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[博士论文] 王志芳
内科学(内分泌学) 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 骨质疏松认识率、筛查率和治疗率现状调查及影响因素分析
  背景:
  目前骨质疏松症(Osteoporosis,OP)已经成为一个世界范围的、主要的、不断增长的健康问题,发病率较高。据IOF统计,目前全世界骨质疏松症患者约2亿,其中80%为绝经后妇女。据调查目前中国已有骨质疏松症病人约9000万人。骨质疏松症危害巨大,骨质疏松性骨折造成致残率、致死率升高,不仅严重影响患者生活质量,而且还带来了复杂的护理、医疗问题,需要投入巨大的人力和物力,费用高昂,造成沉重的家庭、社会和经济负担。近年来随着人们对骨质疏松症重视程度的提高,越来越多的国家和地区进行了骨质疏松相关流行病学调查。中国亦先后有多个省市进行了骨质疏松流行情况调查。但是这些调查多以骨质疏松症患病情况及相关影响因素分析为主,而缺乏群众对骨质疏松认识、筛查、治疗情况及影响因素的分析,这些问题也非常值得去研究。
  河南省作为人口大省,目前尚无针对河南人群的大规模骨质疏松相关流行病学调查,仅有关于南阳及郑州的小样本的地区性调查,且无大样本量的关于群众对骨质疏松认识、筛查及治疗情况。骨质疏松发病率高,危害性大,因此除了了解其患病率及影响因素外,了解广大群众对该疾病的认识、筛查、治疗情况及相关影响因素,积极教育及干预,提高广大群众对该疾病的认识、筛查及治疗率,对预防及治疗骨质疏松,防止骨质疏松性骨折,提高生活质量具有重大的意义。
  目的:
  通过调查郑州大学第一附属医院住院患者骨质疏松认识率、筛查率、治疗率现状,探讨其相关影响因素,从而初步了解河南省成人对骨质疏松症认识、筛查、治疗现状及其影响因素。并积极教育及干预,提高广大群众对该疾病的认识、筛查及治疗,积极预防及治疗骨质疏松,防止骨质疏松性骨折,提高患者生活质量,节省医疗开支。
  方法:
  对郑州大学第一附属医院2016.7.1~2016.7.7日的住院患者6902人(其中不包括18岁以下者,精神异常、意识不清等不能正确客观完成问卷者及拒绝参加调查者)进行调查。采用问卷调查、体格检查及实验室检查方法。了解该人群对骨质疏松认识情况,骨质疏松筛查率、治疗率及影响因素分析。
  结果:
  1.本次调查共纳入住院患者6902人。骨质疏松的总认识率为50.9%。骨质疏松高风险人群(一分钟测试题阳性者)比例50.1%。
  2.多因素分析结果显示,城镇人口认识骨质疏松的可能性是农村人口的1.525倍(OR=1.525,95%CI:1.356,1.715)。小学及以下文化程度较大专及以上文化程度认识骨质疏松的可能性较低(OR=0.373,95%CI:0.314,0.444)。
  结论:
  1.与其他研究相比,本研究中骨质疏松认识率较高、骨质疏松高风险人群骨质疏松筛查率较低,骨质疏松患者治疗率较高。
  2.城镇、文化程度增高、一分钟测试题阳性、合并高血压、糖尿病、血脂异常者骨质疏松的认识率更高。
  3.年龄增加、城镇、文化程度增高、脑力劳动者及未就业者、合并高血压、血脂异常者更易接受骨质疏松筛查。
  4.脑力劳动者及未就业人员较体力劳动者骨质疏松治疗率更高。
  第二部分 糖尿病知晓率、治疗率和控制率现状调查及影响因素分析
  背景:
  糖尿病目前已经成为中国一个重要的公共卫生问题。2010年流行病学调查显示,我国成人糖尿病的总患病率已经达到11.6%。而糖尿病危害巨大,目前研究已经证实,长期的高血糖刺激可以引起眼睛、肾脏以及心脑血管疾病等并发症,严重影响患者生活质量,甚至危及生命,同时提高了医疗开支。此外,最近研究报道显示,糖尿病是一种致肿瘤的危险因素。近年来随着糖尿病患病率的增高,人们对糖尿病重视程度越来越高,越来越多的国家和地区均进行了糖尿病流行情况调查。结果显示糖尿病患病率较高,但患者知晓率、治疗率及达标率均较低。而研究表明改善血糖控制是预防糖尿病并发症的关键。中国目前拥有世界上最多的糖尿病患病人口,而河南作为中国的人口大省,糖尿病患者的糖尿病知晓、控制及治疗情况也可能堪忧。因此我们非常有必要了解河南省糖尿病患病人群对糖尿病知晓、治疗、控制情况及相关影响因素,积极干预,对提高糖尿病患者血糖达标率,减少并发症发生有重大意义。
  目的:
  调查郑州大学第一附属医院住院患者中糖尿病患者糖尿病知晓率、治疗率及控制率现状,探讨其相关影响因素,从而初步了解河南省成人对糖尿病的知晓、治疗、控制情况及其影响因素。积极干预,提高糖尿病的知晓、治疗及控制水平,预防及延缓糖尿病并发症的发生,进一步节省医疗开支。
  方法:
  以被调查的6902人中患糖尿病的2001人为研究对象。采用问卷调查、体格检查及实验室检查方法。了解该人群对糖尿病知晓率、治疗率、达标率及影响因素分析。对不同组间糖尿病知晓率、治疗率及控制率的比较采用卡方检验。采用Logistic回归法分别分析不同组间糖尿病知晓率、治疗率及控制率的影响因素。P<0.05差异为有统计学意义。
  结果:
  1.本研究被调查的6902人中,2001人患糖尿病,即本研究中糖尿病的患病率为29.0%。糖尿病患者中糖尿病知晓率为49.5%,治疗率为33.3%,糖尿病治
  疗者中血糖控制率为47.9%。
  2.多因素分析结果显示,女性更不易知道自己患糖尿病(OR=0.734,95%CI:0.561,0.960)。
  结论:
  1.本研究中糖尿病知晓率、治疗率及治疗控制率均高于2010年全国调查,但较发达国家仍低。而与我国其他省市相比,知晓率、治疗率均较低,但控制率稍高。
  2.男性、年龄增加、锻炼身体者、素食为主者、饮食咸淡适中者、一分钟测试题阳性、合并高血压、血脂异常者更易知晓患糖尿病。
  3.年龄增加、锻炼身体、饮食荤素搭配咸淡适中者、一分钟测试题阳性、合并高血压和糖尿病者治疗糖尿病的可能性更高。
  4.已婚者、锻炼身体者、荤素搭配者糖尿病控制达标的可能性更高,而有糖尿病家族史者糖尿病控制达标的可能性更低。
  第三部分 血脂异常知晓率、治疗率和控制率现状调查及影响因素分析
  背景:
  随着经济的发展,人民生活水平的提高和寿命的延长,慢性非传染性疾病目前已经成为困扰人民健康,增加死亡率和医疗开支的重要原因之一。血脂异常作为慢性非传染性疾病中的比较常见的一种,其危害同样巨大。血脂异常可引起动脉粥样硬化,从而引发心血管疾病。而目前在我国,总死亡原因中的41%为心血管疾病所造成的,即因心血管疾病所造成的死亡已经成为引起我国居民死亡的第一大原因。
  目前关于血脂异常的研究虽多,但多集中在其危害、患病及治疗药物情况,对于血脂异常者的知晓、治疗及控制情况国内外报道均较少。仅少数省市进行
  过相关的研究。河南省做为人口大省,目前尚无大规模关于血脂异常相关流行病学调查,且无关于群众对血脂异常知晓、治疗及控制情况的调查。血脂异常患病率高,危害性大,且知晓率、治疗率及控制率低下,我们非常有必要了解本省血脂异常患者知晓、治疗、控制情况及相关影响因素,积极普及教育,提高广大群众对该疾病的认识,治疗及控制,预防血脂异常及其进而引发的心血管疾病,提高生活质量,节省医疗开支。
  目的:
  调查郑州大学第一附属医院住院患者中血脂异常者血脂异常知晓率、治疗率及控制率现状,探讨其相关影响因素,从而初步了解河南省成人对血脂异常的知晓、治疗、控制情况及其影响因素。积极干预,提高血脂异常的知晓、治疗及控制水平,预防其危害,进一步节省医疗开支。
  方法:
  以被调查的6902人中存在血脂异常的4186人为研究对象。采用问卷调查、体格检查及实验室检查方法。了解该人群对血脂异常知晓率、治疗率、控制率及影响因素分析。对不同组间血脂异常知晓率、治疗率及控制率的比较采用卡方检验。
  结果:
  1.本研究中被调查的6902人中,4186人存在血脂异常,即本研究中血脂异常的患病率为60.6%。血脂异常者中血脂异常知晓率为25.0%,治疗率为17.4%,血脂异常治疗者中血脂控制率为52.3%。
  2.血脂异常知晓率方面,多因素分析结果显示,城镇居民更易知晓自己患血脂异常。与18-39岁相比,70-79岁组更易知道自己患血脂异常。脑力劳动者
  比体力劳动者更易知晓自己患血脂异常。饮食荤食为主者比荤素搭配者更易知晓自己患血脂异常。饮食咸淡适中者比饮食偏咸及偏淡者知晓自己患血脂异常的可能性更高。
  结论:
  1.本研究中血脂异常患病率高于全国和其他省市调查的患病率。知晓率、治疗率及治疗控制率均高于2002年及2010年全国调查水平和吉林省调查水平,但较美国等发达国家仍低。而与我国其他省市相比,知晓率、治疗率较大部分省市偏低,但治疗控制率则相对偏高。
  2.年龄增加、脑力劳动者、荤食为主者、饮食咸淡适中者、合并糖尿病及有血脂异常家族史者知晓患血脂异常的可能性更高。
  3.年龄增加、脑力劳动者、从不锻炼身体者、饮食荤素搭配者、饮食咸淡适中者、合并糖尿病及有血脂异常家族史者接受调脂治疗的可能性均更高。
  4.年龄增加、脑力劳动者、经常锻炼身体者血脂控制达标的可能性更高。合并糖尿病者血脂控制达标的可能性更低。
[硕士论文] 张永利
医学影像与核医学 上海交通大学 2016(学位年度)
摘要:目的:分析氟骨症患者和染氟兔椎体 MRI信号强度及其与椎板和椎体骨形态计量参数的相关性,证明骨髓造血细胞为影响椎体信号强度的因素,为基于椎体信号强度评价氟骨症的骨髓增生及其早期诊断的实用性提供依据。
  材料和方法:回顾分析109例(男性57例,女性52例;年龄32-80岁,平均51岁)氟骨症脊柱MRI和X线表现,其中获36例椎板骨组织样本。另外选择109例(男57例,女52例;年龄34-80,平均51岁)来自非地方性氟中毒流行地区的脊柱MRI作为对照病例,对氟骨症患者椎板骨形态计量参数与信号强度的关系进行研究。选择3月龄新西兰白兔,分析24例染氟开始、90天、180天(染氟途径为饮用水,氟含量为100mg/L)腰椎MRI的信号强度及其与椎体骨形态计量参数的关系,并与8例对照组比较(饮用水氟含量<0.9mg/L),证明椎体骨形态计量参数改变对信号强度的影响。
  结果:109例氟骨症患者的脊柱X-线片有骨硬化征象者77例(77/109,70.6%),骨质疏松29例(29/109,26.6%),正常骨质3例(3/109,2.8%)。MRI的T1加权成像(T1WI)显示椎体为低信号25例(25/109,22.9%),等信号52例(52/109,47.7%),高信号32例(32/109,29.4%);短时反转恢复序列(STIR)显示椎体为低信号104例(104/109,95.4%),等信号有或无局灶性高信号5例(5/109,4.6%)。对椎体T1WI、T2加权成像(T2WI)、STIR信噪比(SNR)分析发现氟骨症低于对照组,配对t检验显示差异均有统计学意义(P<0.05)。依椎体T1WI低信号诊断骨硬化有6.0倍的优势比(OR=6.041,95% CI2.44-14.91,P<0.001)。对36例椎板骨形态计量分析发现平均骨髓造血细胞容积占骨髓组织的78.3%,依骨髓增生诊断标准氟骨症患者有较活跃的骨髓增生(诊断标准:造血细胞容积占骨髓组织的41%~60%为骨髓增生正常,61%~80%为增生较活跃,81%~100%为增生极度活跃)。该36例的T1WI显示椎体为低信号11例(11/36,30.6%),等信号15例(15/36,41.7%),高信号10例(10/36,27.8%)。椎板骨组织形态计量分析显示低信号组的造血细胞容积占骨髓组织的92.3%,为骨髓增生极度活跃;等信号组占79.4%,为增生较活跃;高信号组占61.1%,接近骨髓增生正常。方差分析显示三组之间差异有统计学意义(F=66.849,P<0.001)。Pearson相关性检验显示造血细胞与T1WI呈负相关(r=-0.940,P<0.001),与STIR无相关性(r=-0.262,P=0.123)。36例有椎板组织样本患者中发现 X-线片有骨硬化征象者23例(23/36,63.9%),骨质疏松者13例(13/36,36.1%)。椎板骨形态计量分析显示骨硬化者的造血细胞容积平均值(84.2±9.6%)明显高于骨质疏松(69.5±10.9%),两样本t检验显示差异有统计学意义(t=3.839,P=0.003)。依T1WI低信号诊断骨髓增生的敏感度和特异度分别是100%和60%,诊断骨髓增生极度活跃的优势比是等和高信号的5.0倍(OR=5.0,95% CI2.283-10.951,P<0.001)。动物实验证明染氟组椎体T1WI的SNR(7.6±2.4)低于对照组(12.2±2.0),两样本t检验显示差异有统计学意义(t=4.874,P<0.001);STIR SNR染氟组(5.2±1.6)高于对照组(3.0±0.2),两样本t检验显示差异有统计学意义(t=6.238,P<0.001)。椎体骨形态计量分析发现染氟组骨髓造血细胞容积(58.9±11.4)高于对照组(45.1±6.3),两样本t检验显示差异有统计学意义(t=3.241,P=0.003)。Pearson相关性检验显示造血细胞与T1WI呈负相关(r=-0.763,P<0.001),而与STIR呈正相关(r=0.517,P=0.001)。依椎体T1WI信号减低和STIR信号增高诊断动物实验的骨髓氟中毒,诊断统计学提示 T1WI的敏感度最高(96%),STIR的特异度最高(100%)。
