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[硕士论文] 鲍玉艳
生理学 东北师范大学 2010(学位年度)
摘要:20-羟二十烷四烯酸(20-HETE),细胞色素P450s(CYP)ω-羟化酶的花生四烯酸的代谢物,具有重要的血管紧张度调节作用。但是关于20-HETE对心脏的作用报道甚少,尤其在心肌细胞水平的研究更少。为了揭示20-HETE在对心肌细胞凋亡的作用,本文研究了外源20-HETE对培养的乳鼠心肌细胞诱导凋亡的效应及其信号通路,发现20-HETE可以通过线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡。方法与结果:(1)通过FITC-annexinV/propidium iodide(PI)双染的方法检测细胞凋亡率,发现与对照组相比,20-HETE处理后,细胞凋亡率从20.7±0.8%升高到31.7%±2.0%;(2)通过激光共聚焦,利用JC-1做荧光探针,发现20-HETE可以使心肌细胞线粒体膜电位升高,这就意味着线粒体内凋亡信号分子的释放,激活了心肌细胞凋亡的线粒体信号通路。细胞凋亡是细胞程序性死亡,有重要凋亡基因的参与;(3)通过RT-PCR的方法对促凋亡基因Bcl-2和抑凋亡基因BaxmRNA的表达进行了检测,发现20-HETE能引起Bcl-2的表达下调,而Bax的表达上调,Bax蛋白的表达可以进一步促进线粒体凋亡因子的释放;(4)对凋亡蛋白Caspase-3的活性进行了检测,显示20-HETE导致Caspase-3产生增多,进一步证明了凋亡的发生;(5)通过对于[Ca2+]i的测定,发现20-HETE可能通过增加[Ca2+]i引起钙超载,激活了线粒体信号通路,导致心肌细胞发生凋亡,而引起一系列的级联反应。这些结果揭示了20-HETE可以通过线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡,这为进一步研究20-HETE在心脏上的作用做出了理论依据。
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