绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 18
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 342 条结果
摘要:蛋白质激酶在生命过程中起着关键的调节作用,蛋白质激酶的异常往往会导致恶性疾病如癌症的发生.靶向蛋白质激酶的小分子抑制剂为相关疾病的治疗提供了切实可行的方案,因此研究蛋白质激酶-小分子的相互作用对于靶向药物的开发具有重要作用.质谱作为一种高精度、高通量、高灵敏度的分析仪器,在蛋白质-小分子相互作用研究领域的应用得到了快速发展.本综述总结了质谱技术应用于蛋白质激酶-小分子相互作用研究的主要策略和最新进展,探讨比较各种方法的优缺点.基于质谱的分析方法将有助于从分子水平上深刻揭示蛋白质激酶-小分子的相互作用机理,为靶向药物的设计开发提供新的思路.
摘要:目的 机采血小板献血过程结束后,所用耗材管路中会有部分残余的血液无法完全回输给献血者导致浪费.文章旨在探索一种安全、简便的操作方法,尽可能减少献血者失血.方法 随机抽取10名无偿机采血小板献血者,选用FENWAL血细胞分离机单针血小板采集程序,按照血细胞分离机操作手册进行血小板采集,在机器执行最后一步还输程序的抽吸时将空气陷阱倒立,并且在还输程序结束后将盐水管路和返血管路脱离各自的管路夹,通过重力的作用还输,对返血管路、空气陷阱、管路耗材残余血液分别进行细胞计数.结果 管路耗材最终留有稀释血液(84.68±4.38)mL,其中含有相当于(42.06±4.08)mL全血中的红细胞,以及(214.37±68.09)mL全血中的白细胞.空气陷阱留有(11.98±3.27)mL[相当于(8.32±2.52)mL全血中的红细胞,以及(58.97±24.57)mL全血中的白细胞]血液;返血管路留有20mL[相当于(11.18±1.18)mL全血中的红细胞,以及(80.74±30.89)mL全血中的白细胞]血液,将空气陷阱和返血管路留有的血液通过改进操作方法还输至献血者体内.结论 空气陷阱和返血管路中残留的血液可还输到献血者体内,为无偿献血事业的健康发展提供技术支持.
摘要:目的 研究内质网应激分子CHOP调控细胞凋亡与自噬的作用和机制.方法 利用衣霉素诱导DU-145细胞产生内质网应激,Western Blot法检测内质网应激相关分子Grp78、Grp94、p-eIF2α和CHOP及自噬蛋白LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达;用流式细胞术检测细胞凋亡水平;沉默CHOP基因,用Western Blot法检测凋亡蛋白PARP、Caspase3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡;并利用免疫荧光检测自噬标志性蛋白LC3B的表达.结果 衣霉素诱导DU-145细胞内质网应激能诱导一定程度的细胞凋亡,衣霉素处理8、12、24 h的细胞凋亡率分别为3.27﹪±1.02﹪,8.97﹪±0.71﹪和11.67﹪±1.41﹪,处理12 h及24 h的细胞凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01).同时也能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活DU-145细胞自噬.CHOP基因沉默抑制细胞凋亡,shCtrl组细胞凋亡率为32.17﹪±3.93﹪,shCHOP-1组细胞凋亡率为23.53﹪±3.41﹪,两组相比差异具有统计学意义(P<0.05).且CHOP基因沉默能促进细胞自噬分子LC3B的表达.结论 衣霉素诱导DU-145细胞内质网应激状态下,CHOP在细胞凋亡与自噬之间发挥双重调控作用.
摘要:骨髓(BM)移植已在许多血液病中成功应用多年,主要依赖于成人BM和外周血(PB)中的造血干细胞(HSCs).然而,合适配型HSCs的稀缺限制了其临床应用,难以满足更多有需要的患者.诱导多能干细胞(iPSCs)的出现,有望解决这一难题.iPSCs具有分化成所有血细胞的潜能,使得HSCs和其他血细胞在血液病中的广泛应用成为可能.然而,临床应用iPSCs治疗血液病仍障碍重重.本文主要回顾了iPSCs在血液病中的应用和发展以及面临的问题和挑战.
