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[硕士论文] 陈步鑫
水生生物学 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:鲤春病毒血症病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV)属于弹状病毒科鲤春病毒属,是一种严重危害鲤养殖安全的传染性病原,感染鱼后能引起典型的鲤春病毒血症(Spring Viraemia of Carp,SVC)。该病在欧洲、亚洲和北美洲的鲤养殖区是较为常见的流行性疾病,虽然该疾病在我国还未检测到大规模暴发,但作为鲤养殖大国,该病对我国的鲤养殖产业构成潜在的巨大威胁。SVCV感染能引起鱼体体表出血、腹水和泄殖孔发炎等症状,严重者导至死亡。目前,SVCV的致病机理和入侵机制尚不清楚。SVCV结构蛋白糖蛋白(Glycoprotein,G)位于病毒囊膜上,在病毒入侵细胞时的内吞过程中发挥作用,该蛋白可以决定病毒的血清型。研究表明,SVCV蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒的免疫逃逸和复制产生重要影响。因此,研究SVCVG蛋白与宿主蛋白的相互作用对揭示该病毒的入侵与致病机理、抗病毒药物和预防疫苗的开发具有重要的科学意义。
  首先,利用串联亲和纯化(Tandem Affinity Purification,TAP)与质谱分析相结合的方法,在FHM细胞中筛选出可能与SVCV G蛋白相互作用的宿主蛋白。其次,用激光共聚焦和免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)共同验证,实验结果表明了SVCV G可以与宿主14-3-3β/α-A蛋白发生相互作用。通过对14-3-3β/α-A蛋白序列进行比对和同源性分析,发现14-3-3β/α-A在哺乳动物、鸟类、两栖类和鱼类中高度保守,其同源性高达97%。FHM细胞在感染SVCV后,14-3-3β/α-A的蛋白和mRNA水平都显著下降。在FHM细胞中过表达14-3-3β/α-A会促进SVCV的黏附和入侵,然而,14-3-3β/α-A对SVCV在感染后期的复制没有影响。本文首次证明了宿主蛋白14-3-3β/α-A与SVCV G蛋白发生相互作用,并且能促进SVCV的入侵和黏附,为揭示SVCV的致病机理和抗病毒药物的研发提供了新的理论依据。
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