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[硕士论文] 任重阳
免疫学 安徽理工大学 2018(学位年度)
摘要:失眠是常见的睡眠障碍,不仅影响免疫功能,且能造成认知功能的损害。腺苷在人体脑内及外周广泛分布,通过调节神经细胞功能及神经递质的释放,发挥促眠作用。腺苷信号包括腺苷产生、代谢过程关键酶及腺苷受体,它们也与睡眠调节相关。研究显示,睡眠紊乱会诱导免疫炎症因子的异常表达,而一些炎症因子在也具有促眠作用。在腺苷的主要分泌场所星形胶质细胞中,腺苷与免疫炎症因子共同作用,调节睡眠觉醒过程。失眠会造成认知功能的损害,特别是工作记忆及空间识别能力的降低。以往的研究主要针对睡眠剥夺的健康人群,对于符合慢性失眠诊断标准患者的外周腺苷相关指标及免疫功能的研究较少,同时也缺乏这些指标与患者记忆功能联系的研究。
  目的:探索慢性失眠障碍(CID)和失眠共病抑郁(ICD)患者外周血腺苷水平与免疫炎症因子水平的变化,探索相关指标的的变化是否与失眠患者记忆能力的损害存在联系。
  方法:募集首诊于睡眠及神经内科门诊,主诉失眠的患者共69例。根据ICSD-3诊断标准分为CID病例37例(男13例,女24例)和ICD病例32例(男6例,女26例)。来源于体检中心的对照组47例(男13例,女34例)。进行患者基本资料如年龄、性别及教育程度的采集。由专业医师完成匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评估患者的睡眠质量,汉密尔顿抑郁量表17项(HAMD-17)评估患者抑郁情绪及蒙特利尔认知量表(MoCA)评估患者总体认知功能。指导患者完成九盒迷宫实验,评估相关记忆能力。抽取受试者静脉血,部分进行淋巴细胞分离,部分离心获取血浆置于-80℃冰箱冻存。应用液相色谱串联质谱法测血浆腺苷水平,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测ADA水平,应用PHA刺激淋巴细胞转化实验检测淋巴细胞转化率,应用Luminex液相芯片技术检测外周血IL-1β、TNF-α及IL-4水平。
  结果:CID组、ICD组和对照组的基本资料,包括年龄、性别及教育程度无统计学差异;CID组和ICD组PSQI评分高于对照组(P<0.05),但其两组组间无统计学差异,CID组和ICD组的HMAD-17评分均高于正常对照组(P<0.05),且ICD组的评分高于CID组(P<0.05);三组间物体及空间参考记忆、物体及空间工作记忆和物体再认记忆均有统计学差异(P<0.05),两两比较CID组物体工作、空间工作及物体再认记忆的错误数高于对照组(P<0.05),ICD组的所有类型记忆错误数均高于对照组(P<0.05);三组间的腺苷水平有统计学差异(P<0.05),CID组及ICD组的腺苷水平低于对照组(P<0.05);三组间比较ADA水平之间有统计学差异(P<0.05),ICD组的ADA水平高于对照组(P<0.05),CID与对照组及CID与ICD两组间ADA水平无统计学差异;三组间比较淋巴细胞转化率之间有统计学差异(P<0.05),ICD组的淋巴细胞转化率高于对照组(P<0.05),ICD与CID两组间无统计学差异;三组间比较TNF-α水平之间有统计学差异(P<0.05),CID组和ICD组的TNF-α均高于对照组(P<0.05),且ICD组TNF-α水平低于CID组(P<0.05);三组间的IL-1β水平均有统计学差异(P<0.05),CID组及ICD组的IL-1β水平高于对照组(P<0.05),且ICD组的IL-1β水平高于CID组(P<0.05);三组间的IL-4水平无统计学差异,CID组的IL-4水平高于对照组(P<0.05)。
  结论:失眠患者(慢性失眠组和失眠共病抑郁组)外周血腺苷水平降低,影响了促进睡眠和抑制觉醒的能力。失眠共病抑郁组的淋巴细胞转化率及ADA水平升高;失眠患者体内具有促眠作用的TNF-α和IL-1β升高,慢性失眠组患者体内对TNF-α和IL-1β负调控的IL-4同时升高。提示失眠影响了机体的免疫功能,且机体会对失眠造成的免疫状态改变进行自我调整。因腺苷具有免疫抑制作用,外周血腺苷水平降低伴随免疫细胞因子表达的上调是合理的,但其中的通路及机制需进一步探索。失眠患者的记忆功能损害程度与TNF-α、IL-1β、腺苷水平的变化有相关性,记忆功能损害来自于它们的影响。
[博士论文] 龚洪
医学心理学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:研究背景:
  抑郁症是一种常见的精神疾病,以显著而持久的情绪低落为主要特征。目前,全球有超过3亿名抑郁症患者。总体而言,与发展中国家相比,美国等发达国家的抑郁症患病率较高,中国的抑郁障碍患病率约为3%至5%(2017年国家卫计委和世界卫生组织的统计结果分别为3.59%和4.2%)。性别方面,女性抑郁症患者明显多于男性。抑郁症不仅拥有极高的致残率,严重影响广大患者的身心健康,而且也给社会带来了沉重的经济负担。
  上世纪50年代初期,Selikoff和Robidzek等发现抗结核药物异丙烟肼具有改善情绪的作用。此后,从单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁药物到选择性五羟色氨重摄取抑制剂(SSRI)、去甲肾上腺素重摄取抑制剂(SNRI)类药物,一代代的抗抑郁药取得了长足的发展。然而,即便与第一代经典抗抑郁药相比,目前广泛使用的一线抗抑郁药(SSRIs和SNRIs)的疗效并无显著提升,临床上仍有约三分之一到一半的抑郁症病人对经典抗抑郁药无响应。此外,这些经典抗抑郁药大多存在明显的疗效滞后期,连续用药2到4周后才逐渐发挥疗效,这对于具有自杀倾向的重性抑郁症患者来说非常不利。
  抑郁症的致病机理十分复杂,各种假说层出不穷,主要包括单胺类神经递质假说、应激/PA轴假说、神经炎症假说、神经可塑性假说、谷氨酸/GABA平衡假说、快感缺失/类阿片假说、类胆碱/肾上腺素平衡假说等。虽然抑郁症的病因学和病理学机制尚不十分清楚,但近年来的研究发现,神经炎症可能在抑郁症的发生发展中发挥着关键作用。小胶质细胞是神经炎症的主要参与者,处于敏化(priming或sensitization)状态的小胶质细胞虽然具有和静态小胶质细胞相似的监视功能,但当它们遭受二次免疫刺激的时候,其炎症反应将会被明显放大。小胶质细胞处于敏化状态的动物也更容易发生抑郁样行为。强烈或持久的免疫刺激也可以促进小胶质细胞激活,导致大量细胞因子的分泌,诱发中枢神经炎症,从而导致抑郁行为的发生。
  本实验室和其他实验室的研究发现,一些内源性损伤相关分子模式在神经炎症和抑郁发生过程中发挥了非常重要的作用。以HMGB1为例,它能够促使大鼠海马小胶质细胞进入敏态,显著放大小胶质细胞对LPS的炎症响应。二硫键形式的HMGB1也能够激活TLR4和RAGE介导的神经炎症反应,从而导致小鼠产生抑郁样行为。Mrp8和Mrp14是S100钙结合蛋白家族的两个重要成员,也是两种重要的内源性损伤相关分子模式。在生理条件下,Mrp8和Mrp14主要以Mrp8/14异源二聚体的形式存在并发挥生物学功能。Mrp8/14可以主动或被动的释放到细胞外,并与细胞膜上的TLR4和RAGE等多种模式识别受体发生特异性结合,诱导炎症反应的产生。已有研究表明,Mrp8/14在认知功能损伤及多种炎症疾病中作用显著,但Mrp8/14在抑郁症中扮演怎样的角色尚不得而知。因此,本研究旨在探究Mrp8/14在抑郁发生中的作用,并进一步揭示Mrp8/14发挥作用的主要机制。
  研究方法:
  (一)Mrp8/14在神经炎症敏化中的作用
  采用急性尾部电刺激方法,探究Mrp8/14在应激诱导的大鼠海马小胶质细胞敏化中的作用,通过给予Mrp8/14抑制剂ABR-215757,观察其对应激后大鼠小胶质细胞敏化的影响。此外,中枢给予重组Mrp8/14蛋白(rMrp8/14)后,分离原代的大鼠海马小胶质细胞,进一步研究Mrp8/14蛋白对海马小胶质细胞敏化的影响。
  (二)小鼠抑郁模型中Mrp8/14及相关炎症信号通路的变化
  通过慢性不可预见性温和应激(CUMS)来构建小鼠抑郁模型,检测抑郁行为指标(糖水偏爱实验和悬尾实验)验证动物造模是否成功。观察中枢海马和外周血清中Mrp8/14的来源和变化情况,同时检测海马组织中TLR4和RAGE通路的变化情况。
  (三)Mrp8/14在CUMS所致小鼠抑郁样行为及炎症信号通路中的作用
  选用ABR-215757作为Mrp8/14的特异性抑制剂,在CUMS处理期间,每天腹腔注射ABR-215757,研究其对CUMS诱发的小鼠抑郁样行为以及TLR4和RAGE通路的影响。
  (四)重组Mrp蛋白对小鼠抑郁样行为和神经炎症的影响
  通过侧脑室埋管分别给予Mrp8、Mrp14以及Mrp8/14三种重组蛋白,研究各重组蛋白对小鼠抑郁样行为的影响,进一步探索小胶质细胞激活、TLR4和RAGE通路的激活以及中枢炎症因子的表达情况。
  (五)TLR4在rMrp8/14所致小鼠抑郁样行为和神经炎症中的作用
  选用体内含量最为丰富的Mrp8/14异源二聚体进一步研究其在抑郁和神经炎症中的作用机制。另外,在中枢给予rMrp8/14蛋白之前,使用TLR4的药理性抑制剂TAK-242观察其对Mrp8/14诱发的抑郁样行为和中枢神经炎症的影响。
  (六)TLR4在rMrp8/14所致BV2小胶质细胞激活中的作用
  体外培养BV2小鼠小胶质细胞,以活性氧ROS和一氧化氮NO作为小胶质细胞激活的指标,进一步研究整体实验中的Mrp8/14在小胶质细胞激活中的作用机制。
  研究结果:
  (一)Mrp8/14介导急性尾部电刺激诱导的神经炎症敏化
  1、急性尾部电应激24小时后,大鼠海马中的Mrp8和Mrp14的mRNA表达显著上调,Mrp14蛋白的表达也明显提高。
  2、体外实验表明,LPS能够快速提高小胶质细胞的TNF-α、IL-1β以及IL-6的表达,各浓度的ABR-215757均不能改变LPS的作用。
  3、应激组大鼠小胶质细胞经LPS处理后,TNF-α、IL-1β和IL-6的表达显著升高,中枢给予Mrp8/14的抑制剂ABR-215757后,应激和LPS诱发的TNF-α、IL-1β和IL-6高表达均被显著抑制。
  4、中枢给予低剂量的rMrp8/14后,小胶质细胞对LPS的反应明显增强,TNF-α、IL-1β和IL-6的表达显著升高。
  (二)CUMS激活Mrp8/14和相关炎症信号通路
  1、CUMS处理四周后,小鼠体重减轻,糖水偏爱程度降低而悬尾不动时间延长,小鼠出现抑郁样行为。
  2、应激组小鼠的海马和外周血清中的Mrp8和Mrp14蛋白的表达升高。中枢升高的Mrp8和Mrp14可能来源于海马神经元。
  3、CUMS可以提高小鼠海马中的TLR4蛋白的表达,促进NF-κB p65的磷酸化水平。
  4、CUMS不影响小鼠海马中的RAGE蛋白的表达。
  (三)Mrp8/14抑制剂影响小鼠抑郁样行为及相关炎症信号通路的激活
  1、Mrp8/14抑制剂ABR-215757可以明显改善CUMS诱导的小鼠抑郁样行为(糖水偏爱实验和悬尾实验)。
  2、Mrp8/14抑制剂ABR-215757可以降低CUMS导致的TLR4蛋白表达升高,并抑制NF-κB p65的磷酸化,但对小鼠海马的RAGE蛋白表达并没有明显作用。
  (四)重组Mrp蛋白可以诱导小鼠的抑郁样行为和神经炎症
  1、中枢分别给予重组Mrp8、Mrp14和Mrp8/14蛋白均能够降低小鼠糖水偏爱,延长悬尾不动时间,诱发抑郁样行为。
  2、中枢分别给予重组Mrp8、Mrp14和Mrp8/14蛋白均能够促进TLR4的表达升高,和NF-κB p65的磷酸化水平,但对RAGE表达的影响并不明显。
  3、各重组蛋白可以不同程度地提高海马促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的表达,促进IBA-1的表达升高。
  (五)TLR4抑制剂可改善rMrp8/14导致的小鼠抑郁样行为和神经炎症
  1、糖水偏爱实验和悬尾实验表明,TLR4抑制剂TAK-242预处理可以显著改善rMrp8/14导致的小鼠抑郁样行为。
  2、TAK-242预处理能够降低rMrp8/14诱发的TLR4/NF-κB信号通路激活,降低促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的表达,抑制IBA-1的表达。
  (六)TLR4抑制剂可抑制rMrp8/14诱导的BV2小胶质细胞激活
  rMrp8/14可以诱导体外培养的BV2小胶质细胞产生一氧化氮和活性氧,促进iNOS的mRNA和蛋白表达水平升高,TLR4抑制剂TAK-242可以缓解rMrp8/14诱导的BV2细胞激活。
  研究结论:
  Mrp8/14在神经炎症敏化和抑郁样行为的发生中发挥重要作用,抑制Mrp8/14可以显著改善急性应激所致的神经炎症敏化、慢性应激诱导的抑郁样行为以及TLR4/NF-κB信号通路的激活。本研究丰富了抑郁症的神经炎症假说,且通过调节Mrp8/14功能可能作为抗抑郁治疗新的策略。
[硕士论文] 伍天文
生理学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:随着成人疾病胎儿来源学说的提出,越来越多的证据显示,胎儿期宫内不良环境,如糖皮质激素暴露等,可使得胎儿在成年后罹患抑郁症等神经精神疾患的风险大大增加。但这其中的机制目前还未阐明。近年来的研究表明,线粒体功能紊乱可能参与了抑郁症的发生发展。因此,在本文中,我们研究妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致后代抑郁样行为的线粒体等相关机制,并进一步探究了运动对此的影响。
  论文的第一部分,我们着重研究了妊娠期母体暴露过量糖皮质激素对子代抑郁样行为的影响;从线粒体功能、神经元数量及神经纤维结构等角度,研究了妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致子代抑郁样行为的内在机制。
  在论文的第二部分,我们研究了幼年期运动对妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致子代抑郁样行为的影响;在此基础上,进一步探讨其可能的线粒体功能、神经系统结构和功能等机制。
  我们实验室前期发现,妊娠期母体暴露过量糖皮质激素可以导致子代血清皮质酮水平增高并出现抑郁样行为,且这些改变通过母系途径传递到子二代。因此,在本论文的第三部分,我们研究了妊娠期母体血清高皮质酮的状态对子代抑郁样行为的影响及其可能的胎盘相关的机制。
  结果:
  一、线粒体在妊娠期母体暴露高糖皮质激素所致子代抑郁样行为中的作用。