摘要:目的 探讨间充质细胞(MSC)外泌体对低氧条件下胰岛内皮细胞(MS-1)血管生成的影响.方法 MSC无血清低氧条件培养48 h,超滤离心法富集条件培养基中的外泌体,采用电镜和Western Blot的方法进行鉴定;通过血管形成试验比较分析不同条件下:常氧培养组(NOR组,21﹪O2、5﹪CO2)、低浓度氧培养组(HYP组,2﹪O2、5﹪CO2)、外泌体+低浓度氧共培养组(HYP+EXO组,2﹪O2、5﹪CO2),MS-1细胞的血管形成能力;image J软件分析血管形成长度;PCR、Q-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)RNA水平的表达,Western Blot检测VEGF、HIF1α 蛋白水平表达以及mTOR信号通路激活情况.采用单因素方差分析和SNK-q检验统计学分析.结果 超滤离心法富集的MSC条件培养基中的外泌体,大小为30~100 nm,表达CD9,CD63,CD81等外泌体表面标志物;血管形成试验结果显示,低氧促进MS-1血管生成,HYP+EXO组形成明显的血管网状结构;HYP+EXO组血管形成相对长度(2386.0±137.7)像素与NOR组(393.3±174.2)像素和HYP组(1467.0±230.0)像素相比增强,差异有统计学意义(t=12.30,P=0.0065;t=15.74,P=0.0040);PCR结果显示,HYP+EXO组VEGF相对表达量(20.26±9.972)较常氧对照组(1.000)和低氧组(6.521±3.501)均增强,差异有统计学意义(t=5.462,P=0.0009;t=4.238,P=0.0038);同时,Western Blot结果显示VEGF蛋白水平表达升高,HIF1-α 表达上调,mTOR发生磷酸化.结论 MSC外泌体可促进低氧条件下的小鼠胰岛内皮细胞血管生成.MSC外泌体可能通过上调HIF1-α,调节VEGF表达,激活mTOR信号通路,促进胰岛内皮细胞血管生成.
摘要:为了深入理解红外预警卫星的发展过程及建设水平,以美国为例,对红外预警系统进行研究.红外预警卫星系统作为美国反导预警系统重要组成部分之一,其预警能力直接影响美国反导体系作战效能.从总体上概述美国红外预警卫星系统的发展历程,重点介绍国防支援计划、天基红外系统、空间跟踪与监视系统研制情况、工作特点、目标探测能力,进一步基于卫星工具包(satellite tool kit,STK)仿真软件分析卫星的部署情况.在此基础上,总结美国红外预警卫星系统的发展启示.该研究可为我国预警卫星的发展与研究提供参考.
摘要:1966年Friedenstein发现了一群贴壁生长的、成纤维样的,可以体外诱导分化成多种中胚层组织的细胞.1991年Caplan正式命名为间充质干细胞(MSC),成为了全球最常用的描述.随着这群细胞生物学特性研究的进展,MSC到底是不是真正的干细胞引起了争论.目前研究资料表明,MSC的治疗效果主要是通过作为支持细胞分泌生物活性因子,刺激患者体内残留的组织特异性干细胞再生组织,而不是通过其干细胞的特性分化成新的组织.然而,一些研究者过分强调MSC的干细胞性能,误导患者以为输注的MSC可以再生成新组织.因此,一些学者呼吁需将MSC的名称改为间充质细胞或药用信号细胞(medicinal signal cell).本文将对MSC的定义和起源的发展过程进行梳理,并讨论如何合理的应用MSC的名称.
[期刊论文] 王剑 陈津 阙仲萍
-
CSTPCD 北大核心
-
摘要:以超大规模集成电路引线框架用材为研究对象,以前期试验为基础,在Cu-Ni-Ti合金中添加Sn,采用传统金属型铸造成形方法进行熔炼,研究了在C3N1 T合金中添加不同Sn含量(0.757%,0.865%和1.187%)对合金显微组织、相变化、电导率和硬度等性能的影响.研究结果表明,Sn可以细化合金组织、显著提高合金硬度和电导率,合金的硬度与电导率综合性能优异,实用价值较高,具有良好的应用前景.
