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摘要:目的 原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuber-culosis,MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白(recombinant ESAT6-CFP10,rEC),并优化表达条件.方法 以(GGGGS)3为linker将ESAT6和CFP10两个基因连接,合成rEC全基因,插入至载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-rEC,转化至感受态E coli BL21(DE3),筛选优势菌株进行诱导表达,并对诱导温度(25、30、37℃)、诱导剂种类及浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mmol/L IPTG及0.5、1、5、10、15、20 g/L乳糖)、诱导时间(2、3、4、5、6h)、诱导起始A600(0.4、0.6、0.8、1.0)进行优化.菌种经5L发酵罐发酵培养后,采用亲和层析及离子交换层析纯化rEC融合蛋白,于-20℃分别储存0、2、4、6个月,12.5% SDS-PAGE分析rEC融合蛋白,并对保存0、6月的样品进行HPLC-SEC分析.结果 重组质粒pET-28a-rEC经双酶切及测序鉴定,构建正确.rEC融合蛋白最适诱导条件为:于30℃,以0.1 mmol/L IPTG诱导4h.纯化后rEC融合蛋白纯度达95%以上,且可与鼠抗ESAT6单克隆抗体发生特异性结合,于-20℃保存6个月未见蛋白降解及聚体产生.结论 原核表达了rEC融合蛋白,并优化了其表达条件,获得的rEC融合蛋白具有较高纯度及稳定性....
摘要:ONECUT转录因子在哺乳动物细胞中包含3个成员,分别为肝细胞核因子6(HNF-6,ONECUT-1)、ONECUT-2(OC-2)和ONECUT-3(OC-3),三者在消化系统中的表达既相互重叠又具有一定的特异性.ONECUT转录因子通过调节基因表达,参与细胞周期和增殖调控、细胞分化和器官形成、细胞迁移和基质黏附、物质代谢等多个方面的生物学功能,并影响消化系统的器官发育及疾病发生....
摘要:感染或既往感染慢性乙型肝炎病毒(HBV)的肿瘤患者或器官移植者,分别在接受化疗或免疫抑制剂治疗情况下,部分患者会发生HBV再激活,引起肝损伤甚至肝衰竭,导致治疗减缓甚至中断,进而影响患者的预后。我国属于 HBV 感染中(高)流行地区。2006年血清流行病学调查显示,我国20~59岁成年人中 HBV感染率(血清抗-HBc 阳性)为38.9%,表明我国有超过三分之一的成年人为 HBV 携带者或既往感染者[1]。这些人群在接受化疗或免疫抑制剂治疗时,存在较高的发生 HBV再激活的风险,临床上应引起足够的重视。...
摘要:目的 分析肉芽肿性小叶性乳腺炎(GLM)与乳腺导管原位癌(DCIS)的超声特征,为临床鉴别诊断两者提供影像学依据.资料与方法 选取经病理证实的63例GLM和43例DCIS患者的临床与超声检查资料,结合超声乳腺影像报告和数据系统(BI-RADS)分类方法对GLM、DCIS患者进行分类,并分析其声像图特征.结果 GLM组65个病灶中,47个病灶(72.3%)术前超声BI-RADS分类为4A类,55个病灶(84.6%)边缘模糊,43个病灶(66.2%)存在成角,51个病灶(78.5%)表现为实质回声不均匀,所有病灶均未发现钙化,38个病灶(58.5%)后方回声增强,51个病灶(78.5%)周围水肿、回声增强;DCIS组43个病灶中,13个病灶(30.2%)为4A类,28个病灶(66.7%)表现为低回声肿块,22个病灶(51.2%)存在微小钙化,所有病灶均未发现周围组织水肿.GLM组与DCIS组上述指标比较,差异均有统计学意义(P<0.01);GLM血供比DCIS丰富,差异有统计学意义(P<0.01).结论 超声表现有助于临床鉴别GLM与DCIS,对指导临床诊治有一定的价值....
