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[博士论文] 沈奇骢
基础医学;免疫学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:表观转录组学(Epitranscriptome)是生命科学领域新兴的前沿研究热点,主要关注各种RNA水平的修饰,及其在细胞转录组中的分布和表观调控作用,如近年来被广泛研究的6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)。5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-mC)修饰在生理状态下存在于包括mRNA的多种RNA中。然而作为一种可逆的化学修饰,其动态调控机制还不清楚,特别是还没有发现其特异性的去甲基化酶。另外,作为一种在哺乳动物RNA中普遍存在的修饰方式,其生理和病理功能尚不清楚,特别是其在基因表达调控中的功能尚有待于深入研究。研究mRNA中5-mC的调控及其功能是表观转录组的一个重要方向。Tet蛋白(Ten-eleven Translocation,Tet)作为DNA甲基化的氧化酶,也能够在体外氧化RNA中5-mC。Tet蛋白是否在哺乳动物细胞中调控mRNA中的5-mC修饰,其在不同的生理过程中发挥着怎样的调控作用?这些科学问题有待进一步研究。
  天然免疫是抵御病原体的第一道防线,如何快速高效的识别和清除病原体,并维持免疫稳态,是天然免疫的根本科学问题。病原体感染激活免疫系统,诱导炎症反应,产生各种细胞因子进一步动员造血干细胞向髓系细胞分化,放大天然免疫应答效应是机体快速清除病原体的重要手段。髓系发生(Myelopoiesis)是急性或慢性感染的关键应答反应,其表观遗传学机制尚未见报道,值得探究。Tet2不仅在造血干细胞的自我更新和分化中发挥着重要的调控作用,多项研究也发现Tet2在造血系统多种恶性肿瘤中存在多位点突变,且Tet2基因突变导致的催化功能缺失与造血系统恶性肿瘤的发生发展密切相关,特别是在髓系恶性肿瘤中,表明Tet2可能是一种重要的抑癌基因。此外,Tet2在炎症消退过程中也发挥着重要的调控作用。Tet2是否也参与病原体感染诱导的髓系免疫细胞分化还有待研究。
  本课题围绕Tet2是否参与感染诱导的髓系发生及其表观调控机制展开研究。发现,Tet2能够通过抑制Socs3的mRNA水平而促进脓毒症感染和寄生虫感染诱导的髓系免疫细胞的分化扩增。Tet2通过Adar1抑制Socs3的表达,Adar1通过结合双链RNA并以RNA编辑非依赖的方式降低Socs3mRNA的稳定性。进一步机制研究发现Tet2抑制了mRNA上5-mC的水平,Tet2缺失导致Socs3mRNA3'-UTR区域5-mC水平上升,可能通过5-mC特异性的结合蛋白影响该区域RNA双链的形成,从而减少Adar1的结合。本研究揭示了DNA甲基化氧化酶Tet2分子能够促进感染诱导的髓系天然免疫细胞的发生,从而促进机体对病原体的抵抗能力,为机体抵抗病原体感染的效应机制提出了新观点,也为有效防治感染性疾病提供了新思路和潜在药物研发靶标。同时,Tet2一直被认为是通过调控染色质状态来介导基因转录水平的调控,而本研究首次提出了Tet2作为RNA结合蛋白能够在mRNA修饰水平参与转录后调控的全新功能,为进一步研究Tet2的生理病理功能开辟了新的研究方向。
  第一部分 Tet2通过抑制Socs3的表达而促进感染诱导的髓系免疫细胞分化
  在病原体感染过程中,机体需要从骨髓大量动员免疫细胞到外周血,以快速高效地清除入侵的病原体。同时,刺激造血的细胞因子以及炎性细胞因子促进了更多髓系细胞的发生。为了观察Tet2在此过程中的作用,首先构建了盲肠结扎穿孔诱导脓毒症的小鼠模型,发现Tet2缺失显著降低小鼠脓毒症CLP模型的死亡率和临床评分,其原因主要是Tet2缺失使得髓系终末细胞的动员显著降低而避免了炎症因子风暴导致的组织器官损伤;另外还构建了血吸虫感染(慢性感染模型)诱导肥大细胞分化扩增的模型,发现Tet2缺失也能够抑制寄生虫感染诱导的肥大细胞的分化。说明Tet2在病原体感染诱导的髓系细胞分化中起着关键作用。为了进一步探究Tet2促进髓系发生的分子机制,对野生型和Tet2敲除的骨髓来源的肥大细胞进行了表达谱分析,发现PI3K-AKT和JAK-STAT信号通路的多个基因在Tet2缺失细胞中表达有显著变化,其中包括JAK-STAT信号通路的关键抑制分子Socs3。进一步检测发现Tet2敲除的造血祖/干细胞和肥大细胞中IL-3诱导的Socs3mRNA和蛋白水平显著增高,并且Tet2敲除细胞中,IL-3信号通路活化障碍,STAT5和AKT的磷酸化水平降低。而在Tet2敲除的细胞中通过siRNA沉默Socs3的表达后,IL-3信号通路活化水平有所恢复。这些结果提示Tet2通过抑制Socs3的表达,从而促进IL-3等细胞因子信号通路的活化,这可能是Tet2促进病原体感染诱导髓系免疫细胞发生的关键机制。
  第二部分 Tet2通过Adar1在转录后水平抑制Socs3的表达
  进一步研究Tet2抑制Socs3表达的分子机制,发现Tet2抑制Socs3的表达并不是通过调控Socs3基因区的DNA甲基化水平,而是在转录后水平。这一结果提示了Tet2作为一种RNA结合蛋白可能具有广泛的转录后调控功能。通过构建紫外交联免疫共沉淀结合高通量测序体系,在全基因组范围内寻找Tet2结合的靶RNA分子。结果发现Tet2结合的RNA种类中,80%属于已知基因转录的mRNA,其中包括Socs3的3'-UTR区域。同时在RNA-seq数据中,发现野生型对照组中A-to-G突变的数目显著高于Tet2敲除组,且更多富集于mRNA的3'-UTR区。Socs3mRNA的3'-UTR区域也包含A-to-G突变位点。Adar1结合双链RNA并介导A-to-I编辑,提示Adar1可能参与这些位点的编辑。在野生型细胞中干扰Adar1后Socs3表达上升,但报告基因结果显示Adar1对Socs3的调控不依赖其酶催化活性。有文献报道Adar1能够其他RNA结合蛋白在转录后水平调控基因表达,而不依赖其RNA编辑功能。通过免疫共沉淀联合质谱检测发现,Adar1能够与调控mRNA稳定性的RNA结合蛋白结合,可能通过这些蛋白发挥抑制Socs3的功能。通过进一步探究Tet2在Adar1介导的Socs3抑制功能中的作用,发现在Tet2敲除细胞中干扰Adar1不能升高Socs3的表达,结合过表达实验发现,Tet2以酶活性依赖的方式促进Adar1对Socs3表达的抑制作用,而同时又不依赖于其DNA结合功能。
  第三部分 Tet2通过抑制mRNA中5-mC的水平而参与Socs3的转录后抑制
  Tet2能将DNA上的5-mC催化氧化成为5-hmC,同时,RNA上的5-mC修饰也被发现存在果蝇和人类细胞系中。为了研究Tet2能否通过氧化的方式降低mRNA中5-mC,构建了Tet2体外催化体系,通过质谱和点杂交检测发现Tet2能够在体外和体内以底物依赖的方式降低mRNA上的甲基化修饰水平,并且在Tet2敲除细胞中,发现mRNA上的5-mC修饰水平升高。而野生型细胞中胞嘧啶上的其他甲基化氧化修饰5-hmC、5-fC和5-caC的含量则很低。通过建立RNA甲基化组分析,发现在mRNA上存在5-mC修饰,且在Tet2敲除细胞中5-mC水平显著升高。以上结果说明Tet2能够以氧化依赖的方式抑制mRNA上5-mC的水平。进一步实验发现5-mC的存在能够抑制Adar1与其靶RNA的结合。DNA或者RNA的修饰能够招募特异性蛋白发挥表观调控功能,通过RNA5-mC结合蛋白实验分析,发现5-mC能够结合一些ATP依赖的RNA解旋酶,这些蛋白跟RNA二级结构的改变和双链解旋有关,而Adar1结合双链RNA。以上结果说明mRNA上的5-mC修饰能够抑制Adar1功能,可能是通过抑制双链RNA的形成使Adar1结合减少的原因。
  综上所述,Tet2能够通过氧化依赖的方式降低mRNA上5-mC修饰的水平,Tet2的缺失使mRNA上5-mC修饰的水平升高,从而抑制Adar1的功能。发现Tet2可能通过抑制5-mC水平促进双链RNA的形成,而双链RNA是Adar1结合所必需的。结合野生型和Tet2敲除细胞中转录组突变位点的对比分析,也揭示了Tet2和Adar1功能上的广泛联系。此外,还发现,内源性mRNA上5-hmC的数量远远少于5-mC,说明从5-hmC如何转换为未甲基化的胞嘧啶需要其他的酶或者更多催化步骤。Tet2在转录后水平降低JAK-STAT信号通路的关键负调控分子Socs3的mRNA的稳定性,维持了细胞因子如IL-3信号通路的持续活化,促进了病原体感染诱导的髓系天然免疫细胞的分化,为抗感染免疫的表观调控提供了新的机制。
[硕士论文] 于婷
统计学 黑龙江大学 2018(学位年度)
摘要:广义主成分分析(Generalized principal component analysis,GPCA)是以主成分分析(Principal component analysis,PCA)为基础发展起来的,其思想与主成分分析相同,是用较少的指标代替多的指标来反映原来指标的信息.例如,有n个样品,每个样品测得p个指标,共有np个数据.由于指标之间往往互有影响,从p个指标中找出几个综合指标并对其进行分析,这样就可以使用小于p个指标去计算,却能得到p个指标计算出来的结果.
