绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 5 条结果
-
北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
-
摘要:为了解鱼类白细胞介素6(IL-6)基因的转录调控原理及其免疫作用机制,构建5个团头鲂 il-6基因启动子的荧光素酶报告质粒(PGL3-IL-6P),以 PGL3-basic 质粒作为阴性对照,将它们分别与内参质粒 pRL-TK共转染进鲤 EPC 细胞,并用100 ng/mL 的 LPS 诱导转染过重组载体的细胞,24 h 后检测荧光素酶的活性。结果显示:与阴性对照组相比,质粒转染组 PGL3-IL-6P-0、PGL3-IL-6P-1、PGL3-IL-6P-2、PGL3-IL-6P-3与 PGL3-IL-6P-4的荧光素酶活性均明显升高,其中 PGL3-IL-6P-4组的荧光素酶活性最高,表明该启动子缺失体(-379至+34)包含 il-6的核心启动子。用 LPS 刺激转染过重组载体的细胞后发现,与未经 LPS 刺激的对照组相比,仅 PGL3-IL-6P-4组的活性明显增强,而其余缺失体的活性则没有显著变化,这进一步表明 PGL3-IL-6P-4缺失体包含核心启动子区,并推测该核心启动子区域存在的潜在转录因子 NF-κB 与 C/EBPβ等可能是响应 LPS 刺激的重要作用元件。...
[博士论文] 饶友亮
水产动物医学 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:维甲酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)样受体(RIG-Ⅰlikereceptors,RLRs)在感知RNA病毒感染和启动抗病毒免疫应答中发挥着重要作用。RIG-Ⅰ和黑色素瘤分化基因5(melanoma differentiation-associated gene,MDA5)是RLR家族两个重要成员,它们负责识别病毒双链RNA(double strand RNA,dsRNA)并通过与干扰素β启动子激活因子1(IFN-βpromoter stimulator1,IPS-1)互作和翻译后修饰来引起下游信号活化。但是对于RLR家族第三个成员遗传学和生理学实验室蛋白2(laboratory of genetics and physiology2,LGP2)来说,因缺少半胱天冬酶富集结构域(caspase recruitment domain,CARD),使得LGP2不能招募信号传导蛋白以引起下游信号的级联放大。到目前为止,关于LGP2的功能是有争议的,因为既有关于其正调控的报道也有关于其负调控的报道。但是对于LGP2发挥两种截然相反的功能的原因尚不清楚。尤其是在鱼类中,目前还没有充足的证据证明LGP2在RLR信号通路中的调节机制。
  高迁移率族蛋白(high-mobi1ity group box protein,HMGB)是一类保守的染色质相关蛋白,也是一类新的核酸识别分子。之前的研究表明,草鱼(Ctenopharyngodon idella)HMGB家族成员在草鱼呼肠弧病毒(grass carp reovirus,GCRV)感染过程中发挥重要作用。由病毒感染和病原相关分子模式(pathogen-asociated molecular pattern,PAMP)刺激引起的HMGB动态亚细胞定位是受HMGB分子内不同结构域间相互作用调控的。然而,对于HMGB在抗病毒免疫中的调节机制尚不清楚。
  在本研究中,我们对GCRV感染过程中,LGP2在RIG-Ⅰ和MDA5调节的抗病毒免疫反应中的调节机制进行了研究。同时我们也鉴定了热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)作为HMGB1b的互作蛋白,并证明了HSP70在HMGB1b调节的抗病毒自噬中的正调控作用。
  1.在静息状态下和GCRV感染早期,LGP2在RIG-Ⅰ和MDA5调节的抗病毒信号传导中发挥负调控作用
