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摘要:背景:传统的药物治疗和手术治疗成骨不全有诸多局限性,近年来越来越多的科学家尝试用间充质干细胞移植治疗成骨不全.目的:旨在通过间充质干细胞治疗成骨不全进展的总结,指导动物实验,以促进其临床应用.方法:由第一作者应用计算机检索PubMed 2000年1月至2018年6月相关文献.在标题、摘要、关键词中以“osteogenesis imperfecta,stem cells,mesenchymal stem cells,stem cells therapy,stem cells transplantation”为检索词进行检索.选择与间充质干细胞治疗成骨不全相关的文章,同一领域选择近期发表的文章.结果与结论:间充质干细胞可以通过直接分化为功能细胞和旁分泌作用治疗成骨不全带来的骨缺损,其低免疫原性和免疫调节作用可保证移植治疗的安全性.间充质干细胞可以从根本上治疗成骨不全,并且能避免药物治疗的不良反应,具有广阔应用前景.尽管目前尚缺乏系统的间充质干细胞治疗成骨不全的有效性和安全性标准,但间充质干细胞移植治疗可以规避传统药物和手术治疗的局限性,期待更多相关研究使之趋于成熟和完善,推动间充质干细胞治疗成骨不全向临床应用转化,真正使患者受益....
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 探究羟基磷灰石(HA)对脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成骨分化的影响.方法 分离、纯化并鉴定C57BL/6小鼠的ADSCs,将HA与ADSCs共培养,CCK-8法检测不同浓度(0、5、10、20、50、100、500 mg/L)的HA对ADSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(ALP)染色检测不同浓度HA对ADSCs成骨分化的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ADSCs成骨相关基因骨钙素(BGLAP)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(COL1A1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达情况.结果 低浓度HA(≤20 mg/L)对ADSCs增殖的影响较小,随着HA浓度增加,细胞的增殖活性下降.HA与ADSCs共培养可显著增加其ALP活性,并促进成骨相关基因的表达(P<0.01),且HA为20 mg/L时诱导效果较好.结论 HA具有诱导ADSCs向成骨细胞分化的能力,为两者混合制作成新的骨支架修复材料提供了理论基础....
摘要:[目的]探究2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)对人肾上皮细胞系(293T)细胞中长散在重复序列-1(LINE-1)基因表达和转座的影响.[方法] 293T细胞每2d传代一次,传代后立即使用5μmol/L PCB153进行染毒.染毒后的细胞置于37℃、体积分数5%CO2培养箱中继续培养,连续染毒10d.同时设置二甲基亚砜(DMSO)对照组.采用实时荧光定量PCR技术检测LINE-1开放阅读框1(ORF-1和开放阅读框2(ORF-2)基因的mRNA表达水平及拷贝数,LINE-1拷贝数增加反映其发生转座.Western blot检测LINE-1 ORF-1和ORF-2蛋白表达水平.[结果]与对照组比较,从第4天开始PCB153染毒组细胞中LINE-1 ORF-1 mRNA表达水平增加(P<0.05),从第6天开始PCB153染毒组细胞中LINE-1 ORF-2 mRNA表达水平增加(P<0.05).染毒第10天时,与对照组(LINE-1 ORF-1:2.74±0.51;LINE-1 ORF-2:0.57±0.10)相比,PCB153染毒组的LINE-1 ORF-1蛋白表达水平(4.39±0.85)和LINE-1 ORF-2蛋白表达水平(0.78±0.10)均明显增加(P<0.05).染毒第10天时,PCB153染毒组与对照组的LINE-1 ORF-1拷贝数分别为1.43±0.64和0.83±0.37,LINE-1 ORF-2拷贝数分别为1.11±0.52和0.81±0.12,差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论] PCB153暴露可增加LINE-1的表达和拷贝数,诱导其转座....
摘要:目的 探讨Ⅴ型成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)患者的基因突变及临床特征.方法 收集5例Ⅴ型OI患者的临床资料,其中1例为家系患者.采集患者、随诊家属及正常对照者的静脉血,PCR扩增干扰素诱导跨膜蛋白5(interferon-induced transmembrane protein 5,IFITM5)基因,基因测序确定突变位点.结果 基因测序结果显示,5例患者均存在IFITM5基因的5′非翻译区的一个碱基C转换成T(c.-14C>T),1例家系患者的母亲为Ⅴ型OI患者,也存在IFITM5基因的c.-14C>T突变.所有患者均出现频繁骨折,并伴有脊柱和(或)四肢畸形,均无牙质发育不全、无听力障碍,1例患者有蓝色巩膜.X线片显示,5例患者均具有前臂骨间膜钙化;3例骨折处形成增生性骨痂;4例桡骨头脱位.结论 5例Ⅴ型OI患者均具有IFITM5基因杂合子突变(c.-14C>T),患者具有独特的影像学特征,骨间膜钙化、增生性骨痂、桡骨头脱位等....