  从海量的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)中,挑选出与疾病或某些临床、环境因素有关的位点,仍是全基因组关联分析中(Genomewide association study,GWAS)的一个重要的课题,本文针对表型-SNP构成的二维列联表结构,提出了一个GPCA模型,该模型是同时对所有SNPs建立的.具体就是对该模型的矩阵作奇异值分解(Singular value decomposition,SVD),来达到减少模型中参数的个数,因此该模型也可称Logistic SVD模型,另外,本文通过刻画SNP基因型在不同表型下的分布差异,构建了一个SNPs筛选准则.模拟研究显示,本文基于Logistic SVD模型和重新构建的SNPs筛选准则都优于现有的方法.
[硕士论文] 王美达
统计学 黑龙江大学 2018(学位年度)
摘要:新一代基因测序技术不仅为人类基因组结构变异的检测提供了新方法,也为我们提供了大量的罕见变异遗传数据,如何通过已有数据检验出罕见变异与人类复杂疾病的关联性引起了人们越来越多的关注.在医学领域,许多人的健康状况和疾病状况都用有序响应变量来衡量,即用每个性状的取值来描述疾病的发展阶段或严重程度.然而,当前大多数检验罕见变异与复杂疾病关联性的方法都是处理两值性状和连续型性状的,有序性状的关联分析方法相对较少,而把有序性状当作两值性状或连续型性状来考虑必然会损失原始数据中一些有价值的信息.因此,在本文中,我们扩展了ADA方法,提出了一种专门用来检验罕见变异和有序性状关联性的方法,简称OR-ADA方法.在我们的方法中,对于有序响应变量建立了累积Logistic回归模型,利用Newton-Raphson迭代对关联系数进行估计,并通过对参数的似然比检验进行关联分析的研究.通过大量的模拟研究和与其他方法的比较,结果显示我们提出的方法对于因果变异方向的影响是稳健的,并且在很多情况下有更高的功效.
[硕士论文] 胡静
公共卫生 东南大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景与目的:随着我国经济的快速发展,人民的日常行为和生活方式发生了巨大的改变,慢性病已成为严重影响我国社会居民生活质量甚至危害生命健康的重要因素,人们不良的生活方式与慢性病的发生发展紧密相关。本研究拟通过抽样调查来了解宜兴市成人重点慢性病患病现状及相关危险因素,全面、科学、客观地掌握我市高血压、冠心病、脑卒中、糖尿病、恶性肿瘤等重点慢性病的患病率,分析我市慢性病主要危险因素分布特点。
  研究方法:采用分层整群抽样,覆盖宜兴市18个乡镇(街道),按人口容量比例来确定调查人数,随机抽取村(居)委进行调查,调查对象为本辖区居住6个月及以上的18周岁及以上居民。现场采用问卷调查的方式,由培训合格的调查员使用统一的调查问卷上门入户进行面对面调查,并开展相应的体格检查。采用Epidata3.1软件对调查问卷进行双人双机的录入,并进行一致性检验,使用SPSS18.0软件对数据库进行整理分析。分析的方法主要包括统计描述,t检验,x2检验,多因素Logistic回归分析等,以P<0.05来判断差异有统计学意义。
  研究结果:1、2015年宜兴市18周岁及以上人群慢性病患病率排前列的分别是高血压、糖尿病、慢性胃肠炎、冠心病、胆结石、高脂血症、脑卒中、恶性肿瘤,患病率依次为18.65%、4.65%、2.41%、2.07%、1.41%、1.35%、1.14%、0.99%。
  2、大部分慢性病的发生都是多因素共同作用的结果。高血压发生的危险因素为年龄、BMI、腰围、饮酒、随机血糖,OR值分别为1.452、1.793、1.538、1.407和1.809,且95%的可信区间均不包含1。糖尿病发生的危险因素为年龄、BMI、血压,OR值分别为1.229(95%CI为1.162~1.301),1.346(95%CI为1.093~1.658),1.363(95%CI为1.024~1.813)。年龄,腰围及血压是冠心病发生的危险因素,OR值分别为1.344(95%CI为1.233~1.465),1.583(95%CI为1.063~2.358)和1.666(95%CI为1.119~2.481)。男性、年龄、随机血糖、血压是脑卒中发生的危险因素,OR值分别为2.051(95%CI为1.172~3.59),1.446(95%CI为1.288~1.622),2.875(95%CI为1.542~5.361),1.971(95%CI为1.162~3.345)。随机血糖是恶性肿瘤发生的危险因素,OR值分别为2.176(95%CI为1.001~4.73)。
  3、本市18周岁及以上人群总吸烟率为25.07,男性吸烟率为48.92%,女性吸烟率为1.05%。总饮酒率为18.87%,男性饮酒率为48.92%,女性饮酒率为2.53%。经常参加体育锻炼(≥3次/周)率为29.65%。高血压诊断标准的知晓率为63.75%,糖尿病“三多一少”症状的知晓率为59.05%。
  研究结论:1、本市慢性病的患病率排在前列的是高血压和糖尿病,这已成为影响我市居民健康的重要因素,政府及有关卫生部门应从多方面加强防控措施,降低高血压、糖尿病等主要慢性病的患病率。2、针对慢性病共同的一些危险因素,如BMI、腰围、饮酒等开展针对性的干预措施,平时注重居民自身血压血糖值的测量,提高血压血糖值的知晓率,减低或控制全人群内危险因素的水平,有效预防和控制慢性病,提高居民生活质量。
[博士论文] 谭磊
机械设计及理论 山东大学 2017(学位年度)
摘要:由于介入治疗具有创伤小、简便、安全、有效、并发症少和明显缩短住院时间等特点,受到广大患者的青睐得以在短时间内快速发展。随着介入治疗学的兴起与快速发展,对经皮穿刺技术的要求也越来越高。与手术提取体内疑似组织相比,经皮穿刺活检技术具有创伤小、恢复快和感染率低等优点,是目前提取癌症疑似组织并进行的细胞学诊断的主要方式。然而在活检取样过程中由于针尖受到不均匀的作用力而产生弯曲变形,同时在穿刺过程中器官组织受力发生变形、移动或者转动导致病灶区域偏离穿刺路径。诸多因素导致了取样过程中取样精度不高、取样性能不稳定等问题,进而导致误诊的例子时有发生。振动辅助穿刺技术通过在活检针穿刺过程辅助轴向振动可减小穿刺力、减小针尖弯曲变形、增加取样量、提高取样精度等,是一种极具潜力的活检穿刺技术。本文研究了振动辅助穿刺过程中穿刺针与软组织交互作用机理,研究了不同速度和不同振动类型对穿刺过程中针受力、软组织断裂性能和穿刺取样性能的影响,优化了取样工艺参数。
  针对振动辅助切削软组织进行理论研究,深入研究振动辅助穿刺过程中针与软组织间交互作用机理,对针与组织之间运动学和力学进行分析并建立相关模型。对穿刺过程中活检针进行运动学分析,推导出无振动辅助和有振动辅助穿刺过程中针尖速度、针尖位移随时间变化的公式,分析了振动辅助穿刺过程中产生回退再切割的条件。理论分析表明,当振动速度大于进给速度时,活检针切割软组织存在回退再切割过程;当振动速度小于进给速度时,不存在回退再切割过程。通过迭代法求得活检针回退再切割时针尖速度。将活检针穿刺取样过程简化为三个阶段,对每一个阶段活检针受力进行分析并建立力学模型。将活检针穿刺第二阶段针切割软组织阶段分成空心针穿刺与实心针穿刺两种情况,分别进行分析并建立力学模型。针对空心针穿刺软组织情况,结合金属切削机理,推导出针尖速度与活检针受力关系式。理论分析表明,针尖速度增加导致针尖组织变形速率增加进而使活检针受力增加。基于LuGre摩擦模型分析了软组织与活检针之间摩擦力情况。理论分析结果表明,无振动辅助穿刺时摩擦力随相互运动速度增加而增加,振动辅助穿刺条件下摩擦力随穿刺速度和振动参数之间关系而变化。振动辅助穿刺条件下,对于给定的进给速度v1,当|v1|<ωA时,增加振动频率或者增大振动振幅可以降低摩擦力;当|v1|>ωA时,增加振动频率或者增大振动振幅会增加库伦摩擦,进而增加摩擦力。分析了振动辅助活检穿刺对软组织断裂性能影响。推导出基于能量法计算振动辅助刀具切割软组织断裂韧性公式。结合冲击载荷和波对裂纹的影响,分析了振动辅助穿刺对软组织裂纹处应力强度因子的影响。理论分析表明,当振动辅助活检穿刺的振动方式为纵振动时,软组织裂纹处应力强度因子随振动频率的增加先增大后减小。
  以明胶假体和猪肝为试验对象,研究了不同穿刺速度对穿刺过程中穿刺阻力和穿刺摩擦力的影响。试验结果表明,当空心针刺入软组织和明胶假体的穿刺速度增加时,穿刺力增大。穿刺过程中摩擦力与相对运动速度呈幂函数关系,摩擦力随穿刺速度增加而增大。通过单元刀具切割明胶假体研究了穿刺速度对软组织动态断裂韧性的影响。试验结果表明,软组织的动态断裂韧性随切割速度的增加而增加,当切割速度较小时断裂韧性增加速度较快,当切割速度较大时断裂韧性的增加速度较慢。通过不同速度下空心活检针穿刺猪肝并对穿刺孔进行分析,研究了穿刺速度对取样性能的影响。试验结果表明,穿刺速度增加,穿刺孔面积先减小后增大。穿刺速度对区域圆度影响不十分明显。
  搭建了的振动辅助穿刺取样装置并对其性能进行了测试,经过测试发现当输入电压相同时,振动辅助取样装置的振幅随频率增加而降低。当振动频率相同时,振幅随输入电压增加而增大。在确定普通振动参数的同时基于仿生学原理提取了仿生振动参数。通过振动辅助穿刺明胶假体分别研究了普通振动和仿生振动对最大穿刺力及摩擦力的影响。试验结果表明,普通振动辅助穿刺条件下,振幅相同时,最大穿刺力随振动频率的增加而增大。仿生振动条件下,最大穿刺力随明胶假体厚度增加而增加;不同穿刺速度条件下,仿生振动对最大穿刺力的影响规律不同。仿生振动对穿刺摩擦力的影响规律与理论分析结果一致。通过不同普通振动条件下单元刀具切割明胶研究振动频率对动态断裂韧性影响。试验结果表明,当振动振幅不变,振动频率增加时,动态断裂韧性变化不明显。使用不同频率振动辅助穿刺猪肝研究振动频率对取样特性的影响,试验结果表明,当振动频率增加时,动态强度因子先增大后减小,因此穿刺孔面积和裂纹长度先增大后减小。研究了振动辅助穿刺明胶时,不同振动频率对针尖弯曲变形量的影响。研究表明,当振动频率增加时,针尖弯曲变形量随振动频率的增加而减小,因此振动辅助穿刺有利于提高取样精度。