摘要:目的 了解单采血小板过程中血清镁的变化情况和固定单采血小板献血者预防性口服补钙后其钙、镁和血清甲状旁腺素的变化情况.方法 选择本中心固定单采血小板献血者49人, 随机分为口服补钙组 (n=20):采集血小板前口服葡萄糖酸钙20 m L (含钙共180 mg);未补钙组 (n=29):采集血小板前未口服葡萄糖酸钙.采用全自动生化分析仪和化学发光免疫分析仪分别检测献血者在机采血小板0、30、60、90 min留取的血液标本中的血清钙、镁和甲状旁腺素含量, 比较2组单采血小板献血者这3项指标的差异.结果 机器采集血小板0、30、60、90 min时, 补钙组和与未补钙组献血者的血清钙 (mmol/L) 分别为2.44±0.25 vs 2.39±0.21、2.31±0.18 vs 2.19±0.20、2.35±0.27 vs 2.25±0.22、2.33±0.27 vs 2.24±0.20;血清镁 (mmol/L) 分别为0.76±0.19 vs 0.74±0.19、0.72±0.16 vs 0.69±0.20、0.73±0.18 vs 0.71±0.19、0.73±0.16 vs 0.71±0.18;甲状旁腺素 (pg/m L) 分别为43.43±20.78 vs 48.16±42.31、166.26±88.77 vs 154.22±71.98、137.79±64.73 vs 138.77±62.99、104.09±76.16 vs 99.83±62.20.2组之间只有血清钙水平在30 min时补钙组明显高于未补钙组 (P<0.05) .结论 单采血小板过程中存在血清镁的降低, 预防性口服葡萄糖酸钙能缓解低钙血症, 但对低镁血症影响有限.
[期刊论文] 陈津
-
北大核心
-
摘要:本文通过浅谈家庭电路的组成及各元件的作用,以贴近学生生活,符合学生认知特点,激发学生学习兴趣,通过探索物理现象,揭示陷藏其中的物理规律,并将其应用实际生产和生活,即从生活走向物理,从物理走向社会.使学生通过实践活动体会和了解物理知识在生产生活中的广泛应用,不断探索,培养学生的实践能力和创新精神,进而达到培养兴趣、巩固知识、提高初中生综合素质的目的,本人结合相关资料做了几点浅析.
摘要:目的 探讨放射治疗前后血清涎液化糖链抗原(KL-6)水平改变在预测肺癌患者发生放射性肺炎(radiation pneumonitis,RP)中的意义.方法 对87例接受胸部放射治疗的Ⅰ~Ⅲ期肺癌患者临床资料进行严格随访,动态观察其放疗前及治疗开始后3个月内血清中KL-6、转化生长因子β1(TGF-β1)和乳酸脱氢酶(LDH)的改变,结合其临床症状及影像学改变,探讨其在预测或早期诊断RP的作用.结果 87例肺癌患者依据临床症状及胸部CT表现,发现有13例被诊断为并发≥2级RP.该13例患者和74例0~1级RP患者在放疗前血清KL-6平均水平分别为(247±105.44)和(209±71.09) U/ml,≥2级RP组患者放疗后3个月内血清KL-6最高水平达(456±202.84) U/ml,放疗后与放疗前比值达(2.01±1.04)倍;而0~1级RP患者放疗3个月内KL-6最高水平为(222±80.42)U/ml,放疗后与放疗前比值为(1.13 ±0.60)倍,两组间差异有统计学意义(t=2.901,P<0.05);而血清TGF-β1与LDH在放疗前后没有明显变化.对放疗后与放疗前血清KL-6比值升高进行受试者工作特征曲线(ROC)分析显示:以1.435为临界值,血清KL-6比值升高诊断≥2级RP的敏感性为0.923%,特异性为0.851%.进一步多因素Logistic回归分析显示,KL-6比值升高(OR=12.886,95% CI=3.372 ~49.247,P=0.002)为≥2级RP的独立危险因素.结论 放疗过程中血清KL-6比值升高≥1.435倍与肺癌患者发生≥2级RP相关,可作为接受放射治疗的肺癌患者发生≥2级RP的预测因素.
