合肽TP5-BP5、Tα1-BP5和Tβ4-BP5基因，构建高效表达重组法氏囊BP5免疫融合肽的基因工程菌株，在大肠杆菌中进行融合基因的表达，并探索重组表达的法氏囊BP5免疫融合肽免疫佐剂特性。该成果为新型免疫佐剂的开发和动物疫病的防控提供了很好的思路。同时对于保障河南养殖业的健康发展也有着重要的意义。主要特点：1.根据大肠杆菌偏嗜密码子设计了重组胸腺TP5和法氏囊活性肽BP5免疫融合肽TP5-BP5(TPB5)基因，并经大肠杆菌原核系统进行了高效表达。重组表达的融合肽TBP5，经动物实验证实，能够有效抑制小鼠肺脏中病毒的复制，具有良好的免疫保护作用。2.设计合成了胸腺Tα1和法氏囊活性肽BP5免疫融合肽Tα1-BP5基因，rTα1-BP5在大肠杆菌中获得可溶性表达，动物实验证实，rTα1-BP5能够同时增强机体体液和细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示rTα1-BP5有助于鼠肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。3.设计并合成重组胸腺Tβ4和法氏囊活性肽BP5免疫融合肽Tβ4-BP5基因，通过大肠杆菌原核表达系统进行了融合基因的表达，重组表达的融合肽Tβ4-BP5能够显著提高灭活H9N2型AIV疫苗免疫后鸡的体液和细胞免疫水平，并且对攻击H9N2型AIV的鸡具有良好的免疫保护作用。4.利用柔性Linker和重叠延伸PCR技术，首次构建了高效表达口蹄疫重组免疫复合肽，经动物免疫实验证实，重组免疫复合肽能够有效增强机体免疫水平。5.该成果密切结合畜牧业生产实际，目标明确、技术路线合理、方法先进、资料翔实、结果可靠。经查新和鉴定委员会确认，该成果有关重组法氏囊BP5免疫融合肽的基因工程表达和新型免疫佐剂的开发具有创新性，在国内同类研究领域居领先水平。应用范围：该研究成果主要应用于新型免疫佐剂的开发和动物疫病的防控。推广情况：该研究成果分别在河南省洛阳、汝州、济源等15个县市的88个养殖场进行了推广试应用，经过近3年来的应用证明，该成果所制备的重组法氏囊BP5免疫融合肽等免疫增强剂，配合疫苗使用，安全性好，无毒副作用。能够增强机体细胞免疫和体液免疫。效果非常显著，不仅有效地防止了疫病的发生，而且还减少了盲目用药，取得了巨大的经济效益。得到了广大养殖场和养殖户的一致好评，同时挽回直接经济损失1825余万元。该研究成果为河南动物疫病防控提供了新的途径，同时对保障河南养殖业的健康发展也有着重要的意义。

成果简介：课题研究蛋鸡感染强病毒新城疫等疫病导致产蛋率严重降低，饥饿疗法对提高产蛋率的效果。经反复试验，饥饿疗法的创新有：1、实施饥饿疗法后，蛋鸡22天后恢复蛋鸡产蛋率达到90%。2、饥饿疗法治疗温和型禽流感较常规治疗死亡率降低90%，疑似感染强毒新城疫死亡率较常规治疗死亡率降低15%。3、提高蛋品质量，延长产蛋期180天，提高蛋鸡场经济效益。

成果简介：该项目旨在通过对廊坊地区流行的传染性法氏囊病病毒的研究，探讨该地区传染性法氏囊病几年来变异的情况，验证新的免疫程序是否合理。采用生物学、免疫学、分子生物学的相关方法和实验技术包括：易感鸡感染实验、琼扩实验、免疫指数测定、组织学病变观察；电镜观察；乙醚敏感实验、氯仿敏感实验、耐酸性实验、耐热性实验；RT-PCR产物鉴定、序列测定分析等方法；1.学实验各指标：易感鸡感染实验结果、琼扩实验结果、免疫指数测定结果、组织学病变观察结果；2.理化学实验各指标：电镜照片、乙醚敏感实验结果、氯仿敏感实验结果、耐酸性实验结果、耐热性实验结果；3.分子生物学实验各指标：产物鉴定结果、序列测定分析结果。研究成果借助兽医院接触一线养殖人员推广，传染性法氏囊病的免疫程序、疫苗、检测等具有广阔的前景。