  搭建了超声振动取样平台并检测了超声振动取样装置性能,超声振动系统输入电压越高,超声振动系统功率越大,振动振幅越大。通过研究超声振动辅助穿刺皮肤过程,基于断裂力学建立力学模型并探讨了振动振幅对穿刺力及试样性能的影响。试验结果表明,当超声振动频率不变,振幅增加时,最大穿刺力和摩擦力分别降低;材料动态断裂韧性减小;裂纹长度增加。超声振动振幅对剪切力和扩展力的合力影响较小。以明胶假体和猪肝为实验对象,研究了超声振动辅助穿刺对最大穿刺力和取样性能的影响。试验结果表明,相同电压条件下,随着振动频率的增加,超声振动振幅减小,最大穿刺力增加。相同电压条件下,超声振动辅助穿刺的穿刺孔面积随频率的增加有降低的趋势,穿刺孔区域圆度随频率增加而增加。
  通过设计正交试验并用极差分析法和方差分析法分析穿刺试验结果,研究了穿刺速度,振动频率,针直径和针尖曲面数对最大穿刺力、摩擦力和穿刺孔面积的影响规律,得到了实现各单一指标最优的参数组合,确定了各试验因素对各指标影响的显著程度。通过验证试验,验证了最优参数组合的正确性,达到了参数优化的目的。
[博士论文] 刘梦佳
儿内科 解放军总医院;军医进修学院;中国人民解放军总医院;解放军医学院 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  泛素蛋白连接酶在各种重要的生理病理过程中都发挥着重要的作用,NEDL1(NEDD4-like ubiquitin protein ligase-1)作为一种泛素蛋白连接酶目前相关的研究还很不充足。已有的研究发现它特异性表达于神经系统,它还可以通过其下游靶点对细胞凋亡、肿瘤发生以及目标蛋白的泛素化降解产生影响。这些研究多为体外实验,因此我们将建立NEDL1基因敲除小鼠(NEDL1-/-)模型,并且对其表现型进行在体研究,为发现NEDL1的功能以及可能的作用机制提供依据。
  研究方法:
  1.使用Cre/LoxP系统建立NEDL1-/-模型,之后通过PCR技术以及western blot技术验证目标基因片段是否被成功敲除并且是否伴随蛋白表达量的降低。
  2.通过免疫荧光染色以及免疫组化等方法,对神经系统细胞进行染色,观察NEDL1对神经系统内各种细胞发育的影响。
  3.通过Barnes迷宫、三箱实验、高架十字以及self-grooming等实验,观察不同基因型小鼠的行为学表现差异(包括学习能力、社会交往能力、焦虑行为、重复刻板行为等)。
  4.通过膜片钳对不同基因型小鼠的脑片进行长时程增强(long term potentiation,LTP)、微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSCs)以及微小抑制性突出后电流(miniaure inhibitory postsynaptic current,mIPSCs)等指标的检测,观察NEDL1敲除后对小鼠脑组织内神经细胞兴奋性以及突触可塑性的影响。
  5.通过LC-MS/MS方法对小鼠血液样本进行氨基酸肉碱代谢谱的检测,观察NEDL1基因和上述代谢产物之间的关系,以便对NEDL1作用于何种代谢产物以及通过什么作用机制发挥作用进行研究。
  6.通过高通量RNA测序的方法对小鼠脑组织样本进行转录组研究,观察NEDL1基因可能的作用靶点以及可以通过什么样的机制发挥作用。
  研究结果:
  1.成功构建NEDL1-/-小鼠,靶基因片段成功敲除并且伴随目标蛋白表达量的降低。
  2.NEDL1-/-小鼠和野生型(NEDL1+/+)小鼠相比,其成年之前的胶质细胞数量明显增加。
  3.在行为学方面,NEDL1-/-小鼠与NEDL1+/+小鼠相比具有明显的刻板行为。
  4.在电生理学特点方面,NEDL1-/-小鼠和NEDL1+/+小鼠相比,mEPSC、mIPSC以及LTP等指标没有显著差异。
  5.在氨基酸肉碱代谢谱方面,NEDL1-/-小鼠和NEDL1+/+小鼠相比具有明显的代谢谱差异,相关的差异功能主要是氨基酸代谢、利用以及蛋白质合成等。
  6.在转录组方面,NEDL1-/-小鼠和NEDL1+/+小鼠相比具有明显的差异,主要的差异功能为肿瘤形成、神经系统兴奋性以及脑发育等。
  研究结论:
  我们成功构建了NEDL1-/-小鼠,它具有在成年之前胶质细胞数量减少、刻板行为明显等表现,代谢组以及转录组研究发现NEDL1功能可能和氨基酸、蛋白质合成,肿瘤形成、神经系统兴奋性、脑发育等相关。
[硕士论文] 温腾飞
内科学 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  尿酸是嘌呤碱在人体内代谢所产生的产物。一般情况下,人体内的尿酸合成和代谢处于平衡状态,当尿酸合成增加或代谢减少时,可导致高尿酸血症。随着人们生活方式的改变,高尿酸血症的发病率呈逐年上升趋势。研究表明,尿酸水平升高与多种代谢紊乱如痛风、心血管疾病、肾脏疾病及代谢综合症等密切相关。高尿酸血症常与糖代谢异常尤其是胰岛素抵抗并存,参与糖尿病和心脑血管疾病的病理过程,最终诱发各种并发症,严重影响患者的生活质量。已有研究表明高尿酸血症与胰岛素抵抗密切相关,尿酸值升高是糖尿病及胰岛素抵抗的一个良好的预测指标。脂肪组织是脂肪储存组织,在糖脂代谢中扮演着至关重要的角色。同时,脂肪组织也是一个内分泌器官,可分泌多种脂肪因子。脂肪细胞在胰岛素抵抗的发生发展中担任着重要的作用。脂肪细胞的功能障碍会导致氧化损伤,增加游离脂肪酸的释放,最终导致胰岛素抵抗和糖尿病的发生。我们的前期研究发现高尿酸可通过增加ROS水平,抑制肝细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞的胰岛素信号通路IRS1-AKT途径,引起胰岛素抵抗。然而,高尿酸对脂肪细胞的糖脂代谢、氧化应激、脂肪因子及细胞分化等的影响以及分子机制尚不清楚。我们需要通过不同的实验方法进一步研究高尿酸影响脂肪细胞的病理生理学机制。
  目的:
  分析高尿酸处理后小鼠脂肪细胞3T3-L1数字基因表达谱的变化,全面研究高尿酸对脂肪细胞糖脂代谢等相关方面的影响;进一步研究高尿酸在脂肪细胞胰岛素抵抗产生中的作用及分子机制。
  方法:
  ⑴用含10%小牛血清的高糖DMEM培养基培养小鼠脂肪细胞3T3-L1,培养至细胞密度达100%后融合两天,更换含1μmol/L地塞米松、0.5mmol/L IBMX、10μg/ml胰岛素、10%胎牛血清的高糖 DMEM培养基诱导分化2天,再换为含10μg/ml胰岛素、10%胎牛血清的高糖 DMEM培养基诱导分化2天,最后换为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基诱导分化4天。显微镜下观察到超过90%的细胞含脂滴,则诱导成功。⑵用15mg/dL的尿酸作用于小鼠脂肪细胞3T3-L124h,次日使用TRIzol法提取RNA,送至北京诺禾致源科技股份有限公司进行数字基因表达谱(DGE)分析。方法如下:使用琼脂糖凝胶电泳分析样品RNA完整性及是否存在DNA污染;使用NanoPhotometer spectrophotometer检测 RNA纯度(OD260/280及 OD260/230比值);使用 Qubit2.0 Fluorometer进行RNA浓度精确定量;使用Agilent2100 bioanalyzer精确检测RNA完整性。使用Illumina测序检测差异基因。采用 clusterProfiler软件对差异基因集进行GO功能富集分析,KEGG通路富集分析,Reactome通路富集分析。⑶小鼠脂肪细胞3T3-L1经10mmol/L NAC过夜处理,12mg/dL的尿酸溶液处理30分钟后,换为含10μmol/L DCFH-DA的无血清DMEM培养基,37℃细胞培养箱内孵育5分钟, PBS液洗涤后,使用倒置荧光显微镜观察细胞的荧光强度;或者使用流式细胞仪进行检测。⑷小鼠脂肪细胞3T3-L1经含10mmol/L NAC的无血清低糖DMEM过夜处理。12mg/dL尿酸作用30min,改为含荧光标记葡萄糖100μmol/L2-NBDG、12mg/dL尿酸和1μmol/L胰岛素的PBS溶液培养45min,使用倒置荧光显微镜观察细胞;或者使用流式细胞仪进行检测。⑸用不同浓度、不同作用时间的尿酸,作用小鼠脂肪细胞3T3-L1,使用蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测尿酸处理后小鼠脂肪细胞3T3-L1胰岛素信号通路蛋白AKT(S473)的磷酸化水平,确定尿酸的最佳作用浓度及时间。⑹小鼠脂肪细胞3T3-L1经10mmol/L NAC的无血清高糖DMEM过夜处理,12mg/dL尿酸处理30min,胰岛素100nmol/L处理5min,提取蛋白后使用蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测IRS1(S307)、AKT(S473)磷酸化水平。⑺小鼠脂肪细胞3T3-L1经15mg/dL的尿酸处理24h,次日,收集对照组和实验组的细胞培养液,使用脂联素Elisa试剂盒检测培养液中的脂联素浓度。
  结果:
