绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 3
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 59 条结果
[硕士论文] 李颖
生物化学与分子生物学 电子科技大学 2014(学位年度)
摘要:乳腺癌是全球女性发病率最高的恶性肿瘤之一,成为威胁女性健康的杀手。如何在诊断肿瘤发生的同时又能够治疗癌症成为当今研究的热点。纳米粒子具有多重成像、基因治疗、携带药物等多种功能,成为诊疗一体化的重要载体。
  在本研究中,通过改良后的Stober法合成的Fe3O4@SiO2(FITC)纳米粒子具有低毒性,良好的生物相容性和可再修饰性等优点。使用TEOS与APS-FITC共同水解的方法将荧光染料FITC和Fe3O4共同包裹在核壳型硅纳米粒子内部,形成平均直径为64 nm的Fe3O4@SiO2(FITC)纳米粒子,这种纳米粒子具有荧光成像与核磁共振成像双重成像功能。通过静电吸引作用将 PEI-FA包裹在 Fe3O4@SiO2(FITC)纳米粒子表面,形成 Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA纳米粒子,粒子zeta电位由-12.2±1.87 mV变为+17.5±1.32 mV,且修饰后的Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA纳米粒子仍然具有良好的荧光特性与超顺磁性,能够吸附带有负电的Notch-1 shRNA形成Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA/Notch-1shRNA纳米复合载体,这种载体能够保护Notch-1 shRNA在血清中和DNaseI中不被降解。
  通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜共同证明Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA纳米粒子对叶酸受体高表达的MDA-MB-231细胞有明显的靶向性,封闭细胞膜表面的叶酸受体后,能够降低细胞对Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA纳米粒子的内吞效率,由此证明MDA-MB-231细胞对Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA纳米粒子内吞部分是由叶酸受体介导的。装载有Notch-1 shRNA的纳米载体能够在细胞内沉默Notch-1基因,通过抑制Notch-1蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,实现对乳腺癌的治疗。Fe3O4@SiO2(FITC)/PEI-FA/Notch-1shRNA纳米复合物能够靶向肿瘤部位,在肿瘤部位具有荧光/MRI双成像功能,且能抑制肿瘤生长,这种多功能纳米载体在医学上有着非常重要的应用价值。
[硕士论文] 贺秋铭
生物化学与分子生物学 电子科技大学 2014(学位年度)
摘要:当今肿瘤的发生率与日俱增,而治疗肿瘤的方法日益多样化。其中传统化疗,是目前应用最为广泛的治疗手段,但其有效性和副作用也是困扰临床治疗中的难题。而光动力疗法是一种治疗肿瘤的新手段,以创伤小,局部治疗等特点,越来越多的受到关注。同时也面临巨大的挑战,因为其产生单线态氧的光敏剂,多数是具有疏水性,难以达到肿瘤部位。那么构建一种安全并且能携载多种不同作用机制的药物载体,提供多种治疗手段,势必能进一步提高肿瘤治疗的效果。
  本论文,通过构建多聚赖氨酸修饰的石墨烯(G-PLL),同时携载化疗药物阿霉素(DOX)和光敏药物酞菁锌(ZnPc),将化疗和光动力治疗相结合,协同抑制多种肿瘤细胞的生长。载体G-PLL大小约为200nm,表面Zeta电位高达+29.25mV,具有良好的生物相容性、稳定性等优点。能够单独高效携载阿霉素(载药率110%)和酞菁锌(载药率59%);进一步,能将两种药物同时携载在修饰后的氧化石墨烯上,形成纳米复合物G-PLL/DOX/ZnPc,具有良好的稳定性和分散性。生物学研究结果表明,在670nm波长激光照射下,能够产生单线态氧。研究结果发现,G-PLL作为两种药物载体,能够被多种肿瘤细胞所内吞;基于抑制率50%的CI50协同指数分别为0.07(HeLa),0.13(MCF-7)和0.13(B16),显示G-PLL/DOX/ZnPc对多种肿瘤细胞显示出较强的化疗与光动力治疗协同作用。
  本文研究表明复合纳米药物G-PLL/DOX/ZnPc具有很好的协同抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,提高肿瘤治疗效果的能力,为肿瘤治疗提供了一种新途径。
[硕士论文] 韩桂秋
生物化学与分子生物学 兰州理工大学 2012(学位年度)
摘要:金雀异黄酮具有抑制骨吸收和增加骨密度的作用。本论文主要研究缺氧条件下,10-6mol/L、10-5mol/L和10-4mol/L的金雀异黄酮对大鼠成骨细胞(ROB)和10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L的金雀异黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)缺氧损伤与成骨性分化的影响。
   缺氧处理36或48小时后,分析各组的细胞活力、细胞内ROS含量、LDH漏出率、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙盐沉积量,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,免疫组织化学染色分析PCNA蛋白表达,钙化结节进行茜素红染色和vonKossa染色,免疫组织化学染色和westernblotting蛋白印迹法分析I型胶原蛋白表达,并用定量RT-PCR法检测缺氧诱导因子(HIF-1α)、抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Caspase-3以及成骨性分化基因Runx2、Osterix和BMP-2的mRNA的相对表达水平。
   结果显示,金雀异黄酮增强细胞活力和提高ALP活性,降低ROS含量和LDII漏出率,抑制凋亡和PCNA蛋白表达,促进基因HIF-1α、Bcl-2、Runx2、Osterix和BMP-2mRNA的表达并抑制基因Caspase-3mRNA的表达,并且还提高Ⅰ型胶原的表达和钙化结节的形成面积。所以,金雀异黄酮对大鼠成骨细胞和rBMSCs的缺氧损伤具有保护作用并促进其成骨性分化。