摘要:目的 探索乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对Polo样激酶1(Plk1)的表达调控作用.方法 pCMV-HA-HBx表达质粒瞬时或稳定转染HepG2细胞,Western blot检测HBx对Plk1蛋白水平的影响;采用荧光素酶活性实验检测HBx对Plk1基因启动子活性的影响,实时荧光定量PCR检测HBx对Plk1 mRNA水平的影响;采用Cycloheximide阻断新蛋白合成后检测HBx对Plk1蛋白半衰期的影响;流式细胞仪技术检测HBx对细胞周期的影响.组间数据比较采用t检验. 结果 Western blot结果显示,瞬时和稳定表达外源HBx蛋白都能显著上调S期HepG2细胞的Plk1蛋白相对水平(1.242±0.133与2.683±0.396,P<0.05;1.340±0.128与3.683±0.349,P<0.01).荧光素酶活性和实时荧光定量PCR实验证实,HBx对Plk1基因的转录水平无影响,而Western blot实验证实HBx能抑制S期Plk1蛋白的泛素化降解,使Plk1蛋白半衰期由30 min延长至90 min.与对照组相比,HBx过表达能促进S期和G2/M期细胞比例的增加(分别为31.65%与24.56%,9.43%与4.47%),G0/G1期细胞比例的减少(58.92%与70.97%).结论 HBx能通过抑制S期Plk1蛋白的降解进而上调Plk1蛋白的水平....
摘要:目的 比较乙型肝炎病毒(HBV)基因在原发性肝细胞癌及癌旁组织中的整合规律,探讨其致癌作用机制.方法 采用Alu-PCR和LM-PCR方法扩增50例有慢性HBV感染背景的肝癌组织及配对非肿瘤肝组织的HBV整合片段,并对整合位点侧翼的病毒及人基冈组DNA序列进行测序,通过NCBI BLAST及UCSC BLAT检索确定HBV DNA在染色体上的精确整合位置.结果 50例肝癌组织中有34例标本检测到HBV DNA的整合,癌组织HBV DNA的整合检出率为68%;配对癌旁组织有35例标本检测到HBV DNA的整合,整合检出率为70%.癌组织中的所有染色体上都检测到HBV整合位点,癌旁组织中除了Y染色体之外,其余染色体也都检测到整合位点.其中14号、15号、18号、19号、Y染色体的HBV DNA整合密度在癌组织中高于癌旁组织.结论 癌组织中14号、15号、18号、19号和Y染色体的HBV DNA整合频率高于癌旁组织,整合位点附近有与癌症相关的基因,提示HBV DNA在这些染色体上的整合可能与HBV致癌机制有一定相关性....
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北大核心 CSTPCD CSCD CBST
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摘要:目的 总结胰腺钩突部局灶性低回声区的声像图特点和分布规律,为该现象与同部位肿瘤的鉴别诊断提供依据.方法 分析10例常规腹部超声检查发现胰腺钩突部回声减低患者的声像图资料,其中3例患者进行了胰腺超声造影检查,2例患者进行了MRI检查,其余5例患者在1个月后进行了超声随访.结果 10例患者均在胰腺钩突部显示三角形的低回声区,边界清晰锐利,范围约(2.5~3.7) cm×(0.7~1.3) cm×(2.9~3.8)cm(左右径×前后径×上下径),其余胰腺实质呈均匀高回声.3例超声造影患者钩突部低回声区增强模式与其余胰腺组织相同,未见异常增强或廓清;2例MRI检查患者胰腺均未发现明显占位性病变.其余5例患者1个月后随访低回声区范围未见明显变化.10例患者均排除占位可能,考虑为局灶性脂肪沉积缺失所致.结论 超声检查发现胰腺钩突部低回声区而不伴钩突形态改变及其他占位效应时,需要考虑局灶性胰腺脂肪沉积缺失可能.超声造影检查、MRI或超声随访可明确诊断....