  ①通过DGE分析,高尿酸引起小鼠脂肪细胞3T3-L1表达差异性显著基因共187个,其中上调差异基因90个,下调差异基因97个。②通过差异基因GO分析,差异基因富集主要集中在转录调控、脂质代谢、染色质重构、脂肪细胞分化等过程;差异基因KEGG分析,差异基因富集主要参与糖酵解/糖异生、PPAR信号途径、溶酶体、过氧化物酶体、磷酸肌醇代谢、二羧酸代谢、氨基酸生物合成、多糖降解等途径;差异基因Reactome分析,差异基因富集主要参与细胞质IP3和IP4的合成、鞘糖脂代谢、FGFR的下游信号激活、PI3K途径、PIP3-AKT途径等。③与糖脂代谢相关的差异基因43个,包括28个上调和15个下调。与活性氧信号转导途径相关的差异基因9个,包括8个上调和1个下调。与胰岛素信号通路相关的差异基因7个,包括2个上调和5个下调。与脂肪细胞分化相关的差异基因7个,包括5个上调和2个下调。④高尿酸诱导小鼠脂肪细胞3T3-L1 ROS水平升高,抗氧化剂 NAC抑制高尿酸诱导的ROS水平升高。⑤高尿酸抑制小鼠脂肪细胞3T3-L1胰岛素刺激的2-NBDG摄取,抗氧化剂NAC改善小鼠脂肪细胞3T3-L1的2-NBDG摄取。⑥高尿酸升高 IRS1(S307)磷酸化水平,降低 AKT(S473)磷酸化水平。使用抗氧化剂NAC可恢复高尿酸升高的 IRS1(S307)磷酸化水平和抑制的 AKT(S473)的磷酸化水平。
  结论:
  高尿酸影响小鼠脂肪细胞3T3-L1糖脂代谢、活性氧信号转导途径、胰岛素信号通路和脂肪细胞分化等基因表达;高尿酸增加ROS水平、抑制IRS-1/AKT信号通路、诱导小鼠脂肪细胞3T3-L1胰岛素抵抗。
[硕士论文] 张明衬
儿科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:①分析21-羟化酶缺乏症(21-OHD)患儿的临床特征及相关生化检查,提高对该病的认识和诊断能力。②分析山西省21-羟化酶缺乏症(21-OHD)患儿的热点突变。③研究山西省21-OHD患儿的基因测序结果,探讨基因型和临床表型的相关关系,为产前诊断和遗传咨询提供遗传学依据。
  方法:⑴回顾性分析2014年10月-2016年10月山西省儿童医院收治的15例山西籍21-OHD患儿的临床资料,总结其临床特点及相关实验室检查。⑵采用Sanger测序法等分子生物学技术对上述21-OHD患儿进行CYP21A2基因突变分析。⑶分析CYP21A2基因检测结果,与其临床表型进行比较,分析基因型与临床表型的相关性。
  结果:①21-OHD患儿临床特征及生化指标:本组15例患儿,均为经典型患者,其中失盐型(SW)8例,单纯男性化型(SV)7例。7例以肾上腺危象就诊,2岁以上的男性患儿多以假性性早熟、男性化体征就诊。女孩患儿均出现假两性畸形。3例SV患儿出现真性性早熟,卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)升高明显。17-OHP、ACTH均出现不同程度的升高;大多数患儿钠离子降低;钾离子升高、正常甚至降低。②CYP21A2基因检测结果:15例患儿共检测出7种突变,包括IVS2-13A/C>G、I172N、R356W、E3Δ8bp、c.1064G>A、c.141C>A、c.121C>T。最常见的突变为IVS2-13A/C>G(40%),其余常见突变依次为R356W(16.7%)、I172N(16.7%)及E3Δ8bp(6.7%)。SWCAH最常见的突变为IVS2-13A/C>G和R356W,其等位基因频率分别达50%和18.8%。SVCAH患者最常见的突变为I172N,其等位基因频率为35.7%。③基因型与临床表型相关性:基因型与临床表型的整体相关性较高,SW、SV中基因型与临床表型的阳性预测值分别为87.5%、100%。
  结论:⑴21-OHD经典型最常见。失盐型常以呕吐、拒食、体重不增或下降、电解质紊乱就诊,严重者出现生命危险;单纯男性化型,女性患儿常表现为假两性畸形;男性患儿常以性早熟、男性化体征就诊,若未及时明确诊断,会发展成真性性早熟。生化指标17-OHP、ACTH升高,结合临床表现可作出诊断。⑵检测出的IVS2-13A/C>G、R356W、I172N为常见突变,山西省热点突变为IVS2-13A/C>G。⑶基因型与临床表型尤其是经典型患者,具有明显相关性,失盐型与单纯男性化型基因型与临床表型的相关率分别为87.5%和100%。
[硕士论文] 张永林
神经病学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:了解中青年阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者认知损害的特点,为及早发现中青年OSAHS患者存在的认知损害和早期干预提供依据。
  方法:选取就诊于山西医科大学第一医院睡眠室行多导睡眠监测的中青年OSAHS患者65例,年龄50岁以下,呼吸暂停低通气指数(Apnea-hypopnea index,AHI≥5次/h),于山西医科大学第一医院选取同年龄、同性别、同文化程度的正常体检者65例作为对照组;记录两组一般情况(年龄、性别、文化程度),入选病例行蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)、临床记忆量表评分,比较两组在MoCA量表、临床记忆量表评分之间的差异。
  结果:⑴OSAHS组与对照组患者在年龄、性别、文化程度方面无统计学差异(P>0.05);⑵OSAHS组患者语言功能较对照组差(P<0.05),两组在视空间及执行功能、命名、注意、抽象、延迟回忆、定向力、MoCA量表总分之间无统计学差异(P>0.05);⑶OSAHS组患者联想学习、无意义图形再认、人像特点联系回忆、记忆商均低于对照组(P<0.05或P<0.01),两组指向记忆、图像自由回忆之间差异无统计学意义(P>0.05)。
  结论:①语言、短时记忆功能损害为中青年OSAHS患者认知损害的早期表现;②临床记忆量表在记忆功能评价方面较全面、敏感性强,是临床记忆评估较为重要的神经心理量表。
[硕士论文] 杨雪艳
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨腹膜透析(PD)患者血清钠浓度与蛋白-能量消耗(PEW)的关系,为临床干预提供理论依据。
  方法:选择2015年6月-2016年12月于山西医科大学第一附属医院肾内科行PD患者共108例,符合入选标准88例。获取患者的基本情况包括[基础原发病因、性别、年龄、体重、身高、体重指数(BMI)、血压水平、透析龄],采用标准的技术检测患者的各项身体指标包括[上臂围(AC)、肱三头肌皮褶厚度(TSF)和上臂肌围(AMC)]等,检测生化指标包括[血清白蛋白(ALB)、血清前白蛋白(PLB)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(MCV)、血转铁蛋白(TF)、血总胆固醇(TC)、血甘油三酯(TG)、血肌酐(SCr)血超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血清钾离子(K)、血钙(Ca)、血钠(Na)]等,及采取主观的综合性评估法(SGA)评测患者的营养状况。根据ISRMN的诊断标准并计算患者的PEW患病率,根据入组患者血钠浓度的均值分为A组(血Na<137mmol/L)和B组(血Na≧137mmol/L),应用统计学方法分别比较两组上述指标及PEW的患病率的差异,并用pearson法分析PD患者PEW的一些指标与血钠浓度的相关性。
  结果:⑴男性48例,女性40例,年龄20~78岁,平均(49.6±13.93)岁,透析时间3~64月,平均透析龄(16.25±13.57)月,糖尿病患者24例,占(27.3%);⑵我院PEW患病率为39.7%;⑶两组的性别、年龄、BMI、透析龄、血压、TSF、PLB、Hb、MCV、TF、TC、TG、SCr、K、Ca、、hs-CRP差异均无统计学意义(P>0.05);⑷与B组相比,A组上臂围、上臂肌围、血清白蛋白水平偏低,SGA评分偏高,差异有统计学意义(P<0.01);⑸PD患者血钠浓度与上臂围、上臂肌围、血清白蛋白呈正相关(P<0.01),与SGA呈负相关(P<0.01)。
  结论:PD患者PEW发生率较高,且PEW的相关指标与血清钠浓度具有一定的相关性,提示预防PD患者的低钠水平,可在一定程度上减少PEW的发生,改善患者预后,延长生命。
[硕士论文] 张飞
耳鼻咽喉头颈外科 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过观察鼻息肉组织内的炎性细胞的浸润特点,分析以中性粒细胞的浸润为主的鼻息肉患者的临床特点,及 IL-17、IL-8在其组织中的表达,从而为鼻息肉的临床分类和治疗策略提供依据。
  方法:收集我科行鼻内镜手术的患者鼻息肉组织,时间为2016年3月至2016年10月。根据病理特点,经HE染色观察后,采用Wenzel SE等[1]以炎性细胞的百分比例>正常对照组的均数+2倍的标准差定义为该炎性细胞为主型的,区分出以中性粒细胞浸润为主的鼻息肉,并与嗜酸性粒细胞浸润为主的鼻息肉作比较,各收集40例,收集鼻中隔偏曲需要行矫正术的患者部分下鼻甲粘膜20例。常规检查鼻息肉患者的外周血中性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比,通过鼻息肉患者的术前鼻窦CT、模拟视觉量表(VAS)及鼻内镜下观察的临床数据,分析其临床特点,并通过免疫组化检查IL-17和IL-8在组织中的。
