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摘要:为研究小肽转运蛋白对小肽转运和吸收机制提供细胞模型,在体外建立原代奶牛小肠上皮细胞分离的方法,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶混合消化液对奶牛小肠组织进行消化,通过2%山梨醇进行密度梯度离心以去除单核细胞、淋巴细胞和肌细胞;用刮除法、相差消化法和96孔板单克隆方法来纯化奶牛小肠上皮细胞,从细胞形态学、细胞角蛋白18免疫荧光染色和小肠上皮细胞特异性标志蛋白来鉴定奶牛肠上皮细胞.结果表明:1)采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶联合消化奶牛小肠组织,通过2%山梨醇密度梯度离心可以获得大量的细胞团且48 h发生贴壁,但是细胞贴壁不牢.2)48 h之后细胞团进一步向外辐射生长出细胞,细胞形态呈现典型的上皮细胞和铺路石形态.5~7 d细胞处于对数生长期,细胞大量增值,一部分成纤维细胞与小肠上皮细胞夹杂生长.3)通过96孔板能够单克隆奶牛小肠上皮细胞,细胞呈现均一的铺路石形态.4)奶牛小肠上皮细胞角蛋白18鉴定为阳性,荧光显微镜下能够发出绿色荧光.5)通过RT-PCR能够检测到奶牛小肠上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白、碱性磷酸酶和肠肽酶的表达,成功建立了奶牛小肠上皮细胞的分离和培养方法....
摘要:为研究饲料中添加不同比例N-HMM Ca对泌乳期奶牛血清生化指标的影响,试验选用胎次、产奶量和泌乳天数相近身体健康的荷斯坦奶牛30头,完全随机区组分为5组,每组6头.对照组饲喂基础日粮;试验组分别饲喂在基础日粮中以干物质基础添加0.15%、0.30%、0.75%和1.50%的N-HMM-Ca,预试期14 d,正试期42 d.结果表明:1)泌乳期奶牛日粮中添加0.75 %N-HMM-Ca使血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度显著升高.2)在第14天时,1.50%组甘油三酯(TG)浓度显著高于其他各处理组(P<0.01).血清中高密度脂蛋白(HDL)水平有所提高,但差异不显著(P>0.05);随着N-HMM-Ca添加量的增加血清中非酯化脂肪酸(NEFA)的浓度逐渐降低(P<0.05);对β-羟丁酸(β-OHB)来说,随着日粮中N-HMM-Ca添加量的增加浓度逐渐升高(P<0.05).3)0.15%、0.30%和0.75%组血清IgA浓度呈现增加的趋势,而且在第42天时尤为显著(P<0.01).4)在第28天时,泌乳期奶牛日粮中分别添加0.15%和0.30%的N HMM Ca使过氧化氢酶(CAT)浓度显著高于其他各处理组(P<0.01).综上所述,泌乳期奶牛日粮中添加0.15%的N-HMM-Ca有利于改善机体健康....
摘要:通过粒-巨噬细胞集落刺激因子( GM?CSF)和白细胞介素-4( IL?4)体外诱导外周血单核细胞为树突状细胞,为利用树突状细胞免疫疗法治疗奶牛乳房炎奠定基础和提供细胞模型。利用淋巴细胞分离液分离获得奶牛外周血单核细胞,在6孔板内培养2h后,弃掉含有大量的T细胞和B细胞上清液,贴壁的基本上是单核细胞,磷酸盐缓冲液清洗5次,加入含有GM?CSF和IL?4的2 mL培养基进行3 d诱导。之后,从培养基顶部小心吸弃1.4 mL的培养基,然后再补加含有GM?CSF和IL?4的1.8 mL培养基继续诱导3 d。每天通过显微镜观察细胞形态。第7天经流式检测细胞表面抗原 CD11c、CD14、主要组织相容性复合体Ⅱ( MHCⅡ)、CD40、CD80、CD86的表达。结果表明:1)第2天,一些细胞表面可以生长出刺突并伴随着伪足的生长。第3天,细胞表面的刺突和伪足越来越多。第4、5天,一些带有刺突和伪足的细胞开始聚集和融合。第6天,单核细胞基本被诱导为树突状细胞,细胞表面含有大量清晰可见的刺突和伪足。2)经流式检测,CD14、CD11c、MHCⅡ阳性表达细胞分别占诱导细胞的6.8%、65.0%、75.9%,CD80和CD86阳性表达细胞分别占诱导细胞的2.0%和1.2%。综上所述,采用奶牛外周血单核细胞经体外诱导能够获得一定纯度的奶牛树突状细胞。...
摘要:为研究青贮蚕豆秸秆对山羊生产性能和饲养经济效益的影响,本试验选用80头健康育肥公羔(波尔×黄淮),随机分为4组,每组2个重复,每个重复10只公羔,对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别以青贮蚕豆秸秆代替20%、40%、60%的稻草-玉米秸秆粗饲料,试验期60 d。结果表明,与对照组相比,试验第2组育肥公羔日增重提高了18.23%(P<0.01),料重比降低了11.72%,经济效益提高了27.21%;试验3组育肥公羔日增重提高了7.39%(P <0.01),料重比降低了5.50%,经济效益提高了8.26%。综上所述,以青贮蚕豆秸秆部分替代稻草-玉米秸秆能够改善育肥公羔的生产性能和提高饲养经济效益,替代量为40%效果最佳。...
