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[博士论文] 董亮亮
微生物学 华中农业大学 2015(学位年度)
摘要:Synechocystis sp.PCC6803是最常见的研究光合作用和碳水化合物代谢生理和遗传特征的模式生物。它们除了能够自养生长外,还能够利用外界碳源(比如葡萄糖)进行光能混养或者异养生长。Synechocystis sp.PCC6803中涉及碳水化合物代谢的途径由大量的已知或未知基因协同调节,这些基因对细胞的生存和生长都是非常重要的。
  在本研究中,发现了一个新的基因slr0280,编码一个假定的周质蛋白。研究表明,Slr0280是混养和异养条件下维持Synechocystis6803完全生长的新的调节因子。当slr0280从基因组中敲除后,发现突变体—△slr0280在有葡萄糖存在的条件下生长比野生型要慢。随后发现这主要归结于△slr0280中涉及糖原分解代谢、氧化磷酸化途径、Calvin cycle的关键基因转录水平的下调。酶活分析及蛋白质组学分析分别进一步证明△slr0280中氧化磷酸化途径和Calvin cycle活性的降低。除此之外,还发现△slr0280对葡萄糖吸收率降低以及细胞内糖原含量增加。为了确定Slr0280蛋白自身的特征,通过圆二色谱及凝胶过滤层析分析,发现Slr0280在溶液中是以单体的形式存在,且二级结构中包含大量的β折叠和无规则卷曲。随后通过细菌双杂交实验,鉴别出一些涉及碳水化合物代谢的蛋白与Slr0280有相互作用。Slr0280中的DUF2233结构域是主要的,但并不是唯一的,负责与其它蛋白相互作用的部分。Slr0280可能是通过自身多结构域与其它蛋白相互作用,进而协调相应的调节。这些数据暗示了Slr0280在碳水化合物的代谢中起到一个温和正调节子的作用,而其发挥调节作用则是通过直接或者间接的蛋白质相互作用。为了从结构方面理解Slr0280的功能,对Slr0280进行了结构方面的研究。从初步获得的Slr0280的晶体结构来看,Slr0280的结构中含有大量的β折叠,与预测的二级结构比较相符。然而要把Slr0280的功能与结构部分相互联系起来还有很多工作要做。
  ApcD、ApcA均是藻胆蛋白的α亚基,两者有着很高的同源性。然而ApcD的光谱相对于ApcA发生了红移。通过对AP-B晶体结构分析,发现ApcD在接触PCB的位点有6个氨基酸残基与ApcA不同。随后通过定点突变技术构建了5个ApcD的突变体(W87Y、Q80T、Y65V、Y85L、M126V)。通过光谱分析发现,ApcD(Y65V)及ApcD(W87Y)的光谱比野生型ApcD发生了一定程度的蓝移。然而这两个突变体的光谱仍与ApcA有一定差别,这说明造成ApcD光谱红移的原因是多种因素影响的结果。
[硕士论文] 陆清
遗传学 中南大学 2014(学位年度)
摘要:复杂性状由遗传因素、表观遗传因素和环境因素共同决定,并在群体中呈现连续性变异。这些变异通常与DNA遗传多态有关,其中最常见的遗传多态是单核苷酸多态(SNP)。目前,复杂性状与SNP的关联研究已成热点,但仍有许多复杂性状的遗传基础还不是很清楚,这就需要更有效为的研究方法来推动它们的研究。最近,我们研究发现:在人类或酵母和线虫等模式生物中,某些复杂性状与次要位点含量(Minor Allele Content,MAC)存在很强的相关性,如在秀丽线虫的HW npr-1 RIAILs(Recombinant Inbred Advanced Intereross Lines)中,MAC同线虫离开食物频率(leaving rate)存在相关性。这就说明MAC通过某种方式调控了相关基因的表达,从而影响相应的复杂性状。线虫的觅食行为是一种受多基因调控的复杂性状,以往的研究证实:npr-1、glb-5以及tyra-3等基因参与调控这一行为,但具体的神经和分子机制还不是很清楚。
  目标:建立一种新的筛选复杂性状相关基因的方法。
  方法:本实验以线虫的觅食行为作为研究性状。利用基因表达差异显著性分析软件(SAM),从HW npr-1 RIAILs中筛选mRNA表达水平同时与MAC和leaving rate相关的基因,作为该行为相关基因的候选基因。然后,随机从候选基因中挑选部分基因,通过RNA干扰技术对这些基因的功能进行分析和验证,以证实该方法是否有效和可行。
  结果:在HW npr-1 RIAILs的基因表达谱中,有492个基因的表达与MAC相关,173个基因的表达与leaving rate相关,27个基因的表达同时与MAC和leaving rate相关。从这27个基因中随机挑选4个表达上调基因(fbxa-103、lnp-1、ZC239.14和F42G2.2)和1个表达下调基因(nspd-7)进行RNA干扰验证。与阴性对照相比,fbxa-103、lnp-1和ZC239.14被干扰后,线虫的leaving rate均显著降低;nspd-7被干扰后,线虫的leaving rate显著升高。
  结论:从基因组的整体遗传变异水平和性状两个方向筛选复杂性状相关基因的方法是有效和可行的。同时也初步揭示了MAC可以通过调控相关基因表达影响复杂性状,这为复杂性状的遗传基础研究提供了新的思路。
[硕士论文] 许昭发
遗传学 中南大学 2014(学位年度)
摘要:碘是生物体必需的一种微量元素,在高等动物中主要用于合成甲状腺激素,调节代谢。碘缺乏和过量都会导致严重的后果,碘缺乏是甲状腺功能低下和智力发育迟钝的一个主要原因,而碘过量是高碘性甲状腺肿、甲状腺功能亢进等诸多甲状腺疾病的主要风险因素。然而,碘过量致病的分子机制尚不明了。相对哺乳动物,碘在其他动物上的研究也很少,秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)是一种常用的、重要的模式动物,而碘在秀丽线虫上几乎没有研究。
  目的:研究过量碘对秀丽线虫生长发育的影响,了解线虫应对过量碘的基因及分子机制。