成果简介：该项目是研制的治疗畜禽胃肠道寄生虫病的发酵中草药，把现代生物技术和传统的中药炮制方法结合起来，采用酵母菌、曲霉菌或枯草芽孢杆菌等微生物发酵的方式对治疗畜禽胃肠道寄生虫病的中草药进行科学炮制处理，通过组方筛选和工艺优化以及详尽的药理学研究，最终得到一种性状稳定、疗效显著的发酵制品。主要技术研究内容：该项目将南鹤虱、使君子、槟榔、芜荑、雷丸、绵马贯众、干姜、淡附片、乌梅、诃子克、大黄、百部、木香、榧子这十四种中药原料混合粉碎过80-120目筛，制得中药粉，利用微生物发酵技术对这些中药粉进行发酵，将发酵产物鼓风干燥至含水量在10%以下，过筛制备即得成品。该项目主要从处方的工艺研究、溶出度研究、药效学及安全性研究、临床应用效果等几个方面进行研究。授权专利情况：2013年申请的《一种治疗畜禽胃肠道寄生虫病的发酵中草药及其制备方法》获得一项发明专利，专利号为：ZL201310457447.7。外观专利(驱虫散)一项，专利号为：ZL201430268442.5。技术经济指标：和普通中药散剂相比，制得的发酵中草药的有效成分的含量显著提高，起毒副作用的物质含量下降，使中药散剂的药效增强，副作用降低，提高其生物利用度。并且有利于药物的吸收和药效的迅速发挥。胃肠道寄生虫病中草药经发酵处理后，毒性降低，各种动物均可安全使用。也没有药物残留，长期使用也不会产生耐药性的问题。应用推广及效益情况：《一种治疗畜禽胃肠道寄生虫病的发酵中草药及其制备方法》是河南亚卫动物药业有限公司组织实施的科技创新成果，所研制的产品分别在河南、山东、河北等主要畜禽养殖省份进行了临床应用，给养殖户和企业带来很好的经济效益。发酵中草药，是把发酵技术应用到中药散剂的一个新的起点，将提高中国的中兽药生产和应用现状，对中兽药和养殖业的发展起到积极的推动作用。造福广大人民，对促进社会进步意义重大，具有很好的社会效益。

成果简介：中国是世界养猪大国，2015年养猪出栏量为7.08亿头，年末存栏量达4.5亿头，猪肉年产量共计5486.5万吨，生猪相关产值达1.4万亿元，占畜牧业总产值40%以上。河南省作为养猪大省，生猪存栏数和母猪存栏数约占全国总量的10%。由于猪病毒性疾病未能得到有效控制，混合感染严重，占总发病率的90%左右，河南每年造成的经济损失约200亿元。常规的病毒检测方法费力，耗时，技术要求高，不适于疾病快速诊断。市售诊断试剂盒如ELISA，乳胶凝集试验等，主要针对单一病原，不能同时进行多种病毒检测，且缺乏与国际检测相应的标准。因此，尽快建立有效的病毒检测方法至关重要。近10年攻关，建立了可以快速、敏感、特异、定量检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪流感H9亚型、猪乙脑病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒10种引起猪群发病的主要病毒。1、建立10种常见猪主要病毒性疾病的PCR检测方法。研究通过设计并筛选多重PCR引物，对PCR反应条件进行优化，共建立10种病毒的PCR诊断方法，进行了临床应用和相关流行病学调查。同时对10种病毒按照DNA病毒和RNA病毒进行分类，开展荧光复合PCR诊断技术研究，建立了10个单重PCR诊断方法，3个二重PCR诊断方法，3个三重PCR诊断方法，1个四重PCR诊断方法。2、创新核酸提取方法，高通量检测。该研究从猪的口腔、鼻腔分泌物、精液、血液等易得的临床样品提取高纯度DNA和RNA，使PCR扩增“一步”完成，简化了操作、避免了易错，同时不采血、无应激。研究建立的实时荧光定量PCR方法与常规PCR方法相比，可以诊断潜伏期感染和早起感染，可以检测突变病原体、区别疫苗接种和野毒感染，具有高通量等特点，有明显创新优势。3、制定3种国家标准检测方法。首次建立了《猪圆环病毒2型SYBR Green I实时荧光PCR检测方法》、《猪传染性胃肠炎病毒RT-nPCR检测方法》、《猪流行性腹泻病毒RT-nPCR检测方法》3种国家标准检测方法。检测标准的建立有利于养猪企业风险评估、疫苗生产质量评估、种猪企业净化效果的评价、与国际技术标准接轨。该研究建立的10种病毒性疾病的PCR检测方法，有利于病毒早期发现和诊断，特别是隐性期诊断，减少由于误诊或不及时诊断造成的损失，为尽早淘汰和采取措施赢得时间。该成果为整体国内领先、部分成果国际领先水平，可作为规模化猪场常见病毒的净化检测方法，同时也为猪主要病毒性疾病的分子流行病学调查，研究发病机理，早期诊断，药物或疫苗的免疫机制提供了试验依据和技术手段。获得国家专利9项，其中发明专利7项、实用新型专利2项。2011年“猪重要病原分子诊断试剂盒产业化开发”项目在“国家大学科技园杯”科技创新大赛中获得一等奖；2014年获“创青春”创业大赛特等奖；2015年“猪重要病毒性疾病分子快速检测方法的建立与标准制订”获河南省教育厅颁发的科技成果壹等奖。在河南省诸美种猪育种集团有限公司、河南省动物疫病预防控制中心等多家单位进行临床应用，累计创造经济效益87816.36万元，经济效益显著，社会效益明显。