  结论:氟骨症患者和动物实验的骨髓造血细胞均增加,依MRI信号强度可无创性判定氟骨症患者的骨髓增生和动物实验的骨髓氟中毒,但最终诊断仍需骨髓穿刺或活检病理学证实。氟骨症患者椎体的T1WI和STIR信号均减低,而动物实验椎体T1WI信号减低,STIR信号增加。提示动物实验的MRI表现可能为早期氟骨症征象,但需对骨小梁类骨质的定量及骨髓微环境对成骨细胞和破骨细胞调节的基础研究证实。
[博士论文] 冯博
中西医结合临床 中国中医科学院 2015(学位年度)
摘要:研究背景:
  我国是认识高原病最早的国家,国外对高原病认识起步较晚,但高原病的命名和分型比国内要早。国外慢性高原病病名只包括高原心脏病和高原红细胞增多,并无慢性高原衰退症的病名,也很少有这方面的科学研究。我国1995年提出慢性高原衰退症病名,但是相关的研究很少开展,目前对该疾病的认识基本停留在一些症状、病名探讨层面,甚少有关于发病机制、发病规律、临床特点、危险因素、治疗对策等深层次的研究,也无有效的防治对策。
  研究目的:
  本研究旨在通过采用流行病学调查的方法,从中医和西医两个角度阐明慢性高原衰退症的证候分布规律及临床特点和相关因素;通过开展临床研究阐明中药治疗本病的临床疗效;通过开展microRNA和mRNA联合分析研究,从基因层面探索本病的发病机制。
  研究方法:
  1.高原衰退症中医证候及相关因素研究
  采用流行病学调查的方法,纳入慢性高原衰退症患者722例,从中医和现代医学两个角度切入,一方面运用中医传统理论,研究慢性高原衰退症的证候分布特点和规律,为防治慢性高原衰退症中医防治提供原则和指导。另一方面,运用现代医学理化检查,研究慢性高原衰退症患者与正常人群高原相关的理化指标方面的差异,揭示慢性高原衰退症发病的临床特点及相关因素。
  2.中药治疗慢性高原衰退症(气虚血瘀证)的随机、双盲、安慰剂对照研究
  基于上述研究,选择慢性高原衰退症发病较常见的证型,开展中药防治慢性高原衰退症的随机、双盲、安慰剂对照的临床研究。
  3.慢性高原衰退症进行microRNA和mRNA联合分析研究
  运用分子生物学技术研究对慢性高原衰退症进行microRNA和mRNA联合分析研究,筛选差异基因交集,预测可能参与的信号通路,为进一步明确发病机制指明方向。
  研究结果:
  1.高原衰退症中医证候及相关因素研究
  慢性高原衰退症患者血常规指标中红细胞压积高于正常人群。多因素校正的logistic回归分析慢性高原衰退症相关危险因素,研究结果显示高海拔工作年限≥31年、急性高原病病史、高血压家族史、睡眠质量差、生活紧张、体育锻炼≥6小时可能是慢性高原衰退症发病的危险因素。
  慢性高原衰退症中医常见症状阳性比例占50%以上的症状依频次由高到低排列为:乏力(66.34%),健忘(61.63%),腰膝酸软(60.39%),气短(56.93%),神疲(56.23%)。被调查者舌质主要见舌质红、舌质淡白、舌质紫暗。常见的脉象为脉细、脉弦、脉虚。中医证候(八纲辨证)以两证相兼或三证相兼为主。被调查者中医证候(五脏辩证)分布以一证单见、两证相兼、三证相兼为主。因子分析显示其证型可辨证分为心脾两虚类证、心肾阴虚类证、肺肾气虚类证、肾阳虚类证、瘀血阻络类证、肝经湿热类证。聚类分析证型主要集中在心脾两虚兼挟痰湿证、肝郁脾虚证、心肾阴虚、肾阳虚证。
  2.中药治疗慢性高原衰退症(气虚血瘀证)的随机、双盲、安慰剂对照研究
  本研究纳入病例80例,分药物组38例,安慰剂对照42例。服药8周后,肺功能检测指标中,最大肺活量(VC MAX)、用力呼气一秒量比最大肺活量(FEVl/VC MAX)较服药前有显著改善;胸片检查中A/T比值较服药前有显著改善;服药8周后,药物组VEGF下降;服药4周后,药物组中医症状积分及西医症状积分均下降,服药8周后,药物组中医症状积分及西医症状积分继续下降。
  3.慢性高原衰退症进行microRNA和mRNA联合分析研究
  前期研究发现的高原病低氧相关基因未在本研究中得到验证,本研究发现13个差异基冈SLC25A25、KIAA1486、ANKFY1、ZEB2、CSMD3、RBM3、PCGF5、RAPH1、TNFRSF11B、EVI5、PBX1、GPRIN3、KCNJ10可能与慢性高原衰退症发生相关。慢性高原衰退症可能与肿瘤、干细胞多能性、胃酸分泌、受体间相互作用以及肿瘤细胞迁移通路相关。
  研究结论:
  1.慢性高原衰退症患者血常规指标中红细胞压积高于正常人群。高海拔工作年限、急性高原病病史、高血压家族史、睡眠质量差、生活紧张、体育锻炼≥6小时可能是慢性高原衰退症发病的危险因素。
  2.慢性高原衰退症中医常见症状阳性依次为乏力、健忘、腰膝酸软、气短、神疲。证候分布以两证相兼或三证相兼为主。病位主要以心、肺、肝、肾四脏虚损为主,证候以不同脏腑的气虚、血瘀、阴虚为主。
  3.中药治疗可改善慢性高原衰退症(气虚血瘀证)患者肺功能检测指标中最大肺活量、用力呼气一秒量比最大肺活量、胸片A/T比值、低氧因子VEGF,并有效改善中医症状积分及西医症状积分。
  4.前期研究发现的高原病低氧相关基因未在本研究中得到验证,本研究发现13个差异基因可能与慢性高原衰退症发生相关。慢性高原衰退症可能与肿瘤、干细胞多能性、胃酸分泌、受体间相互作用以及肿瘤细胞迁移通路相关。
[硕士论文] 永乐
公共卫生 贵阳医学院 2015(学位年度)
摘要:目的:探讨有机硒、二巯基丁二酸(DMSA)、海尔福口服液、强化SOD刺梨汁、银杏叶片治疗地方性砷中毒的确切疗效,为今后临床医师合理、规范用药提供科学证据,并为今后的地方性砷中毒药物治疗试验设计提供参考。
  方法:针对有机硒、二巯基丁二酸(DMSA)、海尔福口服液、强化 SOD刺梨汁、银杏叶片对地方性砷中毒的干预效果,收集自1990年以来国内外相关的文献进行系统评价,分别制定合理高效检索策略以及严格的纳入和排除标准,计算机全面检索CNKI(中国知网)、WANFANG(万方数据)、VIP(维普)、CBM(中国生物医学文献数据库)、CMCC(中国生物医学期刊文献数据库)、Pubmed、Ebsco、CENTRAL、OVID、Springer、Elsevier-Sciencedirect等中英文数据库。分别制定研究的质量评价标准,对临床试验参照Jadad量表进行质量评价;对动物试验参照Stair清单进行质量评价。由2名调查员独立评价所有纳入研究的质量并根据事先拟定的数据提取表提取数据。以尿砷、血砷、发砷、血液GSH、MDA含量及GSH-Px、GST、SOD活性、血清中的总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、胆碱酯酶(CHE)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、丙氨酸转移酶(ALT)、总胆红素(TBil)、结合胆红素(DBil)为干预的结局指标,使用Cochrane协作网提供的软件Revman5.3进行Meta分析,各试验间的异质性检验采用I2统计量检验。根据检验结果分别进行 Meta分析和描述性分析。
  结果:本次研究最终纳入文献28篇,其中10篇评价了有机硒对砷中毒患者的干预效果,Meta结果显示:有机硒治疗组与对照组 GSH-Px活性比较 SMD=1.57,95%CI[-0.24,3.39],Z=1.70,P=0.09,两组差异无统计学意义;两组 SOD活性比较 WMD=27.45,95%CI[6.47,48.42],Z=2.56,P=0.01,两组差异有统计学意义,结果表明补硒干预可有效提高血液中SOD活性;两组血清 MDA含量比较 WMD=-5.43,95%CI[-8.88,-1.97],Z=3.08,P=0.002,两组差异有统计学意义,表明补硒干预可有效降低血液中MDA的含量。两组尿砷含量比较WMD=-18.90,95%CI[-27.96,-9.85],Z=4.05,P<0.0001,两组差异有统计学意义,表明有机硒干预可有效降低尿液中砷离子的浓度;而两组血砷含量比较WMD=2.64,95%CI[-1.27,6.54],Z=1.32,P=0.19,两组差异无统计学意义;试验Yang2000结果显示有机硒治疗组患者发砷明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有2篇临床RCT试验评价了DMSA对患者尿砷的影响,DMSA治疗组尿砷明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。共有11篇文献评价了DMSA对砷中毒大鼠的干预效果,Meta分析结果显示:DMSA组与对照组血砷含量比较SMD=-3.57,95%CI[-4.94,-2.20],Z=5.11,P<0.00001,两组差异有统计学意义,结果表明 DMSA可有效降低大鼠血砷的含量;两组血液中GSH含量比较WMD=0.01,95%CI[0.01,0.02],Z=3.95,P<0.0001,差异有统计学意义,结果表明DMSA可使大鼠血液中GSH含量提高;两组血液MDA含量比较 SMD=-1.66,95%CI[-5.19,1.86],Z=0.93,P=0.35,差异无统计学意义; DMSA对大鼠 SOD、GSH-Px活力与对照组无显著性差异(P>0.05)。共纳入5篇文献评价了中药及天然活性成分对砷中毒患者的干预效果,对其进行定性分析,结果显示患者服用海尔福口服液后尿As含量在疗程末尾明显低于治疗前(P<0.05)。患者口服强化SOD刺梨汁后患者的尿As水平明显低于治疗前(P<0.05)。且患者的SOD、GSH-Px及GST活力较治疗前明显升高,MDA水平则明显降低(P<0.05),而丙氨酸转移酶(ALT)活性及总胆红素(TBil)、结合胆红素(DBil)水平在正常对照组及治疗前后皆无统计学差异(P>0.05)。患者口服银杏叶片治疗组治疗后血液SOD和GSH-Px活性较治疗前明显提高(P<0.01,P<0.05),而MDA含量较治疗前明显降低(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);银杏叶片治疗后患者血清中的TP、ALB含量及 CHE活性较治疗前显著升高,γ-GT活性则明显降低活性则明显降低(P<0.05);ALT、TBil及DBil3项指标在治疗前后未见明显变(P>0.05)。
  结论:有机硒具有明显的抗氧化作用,可明显改善患者皮肤损伤,并可降低患者尿液及头发中砷离子含量,可作为地方性砷中毒长期治疗药物;DMSA对砷中毒大鼠具有明显的排砷作用,可提升大鼠血液GSH含量,对其他抗氧化指标影响意义不大,抗氧化效果不明显,适用于地方性砷中毒的急性期治疗;有些中药及天然类药物具有一定的排砷、抗氧化及保护肝脏作用。可作为地方性砷中毒治疗的辅助药物。
[硕士论文] 郭秀琴
病理学与病理生理学 内蒙古医科大学 2015(学位年度)
摘要:目的:
  通过调查砷暴露人群的饮食习惯、健康状况和皮肤损害情况等多种因素,分析各种因素对人群健康状况的影响,同时检测其基因甲基化特性及其与亲代暴露史的相互作用,探讨砷暴露与健康因素的遗传关系以及表观遗传调控作为砷致癌机制的特异性,评价砷暴露对后代潜在的健康风险。
  方法:
  本研究以上世纪九十年代至今的跟踪数据为依据,采用横断面研究,整群抽取内蒙古巴彦淖尔市五原县砷病区及临近的非砷暴露地区302人为研究对象,参照《地方性砷中毒诊断标准》(WS/T211-2001)和《地方性砷中毒病区划分和临床诊断暂行规定》,确定暴露组215人,对照组87人,暴露人群病例组18人,暴露人群对照组197人。入户使用自行设计的《病例报告表》进行问卷调查,采集血液、尿样、颊粘膜细胞等样本。使用Qiagen DNA提取试剂盒提取DNA;通过紫外分光光度计法、脉冲场凝胶电泳、PicoGreen法定量DNA浓度;使用Illumina甲基化检测分析DNA甲基化程度。所有调查及检测结果,使用Epidata建立数据库,导入SAS(Statistics Analysis System)软件逻辑纠错后进行统计学分析。
  结果:
  1.暴露组与对照组人群砷暴露所致皮肤损害率分别为8.9%和1.4%,差异有统计学意义。暴露组与对照组在每月扁豆食用频率、平均每月梨子食用频率、平均每月动物肝脏食用频率、平均每月动物肾脏食用频率、平均每月松子食用频率、平均每月新鲜水果蔬菜食用量、蔬菜烹饪方式和睡眠质量等方面对比,P值分别为P=0.0303、P=0.0300、P=0.0062、P=0.004、P=0.0025、P=0.0071、P=0.0371和P=0.0442,P<0.05,差异均有统计学意义。