  方法:在线虫培养基中加入不同浓度的碘,培养野生型线虫N2,观察过量碘对线虫生长发育的影响。通过EMS(ethyl methanesulfonate)正向遗传筛选获得相关突变体,利用SNP(single nucleotide polymorphism)遗传作图分析定位突变所在染色体及区间位置,并克隆突变基因。用DCF-DA(2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate)对不同品系线虫体内活性氧族(reactive oxygen species,ROS)水平进行检测。
  结果:我们在线虫培养基里加入不同浓度的碘化钠,发现野生型线虫呈现一种碘浓度依赖的负相关生长模式,当浓度达到5mM及以上时,线虫会停滞在L1到L2幼虫期。
  我们用化学诱变剂EMS诱变野生型线虫,在10000个F2的筛选中,最终得到了12个能在5mM碘离子盘中存活的独立突变,可能影响四个基因。目前我们已经克隆了两个基因:bli-3和tsp-15,其中bli-3编码线虫的同源双重氧化酶(dual oxidase),tsp-15编码一个和BLI-3相互作用的四次跨膜蛋白。RNAi实验表明双重氧化酶成熟因子DOXA-1(dual oxidase maturation factor 1)也参与高碘浓度导致线虫发育停滞的效应。
  我们对L1线虫体内氧化自由基水平进行检测,发现用碘处理后线虫ROS有所升高,而bli-3及tsp-15的突变则会抑制这种ROS的升高。
  结论:
  1、过量碘离子导致野生型线虫N2停滞在幼虫期;
  2、BLI-3/TSP-15/DOXA-1双重氧化酶复合体功能缺失后可抑制过量碘导致的线虫停滞效应。
  3、过量碘通过BLI-3/TSP-15/DOXA-1双重氧化酶复合体促使线虫体内ROS合成。
[硕士论文] 朱虎
动物学 湖南师范大学 2014(学位年度)
摘要:肥胖是一种因体内脂肪堆积过多而严重影响人类健康的复杂疾病,既受遗传因素也受环境因素和基因的相互作用的影响。肥胖通常伴随着心血管疾病、高血压、糖尿病等疾病的发生,因此提高了临床死亡率,给人类的生活、工作带来许多不便,严重影响到人类的健康。衡量肥胖有很多种方法,最常见和实用的办法就是测量身体质量指数(BMI)。脂肪含量、脂肪含量百分比也是常见的研究肥胖的相关表型。它们作为肥胖的重要风险因子,有很强的遗传决定,遗传力一般都在0.5以上。目前通过全基因组关联研究(GWAS),候选基因关联研究和连锁研究鉴定了一些和肥胖相关的基因/区域,但是这些基因/区域仅仅解释很少一部分遗传力,并未完全阐述肥胖的遗传机制。为了进一步阐明肥胖的分子遗传机制,探讨基因间相互作用对肥胖的影响,本研究对肥胖进行了两部分的研究。第一部分,我们采用meta分析,在8个不同的人群中验证肥胖的6个候选基因,通过meta分析,我们共鉴定了45个位于FTO基因上的SNPs和肥胖表型相关,并且通过了Bonfferoni校正(p=1.68×10-5)。其中最显著的SNP是位于FTO基因上的rs7185735(和BMI,FM,PBF的关联p值分别为1.01×10-7,1.80×10-6和5.29×10-4)。连锁不平衡分析发现这45个SNP处于完全连锁不平衡状态(r2>0.80),它们处于同一个大约50kb的连锁不平衡区块。另外5个基因中(CTNNB1,PPARG,LEPR,UCP2和ADRB2),分别在CTNNB1,PPARG和LEPR基因上发现26,11和33个SNP和肥胖的关联呈现边缘显著性(p值从1.53×10-3到4.94×10-2)。另外通过性别和种族meta分析发现一些SNP/基因存在性别特异性和种族特异性,如FTO基因上的rs16952725在男性样本中对BMI关联p值为6.87×10-4,但在女性样本中对BMI关联p值为0.55,(发现35个SNP的p值小于1×10-5,但在非白人中关联p值大于0.05)。通过该研究,我们验证了FTO,CTNNB1,LEPR和PPARG对肥胖的贡献。尤其在分析同时也鉴定了FTO基因的一些变异具有性别和种族特异性。
  第二部分,在中国人群中进行基因相互作用分析,首先在1627个中国人群中进行GWAS分析,将结果显著(p≤0.05)的SNPs进行基因相互作用研究,并将(p<1×10-4)的结果在2286个美国白人中进行验证。在中国人群的相互作用分析中,最显著的结果是位于1号染色体的rs6517826和位于2号染色体上的rs10203899,他们分别位于Mir548X和LOC101927865基因上(p=4.01×10-9)。但在验证分析中,未发现这一对SNP在白人样本中得到验证。在得到验证的结果中,我们发现前15对结果有9对相互作用的SNP位于TCERG1L和CYP19A1基因上。其中3个SNPs位于TCERG1L,4个位于CYP19A1上。最显著的一对结果是位于TCERG1L上的rs2918147与位于CYP19A1上的rs10519299的相互作用(p=1.62×107,白人验证结果p=1.73×10-2)。
  研究表明在TCERG1L和血浆脂联素相关,而脂联素对肥胖有很重要的调节作用。CYP19A1基因编码芳香化酶,它可能间接地通过调节雄激素和雌激素在脂肪组织中的含量来影响身体脂肪的分布。许多的研究表明,CYP19A1已被鉴定为潜在的肥胖候选基因。但是对这两个基因的相互作用机制还不清楚。本研究第一次发现了TCERG1L基因和CYP19A1基因的相互作用与肥胖相关,可能为以后从分子生物学功能水平研究和相互作用机制研究与肥胖的关系奠定了基础。
[硕士论文] 张红梅
园林植物与观赏园艺 安徽农业大学 2013(学位年度)
摘要:本文利用ISSR技术对安徽省黄精属植物进行了遗传多样性分析。主要包括以下品种:黄精(Polygonatumsibiricum)、多花黄精(PolygonatumcyrtonemaHua)、长梗黄精(PolygonatumfilipesMerr)、湖北黄精(PolygonatumzanlanscianensePamp.)、玉竹(Polygonatumodoratum(Mill.)Druce)。通过ISSR分子标记方法,从DNA水平对安徽省黄精属不同地区的14种植物进行遗传多样性分析,并根据特异性条带利用UPGMA方法构建聚类树状图进行聚类分析,获得以下主要结果:
  1、以多花黄精作为研究对象,选用改进的CTAB法提取黄精叶片的基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳检测和OD值检测表明:提取的DNA条带均在23kb左右,OD260/OD280均在1.6-2.0之间,符合分子生物学实验的要求,确定了适合的黄精属植物基因组DNA提纯的方法。