摘要:建筑机电设备涉及技术功能层次多,安装技术含量较高,在安装过程中常常需要解决不同的技术难题,给建筑施工带来很大的困扰。因此,建筑施工企业应注重研究建筑机电设备安装工程中各环节的问题,及时发现问题、解决问题,对建筑机电设备的安装质量进行有效把控,这不仅是建筑机电安装工程发展的必要途径,而且是促进建筑企业良性发展的有力举措。本文对建筑机电工程安装施工的几点思考进行了探讨。
摘要:目的 探讨间充质干细胞(MSC)在改善器官捐献来源供肾肾移植功能恢复中的效果及安全性.方法 回顾性分析2011年7月至2016年12月在南京军区福州总医院完成的97例器官捐献供肾肾移植资料,其中肾移植联合MSC治疗组50例(治疗组),未行MSC治疗组47例(对照组).治疗组受者分别于肾移植术中血管开放前、术后1周、术后2周、术后3周静脉输注约1×106/kg体重的脐带来源MSC悬液50 ml.分析评价2组受者术后3个月内肾功能恢复情况、移植肾功能恢复延迟(DGF)发生率及持续时间、肺部感染发生率、急性排斥反应(AR)发生率,以及外科并发症等情况.结果 治疗组DGF发生率为16.0%,持续时间(14.42±3.95)d,对照组发生率为27.7%,持续时间为(17.85±6.25)d,两组间的差异有统计学意义.治疗组AR发生率为12.0%,对照组为21.3%,差异有统计学意义;治疗组肺部感染发生率为10.0%,对照组为12.7%,差异无统计学意义.术后1个月与3个月时,对照组估算肾小球滤过率(eGFR)均低于治疗组(P<0.05);而术后1周时两组间的差异无统计学意义.两组间外科并发症发生率的差异无统计学意义.结论 MSC治疗组患者术后DGF发生率更低、持续时间更短,AR发生率也更低,显示肾功能恢复趋势要明显优于对照组.但是两组间肺部感染以及外科并发症发生率并无明显差异.
摘要:本文系统描述了大连骆驼山金远洞第四层(L4)出土的熊科化石材料,并简要回顾了中国的似埃楚斯堪熊(Ursus cf.etruscus)化石材料.通过系统比较,认为金远洞L4和之前中国北方早更新世被归入Ursus cf.etruscus的材料(陕西蓝田公王岭的除外)同属于一类熊类,这种熊类和欧洲的埃楚斯堪熊(U.etruscus)最为接近,但又表现出一些独特的特征,因此建立一新亚种,即东方埃楚斯堪熊(U.e.orientalis subsp.nov.).U.e.orientalis subsp.nov.比欧洲早更新世早期的圣瓦利埃埃楚斯堪熊(U.e.saintvallierensis)更加进步,而和早更新世中期欧洲的埃楚斯堪熊指名亚种(U.e.etruscus)以及西亚的维氏埃楚斯堪熊(U.e.verescagini)演化程度近似,但个体大小明显小于这两个亚种.U.e.orientalis subsp.noV.表现出一些和棕熊(U.arctos)近似的特征,如p4后内嵴明显内偏,可能为U.arctos的祖先.U.e.orientalis subsp.nov.和中国南方的亚洲黑熊(U.thibetanus)虽然属于不同支系,但在牙齿适应和个体大小上较为近似,可能有着相似的生态位,相互之间较为排斥.这可能是U.thibetanus和U.e.orientalis subsp.noV.呈现出南北分异格局的重要原因.
[期刊论文] 孟令佳 吉忠海 陈津
-
CSTPCD 北大核心
-
摘要:热分解工业副产石膏回收利用 SO2和固体剩余物是一种有效资源化利用工业副产石膏的方式,但普遍存在利用成本高、能耗高、效率低等缺点,严重限制其循环利用的发展。本文介绍了近年来热分解工业副产石膏的研究进展。从气氛条件、还原剂与 CaSO4的配比、添加剂或杂质的促进作用,加热温度等方面回顾了不同条件对工业副产石膏分解率和脱硫率的影响,对比研究了微波加热相对于常规加热还原分解工业副产石膏的优势,分析了不同反应条件下CaSO4与C/CO的反应机理模型。同时对工业副产石膏热分解的发展方向和趋势进行了展望。通过优化反应条件能够有效提高工业副产石膏的热分解效率和脱硫率,但成本依旧较高。指出微波加热分解工业副产石膏可能成为未来工业化的一个重要方向。
摘要:随着人工智能的不断深化,机器翻译得到了长足的发展,但也威胁着人工译者的存在.海德格尔认为,现代技术使得人、物失去了自我意志,没有了独立性的尊严,沦为功能性的存在.在机器翻译时代,译者沦为生产语言流水线上的工人,失去了个人的风格和尊严.而且技术化的语言会逐渐侵蚀自然语言,从而使语言失去自身的灵性.语言是存在之家,思想家和诗人是语言的守护者.而翻译构成语言的一部分,影响母语的发展.因此译者应当充当守护语言的角色.一个好的译者应具有独立思考的能力,应有创造力和艺术感.