  (一)我们通过强迫游泳实验和糖水偏好实验等经典检测动物抑郁样行为的实验证实,妊娠期母体暴露糖皮质激素后,子一代呈现出抑郁样行为。
  1.妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代在强迫游泳实验中,不动时间显著延长。
  2.妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代在糖水偏好实验中糖水消耗占比显著降低。
  (二)妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中活神经元数量减少。
  (三)妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中多个线粒体相关基因表达发生改变。我们应用全基因组表达谱分析技术发现妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中多个线粒体相关基因表达发生改变,包括UCP3显著上调,slc25a21显著下调,idh2显著下调等。
  (四)妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中线粒体功能和形态均发生改变。
  1.与对照组相比,妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中ATP生成量显著降低ROS生成量显著升高,膜电位显著降低,提示我们线粒体功能发生紊乱。
  2.在电子显微镜下观察,妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中线粒肿胀,有的膜崩解。
  (五)我们通过电镜观察发现妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中髓鞘形态发生了改变。
  (六)通过侧脑室注射线粒体特异性ROS清除剂mitoTEMPO能显著改善妊娠期母体暴露糖皮质激素导致的子一代抑郁样行为,但是通过腹腔注射mitoTEMPO没有作用。
  1.经侧脑室注射mitoTEMPO后,dex组子一代在强迫游泳实验中,不动时间显著降低。
  2.经侧脑室注射mitoTEMPO后,dex组子一代在糖水偏好实验中糖水消耗占比显著升高。
  二、跑台运动对妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致子代抑郁样行为的影响。
  (一)跑台运动能显著改善妊娠期母体暴露糖皮质激素导致的子一代抑郁样行为。
  1.dex组子一代在为期4周的跑台跑台运动后在强迫游泳实验中,不动时间显著降低。
  2.dex组子一代在为期4周的跑台跑台运动后在糖水偏好实验中糖水消耗占比显著升高。
  (二)跑台运动能增加妊娠期母体暴露糖皮质激素后子一代海马中活神经元数量。
  (三)跑台运动能改善妊娠期母体暴露糖皮质激素所致子一代海马中线粒体功能和形态发生的改变。
  1.dex组子一代在为期4周的跑台跑台运动后海马中ATP生成量显著降低ROS生成量显著升高,膜电位显著降低,提示我们线粒体紊乱的功能得到改善。
  2.在电子显微镜下观察,dex组子一代在为期4周的跑台跑台运动后线粒体结构更加完整。
  (四)跑台运动能部分逆转妊娠期母体暴露糖皮质激素导致的子一代海马中髓鞘形态改变。
  三、雌性子一代高糖皮质激素在妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致子代抑郁样行为代际传递中的作用。
  (一)母鼠皮下包埋皮质酮缓释剂能诱导子代出现抑郁样行为。
  (二)母鼠皮下包埋皮质酮缓释剂后子一代海马脑区中线粒体功能发生异常。
  (三)母鼠皮下包埋皮质酮缓释剂后子一代胎盘中11β-HSD2酶表达量显著降低而11β-HSD1型酶的表达无显著变化。
  结论:
  一、妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致子代抑郁样行为可能与子代海马脑区中线粒体功能受损有关。
  二、跑台运动可以有效改善妊娠期母体暴露过量糖皮质激素所致子代抑郁样行为,并且可以改善子代海马脑区中线粒体功能。
  三、母鼠皮下包埋皮质酮缓释剂可导致子代出现抑郁样行为,且海马脑区中线粒体功能异常;其子代胎盘11β-HSD2的表达下降。
[硕士论文] 陆悦
神经病学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:研究目的:
  基于目前传统抗抑郁药物有效率不高、炎性疾病易伴发抑郁等临床问题,本研究拟通过检测抑郁共病哮喘患者的情绪、认知特点以及炎症和脑白质损伤指标,并进行血清、尿代谢组学分析,探究炎症与脑白质损伤在抑郁发生中的可能机制,为针对炎性损害的抗抑郁治疗研究提供新的靶点,从而提高临床抗抑郁治疗的有效率和治愈率。
  研究方法:
  前瞻性随机连续纳入二年以来我院哮喘门诊患者共59例,其中33例哮喘不伴抑郁(哮喘对照组,A组),26例哮喘伴抑郁(哮喘伴抑郁组,A+D组),同时连续纳入神经内科心理门诊无其他伴随疾病的抑郁症患者25例(抑郁症对照组,D组),并按照性别年龄匹配28例正常对照(健康对照组,N组)。对四组研究对象进行人口学资料登记、情绪及认知量表评估、炎症与脑白质损伤相关指标检测、血清及尿液代谢组学测定,并进行统计学分析。
  研究结果:
  1、临床特征:焦虑共病情况:四组患者中,A组的焦虑发生率最低,且仅为轻度焦虑;A+D组的焦虑发生率在四组中最高,其中重度焦虑占11.54%;D组患者的焦虑状态主要为轻度与中度,未见重度焦虑;N组无焦虑。认知障碍共病情况:A,D,A+D三组均有认知功能减退的患者,A+D组发生率最高(73.1%),其次是D组(52%)和A组(45.45%),N组无认知功能减退,与N组相比各组均具有统计学差异(P<0.01)。认知域损害情况:与D组相比,A+D组的注意力、语言、定向力得分均显著下降。
  2、炎症与脑白质损伤指标测定:与N组相比,D组、A组与A+D组血清中的白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)均有上升趋势。与N组相比,D组与A+D组血清中的高迁移率族蛋白1(high-mobility group box1,HMGB1)与轴突导向因子(Netrin-1)均明显升高,存在统计学差异(P<0.05)。与N组相比,D组血清中的髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)均有上升趋势。与A组相比,A+D组血清中的MOG与MBP均明显上升,存在统计学差异(P<0.05)。与D组相比,A+D组血清中的MOG与MBP均有上升趋势,其中,MBP上升更明显,存在统计学差异(P<0.05)。与N组相比,D组、A组与A+D组血清中的胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)均下降。
  3、代谢组学研究:四组患者血清的差异代谢物包括:尿素、乙酰肉碱、脱氧胸苷酸等16种。其血清的差异代谢物相关代谢通路涉及:嘌呤代谢、嘧啶代谢、鞘酯类代谢、甘油磷脂代谢、氨基酸代谢、花生四烯酸代谢、柠檬酸代谢。四组患者尿液的差异代谢物包括:脯氨酸、油酸等22种。其差异代谢物相关代谢通路涉及:氨基酸代谢、泛酸及辅酶A代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢、甘油磷脂代谢、鞘酯类代谢、柠檬酸代谢。进一步的组间比较显示,与A组相比,A+D组患者血清中的乙酰肉碱、柠檬酸及甘油磷脂升高,1-磷酸鞘氨醇下降,尿中的谷氨酸上升,具有统计学差异(P<0.05)。与D组相比,A+D组患者血清中的苯丙氨酸下降,乙酰肉碱上升,花生四烯酸上升,甘油磷脂上升,尿液中的苯丙氨酸下降,酪氨酸下降,具有统计学差异(P<0.05)。与N组相比,D组患者血清中的甘油磷脂上升,尿液中的色氨酸下降,苯丙氨酸下降,酪氨酸下降,具有统计学差异(P<0.05)。
  研究结论:
  1、抑郁与焦虑、认知障碍均有共病发生,哮喘伴抑郁患者焦虑发生率最高,程度最重,且伴发认知障碍发病率最高,主要表现为注意力、语言和定向力明显下降。说明哮喘伴抑郁更容易发生情感与认知障碍共病的情况。
  2、各组患者的急性炎症指标(IL-1β、IL-6及TNF-a)无显著差异,而晚期炎症因子HMGB1与抑炎指标Netrin-1在抑郁患者或哮喘伴抑郁患者中明显升高,提示抑郁是一个慢性持续性炎症反应,而这两个指标可能为诊断抑郁的潜在炎性生物学标记物。
  3、各组患者的脑白质损伤相关指标:MBP、MOG为脑白质损伤相关指标,与正常对照组相比,抑郁组的脑白质损伤指标升高,说明抑郁患者存在脑白质损伤。与正常对照组或哮喘组相比,哮喘伴抑郁组的脑白质损伤指标明显升高,说明抑郁共病哮喘脑白质损伤更严重。与抑郁组相比,哮喘伴抑郁组血清中的MOG与MBP均有上升趋势,其中,MBP明显上升,说明炎性抑郁的脑白质损伤更严重。GDNF为胶质细胞源性神经营养因子,在哮喘、抑郁与哮喘伴抑郁患者外周血中均下降,间接反映了脑白质损伤的表现。
  4、代谢组学研究结果表明,无论是哮喘,还是抑郁本身,都有代谢的改变,而抑郁共病哮喘患者的血尿代谢产物反映了糖代谢障碍,糖异生脂动员增加,其中以反映髓鞘溶解的磷脂代谢、以及神经递质前体谷氨酸代谢异常为主。从代谢的角度进一步验证了炎性抑郁髓鞘损伤的现象,并发现了相关代谢产物和可能通路,为进一步阐述炎症致抑郁的机制提供依据。
[硕士论文] 孙艳
公共卫生 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究通过LPS诱导建立小鼠小胶质细胞(BV2细胞)炎症模型,观察了锌对LPS诱导BV2细胞炎症反应的抑制作用以及对海马神经细胞HT-22活性的保护作用,并初步探讨锌抑制炎症反应的机制。研究结果将有助于进一步完善锌对神经炎症抑制作用的机制研究,为抑郁症的炎症假说提供新的实验基础。
  方法:
  1、细胞培养
  BV2细胞,是小鼠小胶质细胞系;HT-22细胞,小鼠海马神经元细胞系,由加拿大的David Schubert博士馈赠。BV2细胞和HT-22细胞均用含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素双抗的高糖培养基培养在37℃、5%CO2的细胞培养箱内。
  2、细胞干预
  (1)采用100ng/ml LPS按时间曲线(0h、1h、3h、6h、12h、24h)处理BV2细胞。
  (2)使用浓度梯度的硫酸锌(10μM、15μM、30μM、50μM)处理BV2细胞24h和按时间曲线(0h、1h、3h、6h、12h、24h)分别使用10μM、30μM浓度的硫酸锌处理BV2细胞。
  (3)用10μM和30μM的硫酸锌预处理BV2细胞1h,然后用100ng/ml LPS处理不同时间(1h、3h、6h),将实验分为对照组、LPS组、10Zn+LPS组、30Zn+LPS组、10Zn组、30Zn组。
  3、共培养
  10μM和30μM的硫酸锌预处理1h,之后用100ng/ml LPS干预3h培养BV2细胞,然后取其上清液培养HT-22细胞24h。
  4、细胞转染
  当融合度为80%时,将BV2细胞接种于多孔培养板,用转染试剂与干扰RNA为2∶1的比例进行转染。将A20小干扰RNA以及转染试剂lipofctamine3000用Opti-MEM无血清培养基稀释后混匀,室温下孵育15min。每孔预先加入含10%FBS的培养基,再根据培养板规格加入适量的上述混合液。培养至24h和36h后进行后续实验并收集细胞检测。
  结果:
  1、LPS对BV2细胞CD11b表达的影响
  100ng/ml LPS处理BV2细胞不同时间,Western Blotting结果显示:与对照组比较,1h、3h、6h、12h和24h组CD11b蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。
  2、LPS对BV2细胞活性的影响
  100ng/ml LPS处理BV2细胞不同时间,CCK-8试剂盒检测结果显示:与对照组比较,1h、3h、6h、12h和24h组细胞活性均无明显差异(P>0.05)。
  3、LPS对BV2细胞ROS水平的影响
  100ng/ml LPS处理BV2细胞不同时间,与对照组相比,3h、6h、12h和24h组细胞ROS水平显著升高(P<0.01),1h组无明显变化(P>0.05)。
  4、LPS对BV2细胞炎症因子表达水平的影响
  RT-PCR实验结果表明:与对照组比较,1h和3h组TNF-α和IL-6mRNA表达水平均明显升高(P<0.05),6h组仅IL-6mRNA表达水平显著升高(P<0.01);ELISA结果显示,与对照组比较,3h、6h、12h和24h组TNF-α和IL-6的浓度均显著升高(P<0.01)。
  5、LPS对BV2细胞iNOS和COX2表达水平的影响
  RT-PCR结果发现,与对照组相比较,3h和6h组iNOS和COX2mRNA表达水平均明显上升(P<0.05);1h组仅COX2mRNA表达水平显著升高(P<0.01);蛋白分析结果显示:3h、6h和12h组iNOS和COX2表达水平均明显升高(P<0.05),1h组iNOS表达水平显著上升(P<0.01),24h组COX2表达水平显著上升(P<0.001)。
  6、锌对BV2细胞活性的影响
  不同浓度的硫酸锌分别干预BV2细胞24h,实验结果显示,与对照组相比,10μM、15μM、30μM和50μM组细胞活性无明显变化(P>0.05)。
  7、锌预处理对LPS诱导的BV2细胞中ROS水平的影响
  实验结果显示:与对照组比较,3h LPS组ROS水平显著升高(P<0.001),单独加硫酸锌组则无明显变化;与3h LPS组比较,10Zn+LPS和30Zn+LPS组ROS水平均明显降低(P<0.01)。
  8、锌预处理对LPS诱导BV2细胞中炎症因子表达水平的影响
  RT-PCR和ELISA结果显示:与对照组相比较,3hLPS组、10Zn+LPS组和30Zn+LPS组TNF-α和IL-6mRNA表达水平及浓度均显著升高(P<0.001),10Zn组和30Zn组均无明显变化;与3h LPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组TNF-α和IL-6mRNA表达水平及浓度均明显下降(P<0.05)。
  9、锌预处理对LPS诱导BV2细胞中iNOS和COX2表达水平的影响
  RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与对照组比较,6h LPS组、10Zn+LPS组和30Zn+LPS组iNOS mRNA和蛋白表达水平均显著上升(P<0.05),单独加硫酸锌组无明显变化(P>0.05);与6hLPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组iNOS mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。与对照组比较,6hLPS组、10Zn+LPS组和30Zn+LPS组COX2mRNA表达水平均显著升高(P<0.001),COX2蛋白表达水平在6h LPS组显著升高(P<0.001);与6h LPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组COX2mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。
  10、锌对小胶质细胞激活介导的毒性对HT-22细胞活性的影响
  共培养后,CCK-8检测结果显示:与对照组比较,3h LPS组、10Zn+LPS组和30Zn+LPS组HT-22细胞活性明显下降(P<0.05),单独加硫酸锌组(10Zn和30Zn组)无明显变化;与3h LPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组HT-22细胞活性明显升高(P<0.05)。
  11、锌对BV2细胞中A20表达水平的影响
  10μM和30μM硫酸锌分别干预BV2细胞不同时间,RT-PCR实验结果显示:与对照组比较,3h组、6h组、12h组和24h组A20mRNA表达水平显著升高(P<0.01);在LPS诱导的BV2细胞中,Western blotting检测结果显示:与3h LPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组A20蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。
  12、锌对LPS诱导的BV2细胞中NF-κB信号通路的影响
  蛋白检测结果显示:1h LPS组的磷酸化IκBα表达水平较对照组显著升高(P<0.01);与1h LPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组的磷酸化IκBα表达水平明显下降(P<0.05)。与Con组比较,3h LPS组细胞核中磷酸化NF-κp65表达水平显著升高(P<0.01),而细胞质中NF-κB p65表达水平下降(P<0.01);而与3hLPS组比较,10Zn+LPS组和30Zn+LPS组的磷酸化NF-κB p65表达水平显著下降(P<0.01),相反,细胞质中NF-κB p65表达水平显著升高(P<0.001)。
  13、锌对A20干扰后BV2细胞中A20表达的影响
  RT-PCR和Western blotting实验结果显示:与NC组比较,干扰组A20mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),而加锌之后(即Si+10Zn组和Si+30Zn组),A20mRNA和蛋白表达水平均较干扰组明显升高(P<0.05)。在LPS刺激下,与Si+LPS组相比,Si+10Zn+LPS组和Si+30Zn+LPS组A20mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。
  14、锌对A20干扰后BV2细胞中NF-κB的影响
  Western blotting结果表明:与Si+LPS组比较,加锌组(Si+10Zn+LPS组和Si+30Zn+LPS组)细胞质中NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而细胞核中磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。
  结论:
  本研究通过LPS诱导BV2细胞产生炎症反应,观察锌预处理对BV2细胞氧化应激和炎症水平等方面的影响,并探讨锌抑制炎症反应的作用机制。根据实验结果初步得到如下结论:
  1、LPS可以诱导BV2细胞引起氧化应激和释放炎症介质。
  2、锌可以抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,并且可能对BV2细胞激活引起的HT-22细胞损伤具有保护作用。
  3、锌可能通过上调A20而抑制NF-κB的激活,从而抑制小胶质细胞激活介导的炎症反应。
[硕士论文] 苏东安
精神病与精神卫生学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:抑郁症是一种常见的情感障碍,主要临床表现为情绪低落、兴趣减低,甚至可出现极端消极观念和自杀行为,致残及致死率非常高,预计到2020年,抑郁症将成为全球第二大常见疾病[1];先前研究发现抑郁症的发病机制可能与相应脑区神经营养因子水平下调及促炎性因子的异常激活有关[2-4]。大量研究指出氯胺酮作为一类临床常用的全身麻醉药,其可发挥快速起效的抗抑郁作用,且对伴有自杀倾向的难治性抑郁患者亦有改善作用[5,6],本研究旨在通过构建抑郁动物模型和临床实验进一步证实氯胺酮对抑郁症的治疗作用,并试图阐明氯胺酮抗抑郁机制,从而为临床治疗抑郁症提供理论基础。
  一、氯胺酮对抑郁大鼠白介素-1β和白介素-6表达的影响
  目的:观察氯胺酮对抑郁大鼠前额皮层及海马区组织内白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)表达的变化。
  方法:Wistar大鼠雄性20只,2月龄,体重180~220g。按随机方式分为2组(n=10),分别给予生理盐水(对照组,C组)、给予氯胺酮药物治疗组为K组。应用行强迫游泳实验15min的方法建立大鼠抑郁模型,建模后第2天腹腔注射氯胺酮10mg/kg或等体积生理盐水。注射30min后再次进行强迫游泳试验5min,记录大鼠不动时间。然后立即处死大鼠,剥前额皮层及海马组织测定IL-1β和IL-6的表达。
  结果:与对照组相比,氯胺酮干预后大鼠强迫游泳不动时间明显减少(p<0.01),大鼠前额皮层及海马区的IL-1β和IL-6表达均明显下调(p<0.05)。
  结论:氯胺酮的抗抑郁作用可能与前额皮层及海马IL-1β和IL-6的表达下调有关。
  二、氯胺酮对抑郁症患者血清脑源性神经营养因子及5-羟色胺水平的影响
  目的:探索单次小剂量静脉注射氯胺酮对抑郁症患者血清脑源性神经营养因子(BDNF)及5-羟色胺(5-HT)水平的影响。
  方法:39名抑郁症患者随机分为两组:对照组(n=20),氯胺酮组(n=19)。氯胺酮组静脉持续推注0.5mg/kg盐酸氯胺酮溶液50ml,推注时间40min,对照组推注等容量生理盐水50ml。在治疗前及治疗后第1、3、7天完成汉密尔顿(HAMD)量表评分及测定外周静脉血BDNF及5-HT的含量。
  结果:与对照组相比,氯胺酮组患者在干预后第1、3、7天HAMD评分均明显降低(p<0.05),治疗后第1天BDNF水平明显上升(p<0.01),尽管第3天有所回落但仍显著高于对照组(p<0.05),第7天无明显差异(p>0.05),5-HT水平各时间节点与对照组无明显差异(p>0.05)。
  结论:氯胺酮的抗抑郁作用可能与上调血清BDNF的表达有关,与5-HT的关系尚需进一步研究证实。
[硕士论文] 刘德洋
公共管理 黑龙江大学 2018(学位年度)
摘要:随着经济的发展,社会也在不断的向前进步,人口也在不断的增加,家庭的结构也出现了改变,这也就加大了社会的竞争,生活不再是以前的慢节奏,所带来的压力也越来越大。同时精神疾病的患病率也不断的增加。社会上出现的由于精神疾病引发的一系列问题也得到了社会的广泛关注。现如今精神卫生已经成为了公共卫生管理中了一个重要的问题。跟据卫生和计划生育委员会统计年鉴显示,现如今我国的疾病负担排行当中位居首位的就是精神疾病。
  本论文针对近年黑龙江省精神卫生服务现状来分析黑龙江省精神卫生服务问题及原因,从精神疾病分析、中央补助地方严重精神障碍管理治疗项目的资金投入、专科医院的建立以及社区精神康复服务这三个部分进行描述,给相关部门在加强对精神卫生管理上提供参照,为我省的精神卫生的发展贡献自己的一份力。本论文从中国以及发达国家的管理模式给出有关上述问题的管理对策。
[博士论文] 武宜金
外国语言学及应用语言学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:心理治疗是“以言治病”的活动,治疗师和来访者通过言语互动来共同推动诊疗活动的有序开展。在言语互动的过程中,培养温暖、愉悦、可信的关系是取得良好治疗效果的前提和保障。在建立这种关系的过程中,共情起着至关重要的作用。心理治疗中的共情是指治疗师从来访者的角度理解来访者的想法、经历和感受的情感行为。它是准确感受当事人的内心世界的能力,是智力与情感的过程,不仅需要理解、认知另一个人的情绪与处境,还需要将这种理解和认知准确地传达给来访者。虽然共情这一现象引起了学者的重视并取得了许多重要的研究成果,但这些研究主要是从心理学视角出发,关注点在于较为宏观的共情的作用及技术层面,而对于治疗师在治疗过程中共情表达的具体实践方面鲜有研究。基于自然发生的心理治疗会话,本研究尝试对治疗师如何表达共情进行语言分析。
  本研究语料来自于治疗师与来访者言语互动的视屏录像,选取17次的心理治疗会话为研究对象。本研究以人际和谐理论为理论框架,运用会话分析的方法对心理治疗师和来访者言语互动中的共情现象进行话语语用分析,主要探究心理咨询中共情是如何在关系取向、以言行事域、话语域、参与域和非言语域中实现。
  就关系取向而言,本研究发现心理咨询中共情可以分为面子提升共情、面子威胁共情与面子忽略共情。在实现和谐取向过程中,治疗师使用上述三种方式来获取交往权,维护平等权,维持和提升素质和身份面子,实现事务和关系目标。尽管在本研究中发现了面子威胁行为的共情,但其未旦威胁反而维持和提升了治疗师和来访者之间的和谐关系。
  在关系管理的以言行事域,治疗师采用十种不同的互动策略对来访者的心理困惑进行共情理解。治疗师使用这些和谐提升取向的互动策略凸显了对人际交往中平等权和交往权的尊敬。但本研究也发现咨询师有时会违反平等原则(自主—控制),例如,治疗师会采用提供困难解决方法的互动策略来表达共情。在心理治疗这种提供服务和帮助的机构场景中,这种违反平等权原则的互动策略是被允许的行为,是治疗师理解和接受来访者心理苦楚的表现。关于面子敏感性方面,治疗师的互动策略可以显著地提升来访者自身的身份面子。除了提升来访者的身份面子,治疗师自身的身份面子也可以得到提升,因为这些互动策略显示了治疗师积极的社会价值,例如:关爱、体贴、帮助。同时,由于这些互动策略显示了治疗师的帮扶角色,治疗师自己的“素质面子”也可以得到提升。治疗师的互动目标主要是关系性的,目的是建立、维持与增强与来访者之间的治疗关系。
  共情以四步回合语步模式在话语域中呈现。通过对治疗师回应来访者心理困惑序列组织结构的分析,我们发现心理治疗共情序列组织由以下四部分组成:治疗师主动诱导来访者诉说心理困惑或痛苦;来访者讲述细心理困惑或痛苦;治疗师的共情理解;来访者对治疗师共情的回应。此外,本研究也探索了这一序列组织结构的语言结构特征,这可以帮助我们进一步了解共情的微观实现过程。
  共情以独特的方式在参与域与非语言域中呈现。关于参与域,通过分析共情的话轮分配系统,发现共情的话轮构建单位为:词;短语;小句;心理治疗中涉及到两种话轮分配方式:来访者选择治疗师;治疗师自我选择。同时我们也发现治疗师也可通过词汇替代来表达对来访者的痛苦经历的理解。此外,包括听话者在内的“我们”和他者为导向的“你”也是治疗师表达共情的重要语言资源。当来访者表达情感、描述痛苦情感经历或个人心理创伤时,触发语也被治疗师频繁用来表达共情。这类触发语的声音柔和、音量比较低,可以与来访者的情感产生共鸣。关于非语言域,治疗师使用点头、目触、身体向前倾斜、痛苦的面部表情、微笑等非语言资源表达共情。
  心理治疗本质上是一种策略性的言语互动行为。而共情是心理治疗活动顺利进行的必要保证。因此,关注和剖析共情的微观构建过程是了解心理治疗活动的有效途径。本论文对心理治疗中共情行为细致地描写和深入周密的分析将对心理咨询的研究方法提供有益的借鉴。
[硕士论文] 侍相君
神经病学 解放军总医院;军医进修学院;中国人民解放军总医院;解放军医学院 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过比较单纯使用文拉法辛,文拉法辛联合小剂量奥氮平和文拉法辛联合认知行为疗法治疗帕金森病(PD)抑郁、认知功能障碍的临床疗效和不良反应,探讨PD抑郁、认知功能障碍最合适的治疗方案。
  方法:
  选择我院收治的57例PD合并抑郁、认知功能障碍患者并将其随机分为三组,分别为对照组(单用文拉法辛治疗),联合小剂量奥氮平组(文拉法辛联合小剂量奥氮平),联合认知行为疗法组(文拉法辛联合认知行为疗法),每组19例,于治疗前及治疗后4、8周末采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD,得分越高说明患者抑郁程度越高)进行抑郁程度评定,简易精神状态评价量表(MMSE,得分越高说明患者认知功能越好)和事件相关电位(event-related potentials,ERPs,主要测定其潜伏期和波幅)P300进行认知功能评定。
  结果:
  与治疗前相比,治疗4周、8周时,三组的HAMD评分有不同程度下降(P<0.05);与对照组相比,治疗4周、8周时,联合小剂量奥氮平组和联合CBT组HAMD评分明显下降(P<0.05);与联合小剂量奥氮平组相比,治疗4周、8周时,联合CBT组HAMD评分明显下降(△P<0.05)。
  与治疗前相比,治疗4周、8周时,三组的MMSE评分有不同程度升高(P<0.05);与对照组相比,治疗4周时,联合小剂量奥氮平组和联合CBT组MMSE评分升高不明显,而治疗8周时,两组评分均显著升高(P<0.05);与联合小剂量奥氮平组相比,治疗8周时,联合CBT组MMSE评分明显升高(△P<0.05)。
  与治疗前相比,治疗4周、8周时,三组P300潜伏期有不同程度缩短(P<0.05),波幅有升高(P<0.05);与对照组相比,治疗4周时,联合小剂量奥氮平组和联合CBT组P300潜伏期缩短不明显,波幅升高不明显;而治疗8周时,两组P300潜伏期明显缩短(P<0.05),波幅有明显升高(P<0.05);与联合小剂量奥氮平组相比,治疗8周时,联合CBT组P300潜伏期明显缩短(△P<0.05),波幅有明显升高(△P<0.05)。
  三组均无特殊不良反应。
  结论:
  文拉法辛联合认知行为疗法治疗PD抑郁、认知功能障碍疗效确切,能显著改善患者抑郁症状,提高患者的认知功能,疗效较单用文拉法辛或文拉法辛联合小剂量奥氮平治疗更好,且不良反应较少。