  在本研究中,我们证明,在静息状态下或病毒感染早期,LGP2过表达抑制了干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)3和7的蛋白合成和磷酸化水平。同时,LGP2过表达也抑制了所有干扰素(interferon,IFN)家族成员(IFN1、IFN2、IFN3、IFN4、IFNγ1、IFNγ2)和核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)家族成员(NF-κB1、NF-κB2)的mRNA水平和启动子活性。敲降LGP2之后得到了相反的效应。双荧光素酶报告试验表明,LGP2在RIG-Ⅰ和MDA5上游发挥作用。同时,LGP2能与RIG-Ⅰ和MDA5相互作用,并且这种相互作用是不依赖于GCRV感染的。结构域互作试验发现,LGP2与MDA5的三个结构域都互作。但不与RIG-Ⅰ的CARD结构域互作。此外,LGP2对RIG-Ⅰ和MDA5的K63连接的泛素化有明显的抑制作用,但对RIG-Ⅰ和MDA5的CARD结构域来说,LGP2过表达只显著抑制了RIG-Ⅰ的CARD结构域K63连接的泛素化,而对MDA5CARD结构域的K63链接的泛素化没有影响。这种差异导致了LGP2在RIG-Ⅰ和MDA5调节的IPS-1和IRF3活化调节因子(mediator ofIRF3activation,MITA)活化中的不同抑制机制。有意思的是,LGP2对RIG-Ⅰ和MDA5的K48连接的泛素化也有抑制作用。我们推测这种抑制作用保证了RIG-Ⅰ和MDA5的基础蛋白水平,为随后信号的迅速活化提供了物质基础。以上结果表明,在静息状态下或病毒感染早期,LGP2在RLR信号通路中发挥负调控作用,这是机体维持稳态所必须的。
  2.GCRV感染后,HSP70通过与HMGB1b互作、引起HMGB1b的胞质转运、以及增强HMGB1b-Beclin1相互作用来促进HMGB1b调节的抗病毒自噬
  自噬在病理和生理过程中发挥着重要作用。然而,在鱼类中,人们对自噬在应对病毒感染中所扮演的角色及其调控机制的研究却很少。在本研究中,我们发现GCRV感染和双氧水(hydrogen peroxide,H2O2)处理引起了CIK(C.idella kidney,CIK)细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的积累以及随后的自噬活化。而ROS引起的自噬反过来抑制了病毒复制。进一步的研究表明HMGB1b是一个HSP70依赖的促自噬蛋白。在H2O2处理后,胞质定位的HSP70转运到细胞核并在细胞核中与HMGB1b互作,进而促进了HMGB1b的胞质转运。在胞质中,HSP70与HMGB1b协同增强ROS引起的自噬活化。而且,HSP70通过与Beclin1的直接相互作用来增强HMGB1b和Beclin1的相互关联以及自噬体团块化聚集。本研究揭示了鱼类抗病毒自噬的诱导过程,证明了HSP70在HMGB1b调节的自噬启动中的重要作用。这些发现启示我们可以通过激活自噬以及自噬信号通路来开发新的草鱼出血病治疗策略。
[专利] 发明专利 CN201510615817.4
华中农业大学 2015-12-09
摘要:本发明属于鱼的分子标记制备技术领域,具体涉一种草鱼抗出血病性状的分子标记及应用。所述的分子标记由草鱼RIG-I基因克隆和转录组测序得到,所述分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:1所示:在该序列的第665位碱基处有一段15bp的碱基片段的插入(缺失)突变,造成草鱼RIG-I蛋白211-215位氨基酸的插入(缺失)(如序列表SEQ?ID?NO:2所示)。草鱼呼肠孤病毒感染试验表明:插入基因型草鱼死亡率显著低于缺失型草鱼死亡率,由此说明草鱼RIG-I基因这段碱基突变与抗草鱼出血病症状相关。本发明为草鱼抗草鱼出血病免疫性状的标记辅助选择提供了一个新的分子标记。
摘要:为了揭示草鱼(Ctenopharyngodon idella)高迁移率族蛋白(High-mobility group box proteins,HMGBs)的亚细胞定位。
摘要:近年来,随着高通量测序的技术逐步发展与成熟,基于高通量测序,研究养殖物种应对病原微生物入侵的转录组应答有助于更好地理解养殖物种的免疫机制。因此,本研究对人工养殖的草鱼进行草鱼呼肠孤病毒(GCRV)感染之后,将草鱼分为易感型和抗性型;再分别提取两种表型草鱼的头肾和脾脏组织RNA 后构建四个mRNA 文库;之后利用Illumina Miseq 平台进行测序。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部