  2、采用5因素4水平的正交实验,通过对影响PCR反应的TaqDNA聚合酶、buffer(Mg2+)、模板DNA、dNTP和引物等因素的筛选,建立了黄精属植物最适的ISSR-PCR反应体系,即25μl的反应体系中含有1.0UTaqDNA聚合酶,3.5mmol/Lbuffer(Mg2+),80ng模板DNA,0.08mmol/LdNTP和0.16μmol/L引物。
  3、在100条UBC引物(UBC801~UBC899)中初选出60条适合黄精植物基因组PCR扩增的引物,利用上述体系通过梯度PCR反应确定了各引物的最适退火温度,最终筛选出10条效果最优的ISSR引物。
  4、利用确定的10条效果最优的ISSR引物对提取的14种黄精属植物的DNA进行PCR扩增,共扩增出115条重复性高的、清晰的条带,其中多态性的条带为114条,多态性百分率为99%。每个引物扩增出的条带平均为10~13条,其中条带重现率为92%。扩增条带的大小主要集中在200~3000bp。
  5、利用NTSYS-pc2.10e聚类分析软件对14个黄精属植物的Jaccard遗传相似系数进行了计算,并利用UPGMA方法构建了聚类树状图。在14个黄精属植物中,亲缘关系最近的为采自九华山和黄山的玉竹,遗传相似系数为0.6870,遗传距离为0.3754,说明了不同地域的分布并没有让其产生教大的遗传变异。亲缘关系最远的为采自九华山、黄山的长梗黄精和采自合肥林科院的黄精,遗传相似系数为0.4261,遗传距离为0.8531,说明了它们之间遗传变异程度较大。
  6、利用POPGENEversion1.32软件对四个亚类进行居群遗传多样性和居群遗传结构的分析,得出本实验测定的各遗传参数为:有效等位基因数Ne为1.5888,期望杂合度H为0.3489,Shannon信息指数I为0.5229,多态性条带百分率PPB为99.13%。黄精四个亚类种水平的基因多样性Ht=0.3500,居群内基因多样性Hs=0.1985,居群间基因分化系数Gst=0.4328,基因流为Nm=0.6553。
[硕士论文] 李祎
遗传学 安徽农业大学 2013(学位年度)
摘要:通过理化诱变创建发掘出新的突变基因,接着对其功能缺失或者功能获得性进行分析,进而阐明基因的功能,已经成为功能基因组学研究的一个重要的方法。
  本论文围绕重离子束辐照粳稻品种武运粳7号获得的一个螺旋生长突变体命名为hk759,对该突变体农艺性状、表型、螺旋性状发生的外界条件、调控机制以及遗传方式等开展研究,主要结果如下:
  1突变体hk759的特性研究
  1.1该突变体螺旋生长特性全生育期、全株器官表达;观察显示该突变体在幼苗生长期就表现出螺旋生长的特性,在成熟期叶片,茎秆、根系和谷粒中均表现出螺旋性状,其螺旋方向为逆时针。在成熟期时,该突变体还表现出分蘖角度增加,株型松散;矮化,叶片半卷,部分螺旋;根系长度和数量都显著增加,螺旋程度明显;谷粒颖壳开裂率高等特点。
  1.2螺旋生长是细胞不对称发育结果;通过石蜡切片对叶芽鞘纵切面进行观察发现:hk759正常部位的左右细胞数目和细胞长宽比并无差异。但是螺旋部位向内侧方向的表皮细胞的长度相比于弯曲外侧方向的表皮细胞较小,仅为外侧细胞的88%,而细胞宽度比外侧方向的细胞宽度大,为外侧细胞的1.08倍。
  1.3突变体螺旋性状遗传受隐性单基因控制,对突变体的突变基因进行初步定位将其定位在两个疑似位点。
  2突变体hk759的螺旋机制的研究
  2.1.螺旋生长特性与光照有关;hk759螺旋程度随着光照强度的增强,螺旋程度降低螺旋圈数减少。螺旋圈的直径变大,而且随后将生长在黑暗条件下的植物放在正常光照下进行培养,会发现突变体物的螺旋程度随着早期生长在黑暗条件下培养的时间增加而增强。
  2.2螺旋生长特性与根系分泌产物有关:hk759可以诱导共同生长的野生型地上部分表现不同程度的螺旋性状。将hk759和野生型分别在地上和地下部分隔离,前者野生型会表现出轻微的螺旋性状,后者野生型不表现螺旋性状。随着野生型地下部分与突变体接触的越多,其表现出螺旋性状的植株比例越大,螺旋程度加强,螺旋圈数增多,螺旋的直径越来越小,螺旋的程度越来越密集。
  2.3突变体螺旋性状与内源激素IAA有关;用液相色谱法法测定hk759和野生型三叶一心时期幼苗中IAA、ABA和GA三种主要内源激素的含量。突变体幼苗的IAA含量为6.15μg·g-1,与野生型相比增加了46.7%,ABA的含量为0.35μg·g-1,与野生型降低了27.7%,而GA的含量为2.52μg·g-1,与野生型相比并没有显著的变化。
  体外激素试验显示:与野生型相比hk759对IAA更为敏感,随着IAA浓度的含量增高,hk759的螺旋程度加强,螺旋的圈数增多,螺旋的直径越来越小,螺旋的程度越来越密集;当IAA含量达到8mg·L-1时,螺旋圈数为2.72,而螺旋的直径仅有3.42cm,分别为空白对照组的2.06倍和82.3%。
[硕士论文] 金龙
遗传学 安徽农业大学 2012(学位年度)
摘要:油茶是我国南方特有的木本油料植物,本研究建立了AFLPs反应分子体系,分析了其在油茶遗传多样性研究中的适用性,并且初步进行了油茶种间杂交实验。
   以油茶基因组DNA为材料,通过试验分析建立了适合油茶且简便易行的AFLP反应体系,筛选出了11对能够反映多态性的有效引物,并对油茶的遗传多样性进行了初步分析,平均每对引物扩增出23个具有清晰条带的位点,其中多态性位点数为20,多态性位点百分率PPL为87.14%,有效等位基因数ne为1.54,Nei’s期望杂合度He为0.36,Shannon多态性信息指数I为0.47。研究结果表明了AFLP标记技术在油茶遗传多样性研究上的适用性,同时也显示了油茶具有较高的遗传多样性,为进一步研究油茶多居群的遗传多样性奠定了重要的理论和技术支持。
   采用有性杂交方法对果大、抗病性强的的广西博白大果和其他地区的3个产油率高的油茶即江西小果、南荣小果、攸县油茶分别进行正反品种间杂交,然后对杂交结果率进行统计分析。结果表明:不同种对结果率影响显著,3个组合杂交平均结果率为4.97%,其中以母本为江西小果(白花)的结果率最高,达到8.25%,其次是广西南荣小果为3.67%,而母本为攸县油茶的结果率最低,只有3%,江西小果与广西博白大果的结果率高于其他杂交组合。本实验为油茶杂交育种亲本选配和新品种的选育提供了理论基础。