[硕士论文] 刘川顺
食品科学 安徽农业大学 2010(学位年度)
摘要:谷氨酰胺合成酶(GS,glutaminesynthetase; EC6.3.1.2)是生物体内广泛存在的酶,它参与许多生物体的氮和碳代谢。而氮代谢是生物体维持生命所必需的,因此,它是生物体内最为关键的酶类之一。谷氨酰胺合成酶在生物体内的分布及生理功能的研究也很透彻。此外,它也是体外微生物酶促转化合成茶氨酸的重要酶类之一,更是谷氨酰胺工业化生产中极其重要的催化剂,是非常有价值的物质,故对其需求量也日益增多。利用微生物发酵生产谷氨酰胺合成酶是条经济而又高效的途径。目前谷氨酰胺合成酶的产酶菌株主要是节杆菌属的一些细菌。而利用霉菌发酵生产谷氨酰胺合成酶的研究却很少,米曲霉更是没被研究过。本实验首先从实验室保藏的菌株中筛选出具有较高产酶能力的米曲霉,并对其进行紫外诱变、优化发酵条件和酶学性质的研究。
   实验中首先从实验室保藏的菌株中筛选出具有较高产谷氨酰胺合成酶能力的米曲霉。进而对米曲霉进行紫外诱变,诱变条件为:紫外灯15W,照射距离20cm,照射时间120S。最后,经过、复筛和遗传稳定性实验,选育出的诱变菌株产谷氨酰胺合成酶的能力比出发菌株提高了15.6%。
   其次,对选育出的米曲霉进行发酵条件的优化,先进行单因子实验,筛选出米曲霉液态发酵产谷氨酰胺合成酶的最适碳源、氮源、起始pH、装液量、发酵温度、摇床转速和诱导因子。结果表明最适碳源为蔗糖,最适氮源为蛋白胨,最适起始pH为6,最适装液量为60ml,最适发酵培养温度为28℃,最适摇床转速为160r/min,最适诱导因子为谷氨酸钠。再通过正交实验确定四种显著影响因子的添加量,优化培养基的成分和液体发酵条件,使选育出的米曲霉产谷氨酰胺合成酶的能力进一步提高。
   再次,对超声波破碎器破碎米曲霉细胞壁的条件进行研究,分别设定不同的工作时间和间隔时间,再对总时间进行优化,结果表明在超声波破碎器功率为400W的条件下,工作1S,间隔3S,20min,是破碎米曲霉细胞壁的最适破碎条件。
   最后,对提取的谷氨酰胺合成酶的粗酶液进一步的纯化,通过实验对米曲霉谷氨酰胺合成酶的酶学性质进行初步的研究。结果表明最适酶促反应时间为:30min,最适pH为为6.5,最适温度为60℃,并且得出Mg2+、Mn2+对维持酶活至关重要。
[硕士论文] 戚大伟
分析化学 复旦大学 2010(学位年度)
摘要:蛋白质的可逆磷酸化是一种非常重要的翻译后修饰,它调节着如细胞信号传导、细胞分化、细胞生长、细胞凋亡等几乎所有的生命活动,也被形象地描述为细胞生理活动的分子开关。因此,对蛋白质磷酸化的研究有助于全面理解蛋白质的各项功能及其机理。现今,蛋白质磷酸化的研究方法是先将蛋白质酶解,而后利用生物质谱对磷酸化肽段的氨基酸序列和磷酸化位点进行准确地鉴定。但磷酸化蛋白质的含量较低,磷酸化肽段的离子化效率较差,且非磷酸化肽段的存在将严重抑制磷酸化肽段的质谱信号,这些原因导致利用质谱直接对磷酸化肽段进行准确分析面临很大困难。因此在质谱分析前需对磷酸化肽段进行选择性富集,而发展新型的富集技术成为当前蛋白组学研究的热点。蛋白质的糖基化是另一种重要的翻译后修饰。糖蛋白在分子识别、细胞成长、尤其是在免疫反应中都有着重要作用。现今糖蛋白已被用作癌症治疗、诊断和检测的标志物。虽然生物质谱技术有很大的进步,但对糖蛋白的鉴定和分析仍面临众多问题。为解决此问题,需在质谱分析前对糖蛋白或糖肽进行选择性富集,从而进一步提高检测方法的灵敏度。近来,磁性纳米材料基于自身磁性已应用于生物医学中的多个领域。而功能化磁球作为一种新型的分析技术已在蛋白质组学研究中得到广泛的应用。
  本论文针对上述蛋白质组学研究中的两个热点问题,将功能化磁球与蛋白质分析结合起来,开展了一系列研究工作,发展了相关的新技术新方法,并进行了实际的应用研究。主要研究内容和取得的研究成果摘要如下:
  第一章概述了蛋白质磷酸化和糖基化修饰的研究现状。首先介绍了蛋白质磷酸化的重要性及其特点。对现今磷酸化蛋白质研究中的生物质谱技术进行了简单地阐述。归纳并总结了磷酸化蛋白质/肽段的富集方法,对其原理和优缺点进行了介绍。然后简单介绍了糖蛋白的特点及现有的富集方法,并概述了功能化磁球在蛋白质组学研究中的应用。最后作者阐述了本论文的选题意义和目的。
  第二章首先利用一种新的简便方法将磷酸基团修饰于磁球表面。然后利用磷酸基团修饰磁球固定Zr4+离子并考察了其对磷酸化肽段的富集效果。基于Zou的报道,用磷酸基团作为螯合剂可使固定的金属离子更为稳定,同时有助于提高富集选择性。但现有的将磷酸基团修饰于磁球表面的方法过于繁杂,同时修饰过程中所使用的试剂有毒。本部分工作极大地简化了修饰过程,并将新制备的材料用于了磷酸化肽段的富集。
  第三章介绍了Fe3O4@C@Ta2O5磁球的合成方法及其在磷酸化肽段富集中的应用。本部分工作第一次将Ta2O5用于磷酸化肽段的富集。利用标准磷酸化蛋白对其富集效率和选择性进行评价,并将其用于实际样品中磷酸化肽段的富集。最后对比了Ta2O5和TiO2的富集差异性,发现二者之间存在着约50%的富集差异。
  第四章介绍了Fe3O4@C@SnO2磁球的合成方法及其在磷酸化肽段富集中的应用。基于Sturm的研究报道,SnO2对磷酸化肽段富集具有较高的选择性。但传统的溶胶凝胶法不适用于合成核壳结构的Fe3O4@c@SnO2磁球。本部分工作利用简单的两步水热反应和一步溶剂热反应,合成了Fe3O4@c@SnO2磁球。利用标准磷酸化蛋白对其富集效率和选择性进行评价,考察了SnO2和TiO2之间富集选择性的差异,证实SnO2较于TiO2具有更好的富集选择性。
  第五章利用简便快捷的自组装方法合成了核壳结构的Fe3O4@C@Au磁球。首先利用本实验组先前报道的方法合成了Fe3O4@C磁球。然后通过静电作用将PDDA修饰于Fe3O4@C磁球表面。由于Fe3O4@C磁球表面吸附了带正电荷的PDDA,因此可有效地吸附带负电荷的金纳米离子,从而合成了具有核壳结构的Fe3O4@C@Au磁球。硼酸是糖肽富集中常见方法,因此我们利用金和巯基基团间的相互作用,将硼酸基团修饰于Fe3O4@C@Au磁球表面。最后考察了新方法对糖蛋白和糖肽的富集效果。
  总之,本论文围绕磷酸化肽段与糖肽的富集新技术新方法,发展了多种新型功能化磁性材料,为解决磷酸化肽段或糖肽的分离富集及鉴定问题提供了有效的研究手段。
[硕士论文] 陶文兵
分析化学 复旦大学 2010(学位年度)