摘要:目的 探究紫花苜蓿黄酮在体外抑制肿瘤细胞活性的研究.方法 采用四氮甲基唑蓝(MTT)法测定紫花苜蓿黄酮在体外的抗肿瘤活性;流式细胞术检测紫花苜蓿黄酮对人胃癌细胞MGC-803周期和凋亡的影响;Western blotting方法检测相关细胞蛋白的表达情况.结果 MGC-803细胞经紫花苜蓿黄酮预处理后,细胞存活率显著降低(P<0.05).流式细胞术检测发现紫花苜蓿黄酮能够诱导细胞凋亡;引起细胞周期紊乱,使细胞阻滞在G0/G1期.Western blotting实验结果表明它能够活化促凋蛋白Caspase-9,Caspase-3,RARP,抑制抑凋蛋白Bcl-2的表达;引起相关细胞周期蛋白Cy-clinD1,CDK4,CDK6的表达量下调.结论 紫花苜蓿黄酮能够通过诱导MGC-803细胞凋亡途径和调节正常周期活动来抑制MGC-803细胞增殖,并且这种抑制作用还存在着时间和剂量依赖效应....
[硕士论文] 隋雁南
动物营养与饲料科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本试验研究了添加不同水平碳酸钴(CoCO3,cobalt carbonate)对泌乳奶牛瘤胃发酵、生产性能及血清生化指标的影响。本试验选择36头体况、胎次、泌乳天数及产奶量相近的健康荷斯坦泌乳奶牛,随机分为6组,每组6头,分别在日粮中以干物质基础添加碳酸钴0(对照组)、6(0.5倍)、12(推荐剂量组)、30(2.5倍)、60(5倍)和120mg(10倍),预试期14d,正试期42d。试验结果如下:
  1.日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛生产性能及各养分表观消化率的影响。结果表明:(1)日粮中添加不同水平的碳酸钴对泌乳奶牛采食量(DMI)无显著性影响(P>0.10);60mg组产奶量呈现下降趋势。(2)碳酸钴对乳脂率、乳总固形物和乳尿素氮无显著性影响(P>0.10);正试期第14d和第28d时,30mg组乳蛋白率和乳糖率显著高于对照组(P<0.05),60mg组乳糖率和乳蛋白率均处于下降趋势,且在第42d时,60mg组乳糖率显著低于其他各处理组(P<0.05)。(3)14~42d时,在泌乳奶牛日粮中添加不同水平的碳酸钴对乳中维生素B12(VB12)含量无显著性影响(P>0.10)。(4)EE和NDF的表观消化率不受日粮中碳酸钴添加水平的影响(P>0.10);添加30mg碳酸钴水平组的CP和ADF的表观消化率显著高于对照组(P<0.05),且ADF的表观消化率显著高于其他各处理组(P<0.05)。
  2.日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛瘤胃发酵及瘤胃细菌区系的影响。结果表明:(1)不同水平碳酸钴对瘤胃液pH值、氨态氮(NH3-N)和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度无显著性影响(P>0.10);丙酸浓度显著高于对照组(P<0.05);微生物蛋白(MCP)含量随碳酸钴添加量的增加而增加,30mg和60mg组显著高于对照组(P<0.05)。(2)12~60mg组瘤胃液维生素B12(VB12)含量显著高于对照组和6mg组(P<0.05)。(3)日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛瘤胃液Chao1、ACE、Shannon指数无显著影响(P>0.10);门水平上,Bacteroidetes、Proteobacteria、Firmicutes为优势菌群;属水平上,Prevotella、Succinivibrionaceae为优势菌属。
  3.日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛血清生化指标的影响。结果表明:(1)日粮中添加不同水平的碳酸钴对谷氨酰胺基转肽酶(GGT)浓度无显著性影响(P>0.10);6mg组和30mg组谷丙转氨酶(ALT)浓度逐渐降低,谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)浓度逐渐升高,碱性磷酸酶(ALP)浓度升高后趋于稳定。(2)不同水平碳酸钴对总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、肌酐(CREA)尿素氮(BUN)、尿酸(UA)浓度和A/G无显著性影响(P>0.10)。(3)不同水平的碳酸钴对总胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量均无显著性影响(P>0.10),但在14~42d时,各组NEFA浓度逐渐增加,其中60mg组NEFA浓度逐渐增加到最大值为1046.18μmol/L;6~60mg组血糖(GLU)浓度逐渐提高,其中30mg组血糖浓度显著高于对照组和60mg组(P<0.05);6~60mg组甘油三酯(TG)浓度先升高后趋于稳定。(4)不同水平的碳酸钴对血清中IgG和IgA浓度无显著性影响(P>0.10);14~28d时,6~30mg组IgM浓度逐渐增加,但60mg组IgM浓度逐渐降低至最低值90.87μg/mL,其中在第14d时,60mg组IgM浓度显著高于6和12mg组(P<0.05)。(5)不同水平碳酸钴对MCV、MCH和MCHC浓度无显著性影响(P>0.10)。在14~42d时,各组RBC、HCT和HGB浓度逐渐降低,其中在第42d时,各处理组RBC、HCT和HGB浓度均显著高于对照组(P<0.05)。(6)不同水平碳酸钴对维生素B12(VB12)含量无显著性影响(P>0.10)。
  结论:综上所述,泌乳期奶牛日粮中添加30mg碳酸钴最有利于提高奶牛生产性能和养分的吸收利用以及改善机体健康。故建议泌乳奶牛全混合日粮中碳酸钴适宜添加量为30mg,安全系数为2.5倍,最高限量为60mg。
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