[硕士论文] 郑磊
法学理论 西南交通大学 2010(学位年度)
摘要:生物遗传资源的价值体现在各个方面,特别是生物遗传资源的经济价值得到了极大的开发,因为其具有巨大的价值,发达国家加强了对发展中国家的资源掠夺,发展中各国都加强了自我资源的管理和保护。因为各国在国家性质、政治体制、生物多样性保护现状、公众的意识、社会环境等方面存在着差异,各国的主管机构的设置和管理模式有所不同。在生物遗传资源的管理模式上,主要有分散管理模式、跨部门联合委员会模式、管理委员会模式、单一主管模式和社区共管模式。
   生物遗传资源社区共管强调多方共同参与资源管理,参与者共同协商达成共识的过程,共享权力和收益,共同承担相关责任,社区共管就是让社区居民参与保护生物遗传资源保护的决策、实施、监测和评估的整个过程,是社区与保护区共同管理生物遗传资源的模式。我国生物遗传资源的流失情况严重,国家在立法上加强了对生物遗传资源的管理制度设计,相关法律法规可以分为国家级法规、地方级法规和政策性文件,我国法律虽然没有明确提出生物遗传资源社区共管制度的概念,但对该制度的内容却有所体现,而且在部分生物资源的保护中也进行了相关实践。
   论文介绍了生物遗传资源共管制度的概念及特点,论证了该制度有利于生物遗传资源的保护;通过分析相关法律原则,得出生物遗传资源社区共管制度的法律基础;通过考察国外相关制度,结合我国实践,认为我国生物遗传资源社区共管制度在应用范围、对本土居民权益保护等方面存在缺陷,经过考察国外相关法律规定,提出了完善我国生物遗传资源社区共管制度的建议:完善生物遗传资源社区共管的指导原则,在国家主权原则、利益相关者原则和公平原则的基础上增加民主的原则和协调的原则;将生物遗传资源社区共管制度扩大到所有生物遗传资源的管理和保护中,注意遗传资源保护中本土居民权益的维护,保障本土居民更多的参与遗传资源的管理等。
[硕士论文] 禹思宇
预防兽医学 南京农业大学 2010(学位年度)
摘要:应用反向遗传系统实现RNA病毒的拯救,从而在DNA水平上对RNA病毒进行遗传操作,为深入研究RNA病毒的分子生物学及病毒与宿主的相互作用提供了新的手段。绝大多数杯状病毒不能够在体外培养,严重阻碍了这类病毒的研究,猫杯状病毒为杯状病毒科中少数能在体外培养的病毒之一,本研究选择猫杯状病毒CH-GD分离株,克隆其全基因组cDNA,尝试建立RNA聚合酶Ⅱ介导的FCV反向遗传系统,拯救含遗传标记的FCV。
   1 FCV CH-GD株全长cDNA分子克隆
   设计并合成了覆盖FCV CH-GD株基因组的1对引物,以本实验室保存的含有FCV CH-GD株全长基因组的pUC-FCV质粒为模板,采用PCR方法扩增FCV全长基因组。通过沉默突变引入一分子标记(MluⅠ识别位点)以便于区分野毒株和拯救毒。改造pCDNA载体,并在其3′端引入核酶(pCDNA-HDVRZ)。将CH-GD株全基因组插入载体,构建CH-GD株基因组的全长cDNA克隆(pCDNA-HDVRZ-FCV),并以PCR、限制性内切酶酶切和基因组测序等方法对pCDNA-HDVRZ-FCV进行鉴定,结果表明已成功构建了FCV CH-GD株的全长cDNA分子克隆。该克隆不仅含有CH-GD株的全基因组序列,还含有核酶序列和一个分子标记(MluⅠ识别位点).
   2.拯救病毒的鉴定
   以 pCDNA-HDVRZ-FCV为模板,用脂质体转染法(LipofectamineTM2000)将FCV基因组全长cDNA分子克隆导入F81细胞,利用聚合酶Ⅱ系统进行体内转录。盲传三代后可观察到典型的FCV致细胞病变效应。使用RT-PCR方法进行鉴定,结果表明拯救病毒成功,获得了感染性cDNA分子克隆。通过对感染性分子克隆分子标志的鉴定,排除了自然毒株的污染。
   3.RHDV VP60在F81细胞上的表达
   用KpnⅠ和NotⅠ分别将本实验室构建的两个转移载体和pUC-FCV进行双酶切,采用粘端连接将RHDV VP60基因带入FCV全基因组中不同位点。成功构建了将RHDV VP60插入FCV全基因组中的质粒(LC之后和VP1之后)。采用脂质体转染法将质粒导入F81细胞,转染48h后,应用间接免疫荧光法能够检测到RHDV VP60的表达,继续传代,发现荧光变弱,至第七代检测不到荧光,RT-PCR结果也为阴性。试验结果表明,重组病毒可以在F81细胞中表达VP60,但是不能形成稳定的可感染的重组病毒。
   总之,FCV反向遗传研究系统的建立将为深入研究其功能基因组学以及致病和变异的分子机制奠定基础,同时还具有将FCV开发成载体用于基因治疗或研发新型疫苗的潜在应用前景。
[硕士论文] 陶娟
动物学 河南师范大学 2010(学位年度)
摘要:花臭蛙(Odorrana schmackeri),隶属于蛙科(Raninae)臭蛙属(Odorrana),主要分布于我国亚热带和热带地区,分布区遍布西北、西南、华东、华中、华南。迄今对花臭蛙不同地理种群的遗传分化和遗传结构的研究还未见报道,种群遗传学是花臭蛙资源利用与保护的基础,本文利用线粒体基因作为分子标记对花臭蛙12个地理种群的遗传结构进行了研究。
   本论文采用PCR和直接测序法,分析花臭蛙12个种群(南召种群、栾川种群、兰草谷种群、高家堰种群、五峰种群、碧口种群、青木川种群、雷公山种群、江口种群、武夷山种群、黄山种群、天目山种群)的遗传变异。通过测定118个样品的线粒体12SrDNA序列片段(774bp)、16SrDNA序列片段(1056bp),研究了花臭蛙12SrDNA、16SrDNA序列的遗传多样性及种群的遗传结构。
   对12SrDNA与16SrDNA的联合序列分析结果表明,在118个花臭蛙个体中,共检测到295个变异位点,获得25种单倍型,其中H1、H2、H3为一些地方种群的共享单倍型。整个种群的核苷酸多样性为0.837±0.023,单倍型多样性为0.05122±00099。这样高的单倍型多样性和核苷酸多样性与花臭蛙作为东洋界的广布种、种群大是相应的。南召种群、兰草谷种群和高家堰种群的核苷酸多样性、单倍型多样性均较高,且三种群的单倍型都分别聚在两个进化支上,说明他们是异域起源并发生了二次接触,推测他们至少包括两个遗传上显著不同的源种群。青木川种群、武夷山种群、雷公山种群、黄山种群和江口种群的的单倍型多样性较高,而核苷酸多样性较低,说明他们由一个较小的有效种群迅速增长而来。栾川种群、碧口种群和五峰种群的单倍型多样性和核苷酸多样性均低,暗示这些种群可能在历史上经历过严重的瓶颈效应。天目山种群的h值较低,π值较高,说明天目山种群经历了短暂的瓶颈效应,丧失了一定的单倍型多样性。
