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摘要:目的:探讨微孔板酶联比色测定法在蚯蚓粗提物蛋白质量浓度、蚓激酶活性测定中的应用。方法蛋白质量浓度采用改良Lowry法,蚓激酶活性采用TAME法,分别使用常量体积和微量体积,用紫外可见分光光度计和酶标检测仪进行测量,用SPSS软件进行直线拟合,做出标准曲线,比较测量结果。结果标准曲线截距RSD<5%,用标准曲线检测BSA的结果显示,2种质量浓度、2种方法的回收率分别为99.6%,94.6%,101.2%和96.5%,RSD分别为3.30%,5.05%,3.36%和2.59%,经t检验3种检测结果差异无统计学意义,可以认为2种检测方法测得的数据一致。结论可以采用微量法进行蚯蚓粗提物蛋白质量浓度、蚓激酶活性的测定。...
摘要:目的 筛选、鉴定鹿茸中的促神经生长组分,并对其生物学活性进行评价.方法 用标准品重组人神经生长因子(rhNGF)作用于PC12细胞,建立评价神经生长因子(NGF)生物活性的技术平台,筛选、鉴定鲜鹿茸及鹿茸表皮细胞分泌物中促神经生长组分.结果 鲜鹿茸经匀浆、均质及CM-FF离子交换层析的洗脱Ⅱ峰中含有促神经生长组分,经Western blot法确定其含有NGF的β亚基,而鹿茸表皮细胞培养分泌物中无此生物学活性.结论 鲜鹿茸中含有NGF类因子,可以促进PC12细胞的增殖,可能是鹿茸益智的药效组分之一....
摘要:目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染地鼠肾细胞BHK-21的抑制作用.方法 将不同浓度的NGF(100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6和0.8μg/L)加入BHK-21细胞中,采用MTT法检测NGF对BHK-21细胞的毒性作用;将不同稀释度的JEV(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7)JEV感染BHK-21细胞,蚀斑计数法测定病毒滴度;在JEV感染的BHK-21细胞中加入不同浓度的NGF,观察细胞的CPE情况,并通过蚀斑减少率分析NGF对JEV的抑制作用.结果 NGF浓度在100 μg/L以内对BHK-21细胞无毒性;JEV的滴度为Lg 8.70 pfu/ml;NGF(12.5 μg/L)+ JEV组BHK-21细胞病变程度明显减轻;随着NGF浓度的提高,蚀斑减少率也呈升高趋势(r=0.929,P<0.05),NGF浓度为3.1μg/L以上时,蚀斑减少率达10%以上,具有明显的抗JEV效果.结论 NGF在浓度为0.8~100 μg/L的范围内,对JEV具有明显的抑制作用,为今后研究NGF抗病毒的作用机制奠定了实验基础....
摘要:将牛脑海马粗提物经盐析、透析、CM-离子交换层析分离纯化得到2个洗脱峰,其中CM2峰含有NGF.利用Western Blot检测结果表明,NGF的分子量约为55 KD和70 KD;PC12细胞法检测其生物学活性,在CM2分离组分作用下,PC12细胞轴突生长效果优于2ng/mL标准品NGF;原子吸收分光光度法检测脑海马结构微量元素含量,Zn与Cu无差别,Fe与Zn、Cu有差异(P<0.01);CM2组分中Fe与Cu含量无差异,Zn远高于Fe、Cu含量(P<0.01)....
摘要:为探索SP调控NK92-MI细胞功能的作用途径,研究Gs在SP活化NK92-MI细胞中的作用.采用CCK-8试剂盒检测Gsα特异性拮抗剂NF449对SP活化的NK92-MI细胞杀伤活性和增殖活性的影响;用RealTime PCR技术检测NF449对SP活化的NK92-MI细胞IFN-γ和LFA-1 mRNA表达的影响.结果显示:NF449对SP的促杀伤和促进IFN-γmRNA表达的活性吴有阻断作用;NF449对SP的促增殖活性无明显影响,NF449和SP对LFA-1 mRNA的表达均无明显影响.表明SP可通过Gs介导的信号通路促进IFN-γ mRNA的表达,这可能是SP促进杀伤活性的机制之一....