摘要:The first-principles calculations were performed to investigate the electronic structure, magnetic and dielectric properties of Cr-doped Fe3C, in comparison to those of pure Fe3C and Cr3C. The obtained results show that the thermodynamic stability of Cr- doped Fe3C becomes weaker in terms of the larger formation enthalpy, on the contrary, the metallicity and covalency are found to strengthen to some extent. The magnetic moments of Fe3C, Fe11CrC4(g), and Fe11CrC4(s) are respectively 21.36μB/cell, 16.92μB/cell, and 17.62μB/cell, and in Fe11CrC4(g) and Fe11CrC4(s), the Fe of Wyckoff positions of 8d and 4c is substituted by Cr. The local magnetic moment of Cr at 8d site is larger than that at 4c site in the doped structure, which is opposite to that of Fe. In low frequency band, the permittivity follows the ranking of Fe11CrC4(s)>Cr3C>Fe11CrC4(g)>Fe3C. Once exceeding a certain frequency, the sequence will be broken. Besides the electron transition, the polarization of atoms also makes a contribution to the dielectric properties.
-
北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
-
摘要:铝及铝合金熔渣(简称铝灰)的高效利用是解决环境污染的一个重要途径。本文提出了一种方便、经济、环保利用铝灰的新方法。将铝灰进行研磨、筛分、水洗预处理,高温下直接煅烧预处理样品制备氧化铝。采用X射线荧光光谱(XRF)、X射线衍射(XRD)对铝灰、预处理铝灰及氧化铝产品的化学组成和物相进行分析,并测得最佳样品的白度值及比表面积。研究结果表明:水洗处理铝灰可以除去铝灰中大量的可溶性盐NaCl等提高制备所得氧化铝的纯度;煅烧温度越高,获得氧化铝的纯度越高,在1600℃高温下,煅烧4h,所得氧化铝含量可达95.86%,其白度为87.2,比表面积为38.98m2/g,可用作磨料、催化剂载体等。高温煅烧铝灰可以去除铝灰中大部分杂质,是一种简便、环保、较经济制备氧化铝的方法。
[博士论文] 陈津
临床检验诊断学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,其发病率一直高居女性各器官恶性肿瘤发病率之首,每年因乳腺癌死亡人数多达50多万。ErbB2过表达型乳腺癌是恶性程度较高、预后较差的乳腺癌分子亚型,约占乳腺癌患者的25~30%。紫杉醇作为乳腺癌化疗方案中重要的候选药物,被广泛地用于转移性乳腺癌的化疗实践中,也是ErbB2阳性乳腺癌新辅助治疗中采用最多的紫杉烷类。随着紫杉醇药物的广泛使用,原发和继发性紫杉醇耐药性的产生这一问题也日益凸显,鉴于目前对其相关耐药分子机制的了解甚少,这极大的限制了紫杉醇在乳腺癌综合治疗中的临床疗效。肿瘤细胞对化疗药物的耐药性可以是内在的或是后天获得的。内在的耐药意味着一开始化疗就无效;获得性耐药是在肿瘤治疗过程发展的,可能是由于突变也可能是由于其他适应性反应如激活代偿信号通路引起的。