   比较两两种群间的固定系数(Fst)及基因交流值(Nm)表明,雷公山种群、江口种群、武夷山种群相互间的遗传分化程度较低,他们与其他种群间的遗传分化程度较高。黄山种群与天目山种群间,碧口种群与青木川种群间的基因交流非常频繁。高家堰种群与碧口种群、青木川种群、南召种群、栾川种群、兰草谷种群、五峰种群间有共享单倍型H1、H3,且高家堰种群与他们之间的遗传分化程度较低。
   单倍型的地理分布特点和AMOVA分析结果表明花臭蛙的不同地理种群之间及种群内都存在极其显著的分化,通过不同方法构建的系统发育树也证明了这一点。这种遗传分化最可能的原因是受第四纪冰川的影响。
[硕士论文] 郝楠
法学·国际法 西北大学 2009(学位年度)
摘要:随着现代生物技术的发展,被誉为“绿色黄金”的遗传资源在经济、科技、商业等方面的价值日益显现。正是由于遗传资源蕴含着巨大的价值,所以产生了惠益分享的法律问题。它包括遗传资源为全人类所有还是提供国所有,惠益分享的客体为广义还是狭义,以及实现惠益分享方式。首先,本论文从遗传资源的惠益入手,说明遗传资源惠益的多样性。由于难以做穷尽式的列举,因而通过对惠益分类进而概括惠益更为科学。 其次,分析惠益分享的法律关系。惠益分享的主体多重,主要有遗传资源的提供者、遗传资源的研究者和相关国际组织构成。惠益分享的客体有限,考虑到人格尊严和粮食安全,将人类和粮农植物遗传资源排除于惠益分享客体之外。再次,论文讨论遗传资源惠益分享的法律规定。国际法层面,主要介绍公平合理的分享惠益和促进国家能力建设。区域法律层面,分别论述对区域成员有实际约束力和仅具有示范效果的区域性法律。国外法律层面,从综合性法律、配合性法律和单行法律三个角度进行论述。 最后,论文提出对我国遗传资源惠益分享建议:第一,明确惠益分享的主体,并建立专门的管制机构处理惠益分享主体间的争议。第二,明确惠益分享的客体,并建议对不同的惠益采用分类管理的标准。第三,建议惠益分享的立法模式即采取单行法来解决生物剽窃的问题,并通过合同方式灵活处理。
[硕士论文] 周宇琼
动物营养与饲料科学 上海交通大学 2008(学位年度)
摘要:在生存分析领域,除比例风险回归模型外,还有一类模型与之并列,叫做加速失效时间模型(accelerated failure time model,简称为AFT模型)。AFT模型研究协变量与对数生存时间之间的回归关系,模型的形式与对回归系数的解释与一般的线性回归方程相似,而对分析结果的解释则较比例风险回归模型简单、直观,更易于理解。 生存时间是一种特殊的数量性状,它不服从于正态分布,在以往的研究中,有许多专门的统计方法对其进行分析,如参数,半参数模型等,都适用于对生存性状的孟德尔遗传学的QTL进行作图分析,但是这些方法总是包含着非线性因素的解决办法,因此不适于对生存性状多个互作QTL的遗传构架分析。而AFT模型适用的特殊性就在于它的线性。 本文对生存分析及QTL定位相关概念方法进行了详细介绍,并将生存分析中的加速失效时间模型应用于生物遗传领域的QTL定位分析中,与Bayes作图方法相结合,探讨了基于加速失效时间模型生存性状遗传结构的Bayes定位分析原理。模拟研究与实际数据分析证明了基于加速失效时间模型的Bayes QTL定位方法比直接分析生存数据具有更高的检测效率和参数估计精度。为以后研究生物生存性状遗传结构提供了新的方法依据,同时也具有重要的生物学意义。
[硕士论文] 狄静芳
微生物学 河北师范大学 2008(学位年度)
摘要:血栓性疾病特别是脑血栓、心肌梗塞、深度静脉血栓等均有较高的致死、致残率,溶栓治疗法是治疗此类疾病的常规疗法。自从二十世纪八十年代以来,已先后开发了多种溶栓制剂,现已被广泛应用于临床,例如:重组组织型纤溶酶原(recombinant tissue-typeplasminogen activator,rt-PA)、尿激酶(UK)、重组链激酶(recombinant streptokinase,r-SK)等,这些溶栓制剂各有优缺点,其中以rt-PA疗效最佳,但因其价格昂贵使用范围受到很大限制。科研工作者正在努力寻找一种既有较好溶栓疗效价格又便宜的新一代溶栓制剂。 天然葡激酶(staphylokinase,SAK)是金黄色葡萄球菌溶原性噬菌体合成的一种蛋白质。临床研究表明,重组葡激酶(r-SAK)具有与rt-PA相当的溶栓活性,且有更高的纤维蛋白专一性,除此之外,它能在大肠杆菌中高效表达,生产成本低,是一种很有应用前景的溶栓制剂。但临床试验表明,使用r-SAK后仍有一定的再梗塞率,而活化后血小板聚集反应是成功溶栓后再栓塞的主要原因,因此在溶栓的同时进行抗凝、抗血小板聚集治疗是一种积极的预防再栓塞的治疗策略。GPIIb/IIIa拮抗剂能与纤维蛋白原竞争性结合血小板表面的GPIIb/IIIa受体,能够抑制血小板聚集通路的最后一步,具有很强的抑制血小板聚集的作用。国内外根据RGD(Arg-Gly-Asp)序列已设计了许多GPIIb/IIIa受体阻断剂,用于抑制血小板聚集。 为研制兼具溶栓和防栓功能的新型溶栓剂,降低溶栓后再栓塞的发生率,本试验设计在SAK分子的N-端引入RGD序列,构建四个新型双功能SAK突变体分子,研究其表达和纯化,并分析其生物学活性。 本实验采用PCR介导的定点突变的方法,通过设计N-端包含RGD短肽序列的突变引物,以野生型葡激酶(wild type staphylokinase,WT-SAK)质粒为模板,PCR克隆得到SAK突变体基因;将突变后的SAK基因序列与表达载体pBV220质粒连接后,转化大肠杆菌BL2l进行表达:应用阳离子交换层析、凝胶过滤层析和阴离子交换层析连续三步层析法纯化表达产物,并对所得纯化产物进行生物学活性鉴定。实验结果显示,SAK突变体蛋白在大肠杆菌BL2l中的表达量占菌体蛋白总量的50%以上;三步连续层析纯化后其纯度可达97%以上;测得其纤溶比活性分别为10.8×104mJ/mg、10.1×104HU/mg、11.0×104HU/mg、11.2×104HU/mg,不低于WT-SAK的纤溶活性(9.8×104HU/mg);并且具有明显的抗血小板聚集活性,实验测得血小板聚集抑制率分别为10.72%、12.36%、19.71%、21.65%,明显高于WT-SAK(3.98%);ELISA分析结果表明,SAK突变体中大肠杆菌菌体蛋白残留量均小于0.1%,符合《中国药典》2005版中规定的要求。本实验中,突变体基因在大肠杆菌中获得高效表达,得到了高纯度、高活性的SAK突变体蛋白。突变体既保留了野生型葡激酶的纤溶活性,同时又具有了抗血小板聚集功能,为新型双功能SAK的研制奠定了良好的基础。