  结果:本实验中性粒细胞>4%(1.25%+2×1.37%=3.96)定义为中性粒细胞型鼻息肉;嗜酸性粒细胞大于8%(4.4%+2×1.7%=7.9%)定义为嗜酸性粒细胞型鼻息肉。中性粒细胞浸润为主的鼻息肉组患者与嗜酸性粒细胞型鼻息肉组患者相比较,在性别、年龄、中性粒细胞百分比无显著差别(p>0.05);NEUNP与 ENP患者流粘脓涕程度分别为6.35±1.20和5.69±1.31(p<0.05),存在显著的差异;而两组患者的VAS整体主观症状、鼻内镜下鼻息肉病变程度均无显著差别(p>0.05);NEUNP患者和EOSNP患者的鼻窦CT影像学整体得分分别为9.59±3.35和14.43±3.81(p<0.05),上颌窦评分分别为3.14±1.21和2.05±1.02(p<0.05),均有显著的差异,即NEUNP患者的整体病变较轻,但上颌窦病变较严重。IL-17、IL-8在NEUNP中的表达均明显高于在EOSNP、正常下鼻甲粘膜中的表达(p<0.05)。
  结论:性粒细胞型鼻息肉患者的分泌物为粘脓性分泌物,其主观症状的评分明显高于嗜酸性粒细胞鼻型的鼻息肉患者;中性粒细型鼻息肉患者上颌窦的病变程度同样明显高于嗜酸性粒细胞鼻息肉患者,整体上鼻窦的病变程度相对嗜酸性粒细胞型鼻息肉较轻。IL-17、IL-8在中性粒细型鼻息肉组织中的表达均高于嗜酸性粒细胞型鼻息肉和正常对照组,提示IL-17、IL-8趋化中性粒细胞作用于鼻息肉,对中性粒细胞型鼻息肉的发病机制发挥重要作用。因此,以中性粒细胞浸润为主的鼻息肉,有明显的临床和病理特点,为鼻息肉的发病机制提供了新的认识。
[博士论文] 夏龙飞
临床检验诊断学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:目的:抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)是一种非器官特异性自身免疫性疾病,血栓形成是其主要的病理基础和最突出的临床表现,也是APS首要的死因。研究表明,血清中高滴度的抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody,aPL)(尤其是抗β2GPI抗体)在APS血栓形成起着极其关键的作用,但是具体的机制仍不清楚。本课题组前期研究发现,抗β2GPI抗体/β2GPI复合物能够通过刺激核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)和激活蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)的活化,从而诱导单核细胞表达组织因子(tissuefactor,TF)和炎症因子,但目前还缺乏足够的体内实验阐述NF-κB和AP-1在aPL/抗β2GPI抗体诱发体内血栓形成中的作用。此外,近期有研究表明,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物(the mammaliantarget of rapamycin complex,mTORC)通路在APS血管壁内皮炎症激活导致血管损伤的过程中起着关键作用。因此,本论文旨在前期研究的基础上,分别利用实验性APS(EAPS)小鼠模型和单核细胞(THP-1和人外周血单核细胞)探讨NF-κB/AP-1和mTOR在抗β2GPI自身抗体诱导血栓形成中的作用及其调控的效应分子,为APS血栓形成的防治提供新思路。
  方法:
  (1)建立EAPS小鼠模型,BALB/c小鼠分别于0h和48 h腹腔注射抗β2GPI抗体(500μg/只)或APS病人来源的IgG(IgG-APS)(500μg/只),72h后用于实验。取小鼠腹腔巨噬细胞,超声裂解,收集细胞总蛋白,Western blotting方法检测NF-κB p65和c-Jun/AP-1的磷酸化情况,验证anti-β2GPI自身抗体是否能诱导NF-κB和AP-1的活化。
  (2)BALB/c小鼠先用NF-κB抑制剂PDTC(100mg/kg/day)或/和AP-1抑制剂姜黄素(curcumin,Cur)(50mg/kg/day)预处理2h,再进行腹腔注射抗β2GPI抗体(500μg/只),取小鼠腹腔巨噬细胞和胸主动脉,Western blotting方法检测NF-κB p65和c-Jun/AP-1的磷酸化情况,观察PDTC和姜黄素对抗β2GPI抗体诱导NF-κB和AP-1活化的影响。
  (3)取EAPS小鼠腹腔巨噬细胞、双侧颈动脉和胸主动脉,运用RT-qPCR和Western blotting方法分别检测TF、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA和蛋白的表达,Xa生成法检测TF活性,免疫荧光检测腹腔巨噬细胞内TF、IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白的表达,从而进一步分析NF-κB和AP-1活化对抗β2GPI抗体诱导小鼠TF和促炎细胞因子表达的影响。
  (4)采用抗β2GPI抗体(10μg/mL)/β2GPI(100μg/mL)或APS-IgG(250μg/mL)/β2GPI(100μg/mL)复合物处理THP-1细胞或人外周血单核细胞一段时间后,收集细胞总蛋白、RNA及上清液,运用RT-qPCR方法检测TF和IL-8的mRNA的表达,Xa生成法检测TF活性,ELISA方法检测IL-8的表达,Westernblotting方法检测mTOR磷酸化的情况,观察抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI诱导单核细胞表达TF和IL-8及mTOR活化的情况。
  (5)先采用mTOR抑制剂雷帕霉素(rapamycin,100nM)预处理THP-1细胞或人外周血单核细胞20h后,再用抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI复合物处理一段时间后,收集细胞总蛋白、RNA及上清液,运用RT-qPCR方法检测TF和IL-8的mRNA的表达,Xa生成法检测TF活性,ELISA方法检测IL-8的表达,Western blotting方法检测mTOR、p38、ERK1/2、JNK和NF-κB p65磷酸化的情况,观察雷帕霉素对抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI诱导单核细胞mTOR、p38、ERK1/2、JNK和NF-κB p65活化的影响。
  (6)THP-1细胞先采用p38抑制剂(SB203580,10μM)、ERK1/2抑制剂(U0126,5μM)、JNK1/2抑制剂(SP600125,90rnM)、NF-κB抑制剂(PDTC,20μM)和TLR4抑制剂(TAK-242,5μM)预处理2h后,再用抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI复合物处理一段时间后,收集细胞总蛋白,Western blotting方法检测mTOR磷酸化情况,观察它们对抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI复合物诱导THP-1细胞mTOR活化的影响。
  结果:
  (1)抗β2GPI抗体和IgG-APS均能显著增加小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB p65和c-Jun/AP-1的磷酸化水平,与对照组NR-IgG比较差异显著(p<0.05)。
  (2)PDTC和姜黄素能分别明显地减弱抗β2GPI抗体诱导小鼠NF-κBp65和c-Jun/AP-1的磷酸化水平(p<0.05),且二者没有共同的抑制效应。但发现姜黄素能明显降低抗β2GPI抗体诱导小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB p65磷酸化水平(p<0.05),对主动脉NF-κ B p65磷酸化水平也有微弱地抑制效应但没有统计学意义(p>0.05)。
  (3)PDTC或/和姜黄素均能显著抑制经由抗体β2GPI抗体诱导的小鼠颈动脉腹腔巨噬细胞TF活性的升高、胸主动脉TF、E-selectin、ICAM-1和VCAM-1 mRNA和蛋白的表达增加、腹腔巨噬细胞TF、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA和蛋白的表达增加(p<0.05),且PDTC显示最强的抑制效应,而二两者联合使用时没有协同效应。
  (4)抗β2GPI抗体/β2GPI和APS-IgG/β2GPI复合物均能显著增加THP-1细胞或人外周血单核细胞TF和IL-8的表达以及mTOR磷酸化水平(p<0.05),且对mTOR磷酸化的影响显示时间依赖性,于刺激45 min(THP-1细胞)和60 min(人外周血单核细胞)时磷酸化水平最强。
  (5)雷帕霉素预处理THP-1和人外周血单核细胞20 h后,抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI复合物诱导的TF和IL-8的表达以及mTOR、p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平均能被明显地抑制(p<0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(p>0.05)。