摘要:环磷酸腺苷受体蛋白(cAMPreceptorprotein,CRP)是原核生物中一个典型的转录调控蛋白。结构研究表明CRP是一个由相同亚基组成的二聚体蛋白,每个亚基包含两个结构域:较大的cAMP结合结构域包含氨基酸残基1-137,主要由β折叠组成;较小的DNA结合结构域包含氨基酸残基138-209,主要由α螺旋组成。通过与受体分子cAMP结合,CRP发生构象变化,并与启动子DNA结合,激活RNA聚合酶,进而起始转录。利用转录组学和生物信息学技术研究发现,CRP能够直接调控200多个启动子的转录起始。CRP是目前研究的最多的转录调控蛋白之一,由于在其他几个重要功能蛋白家族中发现了极为相似的cAMP结合中心和DNA结合中心,CRP现已成为变构研究中一个十分重要的模型。目前,CRP-cAMP复合物、CRP-cAMP-DNA复合物、CRP-cAMP-DNA-RNAP复合物晶体结构均已获得。CRP-cAMP复合物的晶体结构显示,一个亚基处于“闭合”构象,表现为C端靠近C-螺旋的表面,另一个亚基处于“开口”构象,表现为C端远离C-螺旋的表面,且两个结构域间有一个大裂缝。但是,CRP-cAMP-DNA复合物的晶体结构显示,当结合DNA后,两个亚基均处于“闭合”构象,显示出高度的对称性。
  对CRP进行的大量生物化学、生物物理、分子动力学模拟等研究结果均推测,CRP结合cAMP引起微小的构象变化而得到活化:首先引起直接作用点的局部扰动,之后扩展到整个分子,产生整体的构象变化。最近解出并发表了被认为是最后一个解释cAMP诱导CRP构象变化机理的重要结构—apo-CRP,尽管对cAMP诱导CRP构象变化的机理的有了一些新的认识,但仍有诸多问题待解决。任何CRP及其相关复合物结构精度的提高,对解释cAMP诱导CRP构象变化的机理还有着广泛得意义。
  本论文以CRPD138L突变体和cAMP复合物的结构及构象变化机理为研究目标,通过结构生物学、生物化学和光谱等技术手段,得出以下几点结果:
  1.表达、提纯并结晶了CRPD138L突变体,并解析了结构。D138L-cAMP复合物的晶体结构分辨率达1.66A,是目前该蛋白中分辨率最高的结构;该蛋白结构已存入蛋白数据库(ProteinDataBank),编号为3KCC。
  2.高分辨率的D138L-cAMP复合物的结构首次显示,CRP结合了4个cAMP,其中两个是反式的,而另两个是顺式的。
  3.D138L-cAMP复合物中两个亚基均处于闭合构象,并显示出高度的对称性。
  4.比较D138L变体结合cAMP前后的结构,得知除了β-flap,D138L的N端未发生大的构象变化。相反,C端的取向、C-和D-螺旋的长度均发生了显著变化。
  5.比较D138L变体与野生型(wildtype,WT)CRP-cAMP复合物结构,最显著的差别在由β4、β5和loop3组成的β-flap。这些变化使铰链区域更具柔韧性,对于水解酶更灵敏。
  6.蛋白酶的水解反应和FT-IR光谱H-D交换实验结果表明,D138LCRP比WTCRP更具动态性,而这可能影响其识别特异的DNA序列。
  鉴于CRP中结合cAMP袋状结构的广泛性,我们对其组成部分loop3和loop4在结构域之间及亚基之间信号传递中所起的作用进行了研究。依据CRP和其他依赖于cAMP的蛋白的氨基酸序列的差异,构建了两个变体:Mutl(100p4中E78、G79间插入KGSKM五个氨基酸残基)和Mut2(从Mutlloop3中删去E54-G56三个氨基酸残基),结合一系列生物化学、生物物理的实验结果,得出以下结果:
  1.圆二色谱、FT-IR光谱检测三者结构的差异,结果显示这两个变体蛋白与野生型蛋白在二级及三级结构上没有任何可观察到的变化。
  2.荧光各向异性方法测定WTCRP及两个突变体与DNA的亲和力。结果显示loop4中KGSKM的插入,导致了cAMP存在时,CRP对DNA亲和力增大的效应,而两个变体与DNA的亲和力非常接近,说明loop4在变构信号传递过程中发挥了作用,并且参与了结构域间信号的传递。
  3.等温滴定量热技术测量三者与cAMP的亲和力。结果显示三者都有两个强的cAMP结合位点及一个弱的结合位点。Mutl的结合亲和力比WT小,但没有改变两个结合位点的协同性,说明loop4没有参与亚基间的信号传递,而Mut2的两个强结合位点有正向的协同作用,说明loop3参与了亚基间的信号传递。
  4.loop3和loop4的变化,改变了结合cAMP的行为,说明结合cAMP产生的变构信号传递的过程,很可能是两个亚基整体的重排所引起的。
  5.目前有关CRP被cAMP诱导的信号传递路径有两种推测,一种是信号通过铰链区域传递到DNA结合结构域,一种是蛋白整体的构象变化。我们的结果支持后一种推测。
[硕士论文] 周跃飞
生物化学与分子生物学 西北大学 2009(学位年度)
摘要:1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸酯(DXP)被认为是三条主要代谢途径的中间体,即细菌中硫胺素焦磷酸(维生素B1,ThPP)的生物合成过程、磷酸吡哆醇(维生素B6)的生物合成过程以及细菌和高等植物中通过MEP途径合成萜类化合物的过程。DXS酶是DXP合成酶,它是一个ThPP依赖性酶。在MgCl2存在下,它催化D—甘油醛-3—磷酸(D—GAP)和丙酮酸(Py)缩合生成DXP。同时,DXP又是1—脱氧—D—木酮糖5-磷酸酯还原酶(DXR)的底物,而DXR是萜类化合物生物合成的MEP途径中一个重要的限速酶,它催化DXP异构化为具有分支结构的MEP,是抗菌药物筛选的潜在靶分子。为了研究DXR的催化机理和寻找DXR酶的抑制剂,需要通过分子生物学手段制备较高活性的DXS酶,以及以该酶为工具合成不同位点氘标记的DXP。 本研究以构建好的pFMH30质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物以SDS—PAGE电泳分析。SDS—PAGE分析出现一条约66 kDa的条带,与预期融合蛋白的分子量相符。最后经过大量诱导该重组蛋白并纯化,得到目的蛋白DXS的浓度为11.8 mg/ml,纯度在90%以上。反相离子对HPLC鉴定DXS酶的活性,结果表明该酶有较高活性,可以用于后续氘标记的DXP的合成。 DXP是萜类化合物生物合成的MEP途径中的关键中间体,它由DXS酶催化D—GAP与Py缩合而成,或者通过TIM将磷酸二羟丙酮(DHAP)异构化为D—GAP然后与Py反应生成。通过一系列实验,优化了DXP的酶法合成条件。D—GAP是DXP合成中重要的原料,我们以D—果糖-6-磷酸为底物,经过四乙酸铅氧化生成D—GAP。合成D—GAP的产率约为60%,纯度在80%以上。为了合成不同位点氘标记的DXP,本研究在重水介质中,通过酶法或化学法对D—GAP、DHAP或Py分别进行氘标记,并在此基础上成功制备了[3,4-2H2]DXP、[4-2H]DXP、[3-2H]DXP和[1-2H3]DXP。产率和纯度都优于目前报道的以化学法进行的合成。