摘要:目的 探讨孟鲁司特对百草枯(PQ)中毒所致大鼠肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肺湿/干质量比(W/D)和血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、肺组织中核因子κB (NF-κBp65)及肺组织病理变化的影响.方法 取SD大鼠104只,随机(随机数字法)分为3组,PQ组40只、孟鲁司特组40只、对照组24只.PQ组和孟鲁司特组用百草枯一次性染毒,分别在不同处理后第1、3、5、7天时处死大鼠.观察肺组织中MDA和SOD含量、肺湿/干质量比(W/D)、血清TNF-α、IL-10含量及肺组织中NF-κBp65含量,并取肺组织制备标本分别在光镜和电镜下观察肺组织的病理改变.结果 PQ组第7天时肺组织中MDA含量、肺组织湿/干质量比、血清TNF-α和IL-10含量、肺组织中NF-κBp65含量明显高于对照组,SOD含量明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01).孟鲁司特组第7天时肺组织中MDA含量、肺组织湿/干质量比、血清TNF-α和IL-10含量、肺组织中NF-κBp65含量明显低于PQ组,SOD含量明显高于PQ组,差异均具有统计学意义(P<0.05).光镜及电镜观察PQ组病理学改变为急性弥漫性肺损伤,表现为肺泡腔内出血、渗出、炎性细胞浸润,Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞坏死脱落;孟鲁司特组大鼠肺组织病理改变为局灶性肺泡少量炎性细胞浸润,Ⅰ型上皮细胞完整,Ⅱ型上皮细胞未见明显坏死.结论 孟鲁司特对百草枯中毒所致大鼠急性肺损伤具有一定的保护作用....
摘要:研究SP对NK92-MI细胞杀伤活性以及活化性受体NCRs(NKp46、NKp44和NKp30分子)的表达的影响,揭示SP对NK细胞杀伤功能的调节作用及其内在作用机制.MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;Real-Time PCR检测NCRs的mRNA表达;流式细胞术检测NCRs的膜表达.在10-14~10-8 mol/L浓度范围的SP作用24h,对NK92-MI细胞的杀伤活性有明显增强作用;10-14~10-8 mol/L的SP,均可增加NK92-MI细胞活化性受体NKp44、NKp46及NKp30的mRNA表达;该浓度范围的SP均可增加NKp46的膜表达水平,仅较低浓度( 10-14moL/L)的SP对NKp44的膜表达水平有增加作用,各浓度的SP对NKp30的膜表达水平均无明显影响.SP可通过上调活化性受体NCRs的表达水平来调节NK细胞的活性....
摘要:选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制.采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体NKG2A的基因表达和膜表达.10-14~10-8 mol/L的SP在体外可明显增强NK92-MI细胞的杀伤活性.该浓度范围的SP均可上调NKG2D/NKG2A的mRNA水平;10-14 ~ 10-8 mol/L的SP均上调NKG2D/NKG2A的膜表达,较低浓度(10-14mol/L)的SP仅使NKG2D表达上调,而NKG2A表达无明显变化;SP刺激NKG2D膜表达增加的程度高于NKG2A.生物肽SP调节NK细胞功能性受体NKG2D/NKG2A的表达,可能是SP增强NK细胞杀伤活性的一种原因....
摘要:目的 从蚓激酶粗品中分离纯化出蚓激酶组分,制作外用凝胶剂,用于临床,与氢化可的松比较治疗急慢性皮炎的减果.方法 采用自身对照方法,将外用凝胶剂用于临床治疗急慢性湿疹的观察.结果 治疗急慢性湿疹总有效率达90.3%和92%.结论 蚓激酶凝胶对急、慢性湿疹效果明显,优于5%的氢化可的松....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:鹿茸(Cornu Cervi Pantotrichum)为雄鹿未骨化密生茸毛的幼角,是哺乳动物唯一可再生的组织,伴随着其骨质的生长,神经组织亦有所增长,故鹿茸中应存在一定量能够促进神经生长的物质,鹿茸化学成分含有17种以上的氨基酸,多种生物酶及神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子(NGF)、转化生长因子(TGF)等多种活性物质~([1,2])....
摘要:目的 研制对氧磷酶长循环脂质体.方法 采用薄膜分散法制备对氧磷酶长循环脂质体,采用凝胶柱法测定包封率,以包封率为指标,分别考察药脂比、胆固醇用量、聚乙二醇-胆固醇用量、离子强度等对脂质体的影响,在此基础上用正交设计对处方进行优化.结果 经薄膜分散法制得的脂质体包封率为(87.66±3.46)%,平均粒径为126 nm左右,粒度分布均匀,呈单峰分布,电镜结果显示外形圆整,分散性较好.4℃放置15 d包封率无明显变化,酶活性基本稳定.结论 聚乙二醇修饰的对氧磷酶长循环脂质体制备工艺简单可行,对氧磷酶长循环脂质体制剂学、酶学性质稳定....