  (6)抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI复合物诱导THP-1细胞mTOR的活化能被p38抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂U0126或TLR4抑制剂TAK-24显著地抑制(p<0.05),而JNK抑制剂SP600125或NF-κB抑制剂PDTC无抑制效应(p>0.05)。
  结论:
  (1)在EAPS模型小鼠体内,NF-κB和c-Jun/AP-1参与介导抗β2GPI抗体诱导小鼠TF、粘附分子(E-selectin、ICAM-1和VCAM-1)和炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的表达,表明NF-κB和c-Jun/AP-1在aPL诱导的促血栓、促炎症状态中发挥着极其重要的作用。
  (2)体外研究发现,mTOR参与介导了抗β2GPI抗体/β2GPI或APS-IgG/β2GPI复合物诱导单核细胞TF和IL-8的表达,TLR4、p38和ERK1/2能够调节mTOR的活化,表明mTOR在APS的发病机制起到重要的作用。
  (3) NF-κB、c-Jun/AP-1或mTOR的抑制剂均能够降低抗β2GPI抗体诱导的促血栓和促炎症因子的表达,表明NF-κB、c-Jun/AP-1和mTOR可作为APS血栓形成防治的新靶点。
[硕士论文] 管宇
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:背景:胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein1,IGFBPrP1)是一种分泌性蛋白,具有细胞增殖、分化、衰老、凋亡及血管形成等多种生物学活性,广泛分布于各种正常组织中。转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGFβ1)是一种具有多功能和多向作用的非组织特异性胞因子,是目前公认导致组织器官纤维化病变的一种关键因子,尤其对肝、肾组织具有重要作用。
  目的:探索IGFBPrP1是否对SD大鼠和比格犬肾组织具有作用及部分作用机制。
  方法:①健康雄性SD大鼠60只,随机分为3组:A组(n=10):经尾静脉注射生理盐水;B组(n=25):经尾静脉注射腺病毒携带的增强型绿色荧光蛋白(Ad-EGFP)4×109 pfu/只;C组(n=25):经尾静脉注射腺病毒携带的IGFBPrP1(Ad-IGFBPrP1)4×109 pfu/只;各组分别于注射后1、2、4、6、9w留取肾组织,经10%中性福尔马林固定后待测。②健康雄性比格犬18只,随机分为3组:D组(n=6):正常饮食饲养;E组(n=6):皮下注射TAA12 mg/kg,每周2次;F组(n=6):皮下注射TAA12 mg/kg,每周2次,5w起协同注射IGFBPrP1抗体5μg/kg,每周1次;各组分别于12w末留取肾组织,经10%中性福尔马林固定后待测。HE染色和Sirius red染色观察SD大鼠和比格犬肾组织形态结构病理改变和胶原纤维沉积情况;免疫组织化学染色检测SD大鼠肾组织IGFBPrP1、白胞介素1β(IL-1β)、TGFβ1、纤维连接蛋白(FN)以及比格犬肾组织IGFBPrP1、IL-1β、FN的分布和表达情况。
  结果:⑴HE染色:A组和B组肾小球和肾小管结构完整;C组腺病毒转染后1w和2w出现肾小管上皮细胞肿胀,管腔扩张,伴炎症细胞浸润;4w管腔内出现透明管型,6w管腔内存在大量透明管型,9w肾间质内可见纤维增生,个别肾小球甚至出现萎缩坏死。⑵Sirius red染色:A组和B组均仅在肾小囊壁层可见少量红色胶原纤维;C组除肾小囊壁层外,肾小球、肾间质内红色胶原纤维沉积逐渐增多,9w时明显增多。与A组、B组和C组1、2、4、6w相比,C组9w胶原纤维含量明显升高(0.28±0.10),差异具有统计学意义(P<0.05)。⑶IGFBPrP1:A组和B组表达微弱;C组从1w开始,肾小球、肾小管上皮细胞胞浆阳性表达颗粒增多,转染2w后达高峰(4.55±0.78),4w后逐渐减弱,9w表达甚少。⑷IL-1β:A组和B组几乎无表达;C组1w肾小球、少量肾小管上皮细胞胞浆弱阳性表达,随转染时间延长,阳性表达的范围和程度均增加,6w时达到高峰(1.93±0.15),9w较6w表达明显减弱。⑸TGFβ1:A组和B组表达量极少;C组位于肾小球、肾小管上皮细胞胞浆的阳性染色颗粒自转染后1w开始增多,2w时明显增多,9w时达高峰(3.64±0.71)。⑹FN:A组和B组极少表达;C组1、2、4、6w肾小球、肾间质弱阳性表达,9w时阳性表达明显增强(0.60±0.07)。⑺IGFBPrP1:D组微量表达;E组在肾小管上皮细胞胞浆内阳性表达明显增强;F组较E组表达减弱。⑻IL-1β:D组几乎无表达;E组肾小球、肾小管上皮细胞及肾间质内棕褐色颗粒增多;F组呈浅棕色颗粒。⑼FN:D组微量表达;E组肾间质出现棕褐色染色颗粒;F组染色呈浅棕色。以上指标统计分析结果示:E组的IGFBPrP1、IL-1β、FN阳性表达均显著高于D组(0.90±0.12 vs3.99±0.59,P<0.01;0.24±0.02 vs1.28±0.13,P<0.05;0.60±0.07 vs0.88±0.10,P<0.01);F组的IGFBPrP1、IL-1β、FN表达低于E组(2.15±0.11 vs3.99±0.59,P<0.01;0.47±0.03 vs1.28±0.13,P<0.01;0.71±0.05 vs0.88±0.10,P<0.01),但仍高于D组(0.90±0.12 vs2.15±0.11,P<0.01;0.24±0.02 vs0.47±0.03,P<0.01;0.60±0.07 vs0.71±0.05,P<0.01)。以上差异均具有统计学意义。
  结论:①IGFBPrP1可导致SD大鼠和比格犬肾组织发生纤维化病变;②IGFBPrP1是一种类似于TGFβ1的具有非组织特异性的细胞因子。
[硕士论文] 张静茹
神经病学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:纤维蛋白原(FIB)是重要的凝血蛋白,在血脑屏障破坏后沉积于中枢神经系统,引起适应性免疫反应,诱导外周炎性细胞浸润并导致中枢神经系统脱髓鞘。探讨视神经脊髓炎(NMO)发病急性期患者血浆FIB水平并分析其与疾病首发年龄、疾病病程、复发次数、疾病的严重程度及受累脊髓节段等临床特点的相关性。
  方法:收集发病急性期NMO患者59例、复发缓解型多发性硬化(RRMS)患者56例、急性脊髓炎(AM)患者9例及19例良性发作性位置性眩晕(BPPV)患者为对照组的清晨空腹静脉血,分别测定血浆纤维蛋白原(FIB)、凝血酶原时间(PT),活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)水平,分析各指标水平与患者临床特点的相关性。
  结果:⑴NMO发病急性期,患者血浆FIB水平显著高于对照组(P﹤0.0001);⑵NMO发病急性期,患者血浆FIB水平显著高于RRMS组(P﹤0.0001),但与AM组相比无差异(P=0.444);⑶AM组血浆FIB水平与RRMS组相比差异具有统计学意义(P=0.001),与对照组相比(P=0.003);⑷RRMS组血浆FIB水平与对照组相比无显著性差异;⑸NMO组、RRMS组及AM组血浆PT水平与对照组相比差异具有统计学意义(P=0.029,P=0.001,P=0.032),三组间比较无统计学差异;⑹NMO组与RRMS组相比血浆APTT水平具有显著性差异(P=0.005),RRMS组血浆APTT水平高于AM组及对照组(P=0.007,P=0.018);⑺RRMS组血浆TT水平高于AM组及对照组(P=0.025,P=0.035);⑻采用EDSS评分量表评估疾病严重程度,NMO组急性期血浆FIB水平与EDSS分值显著相关(P﹤0.0001,r=0.561),与患者发病年龄呈正相关(P=0.008,r=0.340);⑼RRMS组FIB水平与EDSS分值显著相关(P=0.0024,r=0.302),与疾病病程正相关(P=0.013,r=0.329)。
  结论:NMO发病急性期血浆FIB水平升高并与疾病严重程度密切相关,血浆FIB水平越高,提示患者病情越重。
[硕士论文] 赵豆豆
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:代谢综合征(MS)的发病率逐年递增,与此同时甲状腺疾病也已成为国内外十分常见的内分泌疾病。MS以肥胖、胰岛素抵抗做为其典型特征,而肥胖是由遗传和环境等多方面因素相互作用造成脂肪堆积过多或者伴分布异常、重量增加的慢性代谢性疾病,肥胖与胰岛素抵抗之间更是有着千丝万缕的密切关系。近10年,关于甲状腺与肥胖的联系已经取得显著的成果,有越来越多的证据表明肥胖和癌症风险增加之间的联系,有流行病学数据支持,肥胖使与其独立相关的各种实性肿瘤的发病率增加,其中包括甲状腺肿瘤,但是肥胖与甲状腺肿瘤确切的机制还未明确阐述。炎症、氧化应激、胰岛素–IGF轴和脂肪因子(如瘦素、脂联素等)可能在肥胖与甲状腺良恶性结节的发生与发展过程中起举足轻重的作用。肥胖尤其中心性肥胖大大提高了心脑血管病、代谢性疾病及肿瘤(实性肿瘤为甚)的发病风险。体重指数(BMI)作为评价肥胖的常用指标,已证实与诸多疾病密切相关,近年多种研究表明,中心性肥胖与上述病变关系更为密切。评价中心性肥胖的指标有腰围(WC)、腰围身高比(WHtR),多篇文章报道,腰围身高比对判定中心性肥胖的评价效能较单纯腰围评判要高,原因可能在于腰围在评估中心性肥胖时或多或少受到个体不同身高的影响。
