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山东大学
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找到 72 条结果
摘要:为了适应新世纪对高素质人才的要求,在医学微生物学的实验教学中就如何激发学生的学习兴趣、培养学生的创新能力等进行了一些改革和探索.文章从实验室建设、实验内容以及教学方法方面进行了阐述....
[硕士论文] 齐眉
医学微生物学 山东大学医学院;山东大学;山东医科大学 1998(学位年度)
摘要:人乳头瘤病毒(HPV)是一种重要的DNA肿瘤病毒,它与人类的多种恶性肿瘤密切相关.其中高危型HPV16是宫颈癌、膀胱癌、骨髓癌等的重要诱因.HPV的致癌机理研究已取得了多方面的进展,HPV感染免疫方面的研究相对比较滞后,HPV的主要衣壳蛋白L1蛋白具有可自我组装成毒样颗粒(VLP)及不具转化活性的特点受到了国内外学者的关注.越来越多的实验表明,原核与真核细胞内表达产生的L1蛋白均具有抗原性,能刺激机体产生中和抗体,中和病毒感染,保护机体不受相应PV的攻击.利用HPV16L1蛋白进行HPV相关肿瘤的免疫防治,是一条大有希望的途径.该课题利用原核细胞表达系统表达产生HPV16L1蛋白,并检测其抗原性,为进一步进行HPV16L1 DNA在真核细胞中的表达及疫苗研制奠定基础.利用SDS-PAGE凝胶电泳及Western Blot方法分析检测JM109(DE<,3>)中HPV16L1蛋白的表达情况.结果表明,HPV16L1 NDA在JM109(DE<,3>中获得了成功表达而且表达产物具有良好的抗原性.
[博士论文] 齐眉
病原生物学 山东大学 2006(学位年度)
摘要:  第一部分 山东地区部分HIV感染者及献血者人疱疹病毒8型感染的流行病学调查
  目的 检测山东地区部分HIV(+)/KS(-)感染者及献血者血清或血浆中抗人疱疹病毒8型(HHV-8)IgG抗体的存在情况,并进一步对抗HHV-8阳性标本中HHV-8 DNA的存在情况进行检测;从而了解HHV-8在我国山东地区HIV感染者及献血者中的感染情况,并探讨HHV-8经输血传播的可能性。
  方法 86份HIV(+)/KS(-)血清(来源于山东地区HIV感染者)及520份献血者血浆(主要来源于济南地区)中抗HHV-8 IgG抗体的检测采用ELISA方法;抗HHV-8阳性标本(血清或血浆)中HHV-8 DNA的检测采用实时荧光定量PCR技术(SYBR Green Ⅰ荧光染料法)。
  结果
  1 血清学检测结果
  1.1 86份HIV(+)/KS(-)血清中抗HHV-8抗体检出率为16.275%(14/86),与对照组(健康献血者血浆)比较有显著性差异(P<0.05)。
  1.2 520份献血者血浆中抗HHV-8抗体检出率为5.962%(31/520),其中男性献血者血浆中抗HHV-8 IgG抗体的检出率为6.367%(17/120),女性献血者血浆中抗HHV-8 IgG抗体的检出率为5.534%(14/110)。统计学分析表明,不同性别、年龄献血者血浆中抗HHV-8 IgG抗体的检出率无显著性差异(P>0.05)。
  1.3 HBsAg(+)、抗HCV(+)以及抗梅毒螺旋体(+)献血者血浆中抗HHV-8 IgG抗体的检出率分别为4.065%、4.651%及6.579%,统计学分析表明,抗HHV-8抗体的检出与HBsAg、抗HCV以及抗梅毒螺旋体的检出相关性不大(P>0.05)。
  2 PCR检测结果
  所有抗HHV-8阳性标本(血清或血浆)中均未检出HHV-8 DNA的存在。
摘要:医学微生物学是一门实验科学,实验技术是其不可缺少组成部分.它不仅是学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程,也为学生进一步深入学习其他生命科学特别是分子生物学实验技术奠定基础.本课程在细菌学、病毒学及特微等方面培养学生基本实验方法及技能,包括:显微镜的适当使用,怎样制片染色,无菌技术转移和接种细菌,选择各种各样培养基接种分离并鉴定细菌、细胞培养、病毒分离鉴定等.通过学习能加深学生对微生物学基本理论知识的理解与认识,提高观察、思考、分析和解决问题的能力.我们从七年制微生物学实验教学改革入手,着重提高实验教学质量,加强学生能力及综合素质培养....