摘要:目的:对蛇毒神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)凝胶进行了动物实验研究,包括药理学实验,急性毒性实验,皮肤刺激实验和皮肤过敏实验.方法:利用Hartely豚鼠2,4-二硝基氟苯致红斑性皮炎动物模型.结果:NGF凝胶对红斑性皮炎有明显的作用(P<0.01),超过临床1200倍有效剂量在用药后7天内不能导致皮肤刺激效应和毒性作用.结论:NGF凝胶在治疗皮炎中有显著疗效,无导致全身和局部的不良反应....
摘要:目的 观察神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)凝胶剂的抗炎抑菌作用.方法 以2,4-二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠耳廓肿胀法研究抗炎作用;以稀释法研究NGF凝胶的体外抑菌作用.结果 NGF凝胶有明显的抑制炎症模型小鼠耳廓肿胀的作用.对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)、乙型溶血性链球菌(ATCC32210)有良好的抑菌作用.结论 NGF凝胶具有良好的抗炎抑菌作用....
摘要:0-岩藻糖肽3-β-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(Lunatic Fringe,LFNG)与Notch信号作用密切相关,且LFNG在不同组织细胞中对Notch信号所起的作用不同.为了探讨LFNG在急性B细胞白血病中的表达及对Notch信号的作用,应用real-time PCR和Western-blot在核酸水平及蛋白质水平上检测了LFNG在人急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1、人正常B淋巴母细胞系HMy2.CIR及正常B细胞中的表达状况,并应用siRNA技术分析了LFNG基因沉默后对白血病BALL-1细胞中Notch信号通路的影响.结果显示:白血病细胞系BALL-1存在LFNG蛋白过度表达,且LFNG基因沉默后抑制白血病B细胞的Notch信号通路.上述结果提示LFNG在白血病B细胞中的异常表达能促进Notch信号....
摘要:疟疾是由疟原虫的胞内寄生引起的一种传染性疾病.NK细胞是先天免疫系统的重要细胞,是参与早期防御病毒感染和胞内病原菌感染的淋巴细胞.NK细胞具有细胞毒性,包括诱导被识别为靶细胞的细胞凋亡和分泌细胞因子的来调节免疫应答.NK细胞通过一系列激活或抑制性受体识别病原体-编码分子,使它们能够识别靶细胞.NK细胞在疟原虫感染早期免疫应答中发挥重要作用,有研究表明人NK细胞是外周血PBMC与Pf-iRBCs接触后最早产生保护性IFN-γ的细胞,NK细胞对iRBCs的反应能力决定IFN-γ的产量.NK细胞有直接杀iRBCs效应,体外实验证明NK细胞的溶细胞活性与原虫血症的程度正相关.NK细胞能直接识别疟原虫,但NK细胞直接识别iRBC的分子基础尚不明确.在清除iRBCs的天然免疫过程中NK细胞与其他免疫细胞(如单核细胞和髓系DCs)存在着错综复杂的相互作用.另一方面,NK细胞与疟原虫感染所致的一些严重的免疫病理性疾病(脑疟和妊娠疟疾)有关.NK细胞数量和活性的高低可能与疟疾的发病及感染的进程和最终结局有密切的关系.但是,NK细胞在疟疾感染中的保护性作用机制以及体内NK细胞在疟原虫感染中的作用地位仍有待于深入研究与阐明.