[硕士论文] 段琼
生物化学与分子生物学 中南大学 2009(学位年度)
摘要:目的: 通过比较正常人与神经胶质瘤患者脑脊液中uPAR浓度以及GPI-PLD酶活性,间接反映两者与神经胶质瘤局部侵袭的关系。同时利用GPI-PLD基因转染人神经胶质瘤U251细胞,初步研究GPI-PLD基因过度表达对细胞膜上糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的蛋白质uPAR等的影响,以及神经胶质瘤细胞体外侵袭性的改变,探讨GPI-PLD基因在胶质瘤生长、凋亡和侵袭中的作用,为该基因神经胶质瘤靶向治疗提供了初步理论依据。 方法: 1.分别取30例正常人、15例神经胶质瘤患者脑脊液测定其uPAR浓度与GPI-PLD酶活性; 2.用脂质体转染法将本室已经构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入U251细胞,以未转染的U251细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,以G418筛选出阳性细胞克隆。RT-PCR法鉴定GPI-PLD基因的mRNA表达水平,利用自制具完整GPI结构的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过曲拉通-114(TX-114)分相,定量检测GPI-PLD活性;基因稳定转染后观察细胞生物学特性的变化包括MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡变化。以未转及转染空载体pcDNA3.1(+)细胞为对照组,pcDNA3.1(+)/GPI-PLD细胞为试验组通过Transwell小室检测U251细胞的体外侵袭能力。 结果: 1.病人组和正常对照组脑脊液GPI-PLD酶活性(%)分别为30.7±4.6和44.1±4.4,两组差异有显著性(P<0.05);uPAR浓度分别为2.4±0.6和3.6±0.5(ng/ml),差异有显著性意义(P<0.05)。 2.RT-PCR结果和GPI-PLD酶活性测定表明,稳定高表达GPI-PLD的U251细胞系已经建立。(1)G418筛选后,GPI-PLD稳定转染U251细胞的GPI-PLDmRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染组明显增高,差异有显著性(P<0.05)。(2)GPI-PLD稳定转染U251细胞后,GPI-PLD活性较转染空质粒组和未转染组明显增高,差异有显著性意义(P<0.01),转染组细胞的GPI-PLD活性(%)达到13.1±5.6,而其它组细胞GPI-PLD活性较低,分别为5.7±3.0和5.9±2.6。(3)GPI-PLD稳定转染U251细胞后,细胞释放uPAR明显增加。pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251较pcDNA3.1(+)/ U251、U251细胞组培养基上清uPAR浓度显著提高,增高水平达4倍,而pcDNA3.1(+)/ U251和U251细胞组见无明显差异。 3.GPI-PLD转染前后U251细胞生物学特性的改变。(1)MIT法显示pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251、pcDNA3.1(+)/U251、U251细胞组吸光度的平均水平分别为0.392±0.104、0.631±0.187和0.621±0.194;其中,pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251组比pcDNA3.1(+)/U251和U251组吸光度值明显下降,差异有显著性(P<0.01),pcDNA3.1(+)/U251和U251组无明显差异。表明GPI-PLD基因过表达能抑制U251细胞的增殖。(2)细胞流式术显示pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251、pcDNA3.1(+)/U251、U251细胞组S期细胞数分别为9.33%、16.46%、17.1%;但细胞凋亡率没有明显差别。(3)体外侵袭实验24h后,每个样本分别计数5个视野。结果显示pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251、pcDNA3.1(+)/U251、U251三组细胞侵袭性显著不同(P<0.01)。pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251细胞侵袭性明显低于pcDNA3.1(+)/U251、U251,提示GPI-PLD能分解GPI锚,导致uPAR从细胞表面脱落,抑制其定位与uPA降解基质的功能和uPAR-uPA介导的信号转导,从而降低U251细胞的体外侵袭性。 结论: 1.神经胶质瘤患者脑脊液中GPI-PLD酶活性以及uPAR的浓度均较正常人降低,差异具有显著性。 2.成功将GPI-PLD基因转染入神经胶质瘤U251细胞,并在该细胞中稳定表达。 3.GPI-PLD基因转染U251细胞后能影响该细胞周期并降低神经胶质瘤细胞的体外侵袭性。
[硕士论文] 欧阳泽英
物理化学 湖南师范大学 2009(学位年度)
摘要:本文阐述了小分子与核酸相互作用方式及其研究的发展状况,总结了小分子与核酸的作用的研究方法、研究技术与研究手段、发展方向及其应用前景,介绍了双苯并咪唑类化合物在医药、工业抗蚀剂和航空材料等方面的应用。 ⑴在微波间歇辐射下快速合成二(2—苯并咪唑亚甲基)胺(BBA)。与常规方法相比,反应时间大大缩短仅为17min,产率为75%是传统方法的二倍,溶剂用量是传统方法的四分之一,环境友好,符合绿色化学的发展要求,并摸索出该化合物的最佳微波合成条件。同时在常规方法下合成了镧、铕、钐、镝四种稀土金属的二(2—苯并咪唑亚甲基)胺配合物,并通过红外、紫外、荧光、核磁、电导、元素分析、循环伏安法等对其进行了表征,推测出其化学通式为:[Ln(BBA)2(NO3)2]NO3。 ⑵采用紫外光谱、荧光光谱、粘度法、循环伏安法考察了这四种稀土配合物及配体与DNA的相互作用。研究发现这些物质与DNA作用时紫外吸收都发生了不同程度的减色,但配体的减色更加明显;荧光都明显增强,分别都增为原来的几倍;当配合物浓度小时DNA粘度随配合物浓度增加而减少,继续增加配合物浓度到一定值,DNA粘度开始增加,但是随着配体的浓度的增加,DNA溶液的黏度会不断增加;循环伏安法表明配合物与DNA作用时还原峰发生负移,氧化峰稍微正移,峰电流均减少。