摘要:目的:建立一种简便的ELISPOT方法,用于检测和评价特异性抗体形成细胞的功能,并观察HPV16L1蛋白疫苗接种小鼠诱发体液免疫的效应.方法:将HPV16L1抗原或抗鼠IgG的俘获抗体包被在预先贴有硝酸纤维素膜的培养板微孔内,取被HPV16L1蛋白疫苗免疫的鼠脾细胞,经HPV16L1抗原刺激后加到微孔内,已固定的抗原/抗体可与细胞分泌出的抗体结合.再加入RAM-HRP标记的羊抗鼠IgG和沉淀性底物溶液(DAB),可在有HPV16L1特异抗体产生细胞的位置产生棕褐色的斑点,每个斑点代表一个分泌细胞.同时ELISA法检测血清与脾细胞上清液中HPV16L1特异性IgG水平.结果:免疫组HPV16 L1特异性抗体生成细胞的频数明显高于对照组.结论:ELISPOT法较ELISA法更灵敏,HPV16L1疫苗可有效刺激小鼠产生特异性抗体....
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北大核心 CSTPCD AJ CA
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摘要:2005年1月~2006年1月,我们对520例济南地区无偿献血者血清人疱疹病毒8型(HHV-8)IgG进行了检测,并对其与HBV、HCV感染的相关性进行分析,现报告如下....
摘要:卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcomaassociated herpesvirus,KSHV)又称人疱疹病毒8型(HHV-8),是1994年美国学者Chang[1]等首先从AIDS患者卡波氏肉瘤(KS)组织中发现的一种新的肿瘤病毒,目前被认为是KS的致病因子.KS是AIDS患者最易患的一种血管瘤,在AIDS患者中的发病率可高达50%....
摘要:目的:构建HPV16L1-E7C重组质粒并研究其细胞免疫性.方法:利用基因克隆技术将HPV16L1-E7C DNA片段定向插入pcDNA3.1载体,构建重组质粒pcDNA16L1-E7C,然后将其免疫C57BL/6小鼠,利用T淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖能力,同时利用ELISA试验检测免疫小鼠的脾淋巴细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)的水平.结果:特异性T细胞增殖试验中实验组3H-TdR掺入率为18 339±1 972,对照组为6 737±1 243,实验组小鼠T细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.05).DNA免疫后实验组小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平为0.89±0.56,对照组为4.81±1.33,两者相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:重组质粒能增强小鼠的细胞免疫功能....
摘要:阐述了留学生医学微生物学的教学过程中的特点及在克服语言障碍、采用多种教学方式及正确认识文化差异三个方面所采用的对策....
摘要:目的:获得纯的重组SARSCoV M蛋白,并初步测定重组蛋白的抗原性.方法:软件分析SARSCoV M蛋白富含免疫表位的片断,体外合成编码SARSCoV M蛋白15-170aa序列的DNA片段,利用DNA重组技术,将该合成DNA克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建重组质粒pGEX-SARSCoV M.在大肠杆菌BL21中诱导表达GST-SARSCoV M重组融合蛋白,分离纯化GST-SARSCoV M蛋白,利用纯化蛋白作为抗原,建立ELISA试验检测抗SARSCoV M抗体.结果:GST-SARSCoV M蛋白分子量为43kD,纯化的GST-SARSCoV M蛋白作为抗原检测血清中SARSCoV M抗体,53例正常成人献血者血清未检出SARSCoV M抗体.结论:SARSCoV M蛋白表达成功,在健康人血清中未检出SARSCoV M抗体....