ErbB2介导的耐药性增加是导致肿瘤恶性程度增强和病人存活率降低的重要原因,然而迄今尚未发现ErbB2自身可识别的配体,它必须与其它可识别相应配体的受体相互作用方可有效发挥其生物学功能。ErbB3与ErbB2同属于Ⅰ型受体酪氨酸激酶(RTK)家族,是ErbB2最为重要的相互作用受体伙伴,经常共表达于ErbB2阳性乳腺癌细胞。我们先前的研究发现ErbB3活性升高可导致紫杉醇耐药,靶向抑制ErbB3可增强紫杉醇对ErbB2-过表达乳腺癌的抗肿瘤活性。ErbB2/ErbB3对下游信号转导通路的激活有赖于ErbB3与其配体NRG-1的有效结合,但研究发现ErbB2/ErbB3共表达乳腺癌细胞NRG-1的表达水平极低。
  近年来,肿瘤微环境在肿瘤生物学中的作用日益得到认可。间充质干细胞(也称间充质基质细胞,MSC)能够特异性的募集到包括乳腺癌在内的许多原发和转移的肿瘤部位,是构成肿瘤微环境的重要组成部分。MSC可通过旁分泌细胞因子、外泌体等方式影响肿瘤细胞生长、迁移和治疗耐药。然而,MSC与肿瘤细胞之间的相互作用关系复杂,既可能支持肿瘤生长,也可能抑制肿瘤生长,在不同分子亚型乳腺癌中甚至出现截然相反的结果;因此,进一步深入揭示MSC与特定分子亚型乳腺癌之间确切的相互作用关系及作用机制,阐明作为肿瘤微环境中一个大群体的MSC与肿瘤细胞的关系,有助于进一步了解实体肿瘤的耐药机制。
  研究目的:
  探讨MSC对ErbB2/ErbB3共表达的乳腺癌细胞增殖以及对紫杉醇敏感性等肿瘤生物学行为的影响,并进一步探讨其可能的分子机理,冀望能拓展我们对肿瘤化疗耐药分子机制的认知水平,从而为临床ErbB2/ErbB3共表达乳腺癌病人克服紫杉醇耐药和新的靶向治疗策略提供初步的实验依据。
  研究方法:
  1.首先分离脐带来源的MSC作为细胞的种子来源,通过超滤法、超离法富集脐带MSC培养上清的外泌体,通过透射电镜鉴定外泌体的大小,WB和流式鉴定外泌体特异性标志物的表达。
  2.通过MTS和ELISA凋亡定量检测,分析MSC或其外泌体(0,1,2,5,10,20μg/ml)、重组NRG1对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖的影响,以及对不同浓度紫杉醇(0,2,4,8,16,32nM)诱导乳腺癌细胞凋亡的影响。并通过平板克隆形成试验、流式凋亡分析等方法进行验证;qPCR和WB检测与增殖相关的细胞周期调控基因p21、p27、Cyclin D1、Cyclin E1的表达情况。
  3.通过PCR分析MSC和乳腺癌细胞的NRG-1基因mRNA的表达情况;WB分析MSC及其外泌体的NRG-1蛋白表达以及MSC外泌体、NRG-1作用后乳腺癌细胞ErbB3、Akt、MAPK等信号通路活化和Survivin、PARP等蛋白的表达情况,探讨MSC或其外泌体对乳腺癌MDA-MB-453细胞紫杉醇耐药性影响的分子机制。
  4.构建慢病毒载体pLKO.1_NRG-1_shRNA,用NRG-1shRNA、ErbB3shRNA分别特异性敲低MSC的NRG-1表达和乳腺癌细胞ErbB3受体的表达后,通过平板克隆形成试验、凋亡分析以及WB检测Survivin、PARP蛋白等验证NRG1-ErbB3介导的信号通路在MSC诱导乳腺癌MDA-MB-453细胞紫杉醇耐药中的作用。再通过小分子抑制剂LY294002,Akt抑制剂Ⅷ和YM155分别抑制乳腺癌细胞PI3K、AKT、Survivin,分析MSC外泌体对紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡的影响。
  研究结果:
  1.从脐带wharton胶中分离出MSC,经鉴定符合MSC的标准。采用超滤法可以富集脐带MSC培养上清中的外泌体,经鉴定为30-100nm大小,表达CD9,CD63,CD81等外泌体标志,同时还表达脐带MSC的表面标志CD73,CD90,CD105,说明获得的外泌体来源于脐带MSC。
  2.MTS试验结果显示,以乳腺癌细胞MDA-MB-453单独培养组为对照(100%),MSC共培养组、加外泌体组乳腺癌细胞的增殖率分别为(116±2.53%,114.5±0.48%,n=3),与对照组相比没有统计学差异(p=0.061,p=0.092)。RT-qPCR结果显示,加入MSC外泌体组乳腺癌细胞周期调控相关基因CyclinD1、CyclinE1、p21和p27的表达水平无明显改变;与对照组相比分别增加(1.322±0.121倍,1.142±0.158倍,0.889±0.08倍和1.248±0.244倍,n=4),无统计学差异(p=0.125,p=0.171,p=0.068,p=0.135)。WB结果也证实细胞周期调控蛋白表达没有明显变化。