成果简介：进出境海鱼异尖线虫幼虫感染及生态分布的初步研究为了解舟山进出境鱼类异尖线虫幼虫感染情况和评估人群感染潜在的危险性,对舟山口岸进出境鱼类和出口网箱养殖鱼类异尖线虫幼虫感染情况进行了调查。共检查舟山进出口海鱼1152尾，发现645尾感染异尖线虫幼虫，总感染率为55.99%(645/1152)，发现检出10065条异尖线虫幼虫，总感染强度为15.60（10065/645）。根据上述调查结果显示，舟山进出境鱼类异尖线虫的感染率较高，生食本文所列的阳性海鱼时，应注意对异尖线虫病的预防。异尖科线虫rDNA ITS序列分析以进出口的鱼体内分离的、形态上未定种的12条线虫幼虫作为研究对象，以保守引物扩增rDNA的内转录间隔区（ITS）及5.8S序列。将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pMD18-T载体，用菌落PCR和酶切鉴定阳性菌落，对阳性菌落进行测序分析。经分析后11个虫体实现了定种，有一种虫体由于缺乏相关基因序列资料未能实现区分，但从扩增片段与其他虫体区别较大，且与其他异尖科线虫序列差异较大，可以基本判定其不属于异尖科线虫虫种。结果证明ITS序列的确为理想的种间鉴定的遗传标记。PCR-RFLP方法鉴定进出口海鱼中的异尖线虫幼虫对异尖线虫单条线虫总DNA进行PCR扩增，获得其rDNA-ITS序列，测序后与基因库中DNA序列比较，并根据rDNA-ITS序列比较结果鉴定线虫的种类，最后通过酶切技术获得线虫的PCR-RFLP图谱并以此作为线虫鉴定的分子标签。建立异尖线虫虫种分子生物学检测体系，以实现对其快速准确的鉴定。