[硕士论文] 申玉华
植物学 东北师范大学 2008(学位年度)
摘要:盐碱胁迫是限制作物生产最严重的非生物胁迫因素之一。许多研究者正在培育耐盐作物新品种来适应和利用盐碱地。然而,植物耐盐能力是一个非常复杂的生理性状,传统育种很难大幅度的提高植物的耐盐能力,通过基因工程手段能够很好的解决这个难题。目前,随着分子生物学及生物技术的迅速发展,已经发现了一些与耐盐相关的新基因,并获得了耐盐能力相对提高的转基因植株。紫花苜蓿(Medicago sativa L)为世界范围内广为种植的多年生优质豆科牧草。利用基因工程技术提高苜蓿耐盐性,获得抗逆新品系,将对我国牧草业发展有重要的现实意义。本研究的目的是建立并优化苜蓿高频再生植株转化体系,并将角碱蓬Na<'+>/H<'+> antiporter基因导入紫花苜蓿公农-1号中,为利用生物技术改良苜蓿品质搭建基础平台。 基因型是限制遗传转化的关键因素之一,选择高频再生基因型是苜蓿遗传转化成功的保障,本试验从7份紫花苜蓿供试材料中成功的筛选到一个具有高频再生潜力的基因型——公农-1号。 建立了苜蓿胚性愈伤悬浮培养系统,对影响悬浮培养的两个主要因子一胚性愈伤接种量和悬浮培养转速进行优化,确定了本实验悬浮培养最佳接种量为3g/40ml,悬浮培养理想转速为120r/min。 建立超声辅助农杆菌介导苜蓿胚性愈伤遗传转化系统,以悬浮胚性愈伤作为实验材料,应用超声波辅助农杆菌介导法,成功的建立了苜蓿遗传转化体系。在实验过程中,优化了影响苜蓿遗传转化的因素,包括超声波最佳处理时间(8s)、AS最佳使用量(100umol/L)、最佳共培养时间(5d)、卡那霉素最佳抗性浓度(50mg/L)。 转基因植株的分子检测,在本试验中成功的获得了15株抗性植株,PCR检测证实外源基因已经整合到苜蓿的基因组中。 本实验成功的建立了苜蓿体胚高频再生体系,在此基础上通过农杆菌转化法成功的筛选到转基因植株,为苜蓿遗传转化的理论和应用研究提供了有效的方法。
[硕士论文] 卢泽军
皮肤病与性病学 安徽医科大学 2008(学位年度)
摘要:研究背景:Peutz-Jeghers综合征是一种少见的常染色体显性遗传性疾病,患病率约为1/200,000,其临床特征是口唇、颊粘膜和肢端黑色素斑以及胃肠道多发性错构瘤样息肉。该病多在幼年发病。PJS患者易发生各种良、恶性肿瘤,发生肿瘤的平均年龄约为50岁,肿瘤可发生在胃肠道、胰腺、卵巢、睾丸、乳房及子宫等部位。1997年,Hemminki等利用比较基因组杂交法(CGH)联合杂合子丢失法(LOH)进行基因连锁分析,将PJS的致病基因定位于19p13.3,随后,两个不同的研究小组将STK11基因克隆。STK11基因编码一种新的含有433个氨基酸的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶,与爪蟾胞浆内丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(XKKK1)具有高度同源性。各项研究显示STK11基因为一种肿瘤抑制基因,PJS患者STK11基因的各种突变更证实了其与PJS的相关性。迄今已发现STK11基因的各种突变172个,其中大部分突变造成截断的无活性的编码蛋白。 目的:研究Peutz-Jeghers综合征一家系的STK11基因突变情况。 方法:收集1例中国汉族家族性PJS患者及其家庭成员和100名健康对照的外周血样标本,利用改良盐析法提取外周血白细胞中的DNA,设计覆盖STK11基因所有外显子编码区及其侧翼的9对引物,通过PCR反应扩增和直接测序进行序列分析。 结论:错义突变c.725G>A(p.G242E)可能是导致此PJS家系患者临床表型的主要原因。
[硕士论文] 杜明凤
植物学 贵州师范大学 2008(学位年度)
摘要:淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属EPimedium)植物,目前记载有55种,80%为中国特有种,贵州、四川、湖北等为淫羊藿属植物的变异中心。本研究对主要来自于四川、贵州的18种淫羊藿植物进行了较系统的形态学、种间杂交、RAPD标记、PCR-RFLP标记等方面的研究,以便为淫羊藿属植物系统分类、遗传多样性及中药现代化研究提供有价值的资料。 形态学研究发现,大多数种类在形态分类性状上存在连续过渡的形态变异现象,导致种间的鉴别困难。对杂交Fl代形态学进行观察首次发现:控制淫羊藿花瓣距短于内萼片的基因可能是部分显性,杂交F1代的叶片形状表现为双亲过渡形态。E acuminatum的花瓣和内萼片颜色属于显性遗传。 繁殖生物学研究发现:大多数淫羊藿种内自交不亲和,是异花授粉植物,其有性繁殖方式可能以风媒授粉为主。淫羊藿属植物种间杂交多数组合有较好的可杂交性,但是不同组合之间有较大的变异。E wushanense、Elishihchemii是广亲和的花粉受体,种间杂交中适合作母本。E myrianthum是广亲和的花粉供体,种问杂交中适合作父本。E acuminatum、E pubescense是广亲和的花粉供体兼受体,种间杂交中作为母本或父本都有很高的可杂交性。该结果对于该属进一步的杂交研究、品种改良及该属系统关系研究等都具有一定的参考价值。 RAPD标记研究和PCR-RFLP标记研究:建立了淫羊藿植物DNA标记系统关系图和17种淫羊藿属植物的RAPD指纹图谱。所得结果为淫羊藿中药材种类鉴定,淫羊藿属分类学、种间系统关系及其起源与进化研究提供了新的资料和新线索。 