  3.平板克隆形成试验结果显示,随着紫杉醇浓度(0,2,4,8nM)增加,乳腺癌细胞克隆数逐渐减少;与对照组相比,紫杉醇诱导凋亡中加入MSC共培养或重组NRG1,乳腺癌细胞克隆数明显增多。定量结果显示(n=3),对照组乳腺癌细胞活率分别为(100±1.19%,85.69±1.04%,51.71±0.60%,18.88±0.62%);MSC共培养组分别为(104±1.24%,92.44±1.2%,75.29±1.2%,46.78±0.22%);rNRG1组分别为(107±1.022%,94.24±0.67%,76.49±0.39%;40.69±0.37%);MSC和NRG1明显提高乳腺癌细胞对紫杉醇的耐受性,促进乳腺癌细胞存活(p=0.013,p=0.001,p=0.0001和p=0.0007,p=0.0003,p=0.0006)。
  4.MTS结果显示,在不同浓度紫杉醇诱导乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡模型中,随着紫杉醇浓度的增加,乳腺癌细胞存活率逐渐降低;加入MSC外泌体或rNRG1后,乳腺癌细胞活率明显提高,紫杉醇浓度(2,4,8nM)组具有明显差异(p<0.001)。并且,MSC外泌体降低乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性具有浓度依赖性,随着外泌体浓度的增加(0,1,2,5,10,20μg/ml),乳腺癌细胞活率增加;当外泌体浓度大于2μg/ml时,具有统计学差异(p=0.0518,p=0.018,p=0.008,p=0.0003,p=0.0001)。
  5.细胞凋亡分析结果显示,MSC外泌体显著降低了紫杉醇对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用(p=0.0009,n=3);凋亡相关指示蛋白PARP活性剪切体cleaved-PARP表达降低。流式细胞凋亡分析结果也证实,MSC外泌体明显抑制紫杉醇引起的乳腺癌细胞凋亡(加入MSC外泌体组,紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡率由43.2±0.71%降至23.35±0.64%,p<0.01,n=3)。
  6.MSC及其外泌体高表达ErbB3的配体NRG-1,乳腺癌细胞不表达;MSC外泌体可明显激活MDA-MB-453乳腺癌细胞ErbB3受体,引起Akt信号通路磷酸化,上调Survivin表达,而MAPK信号通路不受影响。当MSC细胞的NRG-1被shRNA特异性敲低或MSC外泌体NRG-1被特异性抗体中和后,MSC及其外泌体的作用效果被逆转。当乳腺癌细胞ErbB3被shRNA特异性敲低,或当PI3K、AKT、Survivin被小分子抑制剂特异性抑制后,乳腺癌细胞凋亡增加,MSC外泌体对对乳腺癌细胞紫杉醇耐药的影响也被消除。
  研究结论:
  1.通过超滤离心法可以较简便地对MSC条件培养基中的外泌体进行富集。
  2.MSC没有明显促进ErbB2/ErbB3共表达乳腺癌细胞MDA-MB-453增殖,但是MSC明显降低乳腺癌细胞对化疗药紫杉醇的敏感性,促进肿瘤细胞的存活。
  3.MSC通过外泌体旁分泌NRG-1,通过与Erb3/ErbB2介导的信号级联反应,引起Akt信号通路磷酸化,上调Survivin表达,抑制细胞凋亡,诱导乳腺癌MDA-MB-453细胞对紫杉醇耐药性。
  4.特异性靶向抑制MSC的NRG-1或肿瘤细胞的ErbB3、PI3K、AKT、Survivin,可消除MSC诱导的ErbB2/ErbB3共表达乳腺癌细胞紫杉醇耐药。
  5.研究结果表明靶向肿瘤微环境中的MSC,可能是克服ErbB2/ErbB3共表达乳腺癌患者中紫杉醇耐药性的新策略.
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部