  2.暴露人群病例组与暴露人群对照组在平均每月蘑菇食用频率(P=0.0424)、平均每月动物肾脏食用频率(P=0.0243)、平均每月牛羊肉食用频率(P=0.0292)、平均每月干豆制品食用频率(P=0.0355)、是否患有胃炎(P=0.0310)、是否患有其他疾病(P=0.0476)、第一次来月经的年龄(P=0.0278)、绝经年龄(P=0.0461)和共生过多少个孩子(P=0.0325),各项检验结果均P<0.05,差异均有统计学意义。
  3.砷暴露所致健康损害多因素logistic回归分析显示,食用动物肾脏为健康的危险性因素(OR值为1.985,P=0.0185)食用干豆制品为健康的保护性因素(OR值为0.183,P=0.0263)。
  4.暴露组祖代、父代和孙代砷暴露所致皮肤损害例数与损害率分别为26、2、0和33.3%、2.4%、0,父代、孙代与祖代在砷暴露所致皮肤损害统计学上均有差异。
  结论:
  实施除砷改水工程可以有效提高地砷病病区人群健康水平,改水地区人群的健康效应仍需监控,人群皮肤损伤仍高于普通人群。诸多因素对改水效果产生影响,诸如饮食习惯、职业等,这种影响还体现在包括睡眠质量、绝经年龄、患有胃炎或患有其他疾病等多个方面。动物肾脏的摄入量对暴露人群是危险性因素,而干豆制品的食用是保护性因素。砷暴露的人群随着暴露时间的增加皮肤损伤增加,但代间是否有遗传因素的体现,仍待进一步研究。尚未发现砷暴露对人体DNA甲基化能力有明显影响,砷暴露祖代、父代与非砷暴露孙代之间,DNA甲基化能力无显著性差异,未来还需持续关注砷暴露对后代潜在的健康风险。
[硕士论文] 崔娜
流行病与卫生统计学 内蒙古医科大学 2015(学位年度)
摘要:目的:
  通过测定不同饮水砷浓度人群血液AhRmRNA和CYP1A1mRNA的表达水平,分析二者异常表达与砷引起的健康效应之间存在的潜在关系,并进一步探讨砷的致病机理。
  方法:
  本研究采用分子流行病学的方法,选取巴彦淖尔市砷病区作为研究现场,将在此居住十年以上的居民作为调查对象,根据饮水砷浓度分为四组,<10μg/L(对照组),10μg/L-(低剂量组),100μg/L-(中剂量组),≥200μg/L(高剂量组),性别、年龄分层后随机抽取233人作为研究对象,进行流行病学调查及相关临床检查,运用实时荧光定量RT-PCR技术,检测其血液中的AhRmRNA和CYP1A1mRNA的表达水平,分析不同砷暴露水平、不同流行病特征、不同疾病与AhRmRNA和CYP1A1mRNA的表达之间的关系。
  结果:
  1.长期砷暴露会导致AhRmRNA及CYP1A1mRNA的表达水平升高,高浓度组的二者表达水平升高具有统计学意义(P<0.05)。
  2.砷中毒的患病率随饮水砷浓度的升高而增加,AhRmRNA及CYP1A1mRNA的表达水平与砷中毒的患病情况的变化一致。
  3.随皮肤角化及色素脱失程度加深,AhRmRNA的表达量升高,差异有统计学意义(F=2.834、3.639,P<0.05);而CYP1A1mRNA的表达没有差异。
  4.研究发现,患Q-Tc期间延长及心律失常的人群的CYP1A1mRNA的表达水平较正常人群高(t值分别为-2.443、-2.212,P<0.05),而AhRmRNA的表达没有差异。
  5.随着患高血压的程度加重,AhRmRNA表达逐渐升高,而CYP1A1mRNA的表达水平却逐渐降低的状态。
  6.在砷暴露人群血液中发现AhR和CYP1A1蛋白均有表达,且AhR呈高表达状态。
  结论:
  慢性砷暴露可以不同程度的干扰人群AhRmRNA及CYP1A1mRNA的表达水平,反映了砷潜在的环境内分泌干扰效应。研究发现砷所引起的健康效应可能与AhRmRNA及CYP1A1mRNA的异常表达有关系;说明研究砷的环境内分泌干扰效应是了解砷的致病机理的有效途径。
[硕士论文] 刘建平
流行病与卫生统计学 内蒙古医科大学 2015(学位年度)
摘要:目的:
  本研究通过测定与分析不同饮水砷暴露人群血液HSP70 mRNA和HSP90 mRNA的表达情况,探讨HSP70 mRNA和HSP90 mRNA的表达与慢性砷暴露致机体健康影响之间的潜在关系,为砷的致病机理与毒作用机制提供依据。
  方法:
  本研究采用分子流行病学方法,整群抽取巴彦淖尔市砷病区的两个乡为研究现场,将在此居住十年及以上的居民为总调查对象,根据水砷浓度分为四组,<10ug/L(对照组)、10ug/L~(低剂量组)、100ug/L~(中剂量组)、200ug/L~(高剂量组),按性别分层后随机抽取了226人作为研究对象,进行流行病学调查及相关临床检查,运用实时荧光定量PCR技术,检测调查人群血液HSP70 mRNA和HSP90 mRNA的表达水平。
  结果:
  1.随砷暴露浓度的增加,人群患病率也随之增加,并呈剂量-反应关系(?2=15.940,P<0.01)。
  2.水砷浓度与调查对象的尿砷、指甲砷含量均呈正相关(P<0.05),HSP70 mRNA的表达与水砷、尿砷含量之间存在曲线回归关系,HSP90 mRNA的表达与水砷、尿砷、指甲砷之间均存在曲线回归关系。
  3.各组砷暴露人群血液HSP70 mRNA的表达均高于对照组,随砷暴露浓度的增高,低剂量、中剂量组人群血液HSP70 mRNA的表达逐渐上调,而高剂量组表达略有下降。中、高剂量组人群血液HSP70 mRNA的表达与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组与低、高剂量组间差异有统计学意义(P<0.05);男性人群血液HSP70 mRNA的表达略高于女性(P<0.05)。
  4.各组砷暴露人群血液HSP90 mRNA的表达均高于对照组,随着砷暴露浓度的增高,低剂量、中剂量组人群血液HSP90 mRNA的表达逐渐上调,而高剂量组表达明显下降。中剂量组人群血液HSP90 mRNA的表达与对照组比较有统计学差异(P<0.05),高剂量组与低、中剂量组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。
  5.对照组与低剂量组人群血清中均有HSP70、HSP90的蛋白表达,但HSP70表达量较低。
  6.对照组与慢性砷暴露人群各剂量组心律不齐的患病率依次为14.3%、10.9%、11.1%、17.6%,差异未见统计学意义(?2=1.589,P=0.660);各组Q-Tc间期延长的患病率分别为18.4%、28.3%、24.4%、35.3%,差异无统计学意义(?2=4.782,P=0.188);四组人群总高血压之间及各级高血压患病率的差异均无统计学意义(?2值分别为5.574、4.828,P值为0.134、0.572);高剂量组糖化血红蛋白含量高于中剂量组,且差异有统计学意义(P<0.05)。HSP70 mRNA及HSP90 mRNA的表达均在中剂量组明显升高,而砷诱导相关疾病的患病率在中剂量组均有降低的趋势。
  结论:
  慢性砷暴露对人群血液HSP70 mRNA与HSP90 mRNA的表达会产生一定程度的干扰,砷致相关健康损害与HSP70 mRNA及HSP90 mRNA的异常表达存在一定的联系,因此深入研究砷致健康损害与干扰HSP表达的途径及HSP在砷暴露人群体内的作用,可为砷的致病机理与毒作用机制提供依据。
[博士论文] 郝珂
生理学 浙江大学 2014(学位年度)
摘要:科学技术的发展和人类社会与经济的繁荣,使得越来越多的人前往高海拔地区探险、旅游、生活和开发建设。然而,高原低氧影响健康,可导致身体不适反应,甚至发展成高原病。因此,研究高原与健康、高原与疾病的关系,也越来越受到关注。
  大量人类与动物研究显示,急性高原低氧可诱发急性高原病(Acute mountainsickness,AMS),还可影响血糖水平和胰岛素分泌,使糖代谢和内分泌调节紊乱。我们实验室的研究显示,模拟高原低氧,刺激大鼠下丘脑应激肽—促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin releasing hormone,CRH)的分泌和基因表达升高,亚急性低氧(5,000米,5天)降低大鼠血浆胰岛素水平,此作用可被CRH1型受体(CRH receptor1,CRHR1)拮抗剂所阻断,但作用机制尚不完全清楚。CRH是下丘脑-垂体-肾上腺轴(Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA轴)的中枢调控因子,在低氧应激反应中具有重要作用,参与行为、内分泌、免疫网络的调控。已有报道,CRHR1在胰岛β细胞表面表达,糖依赖性的增加胰岛素分泌。本文研究低氧下CRHR1介导胰岛素分泌抑制的调节机制。
  我们采用低压低氧模拟高原低氧、体外培养大鼠胰岛以及人类急进高原,阐述低氧下CRHR1信号通路介导胰岛素分泌抑制的机制。研究发现,急性8小时5,000米海拔低氧暴露,升高大鼠血浆CRH、皮质酮(Corticosterone,CORT)和血糖水平,降低胰岛素水平;CRHR1拮抗剂预处理,可反转血糖和CORT的升高和胰岛素水平的降低。急性(8小时)和亚急性(5天)5,000米低氧暴露,导致胰腺组织乳酸生成增加,ATP/ADP比值下降,AMP/ATP比值升高,提示低氧暴露使胰岛细胞处于低氧代谢和ATP不足的状态。体外大鼠胰岛实验结果显示,常氧(21%O2)下,CRH通过刺激胰岛β细胞表面的CRHR1,刺激胰岛素分泌,该作用依赖于糖和CRH水平。CRH促胰岛素分泌作用,是通过激活CRHR1的cAMP/PKA信号通路和L-型钙通道,引起外钙流入细胞实现的。在5% O2低氧条件下,虽然胰岛Crhr1 mRNA处于高表达,但CRH的促胰岛素分泌作用消失。用鱼藤酮(线粒体电子传递链Ⅰ抑制剂)模拟线粒体低氧代谢,可抑制胰岛细胞ATP生成,进而抑制胰岛素分泌,支持在体实验结果。鱼藤酮剂量依赖性地降低胰岛素分泌,1nM鱼藤酮导致胰岛ATP减少,可完全消除1nMCRH的促胰岛素分泌作用。鱼藤酮导致的ATP生成缺乏,阻断了CRHR1激活导致的胞内cAMP水平和ATP/ADP比值的增加。常氧下,CRH可增加胰岛β细胞钙振荡频率,而在低氧下,ATP缺乏时,β细胞钙振荡频率下降,CRH失去刺激作用。因此,我们提出,CRH促胰岛素分泌作用具有O2和ATP依赖性;低氧时,由于胰岛细胞由有氧代谢转化为无氧代谢,不能提供充足的ATP,从而阻断了CRHR1激活的cAMP/PKA和L-钙通道,最终因胞内钙水平下降,导致CRH的促胰岛素分泌作用消失,胰岛素分泌降低。
  低氧不仅升高血浆CRH,也升高CORT水平。体外大鼠原代胰岛实验显示,地塞米松(Dexamethasone,DEX)处理胰岛,能抑制胰岛素分泌,且不受5% O2低氧的影响。鱼藤酮诱导ATP生成不足时,DEX仍可抑制胰岛素分泌,胰岛素分泌量与DEX浓度成反比,与ATP水平成正比。DEX处理上调胰岛Sgk1(Serum andglucocorticoid-inducible kinase1)mRNA的表达,下调Glut2(Glucose transporter2)和Crhr1 mRNA的表达,这些作用不受低氧及ATP缺乏的影响。低氧下,糖皮质激素受体(Glucocorticoids receptor,GR)拮抗剂预处理可使降低的大鼠血糖、胰岛素恢复至正常对照水平,胰岛内升高的SGK1表达消失。由此,低氧激活的HPA轴,通过CORT激活胰岛SGK1表达,导致胰岛素分泌抑制,这是胰岛素分泌被抑制的另一通路。
  在人类,我们发现健康男性志愿者(19-23岁)快速到达海拔3,860米高原两天后,血氧饱和度降低、CRH上升、血浆胰岛素水平不变。AMS组血糖升高、胰岛素敏感性降低,而非AMS组血糖、胰岛素敏感性没有变化,低氧下血糖升高与AMS有一定关系。服用红景天药物,可能使血浆皮质醇水平下降。由此,不仅高原低氧增高的血浆CRH失去刺激胰岛素分泌的作用,同时糖皮质激素缺乏,也撤除了抑制胰岛分泌的作用。
  综上所述,低氧环境下,由于胰岛糖代谢生成的ATP不足,导致CRH的促胰岛素分泌作用因CRHR1信号通路cAMP/PKA减弱,胞外钙内流减少而消失;低氧还可激活CRH,升高血浆CORT,刺激胰岛SGK1上调,抑制胰岛素分泌。人类研究结果显示,急性高原低氧暴露,升高血浆CRH水平,但不改变血浆胰岛素水平;当患有AMS时,血糖水平升高和胰岛素敏感性降低。本研究阐明了由于低氧下CRH促胰岛素分泌作用的失活,以及CRH激活的糖皮质激素对胰岛素分泌的抑制,导致低氧下胰岛素分泌抑制的机制。揭示了CRH促胰岛素分泌活性具有胰岛O2浓度和ATP水平依赖性。提出了低氧调节胰岛素分泌的新理论观点。
[硕士论文] 钱炜
生态学 浙江师范大学 2014(学位年度)
摘要:氟广泛分布于自然界,人体通过水、空气、土壤等多种途径接触到氟化物。环境中含氟量过高,进入人体内的氟过多,会在机体内蓄积引起全身性生理和病理变化,称为地方性氟中毒。过量的氟被人体摄入之后,就会透过“血—脑屏障”在脑组织中蓄积,从而影响神经系统及学习记忆能力。膳食低钙可能是地氟病的主要促发和加重因素,引起脑细胞凋亡率增高,加重氟的神经毒性作用,而摄入膳食高钙会对氟中毒致机体损伤起到明显的改善作用。迄今为止,关于氟中毒对脑发育及其功能损伤已有深入的研究,膳食钙对氟中毒的影响也已有相关报道,但缺乏深入性和系统性。此外,不同饮食钙条件对饮水型氟中毒致子代脑发育干预作用的分子机理及作用靶点也尚未明了。因此,本研究将现场流行病学调查和实验动物试验结合,探索膳食钙对氟中毒的干预作用,探讨钙对氟致脑发育损伤的分子机理及作用靶点,以求通过提高膳食钙来缓解氟中毒症状提供一定的科学依据。
