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摘要:目的:探究过表达Tafazzin(TAZ)对口腔舌鳞癌CAL-27、SCC-15细胞增殖迁移侵袭的影响及其作用机制.方法:利用成功过表达TAZ的慢病毒载体转染CAL-27、SCC-15细胞,分为过表达TAZ组(overexpression TAZ,OE TAZ)和对照组(negative control,NC).用CCK-8实验检测细胞增殖;用划痕实验检测细胞的迁移;用Transwell实验检测细胞侵袭.相关基因的mRNA水平和蛋白水平分别利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测.结果:qRT-PCR和Western blot结果显示,过表达TAZ病毒转染成功;过表达组较对照组增殖升高,迁移侵袭明显增强;增殖相关蛋白p-Erk,p-Akt表达量升高,上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-钙黏连蛋白(E-Cadherin)降低,波形蛋白(Vimentin)升高.结论:过表达TAZ可能通过影响p-Erk、p-Akt、E-Cadherin、Vimentin的表达促进口腔舌鳞癌CAL-27、SCC-15细胞的增殖迁移和侵袭....
摘要:目的 探讨干扰TAZ基因后对舌鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响以及可能的分子调控机制.方法 实验分为干扰组和对照组,将稳定干扰TAZ基因的慢病毒载体转染至舌鳞癌细胞CAL27中作为干扰组,并以非特异性序列转染CAL27细胞作为对照组.利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blotting检测干扰效率,CCK-8细胞活力实验及EdU染色法检测转染后细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blotting检测与周期及凋亡相关蛋白的表达情况.结果 干扰TAZ基因后,RT-PCR和Western blotting检测结果显示,TAZ mRNA和蛋白表达水平明显降低;CCK-8细胞增殖活力检测及EdU染色法显示细胞增殖能力降低;细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均增多;G0/G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞减少.同时,干扰TAZ基因后,周期相关蛋白CYCLIN D1、CDK4和CDK6等表达水平降低;而凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase9表达水平均升高,Bcl-2表达水平降低.结论 干扰TAZ基因可以通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白的表达,来影响舌鳞癌细胞的增殖和凋亡....
[期刊论文] 王琪 陈希彦 文勇
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CSTPCD 北大核心
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摘要:Hippo/YAP信号通路首次被发现于果蝇中,在哺乳动物中具有高度保守的特性,可通过直接或间接地调节细胞增殖、程序性细胞死亡以起到平衡机体内环境稳态、维持器官大小的作用.YAP作为Hippo信号通路中的一个转录共激活因子,与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)、Wnt/β-联蛋白、细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2等通路中相关分子相互作用,使得Hippo通路与其他增殖调控相关信号通路形成“交通”,构成一个复杂的信号通路网,共同调控细胞的增殖.本文就目前对Hippo信号通路中共激活因子YAP与增殖调控信号通路间的交叉影响及其机制的研究进展作一综述....
[硕士论文] 陈希彦
口腔临床医学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最为常见的恶性肿瘤之一,每年有超过28万新增的病例。中国是口腔鳞癌的高发地区,近年来的发病呈上升趋势。虽然目前已有新型的化疗方法和靶向治疗药物应用于临床,但其效果不甚理想,因此我们需深入了解口腔鳞癌的发生发展机制。Hippo信号通路下游的关键效应分子YAP已被报道在肝癌、肺癌等肿瘤组织中表达异常。因此,本课题旨在探讨YAP对口腔鳞癌细胞CAL27的增殖和凋亡的影响,并研究其在体内体外促肿瘤的作用和机制,为YAP基因作为口腔鳞癌治疗新的靶点提供理论依据。
  方法:
  1.用免疫组化法检测不同分化程度的口腔鳞癌和正常口腔上皮组织中YAP蛋白的表达情况。
  2.检测YAP在4株口腔鳞状细胞癌细胞系中的表达水平,并选择CAL27作为进一步的实验材料。利用慢病毒载体转染CAL27细胞,分别构建敲除和过表达YAP基因及对照组的口腔鳞癌细胞系。通过QRT-PCR及Westem blot检测敲除和过表达效率。
  3.利用CCK-8细胞活力实验,EdU染色法,克隆形成实验来检测敲除和过表达YAP对CAL27细胞增殖的影响;流式细胞术检测YAP对细胞周期和细胞凋亡的影响。通过QRT-PCR及Western blot技术检测C-MYC、BCL-2等周期和凋亡相关因子随YAP表达改变时的情况。
  4.以不同浓度的Hippo-YAP信号通路抑制剂维替泊芬处理CAL27细胞,利用CCK-8细胞活力实验、流式细胞术来检测细胞增殖、凋亡和周期的改变;利用QRT-PCR及Western blot技术检测C-MYC和BCL-2等因子随抑制剂浓度改变情况。
  5.利用裸鼠成瘤实验,将敲除组、过表达组及相应对照组CAL27细胞注入到裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况,分析YAP的不同表达水平对口腔鳞癌发生发展的影响。
  结果:
  1.YAP蛋白在正常口腔上皮组织中基本不表达,或表达较弱;口腔鳞状细胞癌中,YAP蛋白的表达水平较高,与肿瘤分化程度有关。
  2.在CAL27细胞中,YAP基因和蛋白表达水平适中。在敲除YAP基因后,YAP及其下游靶基因CTGF、ANKRD、CYR61表达水平明显降低,同时细胞中总YAP和细胞核中YAP表达水平均降低。过表达YAP基因后,YAP及其下游靶基因CTGF、ANKRD、CYR61表达水平明显升高,而细胞中总YAP和胞核中YAP表达水平均升高。
  3.与对照组相比,敲除YAP基因后,CAL27细胞增殖较慢,细胞周期阻滞,同时早期凋亡和晚期凋亡细胞比例均升高;C-MYC和BCL-2mRNA及蛋白表达水平均降低;周期相关蛋白CyclinD1表达水平下降,促凋亡蛋白BAX、Caspase7表达水平升高。过表达YAP基因后,CAL27细胞增殖加快,细胞周期进展加速,早、晚期凋亡细胞比例均降低;C-MYC和BCL-2表达水平升高;CyclinD1蛋白表达水平升高,BAX、Caspase7蛋白表达水平下降。
  4.以不同浓度的Hippo-YAP信号通路抑制剂维替泊芬处理CAL27细胞。利用CCK-8细胞活力实验检测细胞增殖情况,利用流式细胞术来检测细胞周期和凋亡的改变;利用QRT-PCR及Western blot技术检测C-MYC和BCL-2等因子随抑制剂浓度改变情况。
  5.敲除YAP基因后,CAL27细胞在裸鼠体内形成肿瘤速度较慢,肿瘤体积较小,且肿瘤重量较轻;而过表达YAP基因后,肿瘤形成速度较快,肿瘤体积较大,同时肿瘤重量较重。
  结论:
  YAP在口腔鳞癌中高表达且与肿瘤的分级相关;YAP能通过调节C-MYC和BCL-2的表达,来影响细胞的增殖和凋亡,从而调控肿瘤的进展。提示YAP在口腔鳞状细胞癌的发生发展中具有重要意义,为口腔鳞癌的分子靶向治疗提供了新思路。
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