以上实验表明:配体与DNA作用是部分插入模式,而这些配合物与DNA的作用都不是单一的作用模式,而是以部分插入为主,静电作用为辅的多种作用模式共同完成。相比之下,配体与DNA的作用更强,这可能是配体接近平面,而配合物却是八配位的立体结构,因此作用不如配体强。利用凝胶电泳实验研究发现二(2—苯并咪唑亚甲基)胺合镧和二(2—苯并咪唑亚甲基)胺合铕在近生理条件下能有效地切割pBR322DNA。 ⑶测定了pH值对配体及铕的配合物的光谱的影响,实验结果表明pH值对配体和铕的配合物的紫外光谱影响基本一致,随着pH值的增加而减少,并且吸收峰发生红移,当pH值达到一定值时,原吸收峰消失,有二个新峰出现,二者的荧光受pH值影响不同,配体的荧光变化不如铕配合物快和敏感,在1.5~5.1之间荧光随pH值的增加而增强,相反,在5.1~9.5之间随pH值的增加而降低。铕配合物有望作为一种新的分子开关。
[硕士论文] 戴小丹
生物化学与分子生物学 东北师范大学 2009(学位年度)
摘要:糖鞘脂Gb3(Globotriaosylceramide)广泛存在于哺乳动物细胞膜表面,在细胞的生长、分化、识别、信号传导等方面起着非常重要的作用。细胞膜上的Gb3是志贺杆菌毒素(Shiga toxin,STx)的受体,与志贺杆菌引起的中毒性腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒症密切相关。志贺毒素STx是由痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)产生的一种重要的致病毒力因子,由具有酶活性的A亚基(STxA)和受体结合作用的B亚基(STxB)两部分构成。研究表明,在哺乳动物细胞内,STxB与Gb3结合后,经由早期胞内体/循环胞内体直接到达高尔基体,再逆向运输至内质网,而不经过晚期胞内体的降解环境。然而另有研究表明,将荧光标记的Gb3加入细胞后,部分Gb3也到达高尔基体。但现有的一些证据显示,Gb3和其配体STxB可能采取不同的胞吞途径:细胞固有的Gb3途径和由配体STxB诱导产生的STxB途径。 本文以HeLa细胞为实验材料,从两个方面研究了配体结构与配体胞吞途径的关系。第一部分,通过分子克隆构建了三个与Gb3结合强弱不等的STxB突变体,研究并比较了野生型配体和突变配体的胞内运输。第二部分比较了不同配体(天然配体STxB和人工配体Gb3抗体38-13)的胞吞途径,从而阐明STxB在细胞内的运输路径是否由STxB诱导产生的。 第一部分:1.总结文献确定构建三个突变体,分别为W34A、D17E和F30A,。在结合能力上,W34A最强,D17E居中,F30A最弱。以质粒pSU108为模板,通过重叠延伸诱变PCR扩增突变体的cDNA片段。突变体cDNA和载体pSU108分别用SphⅠ、NotⅠ酶双切,然后用T4 DNA连接酶连接定向克隆目的基因。重组质粒转化大肠杆菌DH5a,阳性菌落经小提质粒的酶切鉴定正确后,进行基因测序。测序结果与实验设计相符。 2.测序正确的菌种以及表达STxB的菌种经扩大培养后,在42℃条件下诱导重组蛋白和野生型蛋白的表达。用渗透休克法提取周质蛋白,SDS—PAGE电泳显示有阳性蛋白条带出现。将周质提取物先通过Q—Sepharose FF离子交换柱初步纯化,再用MonoQ HR5/5强阴离子交换剂进一步纯化。SDS—PAGE电泳鉴定目的蛋白的纯度>95%,Western Blot检测纯蛋白为预期的目的蛋白。最后用考马斯亮蓝法定量目的蛋白。 3.以HeLa细胞为研究体系,免疫荧光检测并比较了STxB、W34A、D17E、F30A的转运情况。结果显示,经18℃培养2h,这四种蛋白都能聚集于早期胞内体/循环胞内体。经37℃培养3h,这四种蛋白都能靶向高尔基体。但是部分STxB已呈现内质网定位特征,暗示着与受体结合能力的减弱影响了从早期胞内体/循环胞内体到高尔基体的运输速度。经37℃培养4h,STxB呈现典型的内质网定位特征,而突变配体还定位于高尔基体,且似乎F30A最慢。经37℃培养16 h,STxB的内质网定位特征非常典型,而突变体配体仍旧定位于高尔基体。进一步的研究表明突变体无法到达内质网,在到达高尔基体后降解。表明与受体的结合强弱影响了到内质网的运输,即STxB的胞内运输依赖于STxB—Gb3复合物的稳定作用。 第二部分:比较了STxB和Gb3抗体38-13在HeLa细胞内的胞吞途径。STxB是自然界存在的Gb3配体,而Gb3抗体38-13可以看成是人工合成的配体,两种配体都结合Gb3的寡糖部分。根据结果,Gb3抗体38-13能结合于细胞膜表面,但无法进入细胞内,与STxB的逆向运输路径是完全不一致的。说明STxB在细胞内的运输路径是STxB诱导产生的,而并非利用了细胞内固有的Gb3转运途径。
[硕士论文] 付斌
生物化学与分子生物学 黑龙江大学 2008(学位年度)
摘要:肠道微生物区系是由致病菌和非致病菌构成的一个极其复杂的生态系统,在人类的健康和疾病中起着十分重要的作用。因而,对这个复杂的微生物生态系统及其微生物多样性的探索已成为近年来的研究热点。本课题主要探讨了Lb.paracasei HD1.7菌对机体肠道内环境的耐受能力以及与其它肠道菌群的相互作用情况,并检测其对小鼠肠道微生态体系的调节作用,为后续功能性保健食品的开发奠定基础。 论文首先摸索了Lb.paracasei HD1.7对胃肠环境的耐受性。结果表明,在空腹条件下,Lb.paracasei HD1.7对模拟人工胃液和肠液具有良好的耐受性,在pH>3的胃液和pH8.0的肠液中生长良好,且可以保持相对较高的存活率;在添加乳蛋白的模拟人工胃液中的存活率明显高于空腹情况,且存活时间延长;且食用液体早餐能明显增强Lb.paracaseiHD1.7的存活率。Lb.paracaseiHD1.7对0.1%-0.3%的胆盐环境中均有良好的耐受能力。 其后探索了Lb.paracasei HD1.7在体外对肠道致病菌和肠道益生菌的作用情况。试验结果显示,Lb.paracasei HD1.7能够明显的抑制沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌和变形杆菌四种肠道致病菌的存活,并对青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸性乳杆菌和酵母菌四种肠道益生菌无影响。 最后研究了Lb.paracaseiHD1.7对小鼠肠道微生态区系的影响。以昆明种小鼠作为研究对象,用细菌浓度为2x 1O8cfu/mL的Lb.paracasei HD1.7连续灌胃小鼠1Od,取其盲肠内容物,提取细菌总基因组DNA,PCR扩增16s rDNA V3可变区,通过对实验组和空白组小鼠肠道菌群。DGGE指纹图谱进行分析可知,每只小鼠个体的肠道内均存在一定数量的优势种群,而在灌胃Lb.paracaseiHD1.7后,小鼠肠道内的优势菌群发生了明显的变化,说明Lb.paracaseiHD1.7对肠道微生态有着重要的调节作用,它能够导致肠道内的微生物区系的改变,不仅可以使原肠道内的优势菌群和非优势种群相互间发生转变,而且也可以促进部分新菌种在肠道中的定植,也能够抑制某些菌株的生长甚至使其消失。