  流行病学调查对象为江苏省泗洪县四河乡新淮村和曹庙乡瓦庙村在校的8~13岁小学生,主要针对当地儿童进行钙营养状况调查以及发育商和智商的检测,并根据2003年对尿氟含量的测定和氟斑牙流行情况的调查结果,评判当地2004年之后采取的改水降氟措施成效与否。在体亚慢性动物实验选用健康初断乳SD雄性大鼠25只以供繁殖,雌性大鼠75只,随机平均分为5组。对照组(Control)饮用自来水,食用常食饲料(钙含量0.79%);高氟组(F)饮用100mg/L的NaF溶液,食用常食饲料;低钙组(LCa)饮用自来水,食用低钙饲料(钙含量0.063%);低钙高氟组(F+LCa)饮用100 mg/L的NaF溶液,食用低钙饲料;高钙高氟组(F+HCa)饮用100 mg/L的NaF溶液,食用高钙饲料(钙含量7%)。雄性大鼠饮用自来水,食用标准饲料(氟含量<0.2 mg/kg,钙含量为7~10 g/kg);以上溶液均以自来水作为溶剂。饲养3个月后,以母鼠血氟及尿氟含量作为亚慢性氟中毒动物模型复制成功的标准,然后按雄性∶雌性为1∶1合笼交配,取妊娠18天胎鼠、14天及28天日龄仔鼠共3批进行相关实验。实验各组均以大鼠子代血/尿氟、血/尿钙含量、行为及学习记忆能力、脑海马突触超微结构、双皮质素DCX和突触素p38表达水平、凋亡情况及凋亡相关基因Bcl-2、Caspase12、JNK mRNA表达水平作为观察指标。实验结果如下:
  1、现场流行病学调查:
  2003年调查结果表明:与新淮村相比,瓦庙村饮水氟含量极显著升高(p<0.01),儿童经食物的摄氟量显著升高(p<0.05),尿氟含量差异极显著升高(p<0.01),儿童的氟斑牙患病率和缺损型氟斑牙患病率极显著升高(p<0.01)。
  2013年调查结果表明:两村儿童摄钙量和总体智商未见显著性差异(p>0.05),处于正常范围。但儿童智力低下(IQ<69)率,瓦庙村明显高于新淮村,具有极显著差异(p<0.01)。新淮村和瓦庙村不同性别儿童智商无显著性差异(p>0.05)。两村儿童发育商均处于正常范围,但瓦庙村儿童在身高和头围两项指标与新淮村存在极显著差异(p<0.01),其中男性儿童身高差异显著(p<0.05),女性儿童头围差异显著(p<0.05),身高与出生体重差异极显著(p<0.01)。另外,瓦庙村男性儿童与女性儿童的头围差异显著(p<0.05),新淮村男性儿童与女性儿童的身高与体重差异显著(p<0.05),头围差异极显著(p<0.01)。
  2、在体亚慢性动物实验:
  (1)氟中毒动物模型的检测结果:染毒3个月后,与对照组相比,F组与F+LCa组母鼠切齿表面黄白相间,有白垩色清晰条纹,氟斑牙症状明显,F+HCa组切齿表面部分出现黄白相间的条纹,呈现较轻的氟斑牙症状;F组与F+LCa组血氟含量显著升高(p<0.05),F组、F+LCa组与F+HCa组尿氟含量极显著升高(p<0.01)。说明母鼠在100 mg/LNaF溶液暴露3个月后,亚慢性氟中毒模型复制成功。
  (2)血/尿氟与血/尿钙含量测定结果:与对照组相比,14天及28天雄鼠F组血氟含量显著升高(p<0.05),14天及28天仔鼠F+LCa组均极显著升高(p<0.01);28天仔鼠LCa组与F+LCa组血钙含量均极显著升高(p<0.01);28天仔鼠F组、F+LCa组与F+HCa组尿氟含量均极显著升高(p<0.01);28天仔鼠LCa组与F+LCa组尿钙含量均极显著降低(p<0.01)。与F组相比,14天仔鼠F+LCa组血氟含量极显著降低(p<0.01);14天及28天仔鼠F+LCa组血钙含量均极显著降低(p<0.01);28天仔鼠LCa组与F+HCa组尿氟含量均极显著降低(p<0.01);28天雌鼠LCa组与F+LCa组尿钙均极显著降低(p<0.01),F+HCa组极显著升高(p<0.01)。
  (3)行为及学习记忆能力的测定结果:与对照组相比,14天及28天仔鼠F组与F+LCa组理毛、扶壁、站立次数以及1min、3min跑格数均呈现下降趋势;14天及28天仔鼠F组与F+LCa组第5天逗留平台时间呈现显著性缩短。与F组相比,14天及28天仔鼠LCa组和F+HCa组上述行为参数均呈现上升趋势,而F+LCa组则呈现下降趋势;14天及28天仔鼠LCa组与F+HCa组逗留平台时间呈现延长趋势。
  (4)突触密度及结构参数的测定结果:与对照组相比,胎鼠和仔鼠LCa组与F+LCa组海马突触密度均呈现降低趋势;F组与F+LCa组突触活性带长度及突触后致密物质厚度(post-synaptic density, PSD)均呈现下降趋势,突触间隙宽度均呈现上升趋势。与F组相比,14天雌鼠与28天雄鼠F+LCa组突触密度呈现降低趋势。14天及28天雄鼠F+LCa组突触活性带长度呈现下降趋势;28天仔鼠LCa组与F+HCa组突触活性带长度极显著升高(p<0.01);胎鼠LCa组突触间隙宽度显著降低(p<0.05);胎鼠及14天雄鼠F+LCa组PSD厚度呈现不同程度的显著性降低;14天雄鼠F+HCa组及28天雌鼠LCa组PSD厚度显著升高(p<0.05)。
  (5)细胞凋亡检测结果:胎鼠及仔鼠对照组和LCa组大脑海马组织很少见凋亡细胞,F组和F+LCa组凋亡细胞明显增多,F+HCa组凋亡细胞较F组有所减少。
  (6)免疫组化检测结果:与对照组相比,胎鼠及仔鼠F组、F+LCa组与F+HCa组DCX蛋白表达水平呈升高趋势(p>0.05); p38蛋白表达水平呈降低趋势(p>0.05)。与F组相比,胎鼠及仔鼠F+HCa组DCX和p38蛋白表达水平分别呈下降和上升趋势(p>0.05)。
  (7) PCR检测结果:与对照组相比,胎鼠及仔鼠F组与F+LCa组Bcl-2 mRNA表达水平均呈现显著性下降;F组、F+LCa组与F+HCa组Caspase12 mRNA表达水平均呈现显著性上升。胎鼠及仔鼠各组JNK mRNA表达水平均未见显著性差异(p>0.05)。与F组相比,LCa组和F+HCa组Bcl-2mRNA表达水平均呈现显著性上升;LCa组和F+HCa组Caspase12 mRNA表达水平均呈现下降趋势。胎鼠及仔鼠各组JNK mRNA表达水平均未见显著性差异(p>0.05)。
  综上所述,瓦庙村和新淮村儿童钙营养状况良好,未呈现显著性差异。瓦庙村的改水降氟措施较为有效,儿童总体智商与新淮村相比已没有差异,但可能由于改水范围不够完整导致个别儿童智商较低。氟暴露对不同性别儿童智商的影响并没有明显差异。两村儿童发育商均处于正常范围,但瓦庙村儿童在身高和头围两项指标与新淮村存在极显著差异(p<0.01)。此外,两村不同性别儿童头围、身高、体重等发育商指标存在不同程度的显著性差异,可能是由于遗传或饮食差别所致。饮水型氟中毒会引起子代血/尿氟浓度变化以及大脑凋亡细胞增多,从而影响子代脑发育,降低学习记忆能力。氟中毒会使仔鼠脑发育特异蛋白双皮质素DCX表达上升,突触素p38表达下降,导致突触活性带长度降低,突触间隙宽度升高,PSD厚度降低等突触界面结构参数发生变化,并且引起Bcl-2mRNA表达水平下降及Caspase12 mRNA表达水平升高。钙干预氟中毒的分子机理可能是通过上调Bcl-2表达、下调Caspase12表达抑制氟中毒大鼠脑细胞过度凋亡。低钙(0.63 g/kg)摄入与高氟会产生协同效应,加剧氟中毒对机体的毒性作用;而高钙(70 g/kg)摄入与高氟则会产生拮抗效应,在一定程度上减轻氟中毒对机体的损害。
[硕士论文] 董研
流行病与卫生统计学 青岛大学 2014(学位年度)
摘要:目的:
  了解淄博市饮用水水氟状况及变化动态,评估饮用水水氟安全风险和健康危害程度,为开展地氟病病情预测和水氟污染的健康干预提供技术支持。
  方法:
  收集2008-2012年间淄博市农村饮水工程末梢水氟化物监测数据,应用地理信息系统(Geographic Information System,GIS)技术开展水氟浓度的空间分析。
  结果:
  全域空间自相关Moran'sⅠ显示,淄博市水氟含量分布具有空间聚集性;局域空间自相关Moran LISA分析和局域热点(Getis-Ord Gi*)分析显示市域内水氟分布具有不同的聚集类型,存在冷热点区域,即High-High分布的地区为高青县、桓台县北部和南部、张店区北部、博山区东北部及沂源县西北部区域,Low-Low分布的地区为沂源县,Low-High分布于博山区东北部区域;Kriging空间插值发现高青县呈现出东西向明显的高氟带,核密度(KDE)估计显示高青县、桓台县和张店区存在多个等值高氟区域,集中于桓台县起凤镇和荆家镇、高青县高城镇和唐坊镇、博山区白塔镇、沂源县徐家庄乡,趋势面分析(TSA)的预测图表明,水氟浓度有从东南向西北逐渐升高的趋势;高青县是我市地方性氟中毒最为严重的地区,是重病区数量最多的地区,也是儿童氟斑牙患病率最高且病区改水率最低的地区。
  结论:
  淄博市地方性氟中毒总体处于低度流行趋势,以高青县最为严重,为以后重点防控区域;饮水工程高氟反复和新发高氟时有发生,水氟的GIS分析结果和2012年地氟病调查存在空间对应关系;GIS空间分析对地氟病病情预测和健康干预具有科学指导价值。
[博士论文] 邓超男
病理学与病理生理学 贵阳医学院 2014(学位年度)
摘要:目的: 本文通过体内外实验观察氟影响下成骨细胞中刺猬蛋白(Hedgehog, Hh)信号通路分子及其下游成骨相关因子、凋亡相关因子的表达变化,讨论Hh信号特异性阻断剂环巴胺(Cyclopamine, Cycl)的阻断效果;并检测氟中毒大鼠骨组织中与骨髓微环境相关的细胞因子变化情况,深入探讨氟影响大鼠骨骼病变时Hh信号变化与骨形成增强的关系,为氟骨症治疗靶点的研究提供实验依据。
  方法: 1、不同浓度的含氟水饲养大鼠6个月,观察氟斑牙发生情况及测定尿氟含量,明确氟中毒大鼠模型建立成功后,检测各组大鼠骨氟含量。光镜观察骨组织病理形态学改变;抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)鉴定破骨细胞并计数。酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)检测各组大鼠血清骨碱性磷酸酶(Bone alkaline phosphatase, BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphataseform5b, TRACP5b)含量;免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)观察 Hh信号分子和成骨、破骨相关因子的定位及表达情况,探讨 Hh信号变化与骨形成、骨吸收间的关系。2、实时荧光定量 PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR, real-time PCR)、IHC和蛋白印迹(Western Blot)检测氟中毒大鼠骨组织 Hh信号通路中主要因子的mRNA和蛋白表达情况,观察高低剂量氟对Hh信号变化的影响。3、给予高氟组大鼠Cycl腹腔注射,观察Cycl阻断后大鼠氟斑牙、尿氟和骨氟含量、血清BALP含量变化情况。细胞增殖与活性检测试剂盒(cell counting kit8, CCK8)筛选出体外培养成骨细胞时氟和Cycl的最佳药效浓度,偶氮偶联法(p-nitrophenyl phosphate,pNPP法)测定培养成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phhosphatase, ALP)活性。原位末端转移酶标记法(Transferase-mediated dUTP-bintin, TUNEL)定位并计数骨组织中凋亡成骨细胞个数;流式细胞术检测培养成骨细胞凋亡率。Real-time PCR、IHC和Western Blot检测动物模型和培养成骨细胞中Hh信号通路主要分子、其下游成骨相关因子及凋亡相关因子 mRNA和蛋白表达,进一步探讨Cycl对氟暴露下培养的大鼠成骨细胞Hh信号的阻断效果及对成骨细胞增生的影响。4、Real-time PCR、原位杂交(in situ hybridization, ISH)和IHC检测氟中毒大鼠骨组织与骨髓微环境相关细胞因子的mRNA和蛋白表达,探讨氟中毒大鼠骨骼损伤时Hh信号与骨髓微环境变化的联系。