成果简介：对横县和南宁淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况进行调研，结果显示横县麦穗鱼感染率最高为79.46％;银飘鱼次之为59.17％;其他淡水鱼虾感染率为15.00％。此外，麦穗鱼和银飘鱼在不同季节华支睾吸虫囊蚴感染率有较大差别，秋、冬季季节感染率较高。抽检南宁市5种淡水鱼总感染率为4.60％。其中鲤鱼的感染率最高为16.70％，未发现草鱼、青竹鱼和斑鱼感染的情况。此外来源地不同的淡水鱼囊蚴感染率有一定差异。研究常见几种调味料和添加剂对离体华支睾吸虫囊蚴的影响，结果显示调味品食醋、白酒、青芥末和大蒜汁需分别作用90h、15h、8h和36h囊蚴才全部死亡，杀死囊蚴效果的递减顺序为:青芥末＞白酒(56°)＞大蒜汁＞食醋。食品添加剂柠檬酸和亚硝酸钠对囊蚴有一定作用，常温30h处理可以使90％以上囊蚴死亡。得出这几种调味料和添加剂能够致死囊蚴，但所需时间较长。研究臭氧对囊蚴致死效果的影响。结果表明，通入臭氧时间相同时，先放囊蚴后通臭氧(65.33％)比先通臭氧再放囊蚴(9.33％)的试验组死亡率显著提高。在前一方式下，随着臭氧通入时间延长，囊蚴死亡率明显提高;通臭氧20min，死亡率达到100.00％，后尾蚴全部停止活动。在密闭条件下，囊蚴死亡率随臭氧初始浓度的增大而增大。但是几个浓度处理组的囊蚴的脱囊率都不超过30％，说明臭氧在水中易分解。研究了超声波处理对离体和活体囊蚴的影响。结果表明超声波对离体囊蚴的破碎效果非常显著，80w处理3min基本能达到使囊蚴全部破碎。20w超声处理鱼肉3min，囊蚴囊壁凹凸不平，结构不清晰，几乎停止活动;80w处理3min之后，囊蚴极度浑浊，囊蚴全部死亡。鱼肉的蛋白溶解量、色泽和质构随超声功率增大及时间延长破坏增大。超声波处理鱼肉在3min/20w或2min/40w以内比较适合。

成果简介：严重危害中国冷水鱼与海水鱼养殖业的重大外来水生动物疫病，包括流行性造血器官坏死病（EHN）、鲑鱼胰脏病（PD）和病毒性出血性败血症（VHS）监测与预警技术研究，研究免疫磁珠吸附病毒技术。建立高灵敏度的EHNV、CCV和蛙病毒检测方法，不仅可以对发病鱼和两栖类进行确诊，还可对没有临床症状的携带病毒的水生动物进行检测。筛选建立敏感细胞系。填补中国检验检疫领域KHV敏感细胞系和CyHV-2敏感细胞系空白，为建立相应病毒分离体系和技术提供平台。研究焦磷酸测序技术。利用其可重复性和精确性建立EHNV、VHSV、KHV、CyHV-2和CCV的焦磷酸测序确证检测技术，为适时、快速、直观地临床检验提供理想的技术操作平台。研究液相芯片检测方法。利用其高通量的特性建立VHSV液相芯片检测技术，同时具有较高的特异性与灵敏性，节约人力、物力、时间及样本，为流行病学调查和临床诊断研究提供技术。

成果简介：乌鳢肌肉营养组成，提出其饲料必需氨基酸模式；对其饲料形态进行筛选，提出其苗种摄食驯化技术；主要营养素需求的定量；筛选降低氮磷排泄的饲料配方、免疫增强剂和饲料加工工艺；制定其饲料标准和投饲策略等系统研究，与同类产品和技术相比，营养全面，降低氮磷排放，对环境污染小，指导乌鳢养殖和配合饲料生产两个行业的发展。