[硕士论文] 田昕
护理学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过对新生儿无陪护病房的新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)患儿母亲的焦虑抑郁情绪的调查,了解HIE患儿母亲焦虑抑郁情绪的现状,分析其影响因素,以引起医务人员的重视,为制定有效的干预措施提供科学依据 。
  方法:
  采用横断面调查研究,对2016年10月至2017年6月在聊城市人民医院新生儿两个无陪护病房住院的200例HIE患儿母亲进行问卷调查,采用自编的《HIE患儿及其母亲一般资料调查表》调查搜集人口学资料与疾病情况。借助SAS(焦虑自评量表)、SDS(抑郁自评量表)以及SSRS(社会支持评定量表)评估HIE患儿母亲的焦虑、抑郁程度、社会支持状况。收集到的资料选择统计软件SPSS22.0开展统计学分析,患儿及其母亲的一般资料通过相关描述性指标加以分析,包括均数、标准差以及百分比等;患儿母亲的焦虑、抑郁程度与影响因素由单样本与独立样本t检验、单因素方差分析、多元线性回归分析。
  结果:
  1、焦虑自评量表结果显示,200名HIE患儿母亲中63例(31.5%)存在焦虑情绪,焦虑得分为(46.11±8.28)分,对比我国正常群体焦虑得分(29.78±10.01)分,差异有统计学意义(p<0.01)。其中,轻度焦虑45例(71.43%),中度焦虑18例(28.57%),无重度焦虑。
  2、抑郁自评量表结果显示,200名HIE患儿母亲中有41例(20.5%)存在抑郁情绪,抑郁得分为(47.15±8.08)分,高于国内正常人群抑郁得分(33.46±8.55),差异有统计学意义(p<0.01)。其中,轻度抑郁27例(65.85%),中度抑郁14例(34.15%),无重度抑郁。
  3、社会支持评定量表结果显示,200名HIE忠儿的社会支持总分为(42.26±6.07)分,低于国内正常水平(44.38±8.38)分,差异有统计学意义(p<0.01)。客观支持得分为(10.91±2.80)分,低于国内正常水平(12.68±3.47)分,差异有统计学意义(p<0.01)。主观支持得分为(23.28±4.12)分,与国内正常水平(23.81±4.75)分的差异无统计学意义(p=0.068>0.05)。社会支持利用度得分为(8.07±1.72)分,低于国内正常水平(9.38±2.40)分,差异有统计学意义(p<0.01)。
  4、单因素分析提示,HIE患儿母亲焦虑得分,住院天数>14天组高于<7天组和7~14天组;住院费用>10000元组高于<5000元组和5000~10000元组;母亲年龄>35岁组高于<25岁组和25~35岁组;职业中农民组得分高于其余组;家庭月总收入<5000元组高于5000~10000元组和>10000元组;居住地为农村组高于城市组;受孕方式中试管婴儿组高于自然受孕组;有异常产科史组高于无异常产科史组;有窒息复苏史组高于无窒息复苏史组;HIE病情分度为重度组高于轻度组和中度组,差异有统计学意义(p<0.05)。患儿性别、是否早产、住院费用类型、文化程度、分娩方式、是否多胎妊娠、有无宫内窘迫、有无羊水污染对HIE患儿母亲焦虑得分影响无统计学意义(p>0.05)。
  5、单因素分析提示,HIE患儿母亲抑郁得分,住院天数>14天组高于<7天组和7~14天组;住院费用>10000元组高于<5000元组和5000~10000元组;母亲年龄>35岁组高于<25岁组和25~35岁组;受孕方式中试管婴儿组高于自然受孕组;有异常产科史组高于无异常产科史组;有窒息复苏史组高于无窒息复苏史组;HIE病情分度中重度组高于轻度组和中度组,差异有统计学意义(p<0.05)。患儿性别、是否早产、住院费用类型、文化水平、职业、居住地、家庭月总收入、分娩方式、是否为多胎妊娠、有无宫内窘迫、有无羊水污染对HIE患儿母亲抑郁得分影响无统计学意义(p>0.05)。
  6、HIE患儿母亲的焦虑、抑郁情绪分值同社会支持总分呈负相关,且同各维度分值呈负相关。(焦虑得分与社会支持总分、客观支持总分、主观支持总分、社会支持利用度的相关系数分别为:r=-0.612,-0.685,-0.262,-0.415;抑郁得分与社会支持总分、客观支持总分、主观支持总分、社会支持利用度的相关系数分别为:r=-0.550,-0.559,-0.275,-0.373)。
  7、多元线性回归分析提示,住院费用、母亲年龄、家庭月总收入、职业、HIE病情分度、客观支持、社会支持利用度是HIE患儿母亲焦虑的主要影响因素。住院费用、母亲年龄、受孕方式、异常产科史、HIE病情分度、客观支持是HIE患儿母亲抑郁的主要影响因素。
  结论:
  1、无陪护病房的HIE患儿母亲为焦虑、抑郁心理的高发群体。
  2、无陪护病房HIE患儿母亲的焦虑、抑郁情绪受多种因素影响,住院费用、母亲年龄、家庭月总收入、职业、受孕方式、异常产科史、HIE病情分度、客观支持、社会支持利用度等是主要影响因素。
[博士论文] 刘奕卿
神经病学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述。
  第一部分β-arrestin1/2影响Aβ25-35的神经毒性
  一、寡聚Aβ25-35具有神经毒性,可诱导细胞产生内质网应激继而发生细胞凋亡。
  1寡聚Aβ25-35显著降低神经源性细胞的存活率。
  2寡聚Aβ25-35可以诱导SH-SY5Y细胞和PC12细胞产生内质网应激。
  3寡聚Aβ25-35诱导神经源性细胞凋亡。
  二、β-arrestins在AD病人血样及AD细胞模型中的表达异于正常对照组血样及对照组细胞模型。
  1 ARRB1和ARRB2在AD病人血样中表达低于正常老年人对照组血样。
  2稳定表达APP的HEK293(20E2)与转染空载质粒的HEK293细胞相比,β-arrestinl和β-arrestin2蛋白水平显著降低。
  3外源性Aβ25-35处理的神经细胞,β-arrestin1和β-arrestin2表达具有时间依赖性。
  三、ARRB1对Aβ的神经毒性的影响异于ARRB2的影响。
  1人源性神经细胞SH-SY5Y中,ARRB1干扰后,Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞的存活率显著降低,而干扰ARRB2的SH-SY5Y细胞在Aβ25-35处理后的存活率明显升高。
  2β-arrestin1对SH-SY5Y细胞增殖相关信号具有抑制作用。
  第二部分β-arrestin1/2通过参与Aβ诱导自噬的形成及自噬泡的降解,影响Aβ的神经毒性
  一、Aβ诱导神经细胞产生自噬
  1 Aβ25-35诱导细胞产生自噬。
  2.Aβ25-35诱导SH-SY5Y的自噬为保护性自噬。
  3.Aβ25-35诱导的PC12的自噬为损伤性自噬。
  4 SH-SY5Y细胞与PC12细胞基础自噬水平不同。
  二、β-arrestin1参与Aβ25-35诱导自噬的形成
  1.AD细胞模型中β-arrestins表达水平与LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ—致。
  2.干扰ARRB1降低Aβ25-35相关的细胞自噬水平。
  3.干扰ARRB2不影响Aβ25-35相关的细胞自噬水平。Western blotting结果示,干扰ARRB2后,自噬相关蛋白LC3Ⅱ、beclin1、ATG7的基础水平无明显降低,加入Aβ25-351h后,干扰ARRB2的SH-SY5Y细胞的LC3B表达与对照组无明显差异;该结果表明下调β-arrestin2不影响自噬泡的形成。
  三、β-arrestins不参与损伤溶酶体影响Aβ25-35神经毒性。
  1 Aβ25-35损伤细胞的溶酶体。用lysosomal tracker red染SH-SY5Y细胞质中的溶酶体,共聚焦显微镜拍照结果示,阴性对照组细胞中,溶酶体被染成红色点状,均匀分布在胞质中,Aβ25-35处理组,红色点状的溶酶体数量上减少,单个溶酶体染色变浅,且具有时间依赖性。该结果表明Aβ25-35抑制细胞内溶酶体的正常功能。
  2β-arrestins不能通过影响细胞内溶酶体缓解Aβ25-35毒性。lysosomal trackerred染色溶酶体,共聚焦显微拍照结果示,无Aβ25-35处理组细胞,干扰ARRB1组细胞胞质中红色点状的溶酶体与阴性组细胞质中相比轻度减少,Aβ25-35处理组中,阴性干扰组与ARRB1干扰组的红色点状溶酶体数量上基本不变,单个溶酶体染色深浅无差异。
  第三部分β-arrestins通过参与神经元细胞膜表面的α7nAchR表达,影响Aβ25-35的神经毒性
  一、α7nAchR对神经细胞具有保护作用。
  1.α7nAchR在AD病人血样中的表达低于正常对照组血样。我们通过实时定量PCR分析两种样本血样中基因CHRNA7的转录水平差异,研究α7nAchR在正常老年人与AD病人的表达,结果示,在与正常老年人组比较,AD病人组样本血样中αCHRNA7的转录水平显著下降。该结果表明病人血样中,CHRNA7基因的转录水平受到抑制。
  2.α7nAchR激动剂尼古丁具有神经细胞保护作用,干扰α7nAchR后会抑制细胞活性并显著降低尼古丁的保护作用。细胞MTT实验结果分析,提前加入尼古丁可以活化α7nAchR,部分逆转Aβ25-35的神经毒性,增加细胞的存活率。干扰α7nAchR不仅抑制细胞的增殖能力,而且增强Aβ25-35的神经毒性,干扰α7nAchR后,尼古丁不能增加Aβ25-35处理组细胞的存活率。上述实验结果表明,Aβ25-35存在时,α7nAchR,可以对细胞起保护作用,尼古丁可以通过活化α7nAchR增强该保护作用。减少膜表面的α7nAchR,不但会使尼古丁保护作用失效,而且会增强Aβ25-35的神经毒性。
  二、下调β-arrestin2增强尼古丁对神经细胞的保护作用。
  1.下调β-arrestin1对尼古丁的神经细胞保护作用无影响。根据细胞MTT实验结果,阴性干扰组中预先加入尼古丁可以降低Aβ25-35的细胞毒性,增加SH-SY5Y细胞的存活率,干扰ARRB1组SH-SY5Y细胞经Aβ25-35处理后,细胞死亡率增加,而尼古丁处理组与尼古丁非处理组相比,不能提高神经细胞的存活率。该结果说明下调β-arrestin1可以增加Aβ25-35的毒性,且不能通过尼古丁影响Aβ25-35的神经毒性作用。
  2.下调β-arrestin2增强尼古丁对神经细胞的保护作用。细胞MTT实验结果分析,阴性干扰组中预先加入尼古丁可以降低Aβ25-35的细胞毒性,增加SH-SY5Y细胞的存活率,干扰ARRB2组细胞经Aβ25-35处理后,SH-SY5Y细胞死亡率与阴性干扰组细胞相比显著减少,其中尼古丁处理组与尼古丁非处理组相比,神经细胞的存活率显著增加。该结果说明下调β-arrestin2可以通过增强尼古丁的神经保护作用缓解Aβ25-35的毒性。
  三、β-arrestin2参与细胞膜表面的α7nAchR表达
  1.流式细胞术结果表明,SH-SY5Y细胞在Aβ25-35处理后,存活的SH-SY5Y细胞膜表面的α7nAchR有轻度增加。该结果表明细胞膜表面的α7nAchR的数量受外界因素影响出现变化,比如Aβ25-35。
  2.下调β-arrestin1轻度升高基础水平的α7nAchR。流式细胞术结果分析,与阴性干扰组相比,下调β-arrestin1可以轻度增加细胞膜表面的α7nAchR数量。该结果表明下调β-arrestin1可以轻度增加细胞膜表面的α7nAchR的数量。
  3.干扰β-arrestin2显著升高基础水平的α7nAchR。流式细胞术结果分析,下调β-arrestin2可以显著增加细胞膜表面的α7nAchR数量。该结果表明单独干扰β-arrestin2的表达可以显著增加细胞膜表面α7nAchR的数量。
  第四部分结论及创新点
  结论
  1.β-arrestin1/2在正常老年人与同年龄段阿尔兹海默病病人体内中表达具有差异,为研究AD发生发展及治疗方法的切入靶点。
  2.β-arrestin1低表达时增加Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的神经毒性,β-arrestin2低表达时减缓Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的神经毒性。
  3.β-arrestin1参与Aβ诱导的自噬。
  4.β-arrestin2低表达通过上调SH-SY5Y细胞膜表面α7nAchR表达保护神经细胞。
  创新点与不足之处
  1.首次报道β-arrestins在Aβ25-35诱导的细胞死亡中的作用。阿尔兹海默病进展的主要原因之一就是神经元细胞的死亡,因此,寻找神经元细胞死亡的影响基因,并及时加以干预,缓解神经元细胞的死亡是目前很有价值的治疗方向之一。
  2.首次报道β-arrestin1通过参与Aβ25-35诱导的自噬影响神经细胞的存活。但β-arrestins如何参与自噬需要进一步研究。
  3.首次报道β-arrestins通过影响细胞膜表面α7nAchR表达影响神经细胞存活。
  α7nAchR数量及活性的降低使神经细胞死亡增加,是阿尔兹海默病人出现认知障碍及记忆力下降的主要原因之一,而且增加α7nAchR活性是目前治疗阿尔兹海默病的靶点之一,例如多奈哌齐,一种缓解早中期阿尔兹海默病人记忆力下降的有效药物,因此研究有效提高细胞膜表面α7nAchR的数量是目前前景良好的治疗方向之一,但β-arrestins参与细胞膜表面α7nAchR表达的具体机制需要进一步研究。
[硕士论文] 杨春晖
外科学(神经外科) 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述。
  第一部分:高频电刺激大鼠双侧伏隔核对大鼠成瘾行为的影响
  (一)消退期高频电刺激大鼠双侧伏隔核对大鼠成瘾行为的影响
  目的:研究吗啡成瘾大鼠消退期高频电刺激双侧伏隔核对吗啡诱导位置偏爱及复吸行为的影响。
  方法:成年SD大鼠20只,280g-300g,电极外套管通过立体定向手术植入大鼠双侧伏隔核,术后休息5d,应用腹腔注射吗啡(10mg/kg)诱导建立吗啡成瘾大鼠位置偏爱模型,建模成功后将大鼠随机分成实验组(吗啡+DBS)和对照组(吗啡+假刺激),每组各10只。通过DBS电路给予电刺激,实验组给予高频电刺激(刺激参数:频率120Hz,波宽60ms,刺激强度为0.3mA,刺激时间30min/d),对照组为假刺激组。刺激后次日测试两组大鼠位置偏爱评分至消退成功,比较两组消退时间;两组大鼠吗啡成瘾消退成功后24h内给予小剂量吗啡点燃复吸并测试位置偏爱评分并进行组间比较。