摘要:目的:探讨他克莫司(FK506)对肝移植患者外周静脉血IL-2、IL-10基因表达的影响及意义。方法选择接受原位肝移植患者60例,均采用FK506+甲基强的松龙+吗替麦考酚酯三联用药治疗。肝移植术后第1、3周取外周血,检测血清ALT、AST及外周静脉血IL-2、IL-10基因表达。结果与肝移植术后1周比较,肝移植术后3周患者血清ALT水平明显降低(P<0.05),而血清AST水平变化不明显(P>0.05);肝移植术后3周外周静脉血IL-2基因表达明显降低(P<0.05),IL-10基因表达明显升高(P<0.01)。血清ALT水平与IL-2基因表达呈正相关,与IL-10基因表达呈负相关(P均<0.05);血清AST水平与IL-2、IL-10基因表达均无相关性(P均>0.05)。结论 FK506可能通过影响外周静脉血IL-2、IL-10基因表达,从而抑制免疫排斥,诱导免疫耐受。...
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:目的 应用聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线分析(polymease chain reaction-high-resolution melting analysis,PCR-HRMA)技术筛查成骨不全症(osteogenesis imperfecta,OI)患者COL1A1/COL1 A2基因的突变,并探讨突变位点与疾病的关系.方法 采集家系成员(患儿、患儿父母)以及50名正常对照的血液样本,应用PCR-HRMA技术筛查患儿家系及正常对照者的COL1A1/COL1A2基因突变,并用基因测序验证.应用蛋白预测软件PolyPhen、SIFT及Align GVGD对两个杂合突变进行预测.结果 该患儿及其父母COL1A1基因第45外显子区域的PCR-HRMA结果显示异常,标准熔解曲线和差异熔解曲线与正常对照比较均存在明显差异.测序结果显示,患儿COL1A1基因第45外显子区域发生两个杂合突变(c.3235G>A、c.3247G>A),临床诊断为Ⅳ型OI.c.3235G>A来源于患有OI的父亲,使α螺旋结构域1079位氨基酸由甘氨酸(Gly)突变为丝氨酸(Ser).c.3247G>A来源于表型正常的母亲,使1083位氨基酸由丙氨酸(Ala)突变为苏氨酸(Thr).50名正常对照均未发现这两种突变.3种蛋白预测软件PolyPhen、SIFT及Align GVGD均预测c.3235G>A突变可能影响蛋白的功能.而c.3247G>A突变,PolyPhen软件预测其可能为良性.结论 COL1A1基因第45外显子上同时存在c.3235G>A、c.3247G>A突变的病例在人类胶原突变数据库中未见报道.COL1A1基因c.3235G>A突变可能是导致该患儿成骨不全的主要原因....
摘要:目的 筛查4例成骨不全(OI)家系先证者Ⅰ型前胶原α链基因(COL1A1/COL1A2)基因突变,分析基因型与表型的关系.方法 收集先证者及家系成员临床资料,采集先证者、家系成员及50例正常对照的血液标本.采用聚合酶链反应(PCR)-高分辨率熔解曲线分析(HRMA)筛查先证者COL1A1/COL1 A2基因突变,基因测序确定突变位点.结果 HRMA显示先证者1分别在COL1A2基因12外显子、19外显子区域结果异常,标准熔解曲线与正常对照存在明显差异.测序结果,先证者1分别在COL1 A2基因12外显子、19外显子及18内含子发生突变:c.578G>T、c.948 C>T、c.937-3T>C;其中c.948 C>T、c.937-3T>C为单核苷酸多态性(SNP)位点,c.578G>T为新发现的突变位点.先证者2、3、4,分别在COL1 A2基因的38外显子、COL1A1基因的6外显子、23外显子区域的标准熔解曲线与正常对照存在明显差异.测序验证先证者2 COL1 A2基因突变:c.2305 G>T.先证者3、4均在COL1A1基因发生突变:c.517 G>T、c.1588 G>A.其中先证者3 COL1A1基因c.517 G>T为新发现的突变位点.先证者1、2、4基因突变,导致Ⅰ型胶原蛋白3股螺旋区域甘氨酸(Gly)被替换,可引起较为严重的表型,先证者3的无义突变,可造成Ⅰ型胶原合成量的改变,临床表型较轻.结论 患者COL1A2基因c.578 G>T、COL1A1基因c.517 G>T均为新发现的突变位点,患者的基因型与临床表型存在一定的联系....