  结果: 1、慢性氟中毒大鼠氟斑牙发生率、尿氟和骨氟含量、血清 BALP含量随染氟剂量的增加而逐渐增加,提示慢性氟中毒大鼠模型建立成功。氟中毒大鼠骨组织呈骨质硬化表现。2、氟中毒组大鼠Hh信号通路因子印度刺猬蛋白(Indian hedgehog, Ihh)和音速刺猬蛋白(Sonic hedgehog, Shh)及骨形成相关因子Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor2, Runx2)和成骨特异性转录因子(Osterix, Osx)蛋白表达随染氟程度加重呈逐渐增强。但破骨细胞计数、血清TRACP5b、骨吸收相关因子核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-kappa B ligand, RANKL)和细胞核转录因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)p50蛋白表达则在低氟组升高较高氟组明显。氟影响下,Hh信号因子变化与骨形成间呈正相关性。3、氟中毒组大鼠骨组织中 Hh信号通路的配体(Ihh、Shh)、跨膜蛋白(Smoothened,Smo)及核转录因子神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Glioma-associated oncogene homolog, Gli1)、Gli2 mRNA和蛋白表达也较对照组表达增强,呈剂量依赖性;跨膜蛋白受体(Ptched1,Ptch1)和核转录因子 Gli3的mRNA和蛋白表达则在各组间比较无明显差异。4、应用Cycl阻断处理后,大鼠氟斑牙发生率、尿氟和骨氟含量与氟中毒组比较无明显差异。氟+Cycl处理组大鼠血清BALP含量较氟中毒组降低;培养细胞中,经氟和Cycl处理后ALP活性亦降低。Cycl处理后的大鼠骨组织及培养成骨细胞中Ihh、Shh、Smo、Gli1、Gli2 mRNA和蛋白表达较氟中毒组表达减弱,Hh信号通路下游的成骨相关因子 Runx2和β链蛋白(β-catenin)表达也较氟中毒组减弱,Osx则与氟中毒组无明显差异。5、氟中毒大鼠成骨细胞凋亡阳性率增加,但经 Cycl处理后变化不明显;流式细胞术结果显示,2.5mg/L NaF处理组成骨细胞凋亡率较5mg/L NaF处理组升高更明显。经氟处理后再用Cycl阻断,细胞凋亡率较加氟处理组升高。体内外实验证实,氟暴露可致大鼠成骨细胞中 B细胞淋巴瘤-2(B-cell Lymphoma-2, Bcl-2)表达降低、Bcl-2基因相关X蛋白(Bcl-2 accociated X protein, Bax)表达增强、Bcl-2/Bax比值降低。再经Cycl处理后,Bcl-2、Bax表达和Bcl-2/Bax比值与氟中毒组比较变化不大。体外实验则显示,与氟处理组比较,氟+Cycl处理后Bcl-2表达增强、Bax表达降低、Bcl-2/Bax比值升高。6、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和IL-6可在慢性氟中毒大鼠成骨细胞中呈阳性表达,三者的mRNA和蛋白表达随染氟增加而增强,但 IL-1β和 IL-6在低氟组和高氟组间比较无明显差异。肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)在成骨细胞中未见阳性表达,在巨核细胞中呈弱阳性表达,各组间比较表达强度无明显变化。骨氟、Ihh表达与TGF-β1、IL-1β和IL-6表达间均呈正相关性,骨氟、Ihh表达与TNFα表达间无明显相关性。
  结论: 1、在一定剂量氟暴露下,大鼠骨形成强于骨吸收,骨组织呈骨质硬化表现。BALP可作为一个判断氟致骨质硬化的早期生物学指标。2、氟可刺激大鼠成骨细胞Ihh表达增加,此信号经由Smo介导,激活Gli2后将信号转录入细胞核内,诱导Runx2表达,使成骨细胞增生、BALP活性增强,最终导致大鼠骨组织出现了骨质硬化表现。与此同时,氟致Hh信号活化可经由Bcl-2介导成骨细胞凋亡,凋亡产物又可进一步刺激成骨细胞增殖过程。3、Cycl对氟致Ihh信号活化有一定抑制作用,在体外实验中可抑制成骨细胞增生,为氟骨症治疗药物的研究提供了实验依据。4、Ihh信号影响骨髓微环境的变化,在一定程度上参与到氟骨症骨质硬化的发病机制中。
[硕士论文] 王煜蘅
生物化学与分子生物学 贵阳医学院 2014(学位年度)
摘要:目的: 通过研究地氟病患者以及氟中毒大鼠模型 DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因(MGMT)、错配修复基因(MLH1)启动子区甲基化水平检测其mRNA及蛋白水平改变,探讨DNA修复基因甲基化、基因表达与地方性氟中毒发生发展的关系。
  方法: 1.在贵州省毕节市典型燃煤型地氟病区进行抽样,选取八寨镇毛栗坪村45名村民为氟病组,根据患者氟斑牙和氟骨症的分度分组,依次分为轻度组、中度组和重度组,在非氟病区贵阳市沙文镇新寨村,选取年龄性别平衡均匹配的健康人群做为正常对照。酚氯仿法抽提全血 DNA,甲基化特异性 PCR(MSP)法检测DNA中 MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取受检者血液 RNA,实时荧光定量PCR法检测MGMT、MLH1基因mRNA表达水平变化。2.复制慢性氟中毒大鼠模型,20只/组,分为对照组和染氟组,对照组常规饲养,染氟组大鼠的饮用水中加入氟化钠50mg/L,饲养6个月之后采取股动脉放血方式处死。取其动脉血及肝组织,酚氯仿法抽提基因组DNA,MSP法检测血液样本及肝组织中MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取总RNA,实时荧光定量 PCR法检测各组 MGMT、MLH1基因 mRNA表达水平;裂解法提取肝组织蛋白,采用Western blot检测各组MGMT、 MLH1蛋白表达水平。
  结果: (1)氟病区患者血液样本 MGMT、MLH1基因明显出现甲基化,且甲基化阳性率随氟中毒程度加深而升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)氟病区患者血液样本 MGMT、MLH1基因 mRNA表达水平较对照组相比降低,且表达水平与氟中毒程度成负相关,差异有统计学意义(P<0.05);(3)染氟组大鼠血液 MGMT、MLH1基因的甲基化阳性率与对照组比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)染氟组大鼠血液 MGMT、MLH1基因的mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)染氟组大鼠肝组织 MGMT、MLH1基因甲基化阳性率与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)染氟组大鼠肝组织 MGMT、MLH1基因mRNA表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(7)染氟组大鼠肝组织 MGMT、MLH1蛋白表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论: 氟病区患者血液样本MGMT、MLH1基因甲基化程度与地氟病严重程度有相关性,且随着氟中毒的加深而mRNA表达水平降低。染氟大鼠血液样本的MGMT、MLH1基因甲基化阳性率与对照组相比明显增高,且转录水平的表达有所降低,在人体和动物水平上都表现出修复基因的表达可能与氟有一定的关系,且甲基化的后果可能与基因转录水平的表达具有一定相关性。染氟大鼠的肝组织样本MGMT、MLH1基因的甲基化阳性率与对照组相比增高,转录水平与蛋白表达水平均降低,DNA修复基因的表达有可能与氟所造成的肝损伤有关。
[硕士论文] 宋会改
病理学与病理生理学 贵阳医学院 2014(学位年度)
摘要:目的: 通过研究慢性氟中毒大鼠肝组织及及人肝细胞HL-7702 TRPC5、TRPC6蛋白及其mRNA表达,初步探讨TRPC5、TRPC6蛋白在氟中毒肝损伤机制中的作用,为地方性氟中毒肝损伤的诊断、预防和治疗提供理论依据。
  方法: 36只SD大鼠随机分为3组,每组12只,组内雌雄各半。对照组饮用自来水(含氟F﹣<0.5 mg/L),低氟组、高氟组分别饮用加氟5mg/L、50 mg/L的自来水。实验9个月后采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟、骨氟含量,股动脉放血处死大鼠并取肝组织-80℃保存;培养人HL-7702肝细胞株,分为对照组、低氟组、高氟组三组,接种到6孔板长满后,对照组加入普通培养基,低氟、高氟组分别加入含F﹣0.5,5.0 mmol/L的培养基进行培养,于12h、24h、48h分别收集细胞。采用实时荧光定量PCR方法测定大鼠肝组织和人细胞中TRPC5、TRPC6 mRNA表达水平;Western Bolt方法测定肝组织、细胞TRPC5、TRPC6蛋白表达,分析TRPC5、TRPC6在对照组与相应氟中毒大鼠肝组织及人肝细胞中的表达及过量氟对肝脏病变的影响。
  结果: (1)实验组大鼠出现不同程度的氟斑牙,且髙氟组重于低氟组;染氟组大鼠尿氟含量高氟组明显高于低氟组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但低氟组与对照组无明显差异(P>0.05)。骨氟含量低氟组、高氟组与对照组有明显差异(P<0.05),但低氟组与高氟组差异无统计学意义(P>0.05)(2)实时荧光定量PCR结果显示氟中毒组大鼠肝组织TRPC5、TRPC6 mRNA表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),且随染氟浓度增加,表达水平增高。(3)人肝细胞对照组、低氟组、高氟组在同一时间点三组两两比较,在12h、24h、48h时TRPC5、TRPC6 mRNA表达都具有明显差异(P<0.05);但浓度不变时,TRPC6 mRNA表达在不同时间点没有明显统计学差异(P>0.05); TRPC5 mRNA对照组在12h、24h、48h时表达无明显差异(P>0.05),低氟组12h与24h mRNA表达差异不显著(P>0.05),但在48h时出现显著差异(P<0.05),高氟组12h、24h、48h时mRNA表达都具有明显差异(P<0.05)(4)Western Bolt测定大鼠肝组织TRPC5、TRPC6蛋白表达水平,结果显示对照组与低氟组、高氟组比较TRPC5、TRPC6表达水平有显著差异,差异有统计学意义(P<0.05),且随染氟浓度增加,表达水平更高。(5)对照组、低氟组、高氟组从12h时间点人肝细胞TRPC5、TRPC6蛋白表达水平明显增高,差异具有统计学意义的差异(P<0.05),但浓度不变时,TRPC6蛋白表达在不同时间点没有明显统计学差异(P>0.05),TRPC5蛋白对照组在12h、24h、48h时表达无明显差异(P>0.05),低氟组12h与24h蛋白表达差异不显著(P>0.05),但在48h时出现显著差异(P<0.05),高氟组12h、24h、48h时蛋白表达都具有明显差异(P<0.05)。
  结论: TRPC5、TRPC6 mRNA及其蛋白在大鼠肝组织和人肝细胞中均有表达,过量的氟促进染氟大鼠肝组织、人肝细胞TRPC5、TRPC6表达水平的增高,且随氟浓度的增加而增加。提示氟中毒大鼠肝脏及人肝细胞损伤病变的发生机制中TRPC5、TRPC6的表达异常可能是重要环节之一。
[硕士论文] 付迪
农业资源利用 江西农业大学 2014(学位年度)
摘要:目的:为了解萍乡地区地方性氟中毒的现状、形成原因及原因分析,通过改炉改灶后氟中毒的改善情况进行分析,并对存在的问题进行探讨。
  方法:对萍乡四个地区8~12岁居民进行检测,按照Dean氏氟斑牙的分度法进行调查和统计分析;对饮用水中氟的测定采用氟离子选择电极法测定,测得结果的判断标准参照生活饮用水卫生标准;同样用氟离子选择电极法测定土壤中的氟、蔬食物和空气中的氟。
  结果:在对8~12岁儿童氟斑牙的诊断时,一共调查统计了萍乡市8~12岁儿童52338人,被检查出来氟斑牙人数一共有16435人,氟斑牙患病率为30.10%,而且上栗县是整个萍乡市氟斑牙患病率最高的地方;在对8~12岁儿童的尿样,经氟离子选择电极法测定后,这次采样中尿氟的几何平均数大约为1.06 mg/L,而且尿氟含量超过1.40 mg/L的村落也主要是在上栗县;在对饮用水中氟化物的测定与分析时发现:病区村中居民烧开的茶水中氟的含量要远远高出井水中氟的含量,但总的病区的水中氟的含量并没有超过国家标准(1.0 mg/L);在对上栗县病区茶叶进行调查时发现:病区的茶叶氟的含量为287.89 mg/L,对照区茶叶氟的含量为119.08 mg/L,病区茶叶中氟的含量远远高于对照区的茶叶,这也可以从一个侧面解释病区茶水中氟的含量要远远高于井水中氟的含量;病区菜地中土壤中水溶性氟的含量为10.70 mg/L,对照区菜地中土壤的水溶性氟的含量为3.70 mg/L,病区菜地中土壤中水溶性氟的含量明显高于对照区的水溶性氟含量,病区自然土中总氟的含量为928.53 mg/L,对照区自然土中的总氟的含量为368.65 mg/L,病区菜地中土壤中总氟的含量远远高于对照区的总氟含量;上栗县病区厨房空气的平均含氟量为0.0210 mg/m3,对照区厨房空气中平均氟的含量为0.00120 mg/m3;上栗县病区的居民家卧室的空气中的平均含氟量为0.0036 mg/m3,对照区居民家卧室空气中的平均氟的含量为0.0009 mg/m3,上栗县病区厨房和卧室中的空气中氟的平均含量远远高于对照区空气中氟的平均含量,而且病区居民卧室空气中氟的平均含量高于国家标准;在对食物中的氟含量的测定时,发现阔叶植物吸收氟的含量要明显高于非阔叶植物,如芥菜的氟的平均含量分别为25.98mg/L,而红辣椒的氟的平均含量分别为3.74 mg/L;在对病区新鲜蔬菜和储存5个月的蔬菜中氟含量的测定时,新鲜采摘的红辣椒中氟的平均含量为3.74 mg/L,而储存5个月的红辣椒中氟的平均含量为140.80 mg/L在对这两种辣椒中氟的含量的测定时可以看出,储存了5个月的辣椒中氟的含量要明显高于新鲜的辣椒;在对改炉改灶对空气中平均氟含量变化的影响时发现:改炉改灶后的病区居民空气中氟的含量都是比未经改炉改灶病区居民的低,但是无论是改炉改灶后还是没有改炉改灶的居民其厨房中的氟的平均含量都是高于国家关于病区厨房平均含氟量的标准(0.007 mg/m3)。