成果简介：近年来我国水产养殖中病毒性疾病造成的损失呈上升趋势，由于病毒性疾病大多缺乏具有针对性的治疗药物和手段，疫苗防控越来越受到水产养殖业的重视。目前大量使用的注射免疫方式使得水产疫苗的应用和推广受到了很大限制，开发使用成本低廉的DNA疫苗和简单的免疫方式对水产养殖业的发展尤为重要。大量研究表明，基于粘膜系统的疫苗能够提高病原体感染后实验动物的生存率。DNA疫苗不仅能够通过粘膜系统使鱼体产生足够的免疫保护力，同时还能够刺激机体非特异性免疫产生额外的免疫保护。鳜鱼病毒病对我国的鳜养殖业造成很大危害，其主要病原是传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)。根据全国水产技术推广总站数据显示，2015年鳜鱼养殖规模较上年减少58%。目前，该病没有针对性强的特效药物，主要通过水质调节和免疫增强减缓病症，鳜鱼养殖业急需防治疫苗。由于鳜鱼是肉食性鱼类，性格暴躁，只吃活鱼，口服或注射的免疫方式很难在鳜鱼养殖中使用，因而疫苗浸泡免疫是鳜鱼免疫的唯一选择。ISKNV主要衣壳蛋白（major capside protein, Mcp）是病毒粒子的主要抗原蛋白，该研究克隆了ISKNV Mcp基因，构建了重组Mcp基因的DNA疫苗（pcMCP），并对鳜鱼苗进行浸泡免疫。研究表明，针对ISKNV引起的病毒性疾病，以ISKNV MCP基因构建DNA疫苗，通过浸泡免疫的方式对鳜鱼进行免疫，实施后血液中白细胞含量、白细胞吞噬能力和超氧化物歧化酶（SOD)都显著提高，IgM和Mx基因的mRNA在72小时大量表达。攻毒试验显示，pcMCP浸泡免疫降低了感染传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）鳜鱼的死亡率。以ISKNV MCP基因为目的基因构建成DNA疫苗pcMCP，对鳜鱼浸泡免疫效果表明，pcMCP DNA疫苗能够刺激免疫系统，对非特异性免疫和IgM的表达都具有激活作用。免疫后血液中白细胞含量、白细胞吞噬能力和SOD都显著提高，14天时均达到最大。IgM和Mx基因的mRNA表达研究显示，在72小时大量表达，96小时达到最大，分别是对照组的3.05倍和2.02倍。攻毒试验显示，浸泡免疫能够有效保护ISKNV感染的鳜鱼，在第11天，浸泡免疫组的累计死亡率仅为40%，而对照组死亡率都达到了100%，表明pcMCP浸泡免疫降低了感染传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）鳜鱼的死亡率。通过对鳜传染性脾肾坏死病毒DNA疫苗与全病毒灭活疫苗浸泡免疫后免疫系统的活化进行比较，确定鳜传染性脾肾坏死病毒DNA疫苗的免疫保护力。结果表明，DNA疫苗组在免疫后随时间推移，白细胞数目逐步升高，到21天后白细胞数目大于灭活疫苗组，浸泡免疫后血清中的抗氧化酶SOD酶活性都有所提高；在时间上，DNA疫苗较灭活疫苗活化时间晚，但作用时间长，28天时达到最大145U/mL。在激活抗病毒相关基因方面，IgM和Mx基因mRNA表达量在DNA疫苗浸泡免疫后随时间的推移逐步升高，表达时间较病毒灭活疫苗长。在DNA疫苗和病毒灭活疫苗的比较研究中发现，DNA疫苗和灭活疫苗浸泡免疫在免疫应答的时间上具有互补性。具体讲，灭活疫苗浸泡免疫的免疫应答快，但单次免疫的持续性短，而DNA疫苗浸泡免疫的免疫应答晚，但免疫保护持续时间较长。该项目中构建的针对鳜传染性脾肾坏死病毒的高特异性DNA疫苗，通过注射免疫研究明确了DNA疫苗的有效性。由于浸泡免疫研究的实验室阶段和疫苗应用的大塘阶段水环境差别较大，大塘水体中各种颗粒物、微生絮团大量存在，对极性的疫苗分子有较大的吸附和沉降作用。通过中和疫苗表面电荷极性确保在养殖水体中疫苗分子的有效浓度，从而确保了浸泡免疫效果。通过开展鳜传染性脾肾坏死病毒DNA疫苗大塘实验，研究了鳜传染性脾肾坏死病毒DNA疫苗大塘试用的抗病毒效果。在鳜鱼苗下塘前，将疫苗加入活鱼运输车进行免疫，免疫时间确保大于30分钟；鱼苗下塘后与周边未免疫的鱼苗比较鳜鱼虹彩病毒的发病和用药情况。结果表明，DNA疫苗两次免疫后对鳜传染性脾肾坏死病毒病的预防总有效率为67.8%，免疫组的存活率在77.5%～88.5%，渔民增收超过15%以上。我国水产养殖密度大，病害频发，药物的大量使用严重影响了水产品质量安全，给我国本已脆弱的水资源环境带来极大的压力。水产养殖用疫苗，尤其是DNA疫苗构建极为简便，生产成本低廉，生产工艺技术难度低，储蓄运输条件方便，为市场急需产品。该研究表明，DNA疫苗浸泡免疫能够有效刺激鳜鱼鱼体产生免疫保护，降低养殖过程中的养殖风险，减轻鳜鱼养殖病害，减少鳜鱼养殖中的药物投入和人力投入，增加渔民收入。特别是作为我国鳜传染性脾肾坏死病防治首例DNA浸泡免疫产品，如果能够在鱼苗出厂前或下塘前进行免疫浸泡，将会起到非常好的免疫效果，产品市场需求量巨大，应用前景十分广阔。