综合分析上述研究结果认为,中国种类可以被划分为大花类和小花类,而且供试淫羊藿属植物的生物学物种可划分如下:(1)确定的生物学物种:大花种类E davidii、E pauciflorum、E chlorandrum、E acuminatum,小花类群种类E ecalcaratum、E myrianthum、E sagittatum、E pubescense。(2)合并的种类:大花种类E simplicifolium可以合并进E acuminatum,E luodianense合并进E leptorrhizum,E lishihchemii可以合并进E wushanense,以及小花种类E. pudingense可以合并进E sagittatum。(3)不确定种类:来自四川的2个E acuminatum居群AC5、AC6可能是E. acuminatum与E chlorandrum的天然杂交种。小花类群中,E dolichostemon可能是E acuminatum与小花种类的天然杂交种。E shuichengense可能是大花和小花淫羊藿的天然杂交种。
[博士论文] 王明辉
遗传学 复旦大学 2008(学位年度)
摘要:鉴定控制和影响复杂性状的功能基因是当前遗传学中最具挑战性的领域之一。遗传作图的终极目标是检测和定位产生性状差异的遗传变异,在这个过程中最根本的困难来自于基因定位方法粗糙的解析率。传统的的分析手段通过初始的基因组扫描获得的最小的数量性状位点(QTL)区间都不小于10~30cM,这样大的一个遗传距离并不适合从分子水平上解析复杂性状的遗传变异。
   本论文主要包括两个方面的内容,一是数量性状的遗传剖析,另一个是利用基因芯片数据检测遗传多态。
   第一部分内容以酿酒酵母(Saccharomycea cerevisiae)的乙醇耐受这一复杂性状作为一个遗传模型,试图高精度高解析率地解析复杂性状的多基因遗传结构。我们选择了两个表型差异极其显著的酵母菌株,同时开发了一套在全基因均匀分布的STR/SNP遗传标记。选择的两个酵母菌株杂交后生成传统的F2群体并随后建立了多世代的双向重复选择回交(recurrent selection and backcross,RSB)群体.在F2分离群体用复合区间作图(CIM)方法,定位了5个QTL,它们共同解释了约50%的表型变异:其中第九号染色体上的主效QTL解释了25%的表型变异.RSB作图方法充分利用了一套高密度标记信息,定位到了更多的QTL,QTL区间也进一步缩小,在9号染色体的一个QTL区间已经缩小至仅仅包括少数几个基因,已经能够通过对极少的几个基因进行敲除和替换实验来确认影响乙醇耐性的功能基因。
   在全基因组范围检测基因编码区的序列多态具有重要的价值,一是有助于了解基因的功能,二是能获得高密度的遗传标记可以用于QTL作图。本论文第二部分的内容提出了一个新的算法,该算法利用基因芯片表达谱数据来检测序列多态。这种在基因芯片上检测的多态已经被命名为单征多态(single featm-e polymorphism,SFP)。SFP可以用作遗传标记来对杂交群体进行基因分型。与文献报道的4种方法相比较,这种新的SFP算法(1)受基因表达量差异的影响小,(2)RNA表达谱芯片与基因组DNA杂交芯片有近似的检测和基因分型的效力,(3)有较高的交互预测能力,以及(4)较高的假阴性率和较低的假阳性率。我们分别用SFP分型数据和SNP分型数据对一个barley单倍体二倍化(double haploid,DH)群体构建遗传连锁图,发现SFP分型数据构建的连锁图有相当的可靠性。这种SFP检测方法应用于前述的酵母RSB群体,有效地提高了QTL作图的解析率。
[博士论文] 刘海英
动物营养与饲料科学 中国农业大学 2007(学位年度)
摘要:本研究采用候选基因的策略,通过分析绒毛形成的生理机制,选择与绒毛性状密切关联的角蛋白关联蛋白KAP8.1、KAP8.2、KAP6.3和成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因,采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法检测基因变异,并分析基因变异与绒毛性状的相关性。本研究从四个方面进行研究: (1)系统探讨年龄和年份与绒山羊产绒性能和绒毛品质间的变化规律,结果表明:不同年龄间产绒量、绒长度、毛长、体重、绒纤维细度和伸直长度均有显著差异(P<0.01),内蒙古白绒山羊2~4岁生产性能和绒毛品质处于最佳阶段,5~6岁时产绒性能下降,6岁后生产性能大幅下降,绒毛品质明显降低;年份对绒山羊产绒量、绒长度、毛长度和体重有显著影响(P<0.05),各年份产绒性状表型值波动较大,说明年际效应显著,2000年后性状表型值得到稳定提高。 (2)以KAP8.1和KAP8.2为候选基因,检测其基因多态性与内蒙古绒山羊绒毛性状的连锁关系,结果表明:KAP8.1基闵编码区发现T113G和G116C两个SNP位点(GenBank accession no. AY510122),这两个突变未改变氨基酸序列;关联分析结果表明不同基因型对产绒量有显著影响(P<0.05),但对其它各性状没有影响(P>0.05);AB基因型利BB基因型产绒量显著高于其它基因型,分析认为该效应可能是由于T113G突变造成,表明KAP8.1基因多态性可能是绒山羊产绒量的一个分子标记;KAP8.2基因编码区发现A214G和T218C两个SNP位点(GenBank accession no.AY510123),A214G突变是同义突变而T218C是错义突变;关联分析结果表明,基因型对绒纤维细度、产绒量和毛长度有显著影响(P<0.01),但对绒长度无显著影响(P>0.05);AA 基因型(0.73)是群体的优势基因型,该基因型个体绒纤维细度显著低丁其它各基因型,表明KAP8.2基因多态性可能是绒山羊绒纤维细度的一个分子标记。 (3)以KAP6.3基因为候选基因,采用PCR-SSCP技术对其编码区和3'-非翻译区进行多态性扫描,并分析其变异与绒毛性状的连锁关系。结果表明:山羊KAP6.3基因(GenBank accession no.AY310751)共发现10个SNPs位点,分别是C89T、T110C、C134T、C149T、G163A、G170A、A217G、A229C、G389A和A437G。