  结论与讨论:被调查的萍乡市大部分地区有很大一定数量的居民还在受到燃煤型氟中毒的危害;萍乡市儿童氟斑牙患者主要以轻度和极轻度居多;调查病区地方性氟中毒跟饮用井水相关性不大,主要跟土壤中可溶性氟含量高、厨房中空气中氟含量高和当地病区居民生活习惯即食用储存的食物有关系;而且改炉改灶对当地空气的改善有一定的积极影响。因此居民应减少使用储存的食物,并继续研究对为减少空气中氟的含量的改炉改灶方式。由于本文主要采用上栗县作为研究对象来分析当地氟中毒与各环境因素的关系,因此得到的数据可能并不能全部代表萍乡市的,还需要更为全面的调查整个萍乡市的环境因素才能得到更为准确的数据;在对上栗县环境因素的调查中,也只是调查了几十户,可能得出的结果缺乏大量的数据作为支撑和论证,希望在今后能够继续调查分析更多的数据,对所得出的结论的准确性和适用性进行进一步的验证。
[硕士论文] 崔蕊蕊
劳动卫生与环境卫生学 郑州大学 2014(学位年度)
摘要:目的:
  氟斑牙作为地方性氟中毒的特征性表现之一,对儿童危害深远,研究发现并不是所有氟病区的儿童都罹患氟斑牙,可能存在遗传易感性。本次研究通过分析ER基因多态性及启动子区甲基化与儿童氟斑牙之间的关系,从遗传学和表观遗传学方面探讨氟斑牙发生机制,为从分子水平探讨氟斑牙发生机制提供基本依据。
  研究对象和方法:
  1.研究对象的选择:分别在河南省开封、通许两地选择高氟村和对照村作为调查点,高氟村平均水氟浓度为2.44mg/L,对照村平均水氟浓度为0.37mg/L;随机抽取所选调查点本地生长的8~12岁儿童作为调查对象,分别为高氟组和对照组,依据氟斑牙检查结果将病区组又分为氟斑牙组和高氟区非患者组。其中氟斑牙组107人、高氟区非患者组100人及对照组78人,共285人。
  2.氟斑牙的判定:由公共卫生执业医师和口腔执业医师按照Dean's分级法判定。
  3.血清钙的测定采用火焰原子分光光度计法;尿氟检测采用氟离子选择电极法。
  4.雌激素受体α(ERα)基因rs3798577基因型分型采用Taqman探针法,Real-timePCR测定。
  5.ER基因启动子甲基化水平检测采用Real-timePCR测定
  6.本次实验数据的录入和分析均采用SPSS12.0统计软件,甲基化率经对数转换之后符合正态分布,尿氟、血钙经对数转换后的甲基化率的分析均应用单因素方差分析和独立样本t检验;ERαrs3798577基因型和等位基因频率在不同组别儿童中的分布差异采用列联表x2检验,OR值(比值比)和OR值的95%置信区间的计算采用Logistic回归,所有检验都以α=0.05为检验水准,Hardy-Weinberg平衡状况应用x2检验判定。
  结果:
  1.在外环境的检测中,水氟浓度在两组中分布差异有统计学意义。高氟组水氟浓度明显高于对照组(t=-4.379,P<0.05)。高氟组土壤中耕作层溶解氟和全氟明显高于对照组,差异具有统计学意义(分别P<0.05)。其他氟含量指标如空气中氟含量(未检出),粮食中及蔬菜中氟含量,两组之间差异无统计学意义(分别P>0.05),水中钙含量,两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。
  2.高氟组儿童尿氟水平明显高于对照组(F=-52.117,P<0.001),高氟组尿氟超标儿童分布(71.0%)明显高于对照组儿童(11.5%)(P<0.05);血钙水平高氟组明显低于对照组儿童(F=8.503,P<0.001)。
  3.ERαrs3798577基因型在不同组别,不同性别和不同尿氟水平儿童间分布差异均无统计学意义(分别P>0.05)。携带相同基因型不同组别儿童间血清钙水平,高氟组明显低于对照组(分别P>0.05)。
  4.不同组别、不同性别,不同氟斑牙分度,不同尿氟水平儿童间ERα基因启动子甲基化率差异均无统计学意义(分别P>0.05);随着氟斑牙严重程度的增高,儿童ERα基因启动子甲基化率有逐渐增高的趋势,在控制了尿氟变量之后,ERα基因启动子甲基化率与血清钙之间成负相关(r=-0.162,P=0.034)。
  结论:
  1.研究未观察到儿童氟斑牙与ERαrs3798577基因多态性有关。
  2.氟病区儿童血清Ca水平的改变与氟暴露关系更为密切,而与ERα基因rs3798577多态性和该基因启动子区甲基化联系不密切。
  3.ERα基因启动子甲基化水平可能影响钙的代谢,从而对儿童氟斑牙产生影响。
  4.未发现ERα基因rs3798577多态性与该基因启动子区甲基化交互作用与儿童氟斑牙有关。
[博士论文] 魏娜
病理学与病理生理学 贵阳医学院 2014(学位年度)
摘要:目的:地方性氟中毒(简称地氟病)是世界上分布较为广泛、危害较为严重的一种地方病,可引起中枢神经系统毒性损伤,导致病区儿童智力低下。但慢性氟中毒对发育中神经系统损伤作用机制目前还未完全阐明清楚。为了解燃煤型地方性氟中毒病区经过综合治理后学龄儿童智力情况我们进行了此次调查,并通过动物模型和细胞模型进一步探讨脑组织中 N-甲基-D-天门冬氨酸( N-methyl-D-aspartate, NMDA)受体、钙离子信号传导通路及氧化应激对慢性氟中毒仔代神经系统发育和学习记忆能力的损害作用。应用抗氧化剂维生素 E(Vit E)进行干预处理,寻找慢性氟中毒有效防治措施。
  方法:选择贵州省毕节市典型燃煤型地方性氟中毒病区改炉改灶及健康教育综合治理时间超过3年的村8-12岁小学生作为治理时间长组,综合治理时间<1年的村小学生作为治理时间短组,同时选择毕节市七星关区内同年龄段小学生作为对照组。采用Dean法进行氟斑牙检查,氟离子选择电极法测定尿氟,《瑞文标准推理测验》检测智商。通过饮水加氟和 Vit E灌胃处理制备动物模型,实验动物处理5个月后雌雄大鼠合笼,分别取出生1、7、14、21、28 d仔鼠进行实验。观察仔鼠出生后体重变化;记录仔鼠完成平面翻正、空中翻正、听觉惊愕、断崖回避等神经反射的时间; Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力;HE和尼氏染色观察仔鼠脑组织形态改变;脑组织氧化应激指标通过相关试剂盒检测;免疫组化方法检测神经元核心抗原Neu N,NMDA受体各亚单位(NR1、NR2A、NR2B、NR3A)、CaMK II蛋白在脑组织的表达定位;Western-blotting和 Real-time PCR方法检测大鼠脑组织和体外培养细胞中 NMDA受体各亚单位蛋白及 mRNA表达水平;流式细胞术检测仔鼠脑组织和体外培养神经细胞凋亡率;激光共聚焦和流式细胞仪观察体外培养神经细胞内活性氧簇(ROS)和钙离子(Ca2+)荧光染色。
  结果:与对照组儿童比较,病区儿童氟斑牙检出率和儿童尿氟含量显著升高,且治理时间短组检出率高于治理时间长组。智力调查结果显示,病区儿童智商与对照组比较明显下降,且智商分布与尿氟含量呈负相关。病区治理时间长与治理时间短两地儿童的智商分布从整体和性别比较无差异,但在低年龄组儿童中,治理时间长病区儿童中等以上智商比例高于治理时间短病区儿童。
  动物实验结果显示,各实验组仔鼠出生体重无显著差异,但染氟组仔鼠体重增长缓慢,至出生28 d体重明显低于对照组和Vit E干预组;完成平面翻正、空中翻正的时间延迟,水迷宫实验显示逃避潜伏期延长,探索平台次数减少,学习记忆能力下降。HE染色观察随仔鼠生长发育,海马及神经细胞体积增大,染氟组仔鼠脑组织神经细胞核比例增大、染色增强;神经细胞尼氏染色变浅;神经元核心抗原 Neu N表达降低;脑组织细胞凋亡率增高;脑组织 SOD活力下降,MDA含量增加,NO和NOS均呈增高趋势。Vit E干预组各项指标与对照组比较差异无统计学意义。NMDA受体各亚单位在仔鼠发育进程中表达情况为:与新生仔鼠蛋白表达比较,对照组 NR1蛋白表达于出生后21 d达高峰,以后逐渐下降;NR2A亚基于出生14 d表达明显升高,并维持至出生后28 d;NR2B亚基蛋白表达于出生28 d时明显升高;NR3A亚基在仔鼠出生14 d表达最高;phospho-NR2B在仔鼠出生14 d表达升高,并稳定维持至出生后28 d;CaMK II于出生14 d表达明显升高,之后有缓慢下降。染氟组 NR1亚单位在仔鼠出生后7 d升高,之后逐渐下降至新生水平;NR2A亚基于出生28 d表达量最高;NR2B在仔鼠出生14 d时其表达显著增加,至出生后28 d稍有下降;NR3A亚基表达量无统计学意义;phospho-NR2B在仔鼠出生14 d出现表达升高,并在出生21 d、28 d表达显著升高;CaMK II蛋白表达无显著变化。Vit E干预组 NR1亚基表达高峰出现在出生后第14天,持续至出生后28 d;NR2A蛋白表达于出生后21 d达最高;NR2B亚基蛋白在仔鼠出生14 d时其表达显著增加;NR3A亚基蛋白在仔鼠出生7 d表达上升,14 d时达高峰,一直维持至出生28 d;phospho-NR2B蛋白在出生14 d后表达升高;CaMK II蛋白在Vit E处理组仔鼠出生后7 d其表达就升高,维持至出生28 d。与对照组及 Vit E处理组同龄仔鼠各亚单位蛋白表达比较,染氟组仔鼠脑组织NR1、 NR2B及phospho-NR2B蛋白表达升高,CaMK II、 NR3A亚基蛋白的表达下降,NR2A蛋白表达无明显改变。仔鼠脑组织中 NMDA各亚单位 mRNA表达水平随仔鼠生长发育,染氟组NR1和NR2b mRNA表达水平有所升高,21d表达最高,28 d表达逐渐下降;NR3a mRNA表达下降;Vit E干预组 NR3a mRNA表达升高。
  本实验成功培养了原代神经细胞,经加氟处理后,随染氟时间增加,细胞凋亡率升高,细胞内 ROS和 Ca2+荧光染色增强,NMDA受体中 NR1、 NR2B、phospho-NR2B蛋白表达升高,NR2A表达无明显改变,NR3A及 Ca MKII表达下降。转录水平表达发现,低剂量氟处理时,NMDA各亚单位基因的表达无明显变化,高浓度氟处理后,NR2B mRNA表达升高,NR3A mRNA表达下降。通过抗氧化剂 Vit E预处理后,细胞凋亡下降,细胞内 ROS荧光强度明显下降,Ca2+荧光强度也有一定降低。
  结论:以上研究结果表明,(1)地方性氟中毒病区学龄儿童氟中毒情况仍较重,经过长时间综合治理后的病区儿童氟斑牙及尿氟含量下降,低年龄儿童智力明显改善。(2)慢性氟中毒可对仔代生长发育和神经系统发育分化产生不良影响。(3)氟在脑组织中的蓄积可导致氧化应激水平升高,反应性氧中间产物和反应性氮中间产物及脂质过氧化产物增加,抗氧化酶活力下降。(4)脑组织氟中毒可能激活 NMDA受体功能,主要是NR1、NR2B亚基表达升高,phospho-NR2B水平升高;NR3A亚基表达下降;钙离子通路开放,细胞内钙离子浓度增加,导致细胞产生兴奋性毒性损伤作用,细胞凋亡坏死率增加,进而引起学习记忆等功能损害。
[硕士论文] 赵丽娜
病理学与病理生理学 贵阳医学院 2014(学位年度)
摘要:目的: 通过研究慢性氟中毒大鼠肝脏组织中Hh信号通路的蛋白及mRNA表达水平变化以及其特异性抑制剂环粑明(Cyclopamine)的抑制作用,进一步探讨慢性氟中毒的发病机制。
  方法: SD大鼠48只,按体重随机分4组,每组12只,对照组(饮水含氟量<1mg/L);氟中毒组:自由饮用含(NaF)的自来水(含氟量50mg/L);阻断剂组:自由饮用含(NaF)的自来水(含氟量50mg/L),6个月后腹腔注射Cyclopamine10mg/kg,隔天一次,注射3天;阻断剂对照组:自由饮用含氟化钠的自来水(含氟量50mg/L),6个月后腹腔注射二甲基亚砜(Dimethy Sulfoxide,DMSO),方法同阻断剂组。通过观察大鼠氟斑牙的发生情况以及氟离子电极法检测尿氟、骨氟含量;应用自动血生化分析仪检测大鼠肝功能;苏木素-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色后光镜下观察肝组织病理形态学改变;免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)、Western blot和实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)分别检测肝组织中Hh信号通路Ihh,Shh,Smo,Gli1,Gli3的蛋白及其mRNA表达的改变以及Bax和Bcl-2蛋白和mRNA的表达。采用黄嘌呤氧化酶法检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力,化学比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷氨酰胺合成酶(GS)活力,硫代巴比妥酸法检测脂质过氧化物(LPO)含量。通过原位末端转移酶标记法(Transferase-mediated dUTP-bintin,TUNEL)定位并计数肝组织中凋亡细胞个数;流式细胞仪检测肝组织中细胞凋亡率。