  目的:调查山西地区城市、农村人口血糖(空腹和OGTT-2小时血糖)、糖化血红蛋白(HbA1C)、BMI、WC、WHtR等指标是否有差异,差异是否有统计学意义。并分析血糖、HbA1C、BMI、WC、WHtR是否对甲状腺结节(结节大小、单发多发结节)、甲状腺体积有影响。为不同人群MS提供不同干预措施,探索甲状腺疾病的危险因素,并为其提供奏效的防范措施。
  方法:选取山西地区常住居民作为研究对象,总的样本量N=2658。调查对象入选标准:1.调查地区(指城市或者农业县)的户籍人口,且居住时间在五年以上;2.年龄满18周岁;3.除外妊娠期和哺乳期妇女。采用多阶段、分层、整群、随机抽样方法。现场调查人群中城市抽样1396人,农村抽样1262人。年龄构成分为6个年龄组:18-29岁,30-39岁,40-49岁,50-59岁,60-69岁,≥70岁。对调查对象采取现场登记,填写问卷调查表,对抽样对象行必要体格相关检查:身高、腰围、体重、并行甲状腺触诊,行甲状腺B超等项目。采集血液标本,现场进行离心、分装、编号,血液标本送至中心实验室检测,化验结果输入数据库,并对现场调查对象反馈结果,指导进一步检查和治疗。对实验数据进行整理、分析。
  结果:⑴农村空腹血糖异常检出率较城市空腹血糖异常检出率明显升高,差异有统计学意义(χ2=8.188 P=0.004);农村OGTT-2小时血糖异常检出率较城市OGTT-2小时血糖异常检出率明显升高,差异有统计学意义(χ2=24.342 P<0.001);但糖化血红蛋白农村和城市比较差异无统计学意义(P=0.899)。通过BMI值将研究对象分为正常、超重、肥胖三组,经卡方分析,差异无统计学意义(P=0.126)。根据腰围及腰围身高比评价中心性肥胖,农村腰围异常检出率较城市升高,差异有统计学意义(χ2=46.256 P<0.001),农村腰围身高比异常率较城市升高,差异有统计学意义(t=22.460 P<0.001)。⑵经logistic回归分析,腰围身高比是甲状腺体积的影响因素,腰围身高比越大,甲状腺体积越大。⑶经logistic回归分析,空腹血糖、OGTT-2小时血糖是影响有无多发结节的因素,即空腹血糖、OGTT-2小时血糖越高结节多发可能性越高。⑷经logistic回归分析,OGTT-2小时血糖是影响结节大小的因素,OGTT-2小时血糖越高,结节≥1cm的可能性越大。
  结论:①农村空腹血糖异常检出率较城市空腹血糖异常率明显升高;农村OGTT-2小时血糖异常检出率较城市OGTT-2小时血糖异常检出率明显升高;且农村中心性肥胖检出率较城市明显升高。②腰围身高比越大,甲状腺体积越大。③空腹血糖、OGTT-2小时血糖越高结节多发可能性越大。④OGTT-2小时血糖越高,结节≥1cm的可能性越大。
[硕士论文] 杨资鉴
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:⑴探究不同浓度的血管紧张素II(AngII)对心肌细胞中自噬相关蛋白表达和Akt及ERK信号通路的影响。⑵探究抑制自噬对AngII诱导心肌细胞肥大信号通路的影响。
  方法:①建立心肌细胞H9C2的细胞培养模型,置于5%CO2、37℃恒温细胞孵育箱进行培养。②通过Western Blot蛋白质印迹法来检测心肌细胞蛋白表达情况,使用Image Lab5.0和Image J11.0对条带进行灰度值分析。
  结果:与对照组(0nmoL/L)相比,AngII(100nmoL/L)干预心肌细胞1h,磷酸化的ERK(p-ERK)蛋白表达显著升高(P<0.001)、磷酸化的Akt(p-AKt)升高(P>0.05)。ERK、AKt蛋白表达未出现明显变化(P>0.05)。自噬抑制剂3MA(5mmoL/L)可以降低 AngII诱导的 p-Akt(P<0.001)和 p-ERK蛋白表达增加(P<0.05)。进一步研究结果表明,与对照组对比,AngII诱导自噬相关蛋白Beclin1表达增加,3MA抑制AngII诱导的Beclin1表达增加(P=0.005),有统计学意义;LC3表达稍有降低(P>0.05),无统计学意义。
  结论:AngII诱导心肌细胞自噬蛋白增加和Akt及ERK活性增加;自噬抑制剂3MA,抑制AngII诱导的Akt和ERK活性增加。研究提示抑制心肌细胞自噬可减轻心肌细胞肥大信号的激活,进而减轻心肌细胞肥大,抑制自噬有益于心肌肥厚的治疗。
[硕士论文] 张睿雅
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨功能性胃肠病(functional gastrointestinal disorders,FGIDs)患者粪便菌群和肠黏膜菌群的差异性以及二者与肠粘膜中紧密连接蛋白ZO-1的相关性。
  方法:通过结肠镜检查收集32例功能性胃肠病患者的降结肠黏膜组织以及肠道清洁前粪便标本,采用高通量测序及实时荧光定量 PCR技术检测粪便中以及肠黏膜中拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、放线菌门(Actinobacteria)、蓝藻门(Cyanobacteria)、Candidate、梭杆菌门(Fusobacteria)8种菌所占比例,粪便中及肠黏膜定植的拟杆菌门、厚壁菌门、乳酸菌、肠球菌、肠杆菌5种菌的DNA含量与结肠黏膜组织中紧密连接蛋白ZO-1的mRNA的表达情况,比较粪便菌群与肠黏膜菌群的差异性,并分析粪便及肠黏膜优势菌群与紧密连接蛋白ZO-1表达的相关性。
  结果:肠道粪便菌群与肠黏膜菌群不同,粪便菌群较肠粘膜菌群多样性(Shannon指数)增加,肠道粪便组为=2.901±0.54,肠粘膜组为=2.29±1.24,P=0.0120<0.05,有统计学意义。在门水平上,粪便菌中以拟杆菌门及厚壁菌门数量最多,占主要成分;而在肠黏膜组织中变形菌门数量最多。肠黏膜拟杆菌含量与ZO-1mRNA呈正相关(r=0.378;P<0.05);而粪便拟杆菌与黏膜组织ZO-1mRNA表达呈负相关(r=-0.42,P<0.05);组织中乳酸菌和肠杆菌均与ZO-1呈正相关(r=0.53,P<0.01;r=0.355, P<0.05)。
  结论:肠道菌群包括粪便菌群和粘膜菌群,粪便菌群与粘膜菌群存在差异性,且粪便和黏膜的同一菌群与ZO-1的相关性不同甚至相悖。
[硕士论文] 何彦坤
免疫学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:旨在了解煤矿工人外周血端粒长度与原发性高血压之间的关系,为煤炭工人预防高血压提供科学依据。
  方法:⑴使用QIAGEN公司TIA Namp Blood mini kit(51104)试剂盒提取测试对象外周血白细胞基因组DNA;⑵使用实时荧光定量PCR测定端粒长度,T/S值为相对端粒长度,即端粒长度与单拷贝基因比值;⑶运用SPSS19.0软件对受试样本进行数据分析,研究其外周血端粒长度与高血压的相关性。
  结果:①本研究为配对设计实验,高血压病例组和对照组各230例。高血压组平均收缩压为145.73±16.99mmHG,平均舒张压为91.87±14.37mmHG,对照组平均收缩压为120.07±10.23mmHG,平均舒张压为76.24±8.71mmHG,两组存在显著差异。②高血压病例组和对照组在年龄、身高方面无显著差异;而在总胆固醇(TC)、谷氨酰转肽酶(GGT)、谷氨酸(GLU)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、BMI方面,差别具有统计学意义,高血压病例组各指标均高于对照组。③高血压病例组外周血端粒长度变化范围是0.2149-1.9531,对照组外周血端粒长度的变化范围为0.4562-2.1673,两组相比高血压组端粒长度明显缩短(P<0.001)。外周血白细胞端粒长度与年龄呈负相关(P<0.05)。女性高血压患者的端粒平均长度为1.2613±0.4112,男性高血压患者端粒平均长度为0.9981±0.3965。男女高血压患者端粒平均长度上存在显著差异(P<0.05)。
  结论:⑴高血压病例组在总胆固醇(TC)、谷氨酰转肽酶(GGT)、谷氨酸(GLU)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、BMI方面的指标上高于对照组,差别具有统计学意义(P<0.05)。⑵端粒长度与年龄呈负相关,年龄越大,端粒长度越短。男性高血压端粒平均长度低于女性高血压端粒平均长度。⑶高血压人群端粒长度与正常人群的端粒长度有差异,高血压人群的相对端粒长度较正常人群短(P<0.05)。
[硕士论文] 赵艳丽
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate, S1P)促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌效应及其分子机制,探索糖尿病治疗的药物作用靶点。
  方法:⑴断头处死大鼠,充分暴露胸腹腔,将胶原酶 P经胆总管逆行注入胰腺,剥离后37℃水浴震荡消化11分钟,使用10771分离液梯度离心可获得胰岛。分离的胰岛经EDTA络合钙镁离子后,Diapase II消化5分钟,轻轻吹打后,可获得大鼠胰岛细胞(β细胞占多数)。⑵采用RT-PCR方法,检测大鼠胰岛细胞表面S1PR1-5表达情况。⑶在不同葡萄糖浓度的条件下,观察不同浓度 S1P对胰岛β细胞分泌胰岛素的变化;高糖条件下,观察S1PR1-4阻断剂及S1P+S1PR1-4阻断剂对β细胞胰岛素分泌的变化。⑷采用膜片钳技术,观察S1P、S1PR1-4阻断剂及S1P+S1PR1-4阻断剂对电压依赖性钾电流(Kv电流)的影响。⑸采用钙成像技术,观察不同浓度S1P对细胞内Ca2+水平的影响。⑹观察S1P、S1PR1-4阻断剂、S1P+S1PR1-4阻断剂及Forskolin对细胞内cAMP水平的影响。