摘要:目的:探索趋化因子CXCL10及其受体CXCR3基因在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义.方法:通过挖掘癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)中HCC数据库和国际肝癌研究所(Liver Cancer Institute,LCI)中乙肝相关肝癌数据库,分析CXCL10基因和CXCR3基因在HCC及癌旁组织中的表达以及与患者术后总生存率的关系;采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)方法检测45例乙肝相关HCC患者临床样本中CXCL10基因和CXCR3基因的表达情况,并分析CXCL10和CXCR3基因表达的相关性.结果:TCGA数据库中CXCL10基因在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织(非配对样本:3.379±2.081 vs.2.213±2.274,p<0.001;配对样本:3.159土2.267 vs.2.213 ±2.274,P=0.018),LCI数据库中CXCL10基因在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织(7.625±1.683 vs.7.287±1.328,P=0.009),TCGA和LCI数据库中CXCL10基因高表达HCC患者术后总体生存率高于CXCL10基因低表达患者(P =0.107,P=0.002).TCGA数据库中CXCR3基因在HCC组织的表达显著高于癌旁组织(非配对样本:-0.906±1.697vs.-1.978±1.629,P<0.001;配对样本:-1.329±1.732vs.-1.978±1.629,P=0.037),而LCI数据库中CXCR3基因在乙肝相关HCC组织的表达显著低于癌旁组织(3.989±0.339vs.4.074±0.309,p=o.003),但两个数据库中HCC组织CXCR3基因高表达患者的术后总体生存率均显著高于CXCR3基因低表达患者(P=o.004,P=0.014).TCGA数据库中CXCL10基因与CXCR3基因在HCC和癌旁组织里的表达水平均呈正相关(r=0.584,P<0.001;r=0.776,P<0.001).临床样本检测结果显示,CXCL10基因在乙肝相关HCC和配对癌旁组织里的表达水平分别为0.479(0.223,1.094)和0.484(0.241,0.846),均显著高于正常肝组织的0.131(0.106,0.159)(P=0.010,P<0.001),CXCR3基因在HCC和配对癌旁组织里的表达水平分别为0.011 (0.006,0.019)和0.016(0.011,0.021),也显著高于正常肝组织的0.002 (0.001,0.004)(P=0.004,P<0.001),但CXCL10和CXCR3基因在HCC组织中的表达水平与配对癌旁组织相比差异均无统计学意义(P=1.000,P=0.374).结论:CXCL10在不同病因HCC组织中均呈高表达,CXCR3在乙肝相关HCC组织中呈低表达,HCC组织中CXCL10和CXCR3的高表达均利于HCC患者的术后生存....
摘要:目的:探讨巨噬细胞加帽蛋白(macrophage-capping protein,CapG)对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响.方法:采用real-time PCR方法检测了4种胃癌细胞AGS、BCG823、PHM82、MNK45中CapG基因的表达情况,选择低表达并且易转染的AGS细胞作为研究对象,设计针对CapG的特异性引物并合成重组质粒.构建可以表达CapG的慢病毒包装系统,通过侵染人胃癌细胞系AGS,建立可稳定表达CapG的细胞株.通过CCK8实验分析过表达CapG基因对AGS细胞的生长和增殖能力的影响,细胞划痕以及Transwell小室实验分析过表达CapG基因对AGS细胞迁移能力的影响.结果:过表达CapG后,AGS细胞的生长速度略低于对照组,但二者间差异无统计学意义(t=2.424,P=0.073).划痕试验显示CapG实验组划痕间距相对于对照组明显缩小,两组平均缩小距离分别为336.99 μm和45.54 μm,差异有统计学意义(t=14.97,P=0.004).Transwell试验显示CapG实验组和对照组穿膜细胞数目分别为176个和70个,CapG实验组显著多于对照组,差异有统计学意义(t=40.00,P<0.001).结论:过表达CapG基因对胃癌细胞系AGS细胞的生长和增殖无显著影响,过表达CapG基因能促进胃癌细胞系AGS细胞的迁移....