  结果: 1、慢性氟中毒大鼠模型复制成功,表现为实验组大鼠出现氟斑牙损害,与对照组比较,氟中毒组、阻断剂对照组尿氟、骨氟含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与氟中毒组、阻断剂对照组比较,阻断组尿氟、骨氟含量差异不显著。2、肝功能检查及形态学观察:与对照组比较,氟中毒组、阻断剂对照组的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性明显增加,血清总蛋白、白蛋白活性下降;与氟中毒组、阻断剂对照组比较,阻断组血清中谷丙转氨酶活性稍有下降,血清谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白活性升高。表明实验组大鼠肝脏功能有损伤。病理形态学观察发现实验组大鼠肝脏损伤不明显。3、免疫组化、Western blot和Real-Time PCR结果提示:与对照组相比,氟中毒组、阻断剂对照组Ihh,Shh,Smo,Gli1,Gli3蛋白和 mRNA的表达升高,阻断组与氟中毒组、阻断剂对照组比较,其表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。4、肝组织T-SOD、GSH-Px、GS活性及LPO含量结果示:与对照组相比,氟中毒组、阻断剂对照组中T-SOD、GSH-Px以及GS活性降低,LPO含量升高;阻断组肝组织中T-SOD、GSH-Px以及GS活性降低的更明显,LPO含量明显升高。5、肝组织细胞凋亡及相关基因表达结果示:TUNEL和流式检测结果表明,与对照组相比较,氟中毒组和阻断对照组中肝细胞凋亡细胞个数增多;阻断组凋亡细胞较氟中毒组稍增多。与对照组相比,氟中毒组和阻断对照组Bcl-2蛋白和mRNA表达强度降低,Bax蛋白和mRNA表达升高,Bcl-2/Bax比值降低,阻断组更为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论: 过量氟可以激活慢性氟中毒大鼠肝组织中的Hh信号通路,环杷明则有效地抑制 Hh信号通路的活性;Hh信号通路可能与氧化应激、凋亡以及其他信号通路共同参与慢性氟中毒大鼠肝脏损伤的机制及发病过程。
[博士论文] 陈少贤
流行病与卫生统计学 南方医科大学 2013(学位年度)
摘要:背景:氟广泛地存在于自然界,是地球表面第13个最丰富的天然元素。虽然科学家们仍不确定氟化物是否对人体健康有至关重要的作用,但许多人认为,在日常饮食中少量的氟有助于防止龋齿,强化骨骼。另一方面,长期摄入高剂量的氟对人体健康可产生的不良影响,包括氟斑牙和氟骨症、增加骨折风险、导致出生率下降、增加尿路结石(肾结石)、导致甲状腺功能减退、降低儿童智力等。地方性氟中毒在世界范围内分布广泛,流行于五大洲50多个国家和地区。中国是世界上地氟病分布最广、危害最严重的国家之一。根据氟的摄入途径不同,我国地方性氟中毒病区可分为饮水型、燃煤污染型、饮茶型和混合型等几种,其中以饮水型氟中毒为最严重,其次为煤烟污染型,均可导致牙齿和骨骼的氟中毒流行。广东省是我国南方饮水型地方性氟中毒分布范围最广泛的省份之一,1980年已查清全省共有396个氟病区村,分布在14个地级市37个县,115个乡镇。病区人口数50.24万。广东省粤东地区的汕头市是广东省病区人口数最多的地级市,查明的病区人口数为21.61万,病区8-15岁儿童氟斑牙患病率为62.01%。广东省各饮水型氟病区自1985年开展饮水降氟措施以来,已取得了显著成效,至2003年,全省各氟病区改水后,改水受益率已达到病区总人口数的93.3%,儿童氟斑牙平均患病率由改水前的61.12%降至41.5%。
   然而,虽然改水降氟已取得了明显的效果,但由于氟对人体的健康具有双重效应作用,在地氟病防治过程中,氟在多大的剂量范围内对人体健康是有益的,低于多大剂量或者高于多大剂量是有害的?可接受剂量是多少?引起不同健康效应的基准剂量是多少?高氟区氟暴露人群尤其是儿童群体的健康风险度如何评价?改水后氟病区饮水氟的安全剂量应该是多少为好,如何确定等等,这些问题均需进一步探索研究。本课题就是在这样的背景下,探索高氟病区改水后氟暴露儿童健康的风险度评价方法,通过基准剂量模型的构建,寻找氟暴露安全剂量,为改水地区氟的安全剂量确定提供科学的依据。
   目的:通过对不同改水时间儿童氟暴露水平、基本特征和氟暴露各种特定效应的研究,确定氟暴露各特定效应的基准剂量,寻求不同改水时间、儿童不同尿氟含量的各特定效应指标的变化规律及剂量-反应关系,建立氟病区改水后儿童健康风险度综合评价模型,为制定氟暴露限值、提高氟病区儿童健康水平的政策提供科学的决策依据。
   方法:从汕头市潮南区63个氟病村中随机抽取4个氟病村以及一个非氟病村进行6-12岁儿童氟斑牙、龋齿的普查;同时从中抽取600名儿童,检测其尿氟含量及血清中骨钙素、降钙素、碱性磷酸酶含量和骨密度。根据上述各项指标的检测结果进行氟病区改水后儿童健康风险度评价,评价方法采用美国环保署2001年修订的风险度评价指南,评价步骤有:危害认定、剂量-反应关系评价、暴露评定、危险度特征分析。各步骤的统计方法采用SPSS软件16.0以及BMDS软件进行(P<0.05表示差别有统计学意义)。其中危害认定通过Logistic回归分析进行氟暴露与各指标的患病情况的相关性分析;剂量-反应关系评价使用BMDS软件绘制尿氟与各指标的剂量-反应曲线并计算基准剂量以及基准剂量下限;暴露评定采用平均水平来描述氟暴露的剂量,用各指标90%的上限来确定异常指标的范围,用Logistic回归分析暴露与异常的关系;危险度特征分析根据基准剂量下限确定的范围来定量认定风险,衡量风险的大小。
   结果:A、B、C、D四个氟病区村改水前水氟含量分别是5.51mg/l、2.17mg/l、3.99mg/l和3.31 mg/,改水后的水氟含量均降至0.11mg/l,与对照村一致。对照E村儿童尿氟含量平均水平为0.48mg/l,改水后A、B、C、D村儿童尿氟含量分别是:0.62mg/l、0.51mg/l、0.36mg/l和0.27mg/l,各观察村与对照村间差异有统计学意义(x2=127.915,P<0.001),A村儿童尿氟平均水平高于对照村,而C、D村尿氟平均水平低于对照村。不同改水年限氟病区儿童血清骨钙素水平之间差别有统计学意义(F=14.465,P<0.001),改水年限为14年的B村和对照E村低于其他村。儿童血清降钙素水平之间有差别(F=48.959,P<0.001),B、C村间无差别,低于其他村。血清碱性磷酸酶活性之间差别有统计学意义(F=9.831,P<0.001),C村、D村均低于E村。儿童总骨密度值之间有差别(F=3.781,P=0.005),A村、C村均高于B村。
   改水前4个氟病区村氟斑牙患病率为76.99%。改水后除A村氟斑牙患病率高于30%(低于此值可判断为非氟病区)外,其他村均远低于30%。以E村为对照进行Logistic回归分析,A村OR值为7.71(x2=212.02,P<0.001),其他村OR值没有统计学意义。五个村龋齿患病率均高于30%。E村龋齿患病率为49.7%,以E村为对照,进行单因素Logistic回归分析。A、B、C、D村龋齿患病率分别为31.97%(OR=0.48,x2=73.62, P<0.001)、65.0%(OR=1.88,x2=21.38, P<0.001)、56.3%(OR=1.31, x2=10.81,P<0.001)、45.2%(OR=0.83,x2=3.40,P=0.045)。各氟病区村骨钙素、碱性磷酸酶、骨密度异常率均不高于对照村。A村降钙素异常率高于对照E村,其OR值为6.39(x2=27.14,P<0.001)。
   随着尿氟含量的增加,氟斑牙患病率逐渐增加,OR值也逐渐增加。尿氟剂量组在0.00~组龋齿患病率最高,为53.9%;0.37~组龋齿患病率最低,为39.8%;呈U型变化趋势。骨钙素、碱性磷酸酶、骨密度异常率在不同尿氟组间无差别,而降钙素异常率则有随着尿氟含量的增加而上升的趋势,相比尿氟含量0.0~组,0.6~组骨钙素异常的OR值为2.35(x2=4.02,P=0.045),0.9~组的OR值为2.78(x2=4.90,P=0.027)。
   尿氟与氟斑牙的剂量-反应模型选用Logistic模型,计算的基准剂量BMD=0.857mg/l,BMDL=0.720 mg/l。儿童尿氟含量与龋齿间的剂量-反应关系选用Multistage模型,下降曲线的BMD和BMDL(基准剂量下限)值分别为1.095mg/l和0.898 mg/l,上升曲线的BMD和BMDL值分别为0.275 mg/l和0.124 mg/l。尿氟与骨钙素剂量-反应关系模型采用Logistic回归模型,计算的BMD=0.975mg/l,BMDL=0.622 mg/l。降钙素异常的剂量-反应关系模型为Quanal-线性模型:计算的BMD=0.636 mg/l,BMDL=0.383 mg/l。碱性磷酸酶异常的剂量-反应关系模型是Logistic回归模型,计算的BMD=2.299 mg/l,BMDL=0.837 mg/l。尿氟与骨密度异常的剂量-反应关系模型为对数-Logistic回归模型,计算的BMD=0.941mg/l, BMDL=0.811 mg/l。
   氟斑牙在改水年限为6年的归因危险度(ARP)最低,为0.41;而改水年限为14年、15年、17年的归因危险度分别是0.91、0.92、0.96。以各效应指标安全剂量范围下限为对照,计算超过安全剂量范围的OR值:氟斑牙、骨钙素、降钙素OR值分别为2.415、1.945、1.761。龋齿、碱性磷酸酶、骨密度OR值均无统计学意义。以疾病危害程度所占权重乘以异常率作为合计风险,计算各基准剂量组总的风险值,结果显示随尿氟含量的增加,总的风险有上升的趋势。
   结论:
   1.改水后各观察村居民饮用水均符合国家饮用水卫生标准(1.0mg/l以下)。
   2.改水超过六年,观察村儿童尿氟含量、氟斑牙患病率及健康效应指标已达到非氟病区水平。
   3.儿童尿氟与儿童氟斑牙、龋齿患病率及氟性骨损伤四项指标(BPG,CT,ALP和骨密度)均存在剂量-反应关系,其中尿氟含量与龋齿呈U型曲线关系。
   4.通过尿氟与儿童氟斑牙、龋齿患病率及氟性骨损伤四项指标(BPG,CT,ALP和骨密度)的剂量-反应关系构建,计算出各效应指标的BMD值分别为:0.857mg/l、1.095mg/l(龋齿上限值)和0.275mg/l(龋齿下限值)、0.975mg/l、0.636mg/l、2.299mg/l和0.941mg/l; BMDL值分别为:0.720 mg/l、0.898mg/l(龋齿上限值)和0.124mg/l(龋齿下限值)、0.622 mg/l、0.383 mg/l、0.837 mg/l和0.811mg/l。
   5.各效应指标的尿氟基准剂量下限可作为当地尿氟含量的生物限值。
   6.在改水后的4个氟病村中,B村和C村儿童患龋齿的风险高于其他村。
[博士论文] 孔繁平
神经生物学 浙江大学 2013(学位年度)
摘要:我国西部的青藏高原,最突出的自然环境特征就是低氧,随着西部大开发战略的实施,日益增多的援建移民、旅游、探险、军事换防等,使得每年有数百万人进入青藏高原,面临高原低氧损伤的危险。急性高原反应和急性高原病(AMS)是人体快速暴露于高原低氧环境后产生的各种生理反应和低氧性疾病,常见的症状有头痛,恶心呕吐,全身乏力,头晕和睡眠障碍等。急性高原病是人类到达高原的主要挑战,AMS的发病率随着所到达的高度升高而显著升高,在1850米到2750米时有25%的发病率,在3000米时有42%的发病率,而在6000米的时候发病率高达75%。如果AMS得不到及时正确的治疗,可能会发展成为严重的危及生命的高原肺水肿(HAPE)和脑水肿(HACE)。AMS极大地限制了人们在高原的活动。研究AMS的发病机制,预警预测AMS发生的风险具有重大的现实意义,然而目前AMS的发病机制尚未完全清楚,人们试图研究探索快速有效地预测AMS,提出低氧通气反应,心率变异率,最大运动后的氧饱和度的变化等指标来预测AMS的发生,但都不能有效地预测其发生。我们实验室以前的研究发现高原低氧促进神经肽促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)在下丘脑的分泌及其1型受体(CRHR1)的过度表达,在脑-内分泌-免疫网络低氧损伤调节过程中起核心主导的作用,所以我们提出CRH可能成为预测急性高原低氧应激损伤的生物标志分子,证明血浆和唾液CRH水平过度增高与发生AMS相关,通过检测唾液CRH水平变化程度,可以预测人们到达高原后可能发生AMS的潜在风险性。