[硕士论文] 赵霆
生物化学与分子生物学 大连医科大学 2008(学位年度)
摘要:去整合素 蛇毒因其广泛的生物活性早已引起了国内外科学工作者的注意。人们从蛇毒中提出了许多具有潜在临床应用前景的单一组分。其中,去整合素(disintegrins)为一组源自于出血性蛇毒的抗黏附多肽或蛋白质的总称,因其可强力拮抗整合素(integrin)而得名。其特征为富含半胱氨酸,并多含有Arg-Gly-Asp(RGD)或Lys-Gly-Asp(KGD)亲水性氨基酸序列,分子量仅为5kD~9kD,多为单链多肽或蛋白分子。此蛇毒蛋白家族可凭借其分子中RGD序列而成为细胞外基质(ECM)与细胞整合素间结合的强有力的竞争性拮抗剂;因RGD模体能被血小板纤维蛋白原受体αⅡβ3识别,其还具有抑制ADP诱导的血小板聚集的作用。因此,去整合素可运用于与细胞黏附相关的疾病研究领域,如血管新生、肿瘤转移、血栓症等。关于去整合素的功能研究,国内外已有的相关报道为:台湾的Rhodostomin[1]和Accutin[2]、韩国的Salmosin[3,4]和Saxatilin[5]、美国的Contortrostatin[6]等,这些取自于蛇毒的去整合素均具有抑制血管新生与肿瘤转移,抑制血小板聚集等功效[1-9]。 整合素为一细胞表面受体的异源二聚体家族,是一组跨膜糖蛋白。迄今为止,已知有18种不同的α亚基和8种不同的β亚基组成至少24种的异源二聚体[10-12]。α及β亚基的N末端(胞外端)共同构成配体结合位点。因为大部分细胞整合素都识别RGD氨基酸顺序,而大多数ECM蛋白都含有RGD顺序,所以RGD序列已被公认为是ECM成分与细胞整合素结合的位点[13]。整合素胞内部分较短,但可以通过α-辅肌动蛋白(α-actinin)、踝蛋白(talin)和粘着斑蛋白(vinculin)与细胞骨架相连。整合素主要介导细胞之间及细胞与ECM之间的黏附,并介导细胞与ECM之间的双向信号传导,对细胞的黏附,增殖,分化,转移,调亡起到重要的调控作用,在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用[14]。 目前本实验室已经从产于中国旅顺的白眉蝮蛇(Gloydius blomhohffibrevicaudus)毒腺中提取总RNA,利用自行设计的引物进行RT-PCR扩增,获得了219bp的白眉蝮蛇去整合素基因。测序结果显示,其与韩国的蝮蛇去整合素的saxatilin的同源性最高:DNA序列同源性为95.8%,蛋白质序列同源性为91.8%,且蛋白质中含有去整合素的特征模体RGD及12个半胱氨酸。本研究室将此去整合素基因进行克隆、转化与诱导后,得到了该蛋白的可溶性高效表达。经组氨酸亲和层析纯化,获得了分子量为9kD的均质蛋白,将其命名为rAdinbitor。通过实验证明,rAdinbitor能够有效的抑制血小板的聚集,对肿瘤细胞转移,浸润和增殖也有明显的抑制作用。 为了近一步比较白眉蝮蛇蛇毒中去整合素和rAdinbitor在结构、功能方面的差同,完善本试验室对蛇毒去整合素的制备工艺,本试验尝试从旅顺产白眉蝮蛇蛇毒中进行去整合素的分离和纯化。主要做了如下工作: 1)利用凝胶过滤与反相高效液相色谱对旅顺产白眉蝮蛇蛇毒去整合素进行纯化,通过血小板凝集抑制试验对各洗脱组分进行活性鉴定以确定去整合素所在组分。实验结果表明,通过串联凝胶过滤和反相高效液相色谱,得到了分离纯化的白眉蝮蛇去整合素。Tricine SDS-PAGE电泳后银染,呈现出两条清晰、分离的蛋白条带,分子量分别为12kD和17kD。 2)利用凝胶过滤和离子交换层析对旅顺白眉蝮蛇去整合素进行纯化,通过血小板凝集抑制试验对各洗脱组分进行活性鉴定确定去整合素所在组分。实验结果表明,通过串联凝胶过滤和离子交换层析对旅顺白眉蝮蛇去整合素进行了部分纯化。Tricine SDS-PAGE后的银染结果显示了7条蛋白条带。并且,在预计的白眉蝮蛇去整合素可能出现的分子量范围存在2条未完全分开的蛋白条带。 总之,本实验通过对层析方法和条件的摸索、优化,最终确定了以串联凝胶过滤以及反相高效液相色谱对旅顺产白眉蝮蛇蛇毒中去整合素分离的方法。并得到两条清晰,分离的蛋白条带。为以后结构测定、生物活性的研究打下了基础。
[硕士论文] 任莉红
生物化工 烟台大学 2008(学位年度)
摘要:为解决新月菱形藻大规模培养过程中存在着培养密度低、容易污染和操作条件难控制等技术难题,本文从新月菱形藻培养基配方优化入手,对新月菱形藻在平板式光生物反应器中的生长特性进行了研究,并在流加和半连续培养模式下考察了不同培养方式下细胞生物量、胞内多糖和蛋白质含量的变化,获得了以下主要结果:
   ⑴利用正交实验的方法获得了新月菱形藻培养基中常量元素与微量元素的优化配方:NaNO3 300 mg/L、NaH2PO4 25mg/L、NaHCO3 500 mg/L、Na2SiO3 100 mg/L、Mn2+0.80 μmol·L-1、Cu2+0.08 μmol·L-1、Zn2+0.10 μmol·L-1、Mo6+0.02 μmol·L-1、Co2+0.004 μmol·L-1,并添加f/2维生素。与f/2配方相比,利用该配方细胞生物量的产量可提高约200[%]。
   ⑵在平板式光生物反应器中,对新月菱形藻的生长特性进行了考察。建立了新月菱形藻的光衰减模型,并推导了平板式光生物反应器平均光强公式。对光径为30 mm、50 mmm和100 mm平板式光生物反应器的Eavg/E进行比较发现,光径为30 mm的平板反应器具有较高的光利用率;30 mm平板反应器中收获的微藻生物量约为100mm平板反应器的3倍。
   ⑶为探讨更新率、更新周期与藻细胞的生长代谢及氮、磷营养盐的利用之间的关系,在平板式光生物反应器中对新月菱形藻进行了半连续培养。结果表明更新率与总采收量之间呈抛物线关系。当更新率为33[%]时,细胞的最大采收量达到了2.11×1012 cell;当更新率为33[%],更新周期为1d时,细胞的总采收量可进一步提高到3.12×1012 cell。培养液中氮和磷的平均含量随更新率的增大而上升;随更新周期的延长而下降。当更新率为10[%]时,细胞内的蛋白质平均含量最高;当更新率为23[%]时,细胞内多糖的平均含量最大。综合考虑各生长指标,新月菱形藻光生物反应器半连续培养的适宜条件是更新率和更新周期分别为33[%]和1天。