摘要:目的 建立丙型肝炎诊断试剂考评用质控体系.方法 收集自2009年2至6月期间4080份献血员血清标本,用酶免疫实验检测筛选出抗-HCV阳性和抗-HCV阴性的146份标本.分别使用2种进口(Murex、Ortho)和4种国产抗-HCV EIA试剂(分别为英科新创、中山生物、万泰和科华公司)对筛选出的标本进行重复检测;使用Chiron的RIBA HCV 3.0和HCV RNA PCR试剂进行确认试验;采用Roche和Abbott HCV RNA定量试剂进行HCV RNA定量检测,RNA阳性标本进行HCV基因型检测.选择不同强度的或不同含量的确认阳性和阴性的标本及系列稀释标本建立抗-HCV和HCV RNA诊断试剂评价质控体系.结果 构建了抗-HCV和HCV RNA诊断试剂评价质控体系.每种质控体系均由50份标本组成.分别包括20份抗-HCV/HCV RNA阳性标本、20份抗-HCV/HCVRNA阴性标本及10份用于灵敏度评价的系列稀释标本.阳性标本包括强、中和弱阳性,并包含国内常见HCV基因型和亚型.阴性标本包括样本吸光度值/临界值接近临界值的标本.结论 本研究所建立的质控体系背景资料丰富、检测结果稳定可靠,为新研制和改进后国产丙肝诊断试剂的性能评价提供参考数据....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CBST SA
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摘要:目的 探讨不同因素对肝脏超声造影时间—强度曲线(TIC)的影响.方法 选取健康志愿者7名,经左侧肘静脉以6种不同剂量注射造影剂,采用QLab软件描绘TIC获取每一剂量在不同监测条件下的常用血流灌注参数.结果 ①相同面积和形状ROI:随深度增加,增强强度(△I)明显减低.②在低剂量时(0.5 ml和1.0 ml),△I随剂量增加而增加;但剂量增大后,△I无明显差别.③改变面积和形状,不同ROI之间△I差异无统计学意义(P>0.05).④聚焦深度增加,△I呈现下降趋势.⑤△I和上升时间(△t)的比值(△I/△t)与造影剂剂量之间无明显相关性.结论 造影剂剂量对造影参数的影响较大,而改变ROI的大小和形状对造影参数无显著影响;于适当位置选取R01才能获得理想的造影参数,聚焦位置不同可以影响造影剂微泡的稳定性,从而对造影效果产生影响....
摘要:目的 测定不同胃疾病分离的幽门螺杆菌(Hp)临床菌株中硫氧还蛋白(Trx)1、2基因序列,并确定其氨基酸序列,探讨其与相关疾病的关系.方法 通过胃镜获取慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌3种疾病共25例患者的胃黏膜组织,从中分离培养Hp菌株,提取基因组DNA.根据GenBank基因组中Hp基因序列设计Trx1、Trx2引物,应用聚合酶链反应(PCR)进行扩增,对扩增产物进行序列测定及生物信息学分析,并与国际标准菌株比对.结果 应用PCR的方法成功扩增出Trx1全基因序列及Trx2基因前295核苷酸.应用BioEdit软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,不同疾病分离的Hp Trx1均含有321个核苷酸,总突变位点率13.4%(43/321);编码106个氨基酸,含有一个Cys-Gly-Pro-Cys氧化还原活性位点,25例不同胃疾病Hp TRX1的氨基酸同源性高达97.2%(103/106).Trx2的前295个核苷酸,总突变位点率18.6%(55/295);编码的氨基酸无Cys-Gly-Pro-Cys,含有一个CXXC区域,氨基酸同源性为84.7%(83/98).结论 Hp临床分离菌株的Trx两个亚型核苷酸序列均有不同程度的位点突变,但氨基酸的序列同源性较高,均为无效突变.不同疾病分离的Hp Trx1均含有一个Cys-Gly-Pro-Cys氧化还原活性位点,TRX2仅含有一个CXXC区域.研究结果为进一步探讨Hp Trx的生物学功能及其致病机制提供了可靠依据....