  本研究分为实验动物研究和人类研究两部分。在动物实验中,成年大鼠被置于低压氧舱中分别模拟2,5,和7km不同海拔高度高原低氧8小时以及海拔7km高原低氧2,8和24小时不同时间,研究大鼠下丘脑和外周血液CRH和皮质酮水平的相应变化,分析下丘脑和血浆CRH线性相关性。还研究了大鼠脑CRHR1和CRHR2受体基因的表达变化模式,探讨了CRHR1在低氧脑细胞损伤中的作用。在以人类为对象的研究中,令志愿者进行自行车功量仪运动和登高跑运动两种平原耗竭运动模拟低氧,检测运动前后血浆和唾液中CRH和皮质醇水平,测定心率,氧饱和度,以及血清和唾液中的乳酸脱氢酶(LDH)水平;此外,志愿者进入3600和5500海拔的青藏高原现场,结合Lake Louise Score AMS标准,进行AMS问卷调查,根据临床AMS症状和发病率以及血浆、唾液CRH水平的相关变化,计算分析了CRH和发生AMS风险间的相关性。提出了应用检测唾液CRH水平预测发生高原AMS风险的方法。
  结果
  1.低氧强度和时间依赖性地增加大鼠脑PVN区CRH的分泌低氧显著性降低大鼠脑PVN和ME处CRH蛋白水平,升高大鼠垂体CRH水平,这个变化呈现低氧强度和时间变化依赖的关系。低氧显著性增加大鼠脑PVN区CRH mRNA的表达,随着低氧强度的增加,CRH mRNA的表达也增加。
  2.低氧强度和时间依赖性地升高大鼠血浆CRH和皮质酮水平及相关性分析低氧诱导大鼠血浆CRH水平升高,低氧后CRH水平的变化呈现低氧强度和时间依赖的关系。低氧诱导大鼠血浆皮质酮水平升高,皮质酮水平的变化同样呈现低氧强度和时间依赖的变化。
  3.低氧升高大鼠血浆CRH与中枢CRH分泌增加的相关性分析低氧升高大鼠血浆CRH水平和低氧刺激PVN区CRH释放相关,下丘脑CRH水平与血浆CRH水平呈负相关。血浆CRH水平与皮质酮水平呈正相关。
  4.低氧刺激大鼠不同脑区和垂体CRHR1和CRHR2受体的不同表达模式低氧后大鼠皮层、海马、杏仁中央核、PVN和蓝斑区CRHR1 mRNA表达升高,在7km高原低氧8小时达到峰值,低氧24小时后开始回落。大鼠垂体CRHR1mRNA表达模式相同。大鼠皮层、海马、杏仁中央核、蓝斑区和垂体CRHR2 mRNA表达降低,而下丘脑PVN区CRHR2 mRNA的表达与CRHR1 mRNA的表达模式相似的升高。
  CRHR1 mRNA和CRHR2 mRNA在不同脑区的相对表达水平不同,其中在皮层,杏仁核,蓝斑CRHR1 mRNA的表达水平是CRHR2 mRNA的3-5倍,而海马,PVN和垂体中CRHR1和CRHR2 mRNA的表达水平相近。低氧后,CRHR1和CRHR2 mRNA表达水平差异显著,7km海拔低氧8小时后最为明显,其中在皮层,杏仁中央核和蓝斑区两型受体表达水平相差8倍,而海马,PVN区和垂体两型受体相差2倍。
  5.低氧过度激活大鼠脑皮层CRHR1与皮层细胞凋亡相关大鼠皮层促凋亡基因(bim,bnip3,bax) mRNA表达水平在5km高原低氧8小时和7km高原低氧2和8小时后显著升高,而抗凋亡基因bcl-2 mRNA在2km高原低氧8小时后升高,5和7km高原低氧8小时后下降。凋亡蛋白caspase-3的活性在7km高原低氧8和24小时后都有显著升高。HE和TUNEL染色发现,7km高原低氧8小时后,大鼠皮层细胞肿胀,间隙加大,凋亡细胞显著增加。而预先使用CRHR1拮抗剂CP154,526处理后,能显著降低低氧诱导的凋亡基因bim和bax的表达升高,下调凋亡蛋白caspase-3的活性,降低凋亡细胞数目。
  6.急性耗竭运动诱导人体低氧生理反应志愿者登高跑运动后,心率由86±10/分钟升高到177±16/分钟,唾液LDH活性由199.7±112.7 U/L升高到468.7±279.9 U/L,而血清LDH活性没有显著变化,同时动脉血氧饱和度从98%±1%降低到93%±3%。自行车功量仪运动后心率从82±11/min升高到166±18/min,唾液LDH活性从156.7±92.5 U/L升高到294±187.6 U/L,而血清LDH活性没有明显变化,动脉血氧饱和度同样从98%±1%降低到94%±1%。
  7.急性耗竭运动和高原低氧诱导人体唾液和血液CRH水平升高检测健康人体唾液CRH和皮质醇水平存在明显的昼夜节律,唾液CRH水平在清晨7:00最高,中午11:00下降,在下午15:00和19:00保持一个稳定的水平,夜间23:00时降低到最低水平,唾液皮质醇的变化趋势和唾液CRH相同。
  耗竭运动低氧诱导唾液和血浆CRH和皮质醇水平显著升高,在登高跑运动后,唾液和血浆CRH水平分别从25.25±6.41 pg/ml和39.82±7.87 pg/ml升高到35.78±8.51 pg/ml和54.37±9.31 pg/ml,唾液和血浆皮质醇水平分别从1.62±0.54 ng/ml和6.5±1.51 ng/ml升高到3.52±1.22 ng/ml和10.8±2.58 ng/ml。自行车功量仪运动后,唾液CRH和皮质醇水平分别从5.68±6.15 pg/ml和1.96±0.53 ng/ml升高到40.21±10.1 pg/ml和4.11±1.12 ng/ml。
  志愿者在快速到达青藏高原3.6和5.5km后,唾液和血浆CRH分别从17.97±4.46 pg/ml和43.71±9.1 pg/ml升高到53.04±16.06 pg/ml和106.7±31.7pg/ml,唾液和血浆皮质醇分别从1.87±0.51ng/ml和11.43±2.76ng/ml升高到3.84±0.99ng/ml和1.72±5.81ng/ml。
  急性耗竭运动和高原低氧暴露前后,唾液和血浆CRH都有很好的线性相关性。在耗竭运动前后,唾液和血浆CRH水平的相关系数分别是0.9336和0.9086。而高原现场低氧暴露前后,唾液和血浆CRH水平的相关系数分别是0.8410和0.8142。此外,在急性耗竭运动后CRH水平和皮质醇水平也有很好的相关性,其相关系数是0.9228和0.9437,而志愿者暴露于高原环境低氧后,CRH水平和皮质醇水平无明显相关性。
  8.高原低氧AMS和血液、唾液高CRH水平相关人类志愿者分别从平原快速到达海拔3.6 km和5.5 km高度的青藏高原,到达高原后,使用AMS评分量表(Lake Louise Score)测定了个体AMS症状(AMS症状:包括头痛,恶心呕吐,全身无力,头昏和失眠)。在3.6 km组,AMS的发病率是28.6%(63人中有18人发病),其中50.7%的志愿者出现头疼,6.2%出现恶心呕吐,41.2%出现金身无力,49.2%出现头昏,17.4%的志愿者出现失眠。而在5.5km组,AMS发病率是50%(48人中有24人发病),其中头痛,恶心呕吐,全身无力,头昏和失眠的发生率分别是50%,37.5%,41.7%,39.6%和21.7%。根据AMS评分量表将志愿者分为AMS发病组和AMS未发病组,其中AMS发病组的血浆和唾液CRH水平比AMS未发病组高40%,而血浆皮质醇没有显著差异。
  9.唾液CRH基础水平可预测进入高原后发生AMS的风险性无论3.6 km组中唾液和血浆基础CRH,还是5.5km组的血浆基础CRH都可以预测AMS的发生,ROC曲线下的面积(Area under curve,AUC)可以用来衡量预测的准确性,3种样本的AUC分别是0.7292,0.6和0.7236。从ROC曲线上我们也得出了最佳预测诊断阈值。基础血浆CRH水平大于或等于50.33 pg/ml的志愿者中有83%(12人当中有10人)在到达3.6 km海拔高度的高原环境后发生AMS;而唾液中CRH水平的闽值为21 pg/ml,血浆和唾液中CRH水平存在线性相关,血浆CRH在50.33 pg/ml时对应的唾液CRH值为20.8 pg/ml。在另一组到达5.5km海拔高度的高原环境的志愿者中,基础血浆CRH水平在大于或等于49.16pg/ml有81%(16人当中有13人)发生AMS。
  结论:
  高原低氧高度和时间依赖性地刺激大鼠下丘脑PVN区CRH合成和分泌,上调不同脑区和垂体CRHR1 mRNA的表达,抑制CRHR2 mRNA的表达,激活皮层细胞促凋亡基因bnip3,bim,bax的表达和caspase-3活性的增加,当轻度低氧时,促进抗凋亡基因bcl-2的表达,严重低氧则抑制bcl-2的表达,诱导皮层细胞凋亡增加,CRHR1拮抗剂可逆转低氧诱导的细胞凋亡,提示低氧脑损伤与CRHR1的过度激活有关。低氧强度和时间依赖性的增加大鼠血浆CRH的水平,而与脑CRH水平呈负相关,与大鼠血浆皮质酮水平呈正相关,提示血浆CRH来源于下丘脑中枢的分泌,CRH以及CRHR1是低氧应激下脑损伤HPA的标志分子。
  人体耗竭运动诱导机体低氧,升高血浆和唾液CRH及皮质醇水平,唾液CRH水平和血浆CRH水平有很好的线性相关,由于动物实验证明唾液腺不含CRH神经元,提示唾液CRH来源于血液循环。此外,高原低氧暴露后血浆和唾液CRH同时升高,发生AMS的志愿者中具有高的CRH水平,提示高水平的CRH可能与AMS发生相关。唾液和血浆CRH可作为中枢CRH/CRHR1激活的标志分子和AMS的发生密切相关,提示特异的CRHR1抑制剂可能成为治疗或预防AMS的一种选择。此外,由于CRH和CRHR1过度激活与脑损伤有关,可被视为监视AMS的一种生物标志分子,提示通过检测唾液中CRH的水平,可以预测个体应对低氧应激损伤的能力,并预测AMS的风险。
[硕士论文] 焦永卓
流行病与卫生统计学 重庆医科大学 2013(学位年度)
摘要:目的:应用生态学和病例对照研究等流行病学方法,初步查找在地方性氟中毒发病中与氟元素起协同或拮抗作用的其它化学元素,查找与地氟病相关的土壤化学元素,并对比分析氟中毒病人与对照人群体内某些化学元素含量水平的差异,揭示其内在联系,为地方性氟中毒综合防治措施的制定提供科学的决策依据。探讨成釉细胞蛋白基因多态性与氟斑牙的关系,查找地氟病的易感基因,为阐明地氟病发病机制奠定基础。
   方法:
   (1)应用生态学研究,对各乡镇儿童氟斑牙患病率与土壤化学元素水平做相关分析,初步探索可能与氟元素具有协同或拮抗作用的某些化学元素;
   (2)应用病例对照研究,测定氟斑牙、氟骨症病人与内外对照全血中铜、锌、钙、镁、铁及尿氟含量,对比分析三组人群各检测指标含量的差异;
   (3)采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-FRLP)方法检测病例和内外对照AMBN基因的538_540delGGA、657A>G和986C>T的基因型,观察并分析比较组间各基因型分布差异。
   结果:
   (1)巫山县土壤中碘(r=0.571,P=0.041;镍(r=0.553,P=0.05); PH值(r=0.304, P=0.005)与患病率有较弱的正相关关系,且土壤中氟和碘含量均大于其背景值,中位数分别是其背景值的1.84、2.89倍,患病率高达65.3%的建平乡镉含量是其背景值的11.41倍,92%的乡镇PH值高于背景值呈碱性土壤。奉节县土壤中这11种化学元素和PH值与患病率无明显相关性;
   (2)巫山县儿童病例组铜、锌、镁、铁及尿氟均值高于外对照组,氟骨症患者镁、铁、尿氟均值高于内对照组,镁、尿氟高于外对照组;奉节县儿童病例组铜低于内外对照组,病例组与内对照组铁低于、钙高于外对照组,病例组尿氟高于内外对照组;奉节县氟斑牙儿童锌、钙、镁及尿氟高于巫山县的。以上比较差异均有统计学意义;
   (3)病例、内外对照组538_540delGGA位点各基因频率组间比较差异有统计学意义。病例、内外对照组657A>G位点各基因型组间比较差异无统计学意义。三组986C>T位点各基因型组间比较差异无统计学意义。与两对照组相比,病例组的GGA/GGA基因型频率降低(X2值分别为8.957、3.405,P值均<0.05),GGA完全缺失基因型频率增高。单因素分析结果显示,携带-/-(GGA完全缺失)基因型的个体罹患氟中毒的风险增高(病例组与内、外对照组比较OR值分别为2.7、5.9,P值均<0.05)。与内对照组比较,病例组的CT基因型频率增高。病区携带CT基因型的个体罹患氟中毒的风险增高。
   结论:
   (1)碱性的高氟土壤可能增加人体氟摄入量,土壤中的碘、镍、镉等环境化学元素水平可能与氟中毒的患病有关联;
   (2)病区人群体内抗氟元素水平较低,其他化学元素、环境、遗传等因素可能与患病有关,须进一步做全面分析。
   (3) AMBN基因7号外显子538_540delGGA和13号外显子986C>T位点多态性可能是影响氟斑牙发病的易感性因素之一。
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