   ⑷应用流加培养技术对新月菱形藻分别进行了分批培养、恒速流加培养及变速流加培养。结果表明,流加方式对新月菱形藻的生长、细胞内蛋白质和多糖产量有显著影响。恒速流加培养10d的细胞密度、细胞内蛋白质和多糖的含量分别为1.901×107cell·mL-1,42.82 mg·L-1和95.68 mg·L-1,分别是分批培养的2.29倍、1.60倍和2.15倍。在变速流加培养中,当流加控制因子K=0.167时,细胞密度、细胞内蛋白质和多糖的含量分别是分批培养的4.83倍、6.23倍和6.12倍。
[硕士论文] 李宏伟
生物化工 厦门大学 2007(学位年度)
摘要:本研究探讨了氮源、碳源、葡萄糖浓度、温度、以及初始pH值对产酸克雷伯氏菌HP1产氢的影响。单因子实验结果表明:碳源对产氢量的影响远远大于氮源,综合考虑确定以硫酸铵(2g/L)和蛋白胨(1g/L)为氮源,葡萄糖为最适碳源;培养转速选择为100r/min。然后通过正交实验确定:葡萄糖浓度10g/L,初始pH8.0,温度37℃为最优组合。实验结果表明,产酸克雷伯氏菌HP1在14h内产氢量达到1.16 L/L。 琼脂,海藻酸盐,明胶,PVA—硼酸均能很好地将细胞固定在载体之中,达到截留的目的。其中海藻酸钙固定化方法较为温和,有良好的生物相容性,而且能很好地保持细胞的产氢活性。磷酸盐体系和柠檬酸盐体系做缓冲盐,海藻酸钙凝胶解体,而Tris做缓冲盐,海藻酸钙凝胶球没有破碎,因此Tris比较适合作凝胶球固定化培养的缓冲盐。通过实验确定,最适宜浓度为5g/L。 产酸克雷伯氏菌HP1的最佳固定产氢温度与游离产氢最适温度相同,但最佳固定化产氢pH与游离产氢最适pH不相同,这主要是因为用Tris代替KEHPO4—NaH2PO4缓冲体系。固定化产氢实验表明,固定产氢初始pH值为9.0,温度37℃,转速在150 r/min时,产氢效果最好。 控制起始pH值为8.0,葡萄糖浓度为10 g/L,控制水力停留时间为2h,反应温度37℃,实验结果表明,海藻酸钙凝胶球连续产氢平均产氢速率达到33.8mmol/L·h,连续产氢7天。
[硕士论文] 邱炜
生物化工 天津大学 2007(学位年度)
摘要:反胶团萃取技术在生物活性物质如蛋白质的分离领域被广泛的应用与研究。但传统的离子型反胶团在萃取过程中往往对蛋白质选择性低,并且与蛋白质之间作用力过强而使蛋白质失活。带有色素亲和配基(辛巴蓝,CB)的非离子型反胶团解决了蛋白质与反胶团作用力过强而变性的问题,但是对离子强度和高浓度的变性剂耐受力差。因此本文研制出新型金属螯合亲和非离子反胶团系统,并对影响此反胶团系统的条件如pH,离子强度等进行了分析研究。最后,利用此反胶团对蛋白质萃取进行了初步的探索。 通过双液相合成的方法将非离子型表面活性剂(Span85)分子结合螯合剂TED(三羧甲基乙二胺),通过螯合作用连接金属配基(Cu2+),并以正己烷为溶剂制备出Span85-TED-Cu金属螯合亲和反胶团。利用水份测定仪和粒径测定仪对亲和反胶团的性质进行了研究。结果表明,随着金属配基Cu2+的引入,Span85-TED-Cu反胶团的含水率(W0),反胶团粒径(Z-average size)均比Span85反胶团有显著的提高。Span85-TED-Cu反胶团能够在较宽的pH范围(5~9),较大的离子强度(0.5mol/L)以及高浓度的变性剂(8mol/L Urea)条件下保持含水率不变。 对Span85-TED-Cu反胶团萃取蛋白质进行初探。研究表明,反胶团萃取蛋白质受到表面活性剂浓度、金属配基浓度以及助剂(醇)的影响,但可耐受宽pH范围、较高离子强度以及高浓度的变性剂。萃取牛血红蛋白(BH)时,萃取率 E 达到70%。助剂的加入可以增加反胶团对蛋白质的萃取率,但会影响蛋白质在反胶团相的稳定存在,使蛋白质沉积于相界面,不利于蛋白质的复性。
[硕士论文] 梅晶晶
生物化学与分子生物学 南京师范大学 2006(学位年度)
摘要:人B淋巴细胞刺激因子(hBAFF)是一种B淋巴细胞的共刺激因子,属TNF超家族成员。本文一方面利用巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)这一真核表达系统成功构建、表达了hBAFF蛋白;同时对毕赤酵母分泌表达得到的hBAFF进行SDS-PAGE、Western blotting、ELISA等方面的检测。另一方面将hBAFF基因通过柔性臂(Gly<,4>Ser)<,2>与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)相连,通过大肠杆菌(E.coli)表达系统进行融合蛋白的表达;并对表达蛋白做Western blotting、荧光及B淋巴细胞增殖的活性测定。实验设计及结果如下: 1 EGFP-hBAFF融合蛋白的表达纯化及活性测定 将人B淋巴细胞刺激因子和增强型绿色荧光蛋白通过(Gly<,4>Ser)<,2>linker相连接,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白EGFP-hBAFF;并对该蛋白进行Ni<'2+>-IDA亲和层析柱纯化,纯化的蛋白经检测具有EGFP的荧光活性和hBAFF的B淋巴细胞增殖活性。 2 hBAFF在毕赤酵母中的表达及产物鉴定 克隆得到hBAFF基因与穿梭载体pPIC9连接得到pPIC9-hBAFF重组质粒,线性化后电转酵母菌GSll5中,挑选出阳性重组子进行诱导表达;并对表达条件优化,表达产物进行Western blotting、ELISA方面的检测。结果表明,当甲醇浓度为1%、诱导时间为72h、温度为20℃时hBAFF蛋白表达量最高。
[硕士论文] 全艳玲
生物化学与分子生物学 东北师范大学 2006(学位年度)
摘要:本实验采集鞍山地区的黄伞,选育出生产能力旺盛、保健功能明显的菌种,进行各级菌种培养,研究一级菌种培养基、二级菌种培养基、摇瓶发酵培养基和栽培料配方,探索菌丝体、子实体生长条件。优化菌种的培养条件。以种子培养基为基础培养基,通过培养基成分对菌丝体生物量影响的实验,优化培养基,依次筛选较好的碳源、氮源、生长因子及培养基的初始PH,用于液体培养菌丝体和子实体生产。采用热水浸提法提取黄伞多糖,乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白质,活性炭脱色,透析除去小分子物质,用子实体、菌丝体分离出乳白色黄伞多糖。 适宜的母种培养基组成为马铃薯10%,柳木屑5%,胡萝卜10%,葡萄糖2%,蛋白胨1%,磷酸二氢钾0.2%,硫酸镁0.1%。最适摇瓶培养条件为:培养温度25℃、摇床转速160r/min,Ph值5-7,装液量200ml/500ml、培养时间9d。栽培种培养基为阔叶木屑、柳木屑、麸皮、米糠、石膏,菌丝体培养温度:25℃,子实体温度15-18℃,需要通气,散射光。