其中G163A、A217G和A229C突变是错义突变,G389A和A437G突变位于3'-UTR,其余5个SNPs位于编码区,是同义突变。对K2引物,群体以A等位基因为主,AB基因型是优势基因型,其产绒量显著高于其它各基因型(P<0.05)。K3引物检测剑九种基因型,F平H基因型的产绒量最高,且绒长度最长;而G和I基因型的产绒量最低,且绒长度最短;F和H基因型与G和I基因型的这两个性状最小二乘均数相比均达剑显著水平(P<0.01)。K4引物的AC基因型绒纤维细度最小,显著低于其它基因型(P<0.05),BB基因型的绒长度利毛长度显著高于其它基因型(P<0.05)。 (4)以成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因为候选基因,检测其基因多态性,寻找与绒山羊被毛长度相关的遗传标记,结果表明:FGF5基因外显子1存在限制性内切酶Bgi Ⅰ多态位点,测序结果发现该SNP是由碱基序列C→T的突变而引起;基因型利基因频率统计结果表明,该试验群体以等位基因A具有明显的优势;基因多态与绒毛性状关联分析表明,该SNP对各绒毛长度的影响不显著(P>0.05),但AB基因型毛长度大于AA基因型。
[硕士论文] 郭嫔
生物化学与分子生物学 西北农林科技大学 2007(学位年度)
摘要:小麦是世界上的主要粮食作物之一,在农业生产中占重要的地位。与其它农作物一样,由于在育种中大量使用一些相同的亲本,导致栽培小麦基因大量流失,使其遗传基础日益狭窄、遗传变异率低,对其产量和品质的进一步改良起着极大的限制作用。引进国外的优异小麦品种可以扩大我国小麦育种的优异基因源,从而克服这一难题。而对于引进的国外小麦品种与我国的小麦品种进行遗传多样性分析比较则是其能够得到充分利用的前提。因此,本研究利用HMW-GS、RAPD和eSSR三种不同的标记从蛋白质和DNA水平对引自澳大利亚和捷克小麦品种及我国部分冬小麦品种的遗传多样性进行了比较研究,取得的研究结果如下: 1.15份澳大利亚小麦品种在Glu-1位点HMW-GS存在12种变异类型,20份捷克小麦品种存在12种变异类型,我国的20个小麦品种出现15种变异类型;在Glu-B1位点,澳大利亚品种含有我国20份小麦品种所没有的7<'*>+8、13+16和20亚基,捷克品种含有我国20份小麦品种所没有的20和22亚基;在各个位点,三个国家的优质亚基各具特色,在Glu-A1位点中国品种平均得分最高为2.7,在Glu-B1位点澳大利亚品种平均得分最高为2.7,在Glu-D1位点捷克品种平均得分最高为3.9;三个国家小麦品种Glu-1位点总得分为:澳大利亚小麦最高,为8.2分,捷克小麦得分最低,为7.4分,中国小麦得分为8.1分。这些国外引进的小麦品种对我国小麦品质育种有一定的应用价值。 2.利用RAPD标记研究表明,供试的55个品种的简单遗传相似系数(SMC)变化范围从0.44~0.92;平均值为0.74。用算术平均数的非加权成组法(UPGMA)对供试品种进行聚类,在相似系数为0.70处,供试的55个品种被聚为五大类:第Ⅰ大类共有17个品种,全部来自中国;第Ⅱ大类共包括16个品种,除小偃22(中国)外,其余全部是澳大利亚品种;第Ⅲ大类有20个全部为捷克品种。第Ⅳ和第Ⅴ类各有1个品种,分别为87341(中国)和洛阳8716(中国)。总的来说,来自三个不同国家的品种分别被聚为一大类(中国的小偃22、87341和洛阳8716三个品种除外)。对三国品种群体的遗传多样性分析比较发现:①中国小麦品种的遗传变异相对较大,而澳大利亚小麦品种的遗传变异相对较小;②中国品种和捷克品种间的遗传距离大于中国品种与澳大利亚品种间的遗传距离。这说明了引进捷克品种更能丰富我国小麦品种资源。 3.eSSR研究从30个eSSR位点中选出了19个具有多态性的位点;用这些引物在55个供试品种中共检测到172个等位基因。利用eSSR标记分析表明,供试品种的SMC变化范围从0.08到0.88,平均值为0.36。在SMC为0.31处,所有供试材料被聚为了三大类:第Ⅰ大类由全部的中国品种和部分的(8个)澳大利亚品种组成;第Ⅱ大类由全部的捷克品种组成;第Ⅲ大类由部分的(7个)澳大利亚品种组成。利用eSSR标记对三国品种群体间遗传多样性分析比较表明:①中国品种的遗传多样性小于澳大利亚品种群体和捷克品种群体;②中国品种和捷克品种间的遗传距离大于中国品种与澳大利亚品种间的遗传距离。这也说明引进捷克品种更能丰富我国小麦的遗传多样性。这些研究结果为这些引进材料在我国小麦遗传育种中的合理利用提供了一些有价值的重要信息。
[硕士论文] 王昌陵
生物化学与分子生物学 沈阳农业大学 2007(学位年度)
摘要:大豆是重要的油料作物和饲料作物,也是人类的主要食用蛋白和工业原料的来源。近些年随着我国水土资源的严重流失,土地荒漠化不断扩大,大豆的生产受干旱、盐害等不利因素的影响,产量很不稳定,产品已远远不能自给。因此,通过基因工程手段提高大豆抗逆性,在理论和生产上具有重要意义。 已有研究从玉米中鉴定了过氧化氢酶CATI基因启动子应答ABA信号的顺式元件ABRE,克隆了与之特异性结合的转录因子ABP9基因;将ABP9克隆到质粒中构建了植物组成型表达载体pCRl20-35S-ABP9,并证明了ABP9的表达可以提高植物对干旱、盐害等产生的氧化逆境的抗性。 本研究利用含有表达载体pCR120-35S-ABP9的农杆菌EHA105,以大豆子叶节为外植体,用农杆菌介导法转化大豆,以期获得抗逆性提高的转基因大豆;同时对农杆菌介导的大豆遗传转化系统条件进行优化,为提高大豆遗传转化效率提供依据。研究发现,合丰25、黑农35、争光1号等品种再生能力较强;升汞灭菌法对种子的伤害大于氯气薰蒸灭菌法;培养基中加入L-半胱氨酸可提高抗性丛生芽获得率,并在各培养阶段没有共同促进和累积抑制作用;外植体对光照和氧气条件很敏感,并且对氧气的敏感程度要大于光照;植物激素对丛生芽伸长影响的重要性依次为ZT、GA<,3>、IAA和6-BA,最优浓度配比为:6-BA 1.5mg/L,GA<,3>0.75mg/L,IAA 0.1mg/L,ZT 1.0mg/L;利用优化后的转化条件,共获得8株转基因再生植株,经PCR检测和序列分析,4株为阳性,转化率为1.33%。
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