  结果:1、建模后大鼠CPP评分(620.07s±88.21s)较建模前CPP评分(363.04s±56.36s)显著延长(p<0.0001),建模成功;
  2、实验组消退期平均为26天,对照组消退期平均为6天,实验组消退期显著延长;
  3、消退成功24小时内给予小剂量吗啡(3mg/kg)点燃复吸,结果显示:CPP复吸评分实验组(357.01s±192.72s)较对照组(704.91s±181.35s)抑制复吸(p=0.0346)。
  结论:消退期高频刺激成瘾大鼠双侧伏隔核会延长成瘾行为消退时间但会抑制点燃复吸行为。
  (二)戒断期高频电刺激大鼠双侧伏隔核对大鼠成瘾行为影响
  目的:研究吗啡成瘾大鼠戒断期高频电刺激双侧伏隔核对吗啡诱导位置偏爱及复吸行为的影响。
  方法:成年SD大鼠20只,280g-300g,电极外套管通过立体定向手术植入大鼠双侧伏隔核,术后休息5d,应用腹腔注射吗啡(10mg/kg)诱导建立吗啡成瘾大鼠位置偏爱模型,建模成功后采用配对消退方式进行熄灭训练。大鼠成瘾行为消退成功后。将大鼠随机分成实验组(吗啡+DBS)和对照组(吗啡+假刺激),每组各10只。通过DBS电路给予电刺激,实验组给予高频电刺激(刺激参数:频率120Hz,波宽60ms,刺激强度为0.3mA,刺激时间30min/d),对照组为假刺激组。连续刺激7日。最后一次高频电刺激和假刺激后24h内给予小剂量吗啡点燃复吸并测试位置偏爱评分并进行组间比较。
  结果:1、建模后评分616.2s±74.69s较建模前评分353.9s±84.33s大鼠伴药箱停留时间明显延长(p<0.0001),结果表明吗啡诱导大鼠位置偏爱模型建立成功。
  2、消退CPP评分456.4s±148.8s,与建模前评分353.9s±84.33s无明显统计学差异(P=0.0847)且与建模后评分616.2s±74.69s出现统计学差异(P=0.0219)满足消退条件确定消退成功。
  3、CPP复吸评分实验组(330.1 s±212.6 s)较对照组(684.2 s±230.2s)抑制复吸(p=0.0029)。
  结论:戒断期高频刺激成瘾大鼠双侧伏隔核会抑制大鼠点燃复吸行为。
  第二部分:NMDA受体在药物成瘾复吸行为中的作用
  目的:研究NMDA受体在高频电刺激吗啡成瘾位置偏爱复吸行为中的作用。
  方法:成年SD大鼠30只,280g-300g,电极外套管通过立体定向手术植入大鼠双侧伏隔核,术后休息5d,应用腹腔注射吗啡(10mg/kg)诱导建立吗啡成瘾大鼠位置偏爱模型,建模成功后采用配对消退方式进行熄灭训练。大鼠成瘾行为消退成功后。将大鼠随机分成DBS+生理盐水组、DBS+AP-5组和假刺激对照组,每组各10只。通过DBS电路给予电刺激,实验组给予高频电刺激(刺激参数:频率120Hz,波宽60ms,刺激强度为0.3mA,刺激时间30min/d),三组分别于刺激前15min核团微注射给药。连续刺激7日。最后一次高频电刺激和假刺激后24h内给予小剂量吗啡点燃复吸并测试位置偏爱评分并进行组间比较。比较三组大鼠复吸评分。
  结果:1、结果显示建模后评分599.6s±63.27s较建模前评分379.4s±47.50s大鼠伴药箱停留时间明显延长(p<0.0001),结果表明吗啡诱导大鼠位置偏爱模型建立成功。
  2、消退CPP评分431.3s±130.9s。与建模前评分379.4s±47.50s无明显统计学差异(P=0.2857)且与建模后评分599.6s±63.27s出现统计学差异(P<0.0001)满足消退条件确定消退成功,
  3、组间比较各组CPP复吸评分control组vs DBS组p<0.01,DBS组vs AP-5组p<0.05。存在统计学差异。
  结论:伏隔核给予连续高频DBS刺激可抑制吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱的复吸,而伏隔核团注射NMDA受体阻滞剂AP-5可逆转高频DBS刺激抑制的吗啡诱导的大鼠条件性位置偏爱的复吸。
[硕士论文] 孙文静
神经病学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述。
  第一部分 REM期睡眠剥夺对大鼠海马组织自噬水平的影响
  目的:探究REM期睡眠剥夺后大鼠海马组织中是否有自噬活动参与及其水平的改变。
  方法:选取SD大鼠为研究对象,将实验动物分为REM睡眠剥夺组、水环境对照组、正常空白对照组,采用改良多平台睡眠剥夺法来建立本实验所需的睡眠剥夺模型,首先选择免疫荧光观察到三组大鼠海马区自噬体的形成;随后利用western blot检测大脑海马组织中自噬相关蛋白表达量的变化。
  结果:REM期睡眠剥夺后,在免疫荧光下可观察到三组大鼠的海马组织均有自噬体存在;对自噬过程中特征性蛋白LC3B及P62进行WB定量检测后可见:与两个对照对相比,实验组的大鼠海马组织匀浆中LC3B表达明显升高(p<0.05),P62蛋白表达量下降(p<0.05)。同时两个对照组间LC3B及P62蛋白的表达量相差不大(p<0.05)。
  结论:REM期睡眠剥夺后大鼠海马组织的自噬活动被激活。
  第二部分 orexin对海马神经元诱导时间、浓度的筛选及对应自噬蛋白的表达
  目的:观察orexin对体外海马神经元细胞活性及自噬水平的影响。
  方法:本实验选择大鼠原代海马细胞为研究对象,给予不同浓度梯度(0mol/L、10-11mol/L、10-9mol/L、10-7mol/L)的orexin干预2小时和时间梯度(0h、2h、4h、6h、8h)10-7mol/LOrexin进行刺激,利用CCK8试剂盒检测不同干预条件下的细胞活性的变化;另外,针对自噬的改变,首先利用细胞免疫荧光下观察是否有自噬小体存在,随后利用WB对不同时间和不同浓度的orexin干预后自噬蛋白P62进行定量检测选取最合适的实验条件。
  结果:在刺激2小时的条件下,随着orexin浓度的不断增加海马神经元细胞活性率也逐渐上升,选择浓度10-7mol/L组与其空白组相比,结果有差异(P<0.05);而固定orexin的刺激浓度10-7mol/L后,随着干预时间的延长,海马神经元细胞的活性也呈增高趋势,在4小时节点检测的细胞活性较空白对照组有统计意义(P<0.05)。细胞免疫荧光下可见自噬体的存在;与自噬活动呈负相关的P62蛋白的表达量随着orexin的刺激时间和干预浓度的延长表达含量升高,与空白组相比orexin10-7mol/L组及干预4h组的P62蛋白表达均有统计差异(P<0.05)。
  结论:orexin能增加体外海马神经元细胞活性率,同时对细胞自噬活动产生抑制效应;该功能具有时间和浓度依赖性。
  第三部分 orexin对海马神经元自噬水平影响的可能机制
  目的:初步探索orexin影响海马神经元自噬活性可能的机制。
  方法:本实验继续选用海马神经元为研究对象,利用实验二的结果选取刺激条件后(10-7mol/L、4h),随后从orexin和自噬两方面进行干预,将实验分为空白对照组、orexin组、orexin受体阻滞剂(almorexant)组、自噬激活剂(rapamycin)组、orexin+almorexant组及orexin+rapamycin组。利用WB检测自噬相关蛋白Beclin1、P62的表达水平评估自噬水平的改变,随后对各组标本进行电镜观察,更直观观察自噬体的变化。
  结果:orexin组beclin1蛋白表达量较空白对照组下降,自噬活动抑制(p<0.05);加入orexin受体抑制剂组、自噬激活剂的两组细胞,与orexin干预组相比beclin1蛋白表达显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05);若同时加入orexin+其受体阻滞剂或同时加入orexin+自噬激活剂后,则观察到这两组中beclin1蛋白表达水平与对照组数值相差不大(P>0.05),但较单纯加入orexin组相比较,表达增多(p<0.05)。相反,实验过程中与自噬活性呈负相关的蛋白P62的表达量在加入食欲素(orexin)刺激后表达上升,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);而食欲素受体抑制剂组、自噬激活剂组中P62蛋白表达水平下降,相比与对照组有意义(P<0.05);同时给予两种刺激(ore+alm、ore+rap)的两组中,P62水平较orexin组更高,且有意义(P<0.05),但较对照组无明显差异(P>0.05)。
  结论:Orexin对海马神经元自噬水平的抑制可被orexin受体阻滞剂及mTOR抑制剂所阻断。
[硕士论文] 黄蓓
神经病学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述。
  第一部分 发作性睡病猝倒发作时MEP潜伏期延长与皮质兴奋性下降
  目的:利用磁刺激运动诱发电位(MEP)检查,评估1型发作性睡病患者猝倒前和猝倒过程中运动传导通路改变,探讨猝倒时初级运动皮质兴奋性变化,以期发现运动皮质与猝倒机制的关联。
  方法:选取19位1型发作性睡病患者和22位年龄、身高匹配的健康对照组。(1)所有患者完成标准的夜间多导睡眠监测和日间多次小睡潜伏期实验。(2)患者和对照组在安静清醒状态给予运动皮质磁刺激,记录运动诱发电位,检测静息运动阈值、1mV运动阈值、中枢静息期、皮质内易化和短间隔皮质内抑制。(3)诱发患者猝倒,以非猝倒状态下的刺激强度,依次完成猝倒状态下(2)部分的检查内容。
  结果:(1)发作性睡病组患者日间多次小睡潜伏期实验示平均SOREMPs次数3.16±0.83次,平均小睡潜伏期2.28±1.91 min;(2)安静清醒状态下,发作性睡病患者皮质内易化程度显著弱于健康对照组(108.21±51.40% vs182.73±68.59%,P=0.002),1mV运动阈值(48.39±7.12% vs44.86±4.91%,P=0.072)、静息运动阈值(36.44(33.0038.50)% vs36.18(33.0038.25)%,P=1.000)、中枢静息期(68.00(47.5079.50)ms vs58.73(39.5067.00)ms,P=0.160)、短间隔皮质内抑制(48.91(32.1163.18)%vs55.59(26.0081.00)%,P=0.649)在两组间无明显差异。(3)共记录到6位患者的9个猝倒片段。全面性猝倒时1mV运动阈值的平均MEP波幅降低73.45%,静息运动阈值平均MEP波幅降低45.47%。MEP潜伏期延长4±2ms。2位患者在猝倒时皮质内易化增加(98.68% vs124.00%,52.86% vs110.53%),短间隔皮质内抑制改变不一致(43.42%vs18.80%,75.71% vs178.95%)伴猝倒恢复期中枢静息期延长(78ms vs132ms,64msvs104ms)。
  结论:发作性睡病患者非猝倒状态下皮质内易化作用减弱,而全面性和部分性猝倒过程中都存在显著的MEP潜伏期延长和波幅降低,提示猝倒过程中皮质脊髓传导通路抑制、初级运动皮质兴奋性降低。
  第二部分 发作性睡病猝倒过程中视频-脑电-肌电-心电动态监测与分析
  目的:通过对猝倒片段的动态视频-脑电-肌电-心电监测,全面解析猝倒的发生、发展过程的临床特征和神经电生理改变,提供临床快速识别、诊断猝倒的方法,并推进对猝倒机制的研究。
  方法:筛选5位(男4例)伴有典型猝倒症状的1型发作性睡病患者,其中3位被诊断为猝倒持续状态,所有患者病程在1年以内,且均未接受过药物治疗。监测前给予患者充足睡眠,监测中让患者站立于有保护措施的房间内,由专业医师协助其诱发猝倒,并记录猝倒全过程的视频-脑电-肌电-心电改变。
  结果:共记录到5位患者的14个全面性猝倒片段。数据分析发现(1)猝倒是一个动态改变的过程,我们提出改进版的猝倒分期,包括诱发期、对抗/跌倒期、无张力期和恢复期,表现为患者受到情感刺激(诱发期)出现肌肉颤抖、姿势不稳(对抗/跌倒期),继而全身瘫软(无张力期),最后肌张力逐渐恢复(恢复期)的过程(2)猝倒中患者肌肉颤抖抽搐时脑电同步出现特征性短暂爆发的theta节律,无张力期背景脑电为低电压混合频率波,恢复期脑电以α或β节律为主。(3)横向比较猝倒时爆发性theta波与SOREMPs期theta节律相比波幅显著增高,伴频率增快,无张力期低电压混合频率波与清醒闭眼期和夜间REM期(非SOREMPs)不同。
  结论:猝倒各期的临床表现和神经电生理改变均不相同,反映其背后神经递质此消彼长的动态变化。对抗/跌倒期蕴含了两种力量的博弈,其中阵发性高同步化theta节律(HSPT)可能为触发猝倒发作的节点。
[博士论文] 廖文象