摘要:[目的]选择分离纯化低分子量地龙肽活性组分的最适方法及条件,确定其发挥免疫活性作用的有效组分.[方法]经超滤、丙酮沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析分离纯化地龙肽.Tricine-SDS-PAGE测定地龙肽分子量;高碘酸-Schiff法检测糖蛋白;脱E受体法及微溶血实验检测地龙肽活性和生物毒性.[结果11.截流分子量在3~10KD的地龙肽组分通过2倍体积冷丙酮沉淀可获得最大回收率;DEAE SepharoseTM Fast Flow作为离子交换剂可获得最佳分离效果;对上述洗脱峰成分进行Sephadex30pg凝胶过滤层析,获得一个高尖峰;Tricine-SDS-PAGE小分子肽电泳法测得其分子量约为10.764KD;高碘酸-Schiff法确定其不含糖成分.2.在一定浓度(2.065-41.300mg/ml)范围内,随着地龙肽浓度的升高E花环形成率逐步升高,且有较好的量效关系;微溶血实验显示其无溶解红细胞作用.3.45℃水浴30min,地龙肽组分的热稳定性较好;胃蛋白酶和胰酶与地龙肽的质量比为1∶20,37℃水浴1h,地龙肽组分耐受胃蛋白酶和胰酶的效果明显.[结论] 1.分子量约为10.764KD地龙肽单一组分具有较强的免疫调节活性.2.该组分无生物毒性,有较好的热稳定性和一定的耐受胃蛋白酶和胰酶的消化作用.
[硕士论文] 顾鹏毅
生物化学与分子生物学 中国医科大学 2009(学位年度)
摘要:神经生长因子(never growth factor,NGF)是神经营养因子中最早被发现,目前研究较为透彻的,具有神经元营养和促进突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子,其临床应用前景广阔。它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。 NGF具有多种营养性生物学效应:对胚胎发育期神经元的作用;促进生后发育神经元的生长;维持成熟神经元的存活;促进神经损伤的修复与再生;对神经变性性疾病的作用;对肿瘤的潜在性治疗作用;在炎性疾病中的作用;在糖尿病周围神经病变中的治疗作用。 目前,NGF的主要来源是小鼠的颌下腺、蛇毒、豚鼠前列腺、牛精液等,临床较多的采用小鼠颌下腺、蛇毒来源以及基因工程产品人重组NGF(rhNGF),其对人的神经组织有明显的作用,国内外文献已有很多报道。 人体的微量元素有70种,根据其作用分为人体必需微量元素和非必需微量元素及人体有害微量元素二类。所谓必需微量元素,就是正常人体生命过程中不可缺少的微量元素,它参与人体的重要的生命活动过程,对人体的各种生理活动起影响、调节作用。锌在脑中的分布是不均衡的,其中尤以海马结构最高,约占全脑的1/6,它主要位于海马苔状纤维的胞浆中,这些纤维起自海马,止于下丘脑。 本研究对牛脑神经生长因子进行分离纯化,以期为下一步应用性研究做好基础。 材料与方法: 从牛脑中分离出海马结构,利用生物大分子分离纯化技术分离纯化出NGF;利用电泳、蛋白印记杂交鉴定提取物为NGF;采用PC12细胞法测定其生物学活性;对其微量元素Zn、Fe、Cu进行测量。 结果: 牛脑海马粗提物经透析过夜,再经CM柱离子交换层析,得到2个洗脱峰:CM1峰、CM2峰,其中CM2峰为NGF的主要含量峰。电泳及WB结果表明:NGF的主要含量带大约为55KD,次含量带约为70KD,主、次含量带中亦含有β亚基,但结合了不同的α、γ亚基,WB显示的各条带中均含有活性基团B亚基。CM1分离组分和粗提物作用下的PC12细胞轴突生长不明显,标准品NGF、CM2分离组分作用下的PC12细胞轴突生长两者间存在差异(P<0.01),CM2分离组分作用效果低于标准品NGF,但也满足活性判定标准,可以认为CM2分离组分有生物学活性。牛脑海马结构的微量元素中Zn与Cu含量无差别,Fe与Zn、Cu有差异(P<0.01);NGF中Fe与Cu含量无差异,Zn远高于Fe、Cu含量(P<0.01)。 结论: 1.分离纯化得到的牛脑海马NGF的分子量主要为55KD、70KD的两种成分,具有生物学活性。 2.牛脑海马结构中锌元素的含量与铜元素相当,低于铁元素水平;牛脑海马NGF中锌元素的含量明显高于铁、铜元素含量。
摘要:以大鼠和小鼠为研究对象观察蚯蚓纤溶酶凝胶剂1.09/kg能抑制琼脂溶液引起大鼠足跖肿胀,而且能抑制复方巴豆油引起小鼠耳肿胀。用蚯蚓纤溶酶凝胶剂3h,炎症开始减轻,6h后炎症明显好转。该凝胶剂的作用强度和持续时间类似于50mg/kg醋酸考的松滴眼液。
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