摘要:目的 细胞周期抑制因子p21<'WAF1/CIP1>(p21)可在转录水平抑制Polo-like kinase1(Plk1)基因的表达,本文旨在探讨Plk1和p21蛋白在肝细胞癌中的表达及相关性.方法 应用Westem Blot方法检测10对原发性肝细胞癌和癌旁组织中Plk1和p21蛋白的表达情况.通过将pFlex-21表达质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,进一步检测p21过表达对Plk1mRNA和蛋白表达的影响.结果 Plk1在10例肝癌组织中的表达均高于配对癌旁组织,p21蛋白在7对肝癌组织中的表达高于配对癌旁组织.HepG2细胞瞬时表达p21质粒后,Plk1的蛋白表达和mRNA水平均无变化(P>0.05).结论 Plk1和p21在肝细胞癌组织中的表达具有一定的肿瘤特异性.肝癌组织中p21蛋白过表达可能不具有抑制Plk1表达的作用,具体机制还有待于进一步研究....
摘要:目的 探究白蛋白与球蛋白比值(A/G)对肝癌(HCC)患者术后生存预后的影响及其临床价值. 方法 回顾性分析2009年2月至2013年7月收治的行手术切除的630例HCC患者资料.根据A/G的正常下限值将患者分为低值组(A/G<1.5,简称L组)和高值组(A/G≥1.5,简称H组),并观察其分布特征.应用Cox单因素和多因素回归分析影响患者生存预后的独立危险因素;Kaplan-Meier法分析所有患者和巴塞罗那分期(BCLC分期)A、B、C各期低值组和高值组的生存趋势.结果 多因素分析显示:术前A/G(P=0.007)、甲胎蛋白水平(P<0.001)、γ-谷氨酰转移酶水平(P=0.006)、红细胞计数(P=0.014)、国际标准化比值(P=0.009)、术前BCLC分期(P<0.00l)及肿瘤数目(P=0.003)、术中输血(P<0.001)状态是HCC患者术后长期生存的独立影响因素.在630例患者中,L组总生存(OS)的中位生存时间仅为15个月,显著低于H组的42个月(P<0.001).分层分析显示:A/G高值组患者的近期生存优势仅限于BCLC A期患者(P<0.001),在B期和C期患者中消失(P>0.05);而远期生存优势则存在于BCLC A(P<0.001)和B期中(P<0.05),在C期患者中消失(P>0.05).结论 术前A/G能够预测HCC患者预后,指导早期HCC患者的治疗,是一个具有较高临床应用价值的指标....
摘要:慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国病毒性肝炎、肝硬化和肝癌的最主要致病因素,我国现有慢性HBV感染者约7 800万人,慢性乙型肝炎(CHB)患者约2 400万人[1].随着疾病进展,约20%~40% CHB患者将发展为肝硬化、肝硬化失代偿等终末期肝病及肝癌[2].我国的肝癌患者占全世界新发肝癌病例的50%以上,且80%以上的病例与慢性HBV感染有关.因此对CHB患者开展及时、规范的抗病毒治疗以阻断疾病进展,减少终末期肝病的发生至关重要....
摘要:目的 探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)整合序列中基本核心区突变与乙肝病毒相关肝癌发生的相关性.方法 应用Alu-PCR和基于接头的LM-PCR方法扩增40对乙肝相关性肝癌组织和配对癌旁组织中整合的HBV序列,PCR产物纯化后以ABI公司3700测序仪进行全自动测序,测序结果使用Pub Med BLAST软件和Bio Edit软件进行分析.结果 65.0%的肝癌组织检测到整合HBV病毒序列(26/40),共检出37个不同的HBV整合序列.67.5%的癌旁组织中检测到整合HBV病毒(27/40),共检出68个不同的整合序列.平均每例肝癌组织中HBV整合序列检出数为1.42个,而癌旁组织为2.52个,癌组织低于癌旁组织.整合HBV序列发生A1762T/G1764A双突变在肝癌中的检出率高于癌旁组织,差异无统计学意义.结论 HBV感染相关肝癌组织及癌旁组织中都检测到整合HBV序列,再次表明整合是肝癌发生中的一个早期事件;而肝癌组织中整合HBV序列有更高的A1762T/G1764A突变检出率,从一个新的侧面表明这些突变在病毒的致癌过程中具有重要作用....