[硕士论文] 鞠明艳
基础医学 天津医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  建立并探讨聚合酶链式反应-高分辨率熔解曲线(polymerase chain reaction and high resolution melting,PCR-HRM)分析技术筛查中国汉族人群成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)患者 COL1A1/COL1A2基因突变的方法。应用PCR-HRM技术筛查OI患者COL1A1/COL1A2基因突变位点,利用Sanger测序验证,并分析临床表现型与基因型的关联。
  方法:
  1.研究PCR-HRM技术的最佳反应条件,模板(DNA)浓度、PCR-HRM引物设计及引物浓度、退火温度(annealing temperature,AT)、循环数等。
  2.应用 PCR-HRM技术结合 Sanger测序对87例患者及对照者进行COL1A1/COL1A2基因筛查,有家族史的患者,也要同时进行家属的基因测序验证。对筛查结果阳性的患者进一步分析其临床表型及基因型的联系。
  3.在未用PCR-HRM技术筛查出异常的患者中,随机选取其中3例进行全基因组测序(whole-genome sequencing,WGS)分析,以确定未检测出异常的原因。
  结果:
  1.成功建立了利用PCR-HRM技术筛查COL1A1/COL1A2基因突变的方法,采用该方法筛查87例OI患者,检测出COL1A1/COL1A2基因突变44个,其中有22个新突变。COL1A1/COL1A2基因突变总检出率52.87%,COL1A1基因突变24例,COL1A2基因突变22例,两个基因突变率无显著性差异(P>0.05)。有家族史患者突变检出率高于散发病例(P<0.01)。
  2.COL1A1及COL1A2两基因突变方式以单碱基替换为主,以错义突变率最高(65.22%)。有30例患者由于COL1A1或COL1A2基因突变导致氨基酸替换,其中28例为Gly被替换(93.33%),以Gly被Ser替换为最多(46.43%)。COL1A2基因突变导致螺旋结构域中的甘氨酸被替换发生率高于COL1A1基因(P<0.01)。
  3.46例OI患者临床表型除骨折外前3位为:蓝巩膜(95.7%),四肢畸形(91.3%)及牙质形成不全(71.7%)。46例患者均无听力损伤。COL1A2基因突变患者牙质形成不全的人数、1岁之前发生骨折次数、总骨折次数高于COL1A1基因突变的患者(P<0.05)。COL1A1及COL1A2基因错义突变的患者的身高水平以中偏下为主,随着氨基酸位置的改变,这些患者的身高并未呈现特定的变化规律。
  4.经检测存在异常的患者中出现一例特殊病例,其同一外显子上显示有两处不同的突变,通过3种软件(PolyPhen,SIFT和Align GVGD)预测后显示两处突变均致病的可能性较大。
  5.在对3例患者DNA进行全基因组范围的突变扫描及相应的功能预测后,发现了两处发生在 COL1A2基因上的突变,以及一处发生在候选致病基因PAPSS2上的突变,这三处突变PCR-HRM未能筛出。
  结论:
  1.首次用优化了的 PCR-HRM技术筛查了汉族人群成骨不全患者COL1A1/COL1A2基因的突变,并证实PCR-HRM技术可实现COL1A1/COL1A2基因突变高效率、低成本的筛查。
  2.本研究筛查出22例新突变,丰富了人类胶原突变数据库。
  3.研究证实,PCR-HRM可以用于基因检测工作量大、外显子多、无突变热点的基因筛查。
  4.应用 PCR-HRM技术、Sanger测序技术证实一例成骨不全双位点突变个体,经突变功能预测,突变位点分别来自其父母,两处突变的“叠加效应”导致严重表现型。
  5.全基因组测序是防止PCR-HRM漏检的有效方法。
摘要:目的 采用PCR-高分辨率熔解曲线分析方法(PCR-high-resolution melting curve analysis,PCR-HRMA)筛查了87例成骨不全(osteogenesisimperfecta,OI)患者COL1A1/COL1A2基因的突变情况,并分析基因型与表型的关系.方法 收集OI患者临床资料,采集患者、家系成员及50名正常对照的血液标本.PCR-HRMA筛查COL1A1/COL1A2基因突变,基因测序确定突变位点.结果 PCR-HRMA共筛选出46例COL1A1/COL1A2基因HRM熔解曲线异常者,经测序证实患者均存在基因突变,包含20例新突变.COL1A1基因突变检出率为52.17%(24例),COL1A2基因突变检出率为47.83% (22例),两基因检出率无显著差异(P>0.05).
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