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北大核心 CSTPCD AJ CA
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摘要:利用PCR技术获得人疱疹病毒8型(HHV-8)ORF73C基因,克隆至pGEM T-easy载体,进一步克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建含HHV-8 ORF73C基因的重组表达质粒pGEXORF73;重组表达质粒pGEXORF73在大肠杆菌中得到有效表达....
摘要:为了适应医学教育改革的发展趋势,加强学生的自主学习能力和分析解决问题能力的培养,山东大学医学院构建了系列整合课程体系.其中“感染免疫与相关疾病”将医学免疫学、医学微生物学、人体寄生虫学、传染病学以及药理学(抗生素)、病理学(传染病病理)等关联较密切的学科内容进行有机整合,采取课堂教学、PBL、实验教学、临床见习相结合的教学方式,目前已开设近三年,在主动学习和分析解决问题的能力培养以及临床思维方式的培养等方面取得了优于传统教学模式的良好教学效果.文章着重讨论带教过程中遇到的问题及体会....
摘要:为提高医学微生物学实验教学质量,激发学生学习兴趣、培养科学思维、掌握实验操作技能,进行了一些改革和探索.文章从整合实验教学内容,开发综合性试验;引入设计性实验教学法,发挥学生主观能动性;加强实验室建设,重视生物安全方面以及改进实验教学手段,增添实验内容等方面进行了阐述....
摘要:乳酸杆菌是女性生殖道的主体益生菌,我们发现经热灭活的乳酸杆菌对宫颈癌细胞系HeLa细胞具有较强的黏附性.现已证实低表达MHCⅠ类分子或缺乏共刺激分子进而逃逸宿主的免疫监视是肿瘤细胞的重要特征,因此,提高肿瘤细胞的免疫原性,回复机体对肿瘤细胞的免疫监视功能是抗肿瘤治疗的重要策略....
摘要:目的:探讨GM-CSF增强HPV16E6c DNA疫苗免疫效应的作用.方法:①将C57BL/6小鼠18只分为1、2、3 3个组.DNA免疫前,每只小鼠胫骨前肌注射0.25%的布比卡因100μl,24h后,1组注射pcDNA3.1为对照组;2组注射pcDNA3.1E6c;3组注射pcDNA3.1E6c+GM-CSF,2周后加强免疫1次;②加强免疫2周后,取小鼠脾脏及血清进行免疫功能测定.结果:①T细胞增殖实验结果:3H-TdR掺入率:1组为6736,2组为15732,3组为26959,2组比1组提高了133.5%,3组比1组提高了278.7%、比2组提高了71.4%,经t检验表明,3组间的两两比较差异均有统计学意义,P<0.01;②E6CTL表位合成肽特异性刺激后IFN-γ的产量:1组无IFN-γ产生,2组为624.8,3组为832.9,3组比2组提高了33.3%,经t检验表明,两组间差异有统计学意义,P<0.01;③特异性抗体的产生:1组为0.04233,2组为0.4575,3组为0.8125,2组是1组的9.8倍,3组是1组的18.2倍,3组比2组提高了77.6%.经t检验表明,3组间的两两比较差异均有统计学意义,P<0.01.结论:GM-CSF可有效的提高HPV16E6c DNA疫苗的细胞和体液免疫效应....
摘要:目的:构建HPV6b L1-E7嵌合基因重组减毒沙门菌,为进一步粘膜免疫奠定基础.方法:用PCR方法扩增获得HPV6b的L1-E7嵌合基因片段,TA克隆后,再将L1-E7基因克隆入pTETnir15沙门菌表达质粒.用电转化法将重组表达质粒导入鼠伤寒减毒沙门菌S.BRD509(△aroA,△aroC)中,厌氧诱导其表达,蛋白样品做SDS-PAGE凝胶电泳和western blot分析.结果:用BamHI和Sall双酶切重组表达质粒pTETnir15-6bL1E7可释放2389bp和1554bp两片段,结果与预计相符.western blot结果显示,重组沙门菌在约56KD处有明显特异蛋白条带,而对照菌则无.结论:该重组沙门菌能特异地表达HPV6b L1-E7融合蛋白,人乳头瘤病毒HPV6b L1-E7重组减毒沙门菌构建成功....