摘要:目的 探究AFP联合AFP-L3%检测在肝细胞癌诊断中的应用价值.方法 回顾性收集2010年1月-2017年12月在解放军总医院第五医学中心就诊的1208例慢性肝炎患者、1967例肝硬化患者和1569例肝细胞癌患者的血清学指标及临床资料.分析各组患者血清AFP及AFP-L3%的分布情况,比较AFP、AFP-L3%单独及两者联合诊断肝癌的灵敏度、特异度及受试者工作特征曲线下面积(AUC),并分析AFP和AFP-L3、AFP-L3%的相关性.计量资料多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验,计数资料组间比较采用χ2检验.计量资料的相关性分析采用Spearman秩相关.AUC之间的比较采用Delong检验.采用logistic回归建立AFP-L3%及AFP联合诊断肝癌的模型.结果 肝癌组AFP和AFP-L3水平均显著高于肝硬化组和慢性肝炎组(H值分别为1107.3、1076.9,P值均<0.01).肝癌组AFP-L3%阳性率为30.9%,显著高于肝硬化(3.0%)及慢性肝炎组(2.8%)(χ2=768.5,P<0.01).肝癌组AFP-L3%水平为3.3(0~13.4)%,显著高于肝硬化(0)及慢性肝炎组(0)(H=1034.1,P<0.01).相关分析结果显示血清AFP与AFP-L3水平显著相关(r=0.91,P<0.01),但AFP-L3%与AFP则无相关性(r=0.04,P>0.05).在特异度相同的情况下,AFP联合AFP-L3%诊断肝癌的灵敏度显著高于AFP(26.6%vs 18.4%,P<0.01)或AFP-L3%单用(36.6%vs 30.9%,P<0.01).亚组分析显示,对于AFP≥10μg/L的样本,联合诊断肝癌的AUC显著高于AFP单用(0.745 vs 0.701,P<0.01);在肿瘤直径>2 cm或乙型肝炎相关肝癌中,联合检测的灵敏度显著高于AFP单用(27.6%vs 18.0%,27.7%vs 19.1%,P值均<0.01)或AFP-L3% 单用(37.0%vs 30.3%,36.9%vs 31.8%,P值均<0.01).但在肿瘤直径≤2 cm以及非乙型肝炎相关肝癌亚组中,联合检测诊断肝癌的灵敏度与单用AFP或AFP-L3%差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论 AFP联合AFP-L3%能显著提高肝癌诊断的灵敏度,对乙型肝炎相关肝癌和肿瘤直径>2 cm肝癌的辅助诊断具有更好的临床应用价值....
摘要:目的:评估抗病毒治疗对血清AFP在HBV感染相关肝癌诊断应用中的影响.方法:回顾性收集并分析365例慢性乙型肝炎、858例慢性乙肝肝硬化和663例HBV感染相关肝细胞癌患者的临床资料和抗病毒治疗情况.结果:接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎、肝硬化和HCC患者血清AFP水平均低于未治疗组.血清AFP诊断HCC的ROC曲线分析结果显示,诊断界值为400μg/L时,治疗组灵敏度为19.6%,未治疗组特异度为97.0%;在特异度为97.0%的水平上,治疗组的诊断界值为100μg/L,此时灵敏度为29.3%.结论:抗病毒治疗会影响血清AFP对HBV感染相关HCC的诊断....
摘要:目的:探讨原发性肝癌(HCC)组织中SOX7 mRNA的表达及意义.方法:应用实时荧光定量PCR检测SOX7 mRNA在7种肝癌细胞系(HepG2、SNU449、SNU182、SMMC-7721、HUH-7、PLC-PRF-5及Hep3B)和40例HCC及其配对癌旁正常肝组织中的表达.结果:肝癌细胞系中SOX7 mRNA低表达或者不表达.HCC组织中SOX7 mR-NA表达水平为(1.189±1.213),正常肝组织中为(1.821±1.718),HCC组织中的表达水平较正常肝组织降低(t=2.040.P:0.048).SOX7 mRNA的表达与HCC患者的临床分期有关(Z=2.158,P:0.031).结论:SOX7 mRNA 表达下调与HCC的发生发展有关....
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