临床医学;神经病学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:抑郁症是一种高度一致性的精神障碍疾病,在老年期(≥60岁)这一特定人群的抑郁症通常称为老年抑郁症(late life depression,LLD)。目前,随着社会老龄化进程的加快,老年抑郁症已经成为严重的社会公共健康问题。既往有研究根据抑郁症首次发病年龄的不同,将抑郁症分为早发型抑郁症(early onset depression,EOD)和晚发型抑郁症(late onset depression,LOD)。其后研究发现,相较于LOD患者,EOD患者嗜睡、焦虑、自杀意念和自杀行为等表现更为明显,并且其与家族遗传史的关系更为密切。而LOD患者则更多的表现为快感缺失,且血管性病理改变更为显著。此外,LOD患者神经认知损害更为严重,大脑异常改变也更为突出,甚至今后发展为痴呆的风险也更高。 在神经认知方面,近年来的研究表明,老年抑郁症常伴随有多领域认知损害,且随着抑郁症状的缓解,这些认知损害并未恢复到正常水平。在急性期老年抑郁症患者中,信息处理速度被认为是其核心认知损害,可以介导其他临床症状对其余认知领域的影响,而执行功能则是仅次于信息处理速度的核心认知损害。但是有研究发现抑郁症状恢复后,老年抑郁症患者的信息处理速度恢复到正常水平,因此恢复期老年抑郁症信息处理速度不再处于核心地位。既往研究发现,LOD患者在记忆功能、信息处理速度和执行功能方面损害更为严重,那么在恢复期的LOD患者中,信息处理速度是否已经恢复到正常水平仍不明确,并且信息处理速度是否仍然处于核心地位也不清楚。 近些年来,影像学技术已成为大脑神经科学和精神病学研究领域中的重要工具之一。其中,抑郁症的“脑神经网络功能调节障碍”假说已经成为抑郁症神经认知科学研究最受关注的热点之一。然而,目前关于抑郁症异常脑区的致病机制仍未明确,并且没有较为一致的研究结果,这可能是抑郁症异质性的一个表现。目前关于EOD和LOD的研究中,结构影像学表明LOD在海马等脑区的体积减小更为严重,但是缺乏有关于功能影像学方面两抑郁亚型的直接比较研究。既往年轻抑郁症与老年抑郁症的比较中可以发现,两个抑郁亚型的大脑功能存在一定的差异性,但是这两者年龄存在显著性差异,这可能对功能影像的结果造成一定的影像。因此,十分有必要直接比较老年期的EOD和LOD患者的大脑功能情况。血氧水平依赖性信号(blood oxygenation level-dependent,BOLD)和动脉自旋标记信号(arterial spin labeling,ASL)是目前使用较多的用于研究大脑功能的磁共振技术。其中,采用BOLD序列进行功能连接分析可以探讨大脑功能的整合情况,分析脑区与脑区之间网络的异常改变。而采用ASL序列可以计算大脑局部脑血流量(cerebral blood flow,CBF),可以反映大脑的局部功能情况。 在本研究中,我们通过选取恢复期的EOD和LOD患者以及年龄匹配的健康受试者,采用多维度认知神经心理学量表评估认知功能,并利用静息态功能磁共振(functional magnetic resonance imaging,fMRI)探讨大脑功能状况:(1)探讨恢复期EOD和LOD患者认知损害严重程度及其核心认知领域与临床变量之间关联性;(2)利用BOLD序列探讨恢复期EOD和LOD患者在默认网络(default mode network,DMN)、执行控制网络(executive control network,ECN)和突显网络(salience network,SN)中功能连接的特点;(3)采用ASL技术分析恢复期EOD和LOD患者脑血流量的异常改变以及这些改变与认知功能的关系。最终,希望通过以上三部分研究加深我们对EOD和LOD患者神经认知损害的神经功能机制的了解,为今后深入探讨两者认知损害进展方向和机制提供有价值的信息。 第一部分恢复期早发型和晚发型抑郁症患者认知损害特征研究 目的:探讨恢复期EOD和LOD患者认知损害严重程度及其核心认知领域与临床变量之间关联性。 方法:入组36名恢复期EOD,38名恢复期LOD患者和65名年龄匹配的健康受试者。对所有受试者进行一整套神经心理学评估和磁共振扫描,神经心理学评估包括执行功能、记忆功能、信息处理速度、注意功能和视空间技能。采用方差分析、轮廓分析和逐步回归分析方法进行统计分析。 结果:恢复期EOD患者记忆功能显著差于健康受试者;而恢复期LOD患者执行功能、记忆功能和信息处理速度均显著差于健康受试者;两个患者组比较各个认知功能领域无显著性差异。轮廓分析显示恢复期EOD和LOD患者认知领域表现无显著性差异,而各个神经心理学测试表现差异主要来源于执行功能和记忆功能。逐步回归分析显示,恢复期EOD患者中,执行功能为核心认知领域,能介导年龄对记忆功能的影响,但不能介导教育程度对注意功能的影响;而在恢复期LOD患者中,执行功能是最核心认知领域,其次为信息处理速度,其中执行功能能介导灰质体积对记忆功能的影响,而信息处理速度能介导年龄对注意功能的影响。 结论:恢复期LOD患者认知损害比恢复期EOD患者更为广泛。恢复期EOD患者核心认知领域是执行功能,而恢复期LOD患者核心认知领域是执行功能和信息处理速度。 第二部分 恢复期早发型和晚发型抑郁症患者静息态功能连接特征研究
  目的:本研究主要探讨恢复期EOD和LOD患者在默认网络(default mode network,DMN)、执行控制网络(executive control network,ECN)和突显网络(salience network,SN)中功能连接的特点。 方法:本研究选取31名恢复期EOD患者、33名恢复期LOD患者和43名年龄匹配的健康受试者。所有受试者均完成一整套多维度神经心理学评估和静息态功能磁共振扫描。静息态功能磁共振数据预处理后,选取5个感兴趣区作为种子点进行功能连接分析。然后,基于体素水平采用协方差分析来检查恢复期EOD、LOD患者和健康受试者功能连接的差异性。最后,组间差异显著脑区的功能连接值与神经认知功能z分进行偏相关分析。 结果:在默认网络中,三组受试者间功能连接差异性脑区主要集中在额叶皮层、颞叶皮层、扣带回和左侧角回。同理,在执行控制网络中,三组受试者间功能连接差异性脑区主要位于额叶皮层、颞叶皮层和扣带回;而在突显网络中,三组受试者间差异性脑区则主要位于双侧额叶-脑岛-纹状体区域、额叶皮层和中扣带回/补充运动区。与恢复期LOD患者相比,恢复期EOD患者在默认网络、执行控制网络和突显网络的功能连接下降更明显。恢复期LOD患者中记忆功能减退与执行控制网络功能连接下降显著相关。 结论:恢复期EOD和LOD患者在默认网络、执行控制网络和突显网络中功能连接均显著下降,且恢复期EOD患者下降更为明显。此外,恢复期LOD患者执行控制网络功能连接损害能直接影响记忆功能的改变。 第三部分 恢复期早发型和晚发型抑郁症患者脑血流量改变研究 目的:分析恢复期EOD和LOD患者脑血流量的异常改变以及这些改变与认知功能的关系。 方法:本研究入组32名恢复期EOD患者,32名恢复期LOD患者和43名年龄匹配的健康受试者。所有受试者均进行pASL序列磁共振扫描。采用基于体素的统计分析方法分析pASL数据。 结果:与健康对照组相比,恢复期EOD患者标准化CBF显著降低脑区主要位于左侧小脑和右侧距状回/舌头/梭状回区域,而高灌注脑区主要位于右侧角回;恢复期LOD患者标准化CBF显著降低脑区主要位于双侧楔前叶、楔叶、右侧额叶-扣带回-纹状体区域、右侧颢叶、枕叶和顶叶皮层,而标准化CBF显著升高脑区主要位于左侧额叶、颞叶皮层和扣带回。恢复期LOD患者脑血流量分布存在偏侧化现象,并且其CBF异常改变比恢复期EOD患者更为广泛。恢复期LOD患者异常脑血流量与认知功能呈显著相关性,而恢复期EOD患者无此相关关系。 结论:与EOD患者相比,LOD患者脑血流量的异常改变更为严重,并且这些脑血流量的改变可能与LOD患者认知功能进行性减退有关。
[硕士论文] 史鹏
神经病学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:对原发性帕金森病剂末现象(Wearing-off,WO)发病的临床特点及相关影响因素进行探讨,以寻找其危险因子和保护因子,采取干预措施从而延缓剂末现象的出现。
  方法:把纳入研究的96例帕金森病患者根据剂末现象9项问卷(WOQ-9)调查表和临床判断标准分成两组,分别为剂末现象阳性组和阴性组。两组研究对象采取病例对照研究,主要观察可能影响剂末现象的因素如:性别、起病年龄、吸烟、饮酒、喝茶、总病程、应用左旋多巴总疗程、左旋多巴等效日剂量、低密度脂蛋白、血尿酸水平等。对上述研究对象进行单因素分析,得到两组间比较差异有统计学意义的变量。最后对差异有统计学意义的变量进行多因素非条件Logistic回归分析,观察帕金森病剂末现象的影响因素。
  结果:在符合标准的96例患者中,男性53人,女43人,平均年龄(65.11±9.17)岁,平均病程(7.25±4.43)年。符合临床WO判断标准的病人共53例,比例为55.2%,其中男病人29人,女24例。单因素分析中临床判断WO阳性组和临床判断阴性组比较,在发病年龄、总病程、有无喝茶史,应用左旋多巴总疗程、左旋多巴等效日剂量及尿酸水平等方面,均有显著性差别(P<0.05)。将上述统计学有差异的变量进行多因素非条件Logistic逐步回归分析,显示左旋多巴应用总疗程与剂末现象的出现呈独立正相关(OR=1.608,P<0.01),血尿酸水平(OR=0.979,P<0.01)和喝茶史(OR=0.034,P<0.01)与剂末现象的出现率呈负相关。
  结论:病人应用左旋多巴总疗程越长,剂末现象(WO)的出现率越高,左旋多巴使用总疗程是剂末现象(WO)出现的独立危险因素;有喝茶史、尿酸水平高的帕金森患者剂末现象的发生率低,喝茶史和血尿酸高可能是剂末现象出现的保护因素。
[博士论文] 相媛媛
神经病学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种常见的进展性的神经变性病,发病率仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)。PD的发病率有逐年升高的趋势,据估计60岁以上的人口患病率为1%,随着年龄增加,男性和女性的患病率均增加。PD的运动症状主要表现为运动迟缓、肌强直、静止性震颤以及姿势平衡障碍,症状常从一侧肢体开始,逐渐累及对侧肢体。PD的临床表现除了运动症状外还包括非运动症状:例如嗅觉减退、便秘、快速眼动期(rapid eye movement,REM)睡眠行为异常(REM-sleep behaviour disorder,RBD)、抑郁、认知障碍等。这些非运动症状可在运动症状之前出现,伴随PD患者的不同病程阶段。PD确切的病因还不清楚。一般认为是多种致病因素的共同作用所导致,包括遗传因素,环境因素,年龄老化以及生活方式等。
  PD的病理改变是以黑质致密带(substantia nigra pars compacta,SNc)中包含神经黑色素(neuromelanin,NM)的多巴胺(dopamine,DA)能神经元的显著丢失,神经元内路易小体的形成以及尾状核、壳核、苍白球、伏隔核以及丘脑底核中严重的DA缺乏为特征,在经典的运动症状出现之前的数年或者数十年之前病变就已经存在。PD患者在病程的晚期,脑内还可能出现非DA能的改变。PD在临床上具有很大的异质性,预后也有很大的差别。按照经验可分为以震颤为主(tremor dominant,TD)型和非震颤为主型(non-tremor dominant,NTD,姿势不稳步态障碍型或运动不能-强直型),这一亚型分类方法得到了最广泛的研究。Rajput及其合作者进行的尸检结果显示:以姿势不稳步态障碍(postural instability gait difficulty,PIGD)起病的占16%,以震颤为主要表现起病的占49%。一些研究专注于两种亚型主要的运动症状、病程、认知障碍的特点等,结果发现这些亚型有着不同的疾病进展速度以及神经病理特征,与NTD亚型相比,TD亚型患者表现出更加良性的疾病病程,更少的非运动症状以及更轻的认知功能减退。然而,这些不同临床表现的潜在的神经病理机制还不是很清楚。TD患者已知的病理改变与NTD患者是不同的。死后尸检研究显示:与NTD亚型相比,TD亚型的患者在SNc的腹外侧以及蓝斑(locus coeruleus,LC)存在较轻的细胞丢失,同时皮层路易体的沉积也较少。神经功能影像研究显示:随着疾病进展,NTD亚型患者出现纹状体DA显著降低;腹侧纹状体(主要是尾状核和前壳核)葡萄糖代谢显著降低,而TD亚型患者该过程相对稳定。
  尽管NM的生物学功能还不是很清楚,PD患者含NM的神经元的选择性易损的特点提示NM在神经变性中的作用。NM是一种黑色的多聚体,由脑内特定的儿茶酚胺神经元产生。脑内有三个主要的区域含有产生NM的细胞:中脑的黑质(substantia nigra,SN),脑桥的LC,延髓的腹外侧网状结构以及孤束核。其中,SNc和LC含有大量成簇的含色素的神经元,在肉眼观察下表现为黑色,在病理切片上也比较容易辨认。但是,通过常规的磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)不能检测到神经元的丢失,主要是因为MRI不能直接可视化正常或不正常的SNc和LC。
  Sasaki团队于2006年最早应用NM-MRI成像技术成功显示了正常和异常的SNc和LC。NM成像是基于NM顺磁性的特性,引起T1缩短效应以及T1加权成像上的高信号。LC和SNc的信号,在健康对照是很明显的,而在PD患者中信号是减低的,这与病理发现有着很强的一致性。通过应用NM-MRI,研究者们较为准确的识别了PD患者SNc信号的衰减、面积和体积的减低,诊断具有较高的敏感度和特异度。然而,PIGD以及TD亚型患者SN内NM的丢失情况还不是很清楚。到目前为止,还没有报道利用NM-MRI评估PD运动亚型之间的差异。
  研究目的:
  应用NM-MRI比较PD患者和对照组之间SNc信号衰减的差异,以及PD运动亚型之间SNc信号衰减的差异,从而进一步阐明是否能够通过NM-MRI研究的SN变性的差异来对PD不同的运动亚型进行鉴别。
  研究方法:
  门诊收集符合英国脑库PD诊断标准的原发性PD患者31例。在患者关期(至少12小时未服用药物)的状态下通过改良的Hoehn-Yahr分期量表(Modified Hoehn and Yahr staging scale,H-Y)以及统一帕金森病评定量表(Unified Parkinson's disease Rating Scale,UPDRS)的运动部分(第Ⅲ部分)对患者的病情严重程度进行评定。将PD患者分为PIGD组(n=14)和TD组(n=9),同时收集20个年龄性别匹配的志愿者作为对照。通过3T的磁共振扫描器获得所有患者的NM-MRI脉冲序列图像、轴位T1以及T2序列图像,液体衰减反转恢复(fluid attenuated inversion recovery,FLAIR)序列图像以及弥散加权成像(diffusion weighted images,DWI)序列图像。其中的一位作者在显示器上利用圆形光标对感兴趣区(regions of interest,ROIs)的信号强度进行手工测量,反复测量三遍取平均值。ROIs包括:双侧SNc以及小脑上脚(superior cerebellar peduncle,SCP)交叉,测量的层面位于下丘的下缘。SNc信号强度的对比率(contrast ratio,CR)通过以下公式计算:CR=(SSNc-SSCP)/SSCP,其中SSNc代表双侧SNc(包括SNc的外侧部和内侧部)的信号强度的平均值,SSCP代表小脑上脚交叉信号强度的平均值。统计分析:首先应用方差分析(Analysis of Variance,ANOVA)以及Bonferroni检验分析PIGD组、TD组以及对照组三组之间CR、年龄以及性别是否有统计学差异。应用t检验来比较PIGD组与TD组之间CR、病程、H-Y分期以及UPDRS评分是否有统计学差异。应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)来计算NM-MRI鉴别PIGD与TD的敏感度与特异度;ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)>0.7时,应用约登指数确定临界值。所有的分析α值为0.05。
  研究结果:
  1、PIGD组患者14例,其中女性8例(57.1%),男性6例(42.9%),平均年龄(59.8±8.4)岁,病程(3.3±1.7)年,H-Y分期(2.2±0.3),UPDRS(第Ⅲ部分)评分:(30.2±7.7)分;TD组患者9例,其中女性6例(66.7%),男性3例(33.3%),平均年龄(58.8±7.7)岁,病程(3.8±3.4)年,H-Y分期(2.1±0.4),UPDRS(第Ⅲ部分)评分:(32.1±9.9)分;对照组20例,其中女性11例(55.0%),男性9例(45.0%)。三组之间在性别、年龄方面没有明显差异(P分别为0.847,0.123),PIGD组与TD组之间在病程、H-Y分期以及UPDRS(第Ⅲ部分)评分方面也没有明显差异(P分别为0.528,0.206,0.614);