摘要:为了评价重组大肠杆菌表达的HPV16L1蛋白和重组腺病毒表达的HPV16L1-VLP两种抗原在检测宫颈癌抗16 L1或VLP抗体及在宫颈癌血清学诊断意义上的差别,应用PCR技术从宫颈癌组织的DNA中扩增出全长1535bp的HPV16L1基因片段,克隆至pUC18-T载体中,进行DNA测序鉴定.然后,将HPV16L1基因克隆至pGEX-2T表达载体中,并诱导表达HPV16L1融合蛋白,分子量为83kD,能被HPV16L1单克隆抗体所识别.经GST柱层析法纯化后,与重组腺病毒表达的HPV16L1-VLP分别经酶联免疫吸附(ELISA)法检测12份宫颈癌患者和35份献血员血清.12例宫颈癌血清标本中,抗HPV16L1蛋白的抗体阳性率为7例(占 58.3%);抗HPV16L1-VLP的抗体阳性率为8例(占 66.7%).经大肠杆菌表达的重组抗原HPV16L1检测为HPV16抗体 IgG(+)的 7份患者血清,利用HPV16L1-VLP试剂盒检测均阳性;经大肠杆菌表达的重组抗原检测为HPV16抗体 IgG(-)的5 份患者血清,利用HPV16L1-VLP试剂盒检测有1份阳性.两者对HPV16抗体的阳性检出率并无显著差异(P>0.05).本实验结果说明HPV16与宫颈癌高度相关,利用大肠杆菌表达的重组抗原HPV16L1和HPV16L1-VLP重组抗原检测抗体的敏感性并不受影响.利用重组抗原HPV16 L1对宫颈癌的抗体进行定性、定量分析有助于该疾病的诊断....
摘要:为探讨优化密码对牛乳头瘤病毒1型主要晚期基因(BPV1L1)免疫原性的影响,分别将含野生型和优化密码的人源化BPV1L1基因的真核表达质粒转入减毒沙门菌S.BRD509后,通过滴鼻、阴道免疫、静脉注射、腹腔注射等途径免疫小鼠,经VLP ELISA方法测定抗L1构象性抗体产生,MTT法观察诱导的特异性细胞免疫反应.抗体检测结果显示,经粘膜免疫途径,与含有野生型L1基因的表达质粒pcDNA3WBPVL1相比,含优化密码L1基因的pcDNA3HBPVL1诱导产生的SIgA、IgG明显升高,而细胞免疫反应无明显差异.表明优化密码能促进乳头瘤病毒晚期基因L1诱导的体液免疫反应,减毒沙门菌是PVL1 DNA疫苗粘膜免疫的有效载体....
摘要:目的研究猴病毒40(SV40)转化的人胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞MGC-803的差异蛋白质组. 方法运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术比较两者差异蛋白,差异蛋白用胰酶进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索. 结果获得17个GES-1和MGC-803细胞间表达差异蛋白质的明确信息,涉及细胞骨架、细胞调控、细胞凋亡和生物氧化等种类蛋白质. 结论 SV40转化的人胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞MGC-803间的表达蛋白具有差异,这些差异蛋白分析有助于深入研究胃癌发生发展机制,进而为胃癌的早期诊断和防治提供依据....
摘要:目的研究幽门螺杆菌由螺杆状转变成球形休眠体的相关蛋白. 方法运用双向电泳技术比较螺杆状幽门螺杆菌及其球形休眠体全菌蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索. 结果获得9个与幽门螺杆菌球形休眠体形成相关蛋白,即相对分子质量(Mr)为26×103的过氧化物酶、硫氧还蛋白、烯醇酶、黄素氧化还原蛋白、单链DNA结合蛋白、翻译起始因子1、延长因子P、中性粒细胞激活蛋白和Mr为10×103的热休克蛋白. 结论上述蛋白的鉴定为深入研究幽门螺杆菌球形休眠体形成机制,筛选具有潜在价值的抗幽门螺杆菌药物靶位和疫苗候选靶位具有参考价值....
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