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摘要:目的:探讨刘延庆教授临床治疗痛风的经验方对于高尿酸血症大鼠模型相关免疫炎症因子的影响,为该复方的临床应用及后期开发提供实验依据.方法:复方水煎剂在扬州市中医院中药制剂室制备.高尿酸血症模型造模通过给大鼠喂食定制高酵母饲料和腺嘌呤溶液,同时皮下注射氧嗪酸钾悬液进行造模.模型组大鼠分为阴性对照组(不给药)、给药组以及阳性对照组(秋水仙碱),连续给药10 d.全自动生化分析仪用来检测血尿酸水平,蛋白热荧光芯片用来检测痛风相关的免疫炎症因子的表达情况.显微镜下观察大鼠肝肾组织是否损伤.结果:与阴性对照组比较,该复方能明显降低高尿酸血症大鼠模型的血尿酸水平(P<0.01);与对照组相比,该复方对痛风相关的免疫炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-13、TNF-α等具有明显的抑制作用.显微镜下观察大鼠的肝肾组织,未发现明显的肝肾组织损伤.结论:该复方可以明显降低高尿酸血症大鼠模型的尿酸水平,同时抑制痛风相关免疫炎症因子,短期内并未发现明显的肝肾损害.这说明该复方具有明显的抗炎免疫作用,对于高尿酸血症具有明显治疗作用且无毒副作用....
摘要:生物信号通路的交叉对话(cross-talk)是指众多信号通路共享同一关键组分,形成一种蝴蝶领结(bow-tie)样的网络拓扑结构.交叉对话对终末基因的调节表现出功能冗余、协同及拮抗,同时又要避免通路之间互相串扰带来的信号噪音或信号溢出,进化出一套维持细胞对不同外界应激产生特异性应答的绝缘(insulation)机制,对维持细胞内稳态有着非常重要的生物学意义.交叉对话及其分子绝缘机制提示:对话分子对细胞命运调控的两重性,要求实现靶向对治疗有利的对话分子而避开对治疗不利的对话分子;对话分子以大分子复合物为功能载体,在信号绝缘中对话分子互作界面构象的高度可塑性,设计开展药物结合与药理活性关联性研究.因此,以信号通路的交叉对话及其分子绝缘机制指导创新药物设计,对解决当前药物研发的瓶颈和临床困境具有重大的指导意义....
摘要:目的 :探讨南蛇藤总萜(COE)是否通过诱导自噬来抑制结直肠癌细胞增殖.方法 :用不同浓度的COE处理体外培养的大肠癌HT-29细胞,噻唑蓝(MTT)法检查细胞存活率,透射电镜(TEM)观察细胞形态,免疫印迹法(Western blot)检测COE对细胞自噬相关蛋白表达的影响,并采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合COE干预HT-29细胞,用吖啶橙染色细胞、MTT法检测3-MA对COE抑制HT-29细胞增殖的影响.结果 :COE抑制HT-29细胞的增殖,作用24h的IC50为156μg/mL;随着COE浓度的升高,TEM示细胞中自噬体明显增多,和COE治疗组比较,COE联合3-MA组的细胞生存率升高,而自噬泡(AVO)的数量显著下降,微管相关蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达也降低.结论 :COE可能通过上调Bcl-2同源结构域蛋白抗体-1(Beclin-1)和LC3-Ⅱ的表达来增加HT-29细胞的自噬活性,从而抑制HT-29细胞的增殖作用....
摘要:目的:构建过表达雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin,mTOR)的人肝癌HepG2细胞,并研究中草药南蛇藤Celastrus orbiculatus Thunb.提取物对该细胞的影响.方法:利用分子生物学技术,将GV238-mTOR重组质粒转染人肝癌HepG2细胞,分别用荧光素酶活性检测和Western Blot实验,分析转染后的细胞中mTOR的表达水平.人肝癌HepG2/mTOR++细胞中,加入不同浓度的南蛇藤提取物(20、40、80、160、320 μg·mL-1)作用24 h后,分析南蛇藤提取物对mTOR蛋白的作用.结果:经转染的人肝癌HepG2细胞中,mTOR蛋白的表达水平显著增加.南蛇藤提取物明显抑制肝癌细胞的增殖,并明显降低细胞内mTOR蛋白的表达.结论:本实验成功获得能稳定过表达mTOR的人肝癌HepG2细胞株.南蛇藤提取物明显抑制肝癌细胞内mTOR蛋白的表达水平....
摘要:目的 探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制.方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响.Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平.RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMPl、TIMP3的mRNA表达情况.结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性.Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调.RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的mRNA水平有轻微升高趋势,而TIMPl和TIMP3的mRNA水平明显大幅上调(P<0.001).结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关.而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的mRNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的....
[期刊论文] 金凤 钱亚云
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CSTPCD CA
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摘要:转移是肿瘤治疗难以收效的最主要的原因,肺是肿瘤最常见的转移器官之一.现代医学治疗肺转移癌存在诸多禁忌征,而中医药以其独有的辨证论治体系,在控制肿瘤转移方面的优势已有所体现.刘延庆教授治疗肺转移癌以肺为基本病位,明确正气亏虚,风携痰、毒、瘀上窜扰肺为关键病机,遣方用药攻补并重,并运用少量风药以熄风除痰祛邪,并结合现代医学,坚持衷中参西,重视情志因素....
摘要:目的:结合体内外实验研究南蛇藤提取物对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的作用及分子机制。方法:取对数生长期HepG2细胞,除对照组外,分别给予南蛇藤提取物10、20、40、80、160滋g·mL-1培养,采用Western Blotting法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平;斑马鱼胚胎,于受精后48 h开始给药,正常组给予E3缓冲液,DMSO组为含1% DMSO的