  2、与对照组相比,PD患者SNc(包括临床受累严重侧肢体的同侧以及对侧SNc)的信号强度明显减低,以外侧部更明显。并且与对照组相比,PD患者SNc外侧部(包括临床受累严重侧肢体的同侧以及对侧SNc)信号强度CRs的平均值明显减低;PD患者SNc内侧部(包括临床受累严重侧肢体的同侧以及对侧SNc)信号强度CRs的平均值也明显减低。然而,与同侧相比,PD患者临床受累严重侧肢体的对侧SNc(包括内侧部以及外侧部)CRs的平均值仅显示出有减低的趋势,没有统计学意义(外侧部:P=0.71;内侧部:P=0.75);
  3、与TD组患者相比,PIGD组患者的SNc的内侧部(包括临床受累严重侧肢体的同侧以及对侧SNc)的CRs平均值明显减低,尤其是临床受累严重侧肢体同侧的SNc,而两组患者SNc外侧部(包括临床受累严重侧肢体的同侧以及对侧SNc)的CRs值没有表现出显著差异;
  4、临床受累严重侧肢体的同侧SNc的内侧部鉴别PIGD与TD亚型的准确度为81%(敏感度71.4%,特异度77.8%),临床受累严重侧肢体的对侧SNc的内侧部鉴别两种亚型的准确度为77%(敏感度78.6%,特异度66.7%)。ROC曲线分析提示:临床受累严重侧肢体的同侧SNc的内侧部与对侧SNc的内侧部相比,在鉴别两种亚型方面没有明显差别(P=0.72)。
  研究结论:
  与TD组相比,PIGD组患者SNc的内侧部有着更为严重的信号衰减。同时,临床受累严重侧肢体的同侧SNc的内侧部,具有最高的鉴别PD运动亚型的能力(准确度81%;敏感度71.4%;特异度77.8%)。NM-MRI提供了一个有价值的检测手段来鉴别PD运动亚型。NM-MRI为两种亚型之间神经病理机制的不同提供了新的证据。
[博士论文] 王经纬
临床医学(儿科学) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几部分展开论述:
  论文Ⅰ Cx43及其半通道与缺氧缺血性乳鼠脑损伤的相关性研究
  1研究背景:
  多项研究发现脑损伤后星形胶质细胞可表达caspase,其表达量与凋亡指数呈正比,提示亦与神经胶质细胞调亡有关。在脑缺血时,半胱天冬酶级联反应受caspase-3的特异性调节。活化的caspase-3刺激线粒体途径引起凋亡,被认为是神经元凋亡和脑损伤程度的生物标志物。活化的caspase-3能够执行细胞程序性死亡,移除不必要的神经元。在新生脑损伤模型中,药物抑制凋亡能降低损伤,改善运动感觉功能。
  2研究目的:
  (1)通过新生儿鼠缺氧缺血模型确定Cx43及半通道是否在未成熟脑组织中表达;
  (2)动态观察体内缺氧缺血后及葡萄糖氧剥夺后Cx43、半通道及caspase-3的变化,以及星型胶质细胞活性的改变,为寻求HIBI的发病机制及治疗方法提供新的理论基础。
  3研究方法:
  3.1实验对象
  (1)新生7日龄Wistar大鼠共80只,体重12-17g,平均体重(14±2.8)g,大鼠雌雄不限,由山东大学实验动物中心提供。
  (2)人类大脑皮层星型胶质细胞株:购自美国ScienCell研究实验室
  3.2研究对象分组及模型制备:
  (1)实验动物分组:健康新生Wistar大鼠80只,7日龄,随机分为5组,即假手术组(Sham组)、缺氧缺血后1h组(T1h组)、缺氧缺血后12h组(T12h组),缺氧缺血后24h组(T24h组),缺氧缺血后48h组(T48h组)。
  (2)动物模型制备:7日龄新生Wistar鼠用利多卡因颈部皮肤局部麻醉后,胶布固定乳鼠四肢及头部于操作台面上,剪开颈部正中皮肤,分离皮下脂肪,于胸锁乳突肌内侧的深部分离左颈总动脉,用5-0丝线结扎两端并剪断血管,术中用棉球止血,3-0丝线间断缝合皮肤切口,整个手术约5分钟,假手术组仅给予分离左颈总动脉后,缝合皮肤。术后2小时,持续充以8%氧氮混合气体,气流量约1 L/min,维持3h,术后放回母鼠身边喂养。动物实验室温度设定为23±1℃,房间固定湿度为60%±10%,12小时照明,12小时黑暗。
  3.3 HE染色
  对假手术组,缺氧缺血后1小时组,缺氧缺血后12小时组,缺氧缺血后24小时组及缺氧缺血后48小时组乳鼠脑组织行HE染色。
  3.4免疫荧光双标记法
  利用免疫荧光双标记法检测缺氧缺血后1小时组乳鼠脑组织中Cx43+GFAP,HCl+GFAP的表达。
  4研究结果:
  4.1一般情况
  与假手术组相比,缺氧缺血后1小时组(T1h),缺氧缺血后12小时组(T12h),缺氧缺血后24小时组(T24h)缺氧缺血后48小时组(T48h)之间体重无统计学差别(P>0.05)。
  4.2模型成功标志
  缺氧缺血组乳鼠结扎左颈总动脉后,给予缺氧处理。缺氧约10 min,所有乳鼠烦躁不安,活动增多;缺氧15~20 min,可以看到乳鼠口鼻周明显发绀,呼吸困难,呼吸频率增快;20~30min出现站立不稳,摇摇摆摆,爬行时下肢拖步;35~60 min乳鼠活动明显减少,全身青紫。1h后大部分乳鼠出现嗜睡及激惹、抽搐、尖叫,甚至死亡等。
  4.3脑组织大体观
  假手术组于假手术后1小时,各组缺氧缺血后乳鼠在相应时间点,给予水合氯醛腹腔注射后,断头取脑;假手术组左右大脑外观对称,无异常改变;缺氧缺血后不同时间点各组脑组织均有水肿,体积增大,左侧脑组织体积较右侧增大,缺氧缺血后48小时组可见左侧脑部分形成坏死液化灶。
  4.4脑组织HE病理切片染色
  HE染色可见假手术组神经元细胞形态正常;缺氧缺血后不同时间点神经元细胞不同程度肿胀,排列紊乱,甚至数量减少,细胞间间隙增宽;神经胶质细胞增多,排列紊乱,脑室周围白质组织疏松。
  5研究结论:
  (1)本研究显示Cx43和半通道明显调节脑组织星型胶质细胞内的Casp3,他们在缺氧缺血诱导的星型胶质细胞死亡中具有重要的作用,在细胞死亡的整个过程中互相转换。
  (2) Cx43和它的半通道可能成为预测早期缺氧缺血性损伤的信号。对于临床来说,阻断或抑制Cx43和其半通道可能有助于神经保护作用。
  论文Ⅱ 孤独症谱系障碍影响因素分析及与GFAP、HCY相关性的研究
  1研究背景:
  孤独症谱系障碍(autism spectrum disorders,ASD)是儿童早期出现的神经发育障碍性疾病,不是单一的疾病障碍,是以社会交往障碍、语言交流障碍和活动内容、兴趣行为刻板重复为特征的多种障碍,同时多伴有一定程度的智力低下。
  大多数ASD患儿伴有不同程度的智力发育落后。有研究表明ASD患者的死亡率是其同年龄同性别非孤独症人群的2.8倍,较高的死亡率可能与孤独症合并症状有关。迄今为止ASD的治疗仍缺乏特异性,给患者家庭带来很大的经济负担和精神压力。因此,尽早了解ASD的影响因素和发病机制,提早预防,减少患病率,具有重要的意义。
  2研究目的:
  (1)本研究旨在依据上述引起ASD的可能病因,设计针对ASD儿童可能影响因素的调查问卷,了解我市ASD儿童发生的高危因素,探讨儿童出现孤独症表现与儿童一般情况、出生情况、家庭因素及母亲孕期因素等方面的关系。
  (2)通过比较ASD和对照组儿童血清中GFAP、HCY、CRP的含量,探讨GFAP、HCY在ASD儿童中的潜在作用;确定GFAP的早期诊断价值及临床意义。
  3研究方法:
  3.1查阅文献,设计调查问卷
  查阅国内外大量文献,分析ASD儿童的可能影响因素,设计本研究的调查问卷,其内容主要包括四大部分,(1)儿童一般情况;(2)儿童出生情况;(3)儿童父母及家庭情况;(4)母亲孕期情况。
  3.2确定研究对象
  收集烟台市烟台山医院2015年1月至12月间ASD患儿,总共75例,年龄2-6岁儿童,同时收集附近幼儿园及儿童保健门诊查体的同年龄、同性别相匹配的正常儿童作为对照组。ASD确诊标准根据精神障碍诊断和统计手册第四版,排除因任何原因接受过药物治疗;伴有其他神经精神系统疾病者;儿童家人存在代谢性疾病、精神病性障碍等疾病;患儿伴有其他重大疾病者。
  所有对照组儿童来自医院附近幼儿园及儿童保健门诊,由儿科医生进行临床检查。对照组的儿童如存在下列情况将被排除本研究,如果儿童或家人存在内分泌疾病、精神发育迟滞、交往障碍、精神病性障碍,注意缺陷多动障碍和学习障碍。
  3.3签署知情同意书
  本研究的准则和知情同意得到了烟台市烟台山医院伦理委员会的批准。研究的细节向参与研究的儿童父母进行了解释,并得到了受试儿童父母的书面知情同意。
  3.4发放调查问卷
  对ASD儿童及同年龄、同性别相匹配的正常儿童父母发放调查问卷,获取基本数据资料。
  3.5进行儿童孤独症评定量表
  孤独症症状的严重程度使用中文版的儿童孤独症评定量表(CARS)进行测定。所有纳入研究的儿童进行ASD严重程度的评估。
  4研究结果:
  4.1一般资料比较
  ASD组和对照组儿童,均为汉族,两组性别、年龄匹配,其中男孩59例,女孩16例,男女比例为3.7∶1,年龄范围为2岁-6岁(3.75±1.21)岁,按照1∶1病例配对。ASD组与对照组身高、体重两组间比较差异无统计学意义(P>0.05);CARS评分在ASD组是41.7分±6.7,对照组是21.7分±4.4,两组间比较差异具有显著性,有统计学意义(P<0.05)。
  4.2调查问卷的单因素分析
  单因素结果分析显示:接触电子产品时间、父亲劳动类型、父亲学历、家庭月收入、家族中是否有少言寡语之人、孕期是否接触电磁辐射、孕期母亲情绪是否经常波动或有重大不良刺激在ASD组和对照组间存在差异,具有统计学意义;
  4.3调查问卷的条件多因素回归分析
  经条件多因素回归分析结果显示:接触电子产品的时间、家庭收入、家族少言对ASD有影响,从危险度的估计值来看,家庭收入越多,接触电子产品时间越晚,父母家族中有少言寡语的情感不丰富的人越少患ASD的危险性越小。
  4.4调查问卷影响因素与ASD严重程度的相关分析
  调查问卷中影响因素与ASD严重程度的相关分析提示:接触电子产品时间在不同程度的ASD儿童中的分布差异存在统计学意义。
  5研究结论:
  (1)本研究从调查问卷方面着手,发现本地区ASD儿童的高危因素与接触电子产品的时间、家庭收入和家族存在少言寡语之人有关。家族中存在少言寡语之人越多,家庭收入越低,接触电子产品时间越早,ASD发生的风险就越高。
  (2)本研究评估了ASD儿童血清GFAP、HCY等水平,以及与ASD严重程度的相关性,提示GFAP可能参与孤独症儿童的病理生理,是孤独症儿童疾病有用的生物标记,可作为ASD的早期检测辅助诊断工具。
[博士论文] 周艳玲
神经病学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景:
  阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的中枢神经系统变性病,是老年期痴呆的主要原因。AD脑特征性的病理变化是:神经细胞外β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)异常沉积形成的老年斑和细胞内过度磷酸化的Tau蛋白形成的神经原纤维缠结以及突触的失能和神经元的丢失。已经证明Aβ的异常沉积导致突触失能,并通过诱导细胞凋亡导致神经退行性变。目前AD仍无有效的干预措施,已有的药物仅能延缓病情的进展,其根本原因在于发病机制尚不明确,无针对性治疗靶点,这是目前亟待解决的根本问题。
  对梅奥医学中心AD患者临床注册研究的调查显示,80%的AD患者有葡萄糖耐受不良或糖尿病。从最初的鹿特丹研究开始,临床和流行病学积累了越来越多的证据,证明糖尿病患者有很大的可能罹患认知障碍,对痴呆,尤其是AD的易感性增加。Ott和他的同事们也证实,同正常对照相比,糖尿病患者罹患痴呆的风险增加2倍。目前认为,即便是长时间的糖尿病前期状态,也可能显著增加罹患痴呆的风险。
  AD和2型糖尿病有很多共同的病理特征:包括异常的蛋白加工过程、胰岛素信号通路异常、葡萄糖代谢失调、氧化应激、晚期糖基化终末产物的形成以及炎症通路的激活等。AD脑显示胰岛素缺陷、胰岛素信号通路的改变和/或异常激活,重要的是,对胰岛素的反应能力降低。胰岛素缺陷和胰岛素抵抗以及对胰岛素和胰岛素样生长因子的大量干扰代表了AD早期和进展期的异常病理过程,可以从分子、生化及组织病理等多个角度解释AD的绝大多数病变,因此,AD又被认为是一种选择性的脑型糖尿病,即“3型糖尿病”。胰岛素抵抗在AD中的关键作用是与Aβ的形成和沉积、神经元纤维缠结的形成、突触传导的失调和神经元变性有关。因此,如何有效的抑制胰岛素抵抗可能是AD治疗的一个新靶点。神经炎症是AD另一个早期和持续的病理特征,而过氧化应激被证实为诱发因素。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminalkinase,JNK)信号通路与过氧化应激和胰岛素抵抗有关。JNK被过氧化氢激活,从而激活γ-分泌酶,而后者Aβ的形成中有着非常重要的作用。研究证实,Aβ不仅沉积在中枢神经系统,还可沉积在皮肤、皮下组织和肠道等神经以外的组织结构中。近年来,多数学者致力于AD脑神经炎症和胰岛素抵抗的相关机制研究,对AD肠道炎症机制和胰岛素抵抗的相关研究却甚少涉及。
  肠道和大脑之间存在着一个复杂的交互系统,通过神经、内分泌、免疫之间的相互作用交互联系,称为“肠脑轴”(Gut Brain Axis,GBA)。GBA不仅保证恰当的肠道自稳态,而且对情感、动机及高级认知功能都有重要的影响。肠道神经系统是肠脑轴的重要组成部分,可以独立于中枢神经系统而起作用,因此,肠道又被称为身体的“第二大脑”。肠道巨噬细胞是体内最大的常驻巨噬细胞群体,分布在肠道全程,肠道的巨噬细胞同肠道神经系统之间建立了密切链接,两者之间通过β2肾上腺素受体(β2-adrenergic receptor,β2-AR)及其配体交互作用。由此我们推测,肠道巨噬细胞功能状态对肠道神经系统、对GBA的功能有重要影响。近年来越来越多的临床和实验室证据表明肠道微生物群对机体功能的重要影响,而肠道微生物群的变化可以影响肠道巨噬细胞的功能,激活炎症信号通路,导致胰岛素信号通路受损。我们的研究主要围绕Aβ对肠道巨噬细胞的功能影响以及可能的作用机制展开。
  研究目的:
  1.明确在AD转基因鼠肠道中是否存在胰岛素抵抗以及Aβ对胰岛素抵抗的作用;
  2.明确Aβ对肠道巨噬细胞功能的影响及其可能机制。
  研究方法:
  1.动物和细胞
  动物模型:APP/PS1(β淀粉样前体蛋白/早老蛋白)转基因小鼠是目前AD研究领域应用较广泛的动物模型,通过上海茂生生物科技发展有限公司购自美国杰克逊实验室;WT小鼠,购于广东省医学实验动物中心,各20只。动物房饲养,分别分笼喂养(4-5只/笼),自由摄食和饮水。我们选取12月龄的健康小鼠进行相关实验。
