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摘要:根据已报道的甜瓜CmERFII-11基因cDNA序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从甜瓜果实中克隆得到CmERFII-11基因.采用相关分析软件对该基因进行了生物信息学分析,利用荧光实时定量PCR进行表达分析.结果表明,所克隆的cDNA长度为954 bp,编码255个氨基酸,编码蛋白质的分子量为28.33ku,理论等电点为7.62.该基因在根、茎、叶组织以及授粉后不同时期果实中均有表达,在叶片组织中的表达量最高.
摘要:WRKY转录因子是一类重要的调控分子,在高等植物中以基因家族的形式存在.本研究以甜瓜(Cucumis melo L.)基因组数据为材料,利用生物信息学手段对WRKY转录因子家族成员、系统进化、基因分类、保守基序(motif)的保守性进行预测和分析.研究表明,甜瓜WRKY家族包含61个基因,其中13个含有2个WRKY结构域和C2H2锌指型结构归为第Ⅰ类,43个含有1个WRKY结构域和C2H2锌指型结构的归为第Ⅱ类,5个含有1个WRKY结构域和C2HC锌指型结构的归为第Ⅲ类.
[硕士论文] 鲍牧兰
生物化学与分子生物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:ERF(ethylene responsive factor)与乙烯信号转导相关,是一类位于信号途径下游的转录因子,可参与逆境应答、植物生长发育和果实的成熟。ERF转录因子属于AP2/EREBP家族中的EREBP亚族,包含一个AP2/ERF结合域。在甜瓜(Cucumis meloL.)中已经克隆得到若干ERF转录因子基因,但与甜瓜果实成熟相关研究报道较少。甜瓜属于葫芦科甜瓜属,果实具有丰富的营养,因此,深入研究与甜瓜果实成熟相关的ERF转录因子功能已经成为必要。本研究根据甜瓜数据库序列分别克隆得到三个ERF转录因子CmERFⅢ-12、CmERFⅢ-14、CmERFⅤ-2基因,分别编码275、148、391个氨基酸,利用生物信息学软件进行蛋白理化性质、磷酸化位点、信号肽结构、跨膜结构等相关性质预测。结果表明三个转录因子都具有亲水性,有不同的磷酸化位点,不属于分泌型蛋白,不具有跨膜结构,也不属于膜蛋白;亚细胞定位预测显示CmERFⅤ-2和CmERFⅢ-14很可能定位于细胞核,CmERFⅢ-12在细胞质内分布较多,因此三个转录因子可能分别在细胞核和细胞质内发挥着调控作用。为研究其初步功能,构建CmERFⅢ-12、CmERFⅢ-14、CmERFⅤ-2基因超表达载体和RNAi干扰载体,利用农杆菌注射法在甜瓜果实中进行瞬时表达,通过实时定量PCR分别检测转化部位三个基因的表达特性和果实成熟相关基因的相对表达量。结果显示,注射CmERFⅢ-14基因超表达载体部位果皮颜色出现提前变黄表型,注射干扰载体部位仍保持绿色;注射CmERFⅤ-2基因超表达部位果皮颜色保持绿色,注射干扰载体部位出现变黄表型;分别注射CmERFⅢ-12基因超表达与干扰载体部位的果皮颜色表型不明显。注射组织实时定量PCR检测结果显示:CmERFⅢ-14基因的过表达和干扰处理分别会激活和抑制果实成熟相关ACS4、EXP1、PSY1基因的表达。CmERFⅤ-2基因的过表达能抑制EXP1基因的表达。结合表型结果,CmERFⅤ-2基因可能推迟果实的成熟而CmERFⅢ-14基因会促进果实的成熟,CmERFⅢ-12基因则对果实成熟的影响不大。构建携带有果实特异表达E8基因启动子的报告载体pPZP-E8-GUS,以分别携带目的基因超表达载体为效应载体,通过叶片注射法共转化本氏烟草(Nicotiana benthamiana),根据GUS活性变化,CmERFⅢ-12、CmERFⅢ-14转录因子基因能够激活果实特异性E8启动子促进基因的表达而增加GUS酶的相对活性,而CmERFⅤ-2则倾向于抑制E8启动子降低GUS基因的表达而影响酶的相对活性。
摘要:[目的]研究甜瓜CmERFIV-5基因的克隆、表达分析及超表达和RNAi载体构建.[方法]根据GenBank上登录的甜瓜一个乙烯应答因子(ethylene responsive facter,ERF)基因cDNA序列(登录号:MELO3C024315)设计合成特异性引物.应用RT-PCR技术从甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumismelo L.cv.Hetao)成熟果实中克隆得到该基因cDNA序列,命名为CmERFIV-5,分析了该基因在甜瓜根、茎、叶及果实发育过程中的表达特性,将其构建到过量表达载体pPZP221中,得到重组植物表达载体pPZP221-CmERFIV-5.同时,构建了该基因RNAi载体pART-27-CmERFIV-5.[结果]序列分析显示,所克隆的cDNA长度为808bp,编码255个氨基酸.荧光实时定量PCR分析表明,CmERFIV-5基因在甜瓜根、茎、叶及不同发育时期的果实中均有表达,在叶片中表达量最高.[结论]构建了CmERFIV-5基因的过量表达载体与RNAi载体,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
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