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[专利] 发明专利 CN201910674711.X
扬州大学 2019-10-22
摘要:本发明属于生物技术检测领域,具体涉及一种针对猪德尔塔冠状病毒N蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。该试剂盒包被有单克隆抗体PDCoV‑N‑1A2的酶标板、阳性和阴性对照、HRP标记的检测抗体PDCoV‑N‑5C5、样品稀释液、显色液以及洗涤液。其中所述抗体PDCoV‑N‑1A2和PDCoV‑N‑5C5分别由杂交瘤细胞株PDCoV‑N‑1A2和PDCoV‑N‑1A2分泌。本发明的试剂盒以1A2为捕获抗体、以杂交5C5(HRP偶联)为检测抗体建立的双抗体夹心ELSIA方法可特异性的检测PDCoV N蛋白,为PDCoV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。
[专利] 发明专利 CN201910237539.1
扬州大学 2019-06-21
摘要:本发明属于生物技术检测领域,具体涉及一种稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的重组细胞系及其应用。所述细胞系含有猪德尔塔冠状病毒N蛋白基因和抗性筛选基因。本发明获得的稳定表达PDCoV‑N蛋白的带有嘌呤霉素抗性的重组细胞系,可用于检测PDCoV特异性抗体,对于未经疫苗免疫的猪群,监测到特异性抗体阳性反应即可确定该猪群已经发生野毒感染。
[专利] 发明专利 CN201910237177.6
扬州大学 2019-06-14
摘要:本发明属于生物技术检测领域,具体涉及一种猪德尔塔冠状病毒PDCoV抗原制备方法及利用该抗原制备的间接ELISA试剂盒。该抗原的制备方法是:选取猪德尔塔冠状病毒N基因796~1026nt核苷酸区域,按照大肠杆菌密码子使用偏嗜性对该核苷酸区域进行优化设计,优化的基因片段如Seq No.2,优化片段克隆入pET‑32a(+)载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效可溶性表达,进而通过Ni‑NTA亲和层析方法进行纯化而获得。本发明确保了重组蛋白在大肠杆菌表达系统中表达效率更高,更有利于形成可溶性表达产物。制备的间接ELISA试剂盒更适用于PDCoV感染流行病学调查中对猪群进行群体性高通量筛查。
[硕士论文] 钱炳旭
兽医硕士 扬州大学 2019(学位年度)
摘要:根据大肠埃希菌密码子使用的偏嗜性,对G2b亚型猪流行性腹泻病毒(PEDV)J SX2014株S基因(94~525、1 306~1 641 nt 2个区域)、M基因(544~669 nt)和N基因(397~960 nt)进行优化和基因合成,分别克隆入pET-32a(+)中,获得4种重组原核表达载体pET Opti-S-D1、pET Opti-S-D2、pET-Opti M和pET-Opti-N.将重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot鉴定,4种重组蛋白均可获得正确表达.以表达蛋白为抗原制备的兔多抗血清,通过间接免疫荧光试验鉴定,均能与JSX2014株感染的Vero细胞发生特异性反应.进一步通过中和试验鉴定,S-D1蛋白特异性多抗血清可有效阻断JSX2014株对Vero细胞的感染.这一结果提示所表达的目的蛋白均具有良好的免疫原性,可以进一步用于G2b亚型PEDV抗体检测方法的建立....
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