  细胞培养:小鼠肠道巨噬细胞(RAW264.7)细胞购自上海生物研究所。细胞放在37℃、含5%CO2的细胞培养箱中培养,注意湿度饱和;培养基采用DMEM培养基,内加10%胎牛血清;培养基中添加双抗:100mg/ml链霉素和100U/ml的青霉素。定期观察细胞的生长情况,待细胞进入对数生长且状态良好时进行细胞的冻存、传代和药物处理。
  2.免疫组化
  实验小鼠麻醉后处死,打开腹腔,取距幽门20cm处回肠组织,清除残留粪便,用4℃生理盐水冲洗后,置于4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,用于免疫组化染色。
  免疫组织化学染色抗体使用浓度(IR1∶1000、IRS11∶1000、Aβ1∶200、Tuj1∶500、KIBRA1∶200、β2AR1∶400、eNOS1∶400)。DAB体系室温显色。应用Image J图像处理软件进行相关图像分析。
  3.Aβ25-35寡聚体的制备:
  用0.33ml双蒸水中将Aβ25-35肽段1mg溶解,将浓度调整为1 nmol/uL,封口膜封好,置于37℃水浴箱中连续孵育96h,充分聚集、“老化”后备用。
  4.MTT法(MTT assay)
  取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞接种于96孔板,置于37℃、5%CO2培养箱中培养24h。用不同浓度的Aβ25-35处理细胞,然后低浓度组Aβ25-35再加用胰岛素处理,对照组不做处理,细胞的活力用MTT法进行检测,并计算相对增长率。细胞相对增值率=(实验组吸光度值-对照组吸光度值)/对照组吸光度值×100%。
  5.酶联免疫吸附测定法(ELISA assay)
  取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞接种于96孔板,置于37℃、5%CO2培养箱中培养24h。用不同浓度的Aβ25-35处理细胞,然后低浓度组Aβ25-35再加用胰岛素处理,对照组不做处理,结束后取细胞上清,用ELISA法检测IL-6和TNF-α水平。
  6.免疫蛋白印迹(Western Blot)
  取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞铺于6孔板中培养24h,用不同浓度的Aβ25-35处理细胞,然后低浓度组Aβ25-35再加用胰岛素处理,对照组不做处理。药物处理结束后分别用RIPA缓冲液提取细胞蛋白,变性处理、电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显影。检测不同干预条件下RAW264.7巨噬细胞细胞胰岛素信号通路相关蛋白的表达:IR-β、IRS1、p-IRS1Ser307、AKT、p-AKT Ser473、JNK、p-JNK Tyr185。一抗抗体浓度:β-actin1∶1000; IR-β1∶800;IRS11∶1200; p-IRS1 Ser3071∶1200; P-Akt Ser4731∶900; Akt1∶900; JNK1∶1100; p-JNK Tyr1851∶1100。蛋白表达水平用内参蛋白β-actin标准化。应用QUANTITY ONE凝胶电泳图像分析仪分析结果。
  7.数据分析(Statistic Analysis)
  应用SPSS version19.0(IBM,Armonk,NY,USA)统计学软件进行统计学分析,多组数据间比较采用的是one-way ANOVA检测方法,多组间两两比较采用LSD方法。所有分析数据结果均以均数±标准差(Mean±SD)表示,以p<0.05为差异,具有统计学意义。
  研究结果:
  1.免疫组化对比AD小鼠和WT小鼠肠道总的IR、IRS1、Aβ、Tuj、KIBRA、β2AR、eNOS的区别
  免疫组化结果显示:AD小鼠回肠中IRS1、Aβ、Tuj、KIBRA、β2AR、eNOS的蛋白表达量较WT小鼠明显增加,有统计学差异(P<0.05);而IR的量在两组小鼠中无明显差异。
  2.Aβ25-35对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响
  MTT实验结果显示,Aβ25-35促进了RAW264.7细胞的增殖,与空白组对照有统计学差异(P<0.01),且与Aβ25-35剂量呈正相关。而胰岛素处理后细胞增值率较Aβ25-55组明显降低(P<0.05)。
  3.Aβ25-35对巨噬细胞炎症因子分泌的影响
  巨噬细胞经Aβ25-35处理后,炎症因子TNF-α和IL-6分泌明显增多,并与Aβ25-35剂量成正相关,随着Aβ25-35剂量的增大,分泌量逐渐增加,与空白组对比有统计学差异(P<0.01)。而经胰岛素处理后,较单纯使用Aβ25-35明显降低,且有统计学意义(P<0.05)。
  4.Aβ25-35对RAW264.7巨噬细胞中IR-β、IRS1、p-IRS1、AKT、p-AKT、JNK、p-JNK的影响
  Aβ25-35能明显降低巨噬细胞IR-β蛋白含量(P<0.01),而胰岛素处理后又能明显提高IR-β的量(P<0.05);此外,Aβ25-35又明显降低巨噬细胞p AKT/AKT的比值(P<0.01),而胰岛素处理后又能明显提高该比值(P<0.05);Aβ25-35能明显增加巨噬细胞中p-IRS1/IRS1和p-JNK/JNK的比值(P<0.01),而胰岛素处理后使这两种比值又趋向于空白水平(P<0.01)。
  研究结论:
  1.APP/PS1小鼠肠道Aβ异常沉积,IRS1表达增多,IR无差别,提示AD小鼠肠道内存在胰岛素抵抗,而Aβ对此有诱导作用。
  2.APP/PS1小鼠肠道β2AR、KIBRA、Tuj表达增多,肠道神经交感活性增高,巨噬细胞功能活化。
  3.Aβ25-35可诱导巨噬细胞增殖,活性明显增强。
  4.Aβ25-35诱导下,巨噬细胞的胰岛素信号通路受损,其机制与JNK通路有关。
[博士论文] 赵俊武
神经病学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  本研究拟通过rTMS刺激阿尔茨海默病患者颞顶叶,采用认知行为量表评估患者认知功能的改变,并进一步通过听觉词语记忆评测量表的评估,探究rTMS刺激颞顶叶对阿尔茨海默病患者认知功能及听觉记忆的改善的作用,分析rTMS刺激颞项叶对轻度和中度阿尔茨海默病患者的临床疗效。
  方法:
  本研究采用前瞻性、随机、双盲、对照实验设计。共纳入阿尔茨海默病患者30例,并将之随机分为rTMS治疗组和假治疗对照组。利用简易精神状态检查表(MMSE)评估阿尔茨海默病的病情严重程度,进而将阿尔茨海默病患者分为轻度(21-26分)和中度(<20分)。药物治疗:两组患者均服用胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐,剂量范围每日5-10mg,在该研究期间维持个体剂量不变。经颅磁刺激治疗采用英国Magstim公司生产的rTMS治疗仪,线圈为8字形线圈。经颅磁刺激参数:20赫兹(高频刺激),每串10秒钟,间隔20秒,共循环刺激20分钟。刺激部位:国际脑电记录系统10-20分区:左侧(P3/T5)和右侧(P4/T6),随机刺激左右两侧,每次分别刺激10分钟,连续治疗6周,每周5天,每天1次。治疗组前6周给以药物治疗联合经颅磁刺激治疗。对照组前6周治疗方法:药物治疗加经颅磁假刺激,即经颅磁刺激治疗仪不通电,使用录音笔录放与rTMS治疗组相同的参数通电声响。然后两组继续只给于药物治疗6周。分别在治疗前(基线)、治疗6周后即刻(6W)以及继续观察6周后(12W)对每个患者的综合认知功能进行神经心理学评估,每次评估均采用阿尔茨海默病认知功能评估量表(ADAS-cog)、MMSE和蒙特利尔认知评估量表(MoCA)。针对阿尔茨海默病患者的听觉语言认知功能,我们进一步采用世界卫生组织洛杉矶加利福尼亚大学听觉词语学习测验(WHO-UCLA AVLT)进行评估。完成各项神经心理学评估后,比较患者在不同时间点的量表得分数据,并根据阿尔茨海默病的病情严重程度(轻度或中度),对数据进行分组分析及统计比较。
  结果:
  1、受试者一般资料及神经心理学评估基线水平:本研究中17例阿尔茨海默病患者被随机归于rTMS治疗组,其他13例患者被随机归为假治疗对照组。rTMS治疗组和假治疗对照组在年龄(P=0.313)、男女比例(P=1)、教育程度(P=0.921)和多奈哌齐使用剂量(P=0.751)上没有显著统计学差异。在试验过程中,3名参与者(2名来自rTMS治疗组,1名来自假治疗对照组)出现暂时性不良反应,表现为第一次治疗后的轻微头痛和疲劳,受试者均表示愿意配合完成全程试验,且随后不良反应并未再次出现。rTMS治疗组和假治疗对照组患者的基线认知功能评分,包括MMSE评分(P=0.536)、ADAS cog评分(P=0.474)、MoCA评分(P=0.810)和WHO-UCLA AVLT评分(P=0.591)均没有显著统计学差异。根据患者MMSE评分,所有阿尔茨海默病患者可分为轻度20人、中度10人;其中rTMS治疗组中轻度患者12人,中度患者5人,假治疗对照组中轻度患者8人,中度患者5人。
  2、ADAS-cog评分结果:分析显示ADAS-cog评估没有显著的时间与组别交互作用(P=0.332)。17例rTMS治疗组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均ADAS-cog评分分别为:22.6,18.5和16.8;组间统计学比较显示rTMS治疗后即刻的平均ADAS-cog评分较基线水平显著降低(P=0.042);rTMS治疗后6周的平均ADAS-cog评分较基线水平亦显著降低(P=0.013);13例假治疗对照组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均ADAS-cog评分分别为:24.2,22.9和21.2; rTMS治疗后即刻的平均ADAS-cog评分和治疗后6周的平均ADAS-cog评分与基线水平相比较,均未见显著统计学差异(P=0.668;P=0.315)。在根据阿尔茨海默病的病情严重程度所分的亚组中,12例轻度阿尔茨海默病患者在rTMS治疗后即刻的平均ADAS-cog评分较基线水平显著降低(P=0.044);rTMS治疗后6周的平均ADAS-cog评分较基线水平亦显著降低(P=0.017)。然而,接受rTMS治疗的5例中度阿尔茨海默病患者、假治疗对照组8例轻度阿尔茨海默病患者和假治疗对照组5例中度阿尔茨海默病患者的平均ADAS-cog评分在治疗前后未见显著变化(均P>0.05)。
  3、MMSE评分结果:17例rTMS治疗组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均MMSE评分分别为:22.2,23.9和25.5;组间统计学比较显示rTMS治疗后6周的平均MMSE评分较基线水平显著提高(P=0.017),而治疗后即刻平均MMSE评分与基线水平相比较无显著统计学差异(P=0.071)。13例假治疗对照组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均MMSE评分分别为:22.8,23.1和24.2;组间统计学比较未见显著统计学差异(均P>0.05)。在根据阿尔茨海默病的病情严重程度所分的亚组中,12例轻度阿尔茨海默病患者在rTMS治疗后即刻MMSE评分较基线水平无显著变化(P=0.147); rTMS治疗后6周MMSE评分较基线水平显著升高(P=0.042)。然而,接受rTMS治疗的5例中度阿尔茨海默病患者、假治疗对照组8例轻度阿尔茨海默病患者和假治疗对照组5例中度阿尔茨海默病患者的MMSE评分在治疗前后未见显著变化(均P>0.05)。
  4、MoCA评分结果:17例rTMS治疗组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均MoCA评分分别为:17.5,19.8和21.5;组间统计学比较显示无显著统计学差异(均P>0.05)。13例假治疗对照组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均MoCA评分分别为:18.1,19.3和20.1;组间统计学比较亦未见显著统计学差异(均P>0.05)。在根据阿尔茨海默病的病情严重程度所分的亚组中,12例轻度阿尔茨海默病患者在rTMS治疗后即刻MoCA评分较基线水平无显著变化(P=0.208);rTMS治疗后6周MoCA评分较基线水平显著升高(P=0.046)。然而,接受rTMS治疗的5例中度阿尔茨海默病患者、假治疗对照组8例轻度阿尔茨海默病患者和假治疗对照组5例中度阿尔茨海默病患者的MoCA评分在治疗前后未见显著变化(均P>0.05)。
  5、听觉语言认知功能WHO-UCLA AVLT评分结果:17例rTMS治疗组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均WHO-UCLA AVLT评分分别为:32.5,35.8和38.7;组间统计学比较显示rTMS治疗后6周的平均WHO-UCLAAVLT评分较基线水平显著提高(P=0.039),而治疗后即刻平均WHO-UCLA AVLT评分与基线水平相比较无显著统计学差异(P=0.229)。13例假治疗对照组阿尔茨海默病患者的基线、rTMS治疗后即刻及rTMS治疗后6周的平均WHO-UCLA AVLT评分分别为:34.1,35.8和37.8;组间统计学比较亦未见显著统计学差异(均P>0.05)。在根据阿尔茨海默病的病情严重程度所分的亚组中,12例轻度阿尔茨海默病患者在rTMS治疗后即刻WHO-UCLA AVLT评分较基线水平无显著变化(P=0.363);rTMS治疗后6周WHO-UCLA AVLT评分较基线水平显著升高(P=0.021)。然而,接受rTMS治疗的5例中度阿尔茨海默病患者、假治疗对照组8例轻度阿尔茨海默病患者和假治疗对照组5例中度阿尔茨海默病患者的WHO-UCLA AVLT评分在治疗前后未见显著变化(均P>0.05)。
  结论:
  rTMS刺激AD患者颞顶叶干预后,经MMSE、ADAS-cog、MoCA及WHO-UCLA AVLT量表评定,可有效改善阿尔茨海默病患者的认知功能及听觉词语记忆功能,尤其对于轻度阿尔茨海默病患者疗效更为显著。研究显示rTMS刺激大脑颞顶叶可作为一种无创的辅助疗法,结合当前多种治疗及预防疾病进展的手段应用于阿尔茨海默病患者,可能成为改善阿尔茨海默病患者认知功能新的治疗刺激点,具有广泛的应用前景。
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