成果简介：该项目属于水产养殖技术领域。项目主要内容、特点：该成果在国内率先确定了无乳链球菌是罗非鱼链球菌病的主要病原；建立了基于链球菌病病原的快速检测方法和诊断技术；研发了针对链球菌病的灭活疫苗、亚单位疫苗等多种疫苗并进行了示范与应用，获得良好的免疫效果；筛选了一批免疫增强剂，用于链球菌病的绿色防控；培育并推广了1个罗非鱼养殖优良新品种，提高了罗非鱼苗种质量。优化了罗非鱼养殖技术，建立3种罗非鱼养殖模式，提高了罗非鱼养殖经济效益。根据罗非鱼养殖中的关键控制点，编制了5项罗非鱼养殖过程、养殖模式和病害防控等相关技术规范和标准，并在海南省多个地区进行广泛推广。该成果通过对病原菌的确证、快速检测方法的建立、疫苗的免疫示范与推广、养殖技术的优化、养殖技术相关标准的编制以及优良品种的选育等关键技术的集成，并进行了广泛示范与应用，建立了一套罗非鱼链球菌病综合防控体系，有效遏制了罗非鱼链球菌病的暴发，显著减少了抗生素的使用量，提高了罗非鱼产品品质，提升了罗非鱼出口竞争力，获得了十分显著的经济效益。该成果获得国家水产新品种1个，建立了病原快速检测技术3项，建立养殖模式3种，授权发明专利12件，制定了海南省地方标准5项。项目应用推广情况该成果“罗非鱼链球菌病综合防控关键技术研究与应用”琼海市、文昌市和海口市等地区共计示范应用了32600亩，有效控制了罗非鱼链球菌病的暴发，共计新增产值39171.2万元，新增纯收入15489.28万元，新增收节支总额为19873.94万元，经济效益十分显著。其中，项目建立关键技术之一“鱼-虾/蟹混养模式”，不仅有效利用了水体资源，而且显著减少了罗非鱼链球菌病的暴发，获得了更高的经济效益，该养殖模式在海口市多个养殖场示范应用了1500亩，实现了增产增收2697.95万元。项目建立的另一项关键技术“鱼菜共生养殖模式”，可提高废物利用率，促进生态循环，减少病害发生，该技术示范面积200亩，实现了增收节支总额128.93万元。制定了罗非鱼养殖技术和病害检测相关规范和标准5项，并且进行了广泛推广与应用，对海南省罗非鱼链球菌病的防控防治具有重要指导意义。

成果简介：在鱼类学研究和生产实践中常需要对鱼类活体行进外部形态可量性状的测量，鱼的外部形态可量性状特征参数是渔业资源调查、鱼苗繁育、鱼类育种的重要基础参数。在数据采集时，通常采用直尺，量规，三角板等工具对鱼体进行数值测量，由于操作过程中的人为因素及所用工具精确度，读取时容易出现数值误差、读取速度慢，也会使鱼体长时间暴露于空气中造成损伤。如何解决这一问题，使所有测量的数据能够真实、准确地反映出个体的外部形态，是一个需要解决的棘手问题。该实用新型涉及水产品外部形态参数指标测量技术领域，具体是一种鱼类外部形态可量性状的数码测量装置，其包括底板、转套、摆臂和数字显示测距尺，所述底板的左侧和前侧分别设置有用于对鱼体进行定位的纵挡板和横挡板，底板上还设置有支柱，转套套在支柱上，转套能在支柱上滑动，数字显示测距尺通过多根摆臂与转套连接，摆臂两端的连接处都设置有万向节，通过万向节连接。支柱设置在地板的左后角上。所述的转套能在支柱上360度转动。该实用新型可以快速、准确地对鱼类形态的数值进行记录，避免人为估读带来的数值误差。该实用新型的鱼类外部形态的数码测量装置，通过数码显示屏准确读取，可以快速、准确地对数值进行记录，避免了人为估读带来的数值误差。通过蓝牙技术的升级，还可实现实时录入，提高了工作效率，在测量过程中通过任意点位的置零，数码显示屏移动后屏幕可显示精确到0.1-0.001mm的数值，实现各部位精确数值的读取，减少肉眼观测出现数值估读产生的误差，更好的记录鱼体形态数据，更利于鱼类学研究。