  结果:①经胶原酶P消化获得的大鼠胰岛,质地均一,边缘圆润;经Diapase II消化获得的胰岛细胞,大小均一,胞膜完整。②经RT-PCR检测,S1PR1-5在胰岛细胞表面均为阳性表达。③与低糖对照组相比,高糖对照组显著促进了胰岛素分泌。在低糖条件下,不同浓度S1P没有改变胰岛素分泌量(P>0.05);而高糖条件下,S1P浓度依赖性促进了胰岛素的分泌(P<0.001)。在高糖条件下,在单独S1PR1-4阻断剂并不影响胰岛素分泌的基础上,加入S1PR1-4阻断剂消除了S1P对胰岛素分泌的促进作用(P<0.01)。④高糖条件下,S1P显著抑制了Kv电流(P<0.01)。在单独S1PR1-4阻断剂不影响Kv电流的基础上,S1PR1-4阻断剂消除了S1P对Kv电流的抑制作用(P<0.01)。⑤高糖条件下,S1P浓度依赖性升高了细胞内Ca2+浓度(P<0.001)。⑥Forskolin作为阳性对照,S1P抑制了细胞内cAMP的生成(P<0.01)。在单独S1PR1-4阻断剂不影响cAMP生成的基础上,S1PR1-4阻断剂消除了S1P对cAMP生成的抑制作用。
  结论:⑴用胶原酶P消化获得的胰岛、用Diapase II消化获得的胰岛细胞边缘圆润、状态良好。⑵胰岛细胞表面表达有S1PR1-5。⑶S1P通过S1P/S1PRs浓度依赖性促进了葡萄糖刺激的胰岛素分泌。⑷S1P通过S1P/S1PRs抑制了Kv电流。⑸S1P浓度依赖性升高了细胞内Ca2+浓度。⑹S1P通过S1P/S1PRs抑制cAMP的生成。
[硕士论文] 周洁
神经病学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:线粒体病是指由于线粒体DNA和核DNA的突变或缺失导致的线粒体氧化呼吸链相关蛋白异常,继而阻碍 ATP的合成的多脏器功能障碍综合征,故又称作线粒体氧化呼吸链病。根据临床表现可以分为不同的亚型:线粒体脑病:Leigh病;Alpers综合征;线粒体脊髓小脑共济失调伴癫痫发作综合征;线粒体脑肌病:线粒体脑肌病伴高乳酸血症及卒中样发作(Mitochondrial Encephalomyopathy, Lactic Acidosis and Stroke-like episodes,MELAS);肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(Myoclonic Epilepsy and Ragged Red Fibres,MERRF);Kearns-Sayrs综合征(KSS);线粒体神经胃肠脑肌病(ochondrial neurogastrointestinal encephalomyopathy, MNGIE);线粒体神经病:Leber遗传性视神经病;神经源性肌萎缩-共济失调-色素视网膜病变综合征;感觉性共济失调神经病伴眼外肌麻痹;线粒体肌病:慢性进行性眼外肌麻痹(Chronic Progressive External Ophthalmoplegia,CPEO);线粒体肢带型肌病。线粒体基因突变类型包括碱基突变、插入、缺失突变、mtDNA拷贝数突变, m.3243A>G最常见的线粒体基因突变,可导致一系列轻到致死性的临床症状。通常为母系遗传,但偶有散发突变。本文将对我院诊治的6例m.3243A>G突变相关的线粒体疾病患者进行临床、病理及基因研究,解决揭示表型与基因型是否具有相关性;如何根据临床症状及辅助检查确定该基因的分子学诊断的可能性。同时对相关文献进行汇总及统计学分析,得出该突变相关线粒体疾病临床症状的分布特点。本研究分为两个部分:
  第一部分:6例m.3243A>G相关线粒体疾病患者临床、病理及基因研究。
  目的:探讨m.3243A>G相关线粒体疾病的临床症状、肌肉病理、血乳酸值、影像学及基因特点。
  方法:对2014-2016年就诊于本院的6名m.3243A>G相关线粒体疾病患者进行资料收集,病例1、2、6行骨骼肌活检术+冰冻酶组织化学染色及血乳酸检测,病例1、2、3、5、6均行头颅MRI检查,其中1、3、5、6均行MRS检查,其中病例1、5具有基因家系验证。分析其临床、病理及基因特点。
  结果:共6例病人,男女比例为1:2,6例患者发病年龄为10-52岁,发病年龄不服从正态分布,采用中位数(四分位数间距)分别为33.5岁(20.5岁)。发病高峰年龄为30-40岁。首发症状:精神异常(3/6),视力下降(3/6),头晕(3/6),发作性抽搐(2/6),恶心呕吐(2/6),头痛(1/6),首发症状为记忆力减退(1/6)。家族史:其中3例患者有家族史,例1表现为母亲身材矮小,听力下降。例3表现为母亲身材矮小。例5表现为女儿癫痫发作及运动耐力下降。临床症状:共6例患者,神经系统症状:出现癫痫4例(4/6),听力下降4例(4/6),精神行为异常4例(4/6),头痛3例(3/6),智能减退3例(3/6),运动不耐受3例(3/6),视力下降2例(2/6),偏盲1例(1/6),卒中样发作(1/6)。非神经系统症状:身材矮小5例(5/6),胃肠道症状4例(4/6),糖尿病3例(3/6)。核磁结果:5例患者行头颅MRI检查,4例行MRS检查,均有脑内异常信号,4例MRS均可见乳酸峰升高。肌肉病理:3例患者行肌肉病理检查,其中破碎红纤维(1/3),SSVs(1/3),正常(1/3)。基因检测:6例患者均行基因检测,突变率范围:20-67%,突变率分布不服从正态分布,用中位数(四分位数间距)间距表示,分别25.00%(20.80%)。治疗效果:6例患者均行抗氧化及补充代谢辅酶类等治疗,有效率为3/6。
  结论:⑴m.3243A>G相关线粒体疾病临床表型差异大,身材矮小、癫痫、听力下降、精神行为异常、胃肠道症状为较常出现症状,3个或3个以上症状同时出现可考虑m.3243A>G的基因筛查。⑵肌肉病理存在RRFs及SSVs、头颅MRI提示与血管分布不一致的异常信号及MRS乳酸峰升高可提供较高的诊断价值,但应综合考虑并结合基因检测结果,依据单项诊断可能误诊或漏诊。⑶对已确诊该病的患者应进行多系统筛查,包括心脏、听力、视力、血糖水平及糖尿病并发症,及早干预,以提高患者生存质量。
  第二部分:m.3243A>G基因突变相关线粒体疾病基因型及临床表型文献汇总分析。
  目的:m.3243A>G基因突变相关线粒体疾病临床表型的分布特点,并按人种进行亚组分析。同时对听力下降与糖尿病、心功能异常、卒中样发作及运动不耐受之间及眼睑下垂与心功能异常发生率之间的差异进行统计学分析。并预测其生存时间。
  方法:采用R3.1.1软件进行Meta分析。首先对纳入的临床表现发生率进行logit转换,以样本量为权重计算合并值,最终得出合并的“发生率”及其95%CI。通过Homogeneity test(Q检验)进行异质性检验(检验水准为α=0.1),同时结合 I2定量判断异质性的大小。若 P≥0.10,且 I2≤50%,提示研究结果之间同质,则选用固定效应模型来进行 Meta分析;相反则说明在研究结果之间存在着异质性,采用随机效应模型进行 Meta分析。Meta分析的检验水准为α=0.05。并按人种进行亚组分析。对对文献报道具有相关性的症状间发生率差异进行分析,进行卡方检验,显著性水平α设为0.05。两组临床症状发生率的比较,因均有理论值T>5,用Pearson卡方检验。均取 P<0.05为差异有统计学意义。用Kaplan-Meier法估算其生存时间。
  结果:共纳入8篇文献,总共710例病人。Meta分析结果显示:不同临床表现出现比例分别为听力下降53.95%[95%CI(47.76,60.02), P<0.0001]、运动不耐受48.64%[95%CI(34.39,63.12), P<0.0001]、头痛44.97%[95%CI(27.18,64.15), P<0.0001]、癫痫42.32%[95%CI(21.52,66.25),P<0.0001]、血糖升高33.78%[95%CI(25.94,42.64), P<0.0001]、智能减退32.94%[95%CI(15.44,56.91),P<0.0001]、身材矮小30.62%[95%CI(16.64,49.39), P<0.0001]、卒中样发作29.10%[95%CI(20.21%,39.94), P<0.0001]、胃肠道症状27.23%[95%CI(16.16,42.09), P<0.0001]、心功能异常26.24%[95%CI(20.17,33.37), P<0.0001]、视力下降25.74[95%CI(13.01,44.55), P<0.0001]、眼睑下垂21.09[95%CI(14.87,29.01), P<0.0001]、精神行为异常13.00%[95%CI(7.80,20.88), P<0.0001]。亚组分析结果提示该结果存在着人种差异。听力下降与糖尿病、卒中样发作、心功能异常发生率差异无统计学意义。听力下降与运动不耐受,眼睑下垂与心功能异常,差异有统计学意义。该病的预后差,10年生存分析,中位生存时间仅为9(1.3-10)年,癫痫(84.6%)及心功能异常(15%)的出现为常见影响预后的因素
  结论:⑴m.3243A>G相关线粒体疾病临床表型谱广泛,涉及神经系统、心血管系统、内分泌系统及消化系统,不同临床表型发生率不同,且存在人种差距,可为临床基因检测的选择提供借鉴。⑵听力下降为多系统受累的标志,一旦出现,应进行多系统筛查。⑶该病预后相对差。
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