[硕士论文] 陈艳
生物化学与分子生物学 东北师范大学 2006(学位年度)
摘要:疟疾是现代世界卫生方面的突出问题,也是流行最广、危害最大的疾病之一。经过不懈的努力,我国疟疾防治工作已取得显著成效。但近些年,又有许多耐药疟原虫不断出现,使得抗疟药物的研究变得非常紧迫。 糖苷生物碱作为天然产物属于糖苷类化合物中的一种,是植物代谢过程产生的一类自身保护性产物,来抵抗病毒、细菌、真菌、昆虫和动物等侵袭。许多茄属植物可用于民间治疗药物,已经发现多种糖苷类化合物能够有效抗疟,最近又发现糖苷生物碱可以作为抗疟疫苗的免疫佐剂,因此推测糖苷生物碱,可能具有抗疟作用。本试验从马铃薯和龙葵中提取、分离及纯化的茄碱(α-solanine)、卡茄碱(α-chaconine)、番茄碱(tomatidine)、茄边碱(solasonine)、澳洲茄边碱(solamargine)做抗疟活性测定。另外对chaconine与6位硫酸化后的6-O-sulfated-chaconine进行抗疟活性比较,研究它们在抗疟活性上的构效关系,进而分析糖苷生物碱抗疟活性与结构之间的关系。 本论文的结果如下:1.chaconine抗疟作用的半数抑制率(ED50)为4.49mg/kg,说明此药物具有相对的研究价值。 2.比较了五种糖苷生物碱的抗疟作用,抗疟作用由强到弱依次为:α-chaconine、α-tomatine、α-solamagine、α-solasonineandα-solanine。证明糖苷生物碱的活性主要与糖链有关;又进一步证实chaconine与solanine的糖链—卡茄三糖结构活性强于茄三糖结构;实验中推测tomatine含有的四糖高于其他含有三糖的活性;由于三糖与四糖的糖苷生物碱的空间结构不同,因此糖苷生物碱的活性可能还要与其结构等其他方面原因有关。 3.chaconine与6位硫酸化后的6-O-sulfated-chaconine的抗疟作用比较,由于6-O-sulfated-chaconine无明显抗疟作用,说明D-glucose的6位羟基是其主要活性部位。 4.chaconine与solanine混合物的抗疟作用。chaconine与solanine1:1混合物(3.75+3.75mg/kg)的抗疟活性低于单个低剂量(3.75mg/kg)的chaconine与solanine抑制率的和,表现为拮抗作用。
[硕士论文] 刘艳阳
农业生物环境与能源工程 吉林农业大学 2005(学位年度)
摘要:生物质转化技术可分为生物法和热化学转化法,后者主要有气化、热解、高压液化等工艺。其中生物质热裂解液化由于比气化能得到更有价值的液体产物,因而作为一项生物质能资源开发利用的新技术日益受到重视。 本研究结合吉林农业大学主持的吉林省科技厅资助项目:“生物质热裂解制取生物油技术”(课题编号:20000320),利用自行设计研制的以流化床反应器为主体的生物质热裂解制取生物油系统进行了生物质热裂解制取生物油的试验研究。 本文阐述了生物质能源的特点及生物质能利用技术,详细总结了国内外生物质热裂解制取生物油的研究现状,对几种典型的生物质热裂解的装置进行了介绍和性能的对比分析。 以红松、白松、落叶松、楸木等不同木屑为原料,利用自行设计研制的以流化床反应器为主体的生物质热裂解制取生物油系统进行了快速热裂解试验,获得的最高生物油产率达63.8%;在对生物质的热裂解制取生物油进行全面试验研究的基础上,得出了生物质快速热裂解过程中反应温度、原料颗粒粒径、给料速率等主要参数对生物油产率的影响规律,并分析了这些因素的影响机理,为今后生物质热裂解制取生物油技术的应用奠定了基础。试验结果表明:较高的温度和较长的停留时间会降低油的产率,生成过多的不可凝气体;过低的温度和加热速率导致严重的炭化,同样会降低油的产率。红松、白松、落叶松、楸木木屑的最高生物油产率分别为:42.7%、36.1%、51.6%、63.8%。其中,楸木木屑在反应温度为500℃、粒径为0.47~0.67mm、给料速率为20.14kg/h的条件下产油率达到最高值。生物油物理特性和成分分析的结果表明:红松木屑制取的生物油品质最好,热值高、含水率低,更适合进一步的改性研究和应用。 通过试验研究的实际运行过程中遇到的问题,对所自行研制的试验设备的关键部件的工作原理、结构和性能进行了详细评价,提出了该试验设备的不足之处和改进方案,为今后设计研制适合我国国情的同类设备及进一步放大提供指导。 我国在生物质热裂解制取生物油方面的研究起步较晚,至今还没有生物质热裂解制取生物油商业生产的报导,国外已经有很多机构将生物质热裂解制取生物油技术进行商业化生产。本文最后介绍了国内外所进行的生物油的改性研究,讨论了生物质热裂解制取生物油技术的应用前景。
[硕士论文] 王晓艳
农业生物环境与能源工程 吉林农业大学 2005(学位年度)
摘要:本文详细归纳了国外及我国生物质热裂解制取生物油技术的研究现状,并且对国内外关于生物油组成成分的研究现状进行了系统地总结。从可持续发展的观点来看,生物质热裂解制取生物油技术有良好的发展前景。 对生物质原料的散粒体特性进行了分析,主要包括原料的粒径、堆积密度和休止角。生物质原料的散粒体特性对流化床反应器以及整个装置系统的设计都是非常必要的,它们也是生物质热裂解实验研究过程中的重要影响因素。采用范式洗涤纤维法对不同种类生物质原料的组成成分进行了测定。 利用现代精密仪器对试验所制取的生物油进行物理特性分析,主要包括生物油的密度、pH值、粘度和热值,并进行了相关方面的对比分析;利用现行组分分析的先进分析方法GC-MS对生物油的组分进行了分析,比较了不同工况条件下和不同原料所生成生物油成分的组成情况。通过生物油的成分分析解释了生物油高含氧和高含水特性。另外,根据生物油的成分分析可以确定出品质好、产油率高的生物油,为生物质快速热裂解制取生物油技术试验参数的确定提供可靠的数据。 为了优化生物油的产量和品质,本文结合国外在这方面已取得的一些成果,从定性上对相关生物质原料化学组成成分的热裂解反应机理做了粗略的探讨。 总之,有关生物质热裂解制取生物油方面的这些基础性研究,为生物质热裂解技术提供了第一手数据,对现有生物质热解装置的设计、试验工况参数的优化、产物的预测以及试验设备的扩大化等都具有非常重要的意义。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部