成果简介：罗非鱼是全球主要经济鱼类之一，具有生长快、抗病力与抗逆性强、肉质好、繁殖力强、适应性广以及群体产量高等一系列优点，现已成为南方各省出口型养殖规模最大的鱼类，产量占全世界的50％，罗非鱼产业对于增加就业机会、提高农民收入都有十分重要的意义。2009年以来，国内主要的罗非鱼养殖区爆发了非常严重的罗非鱼流行病，90%以上的罗非鱼养殖户出现不同程度发病，急性发病病例逐年增多，3～7天可造成整塘鱼死亡六到八成。患病罗非鱼在水面离群独游，游姿失衡，眼球突出，被养殖户形象的称为“突眼病”。病原分析表明引起罗非鱼“突眼病”的病原为链球菌，主要为海豚链球菌(Streptococcus iniae)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。据统计，近几年因链球菌病导致罗非鱼产业的损失达20亿元，如何防治罗非鱼链球菌病已成为农业和渔业管理部门最为关注的问题。早期诊断是疾病预防的重要手段，该成果开发了一种快速简便、灵敏度高、特异性高的链球菌病原——无乳链球菌的半定量分子生物学诊断技术，利用该技术可在养殖过程中不通过病原菌的培养即可诊断鱼体内病原的数量变化，从而反映无乳链球菌感染鱼体的严重程度，养殖户可以根据感染情况采取适当措施提前预防。该研究为罗非鱼链球菌病的防治提供一种全新的思路和策略，对于预防链球菌病的爆发、提高农民收入有重要的实际意义，也是水产养殖业走向健康持续发展的重要途径。主要成果如下：确定了罗非鱼血液中无乳链球菌的浓度与患病程度间的关系＜10^5CFU/ml，罗非鱼表现出正常的生长状态，从外观看不出受到感染；10^5-10^7CFU/ml，罗非鱼表现出较明显的患病特征；＞10^7CFU/ml，罗非鱼已濒临死亡或已死亡。研发了一种罗非鱼无乳链球菌免培养半定量的诊断技术该技术的操作流程如下：(1)定期使用含有无乳链球菌的标准罗非鱼血液样品分别进行4次不同循环次数的巢式PCR，建立检测灵敏度的标准对照表，(2)通过鱼臀鳍抽血对待建罗非鱼进行血液采集，按1:1的比例与事先准备好的去离子水混合均匀，一般按500μl+500μl的比例进行混合。(3)使用与建立标准对照表时同批次的Taq酶对稀释后的血液样品进行4次不同循环次数的巢式PCR，巢式PCR的方法按常规操作即可。(4)对比步骤3中的实验结果和标准对照表，可大致判读待测罗非鱼血液中的无乳链球菌浓度，并确定患病程度。该方法所达到的技术指标如下：以纯培养微生物为检测对象，检出限＜10×10^3 cfu/ml；以血液检测对象，检出限10×10^4cfu/ml；从采样到完成检测的时间小于6h；诊断准确率大于95％。

成果简介：该研究针对中国渔用饲料中鱼粉原料供应紧张的现状，开发了一种可以替代（或部分替代）鱼粉的优质小肽豆粕产品，具有重大的社会意义和经济效益。小肽豆粕产品是一种豆粕的深度开发产品，应用豆粕经由发酵法、酶解法处理后研制所得。同时，该研究对小肽豆粕进行了全面的营养性能评价，结果表明其营养价值优于普通豆粕。通过小肽豆粕在青鱼、青虾饲料配方中的应用效果研究，结果表明，小肽豆粕蛋白在青鱼幼鱼、鱼种饲料中替代鱼粉蛋白的适宜水平为25%，此时青鱼的生长不受影响。此外，青鱼鱼种可以有效利用饲料中的晶体氨基酸，在小肽豆粕型饲料中补充外源赖氨酸及蛋氨酸，可有效地改善青鱼的生长性能。小肽豆粕可以作为青虾饲料中较好的蛋白源，小肽豆粕替代鱼粉的比例为25%时生长性能最佳，当小肽豆粕替代鱼粉的比例过高时，会诱导氧化应激，影响虾的免疫性能。在平衡氨基酸情况下，综合考虑生长和免疫性能，青虾饲料中鱼粉蛋白和小肽豆粕蛋白最佳配比为1:1。因此，该研究所开发的小肽豆粕产品，可作为一种优质的蛋白源应用于水产饲料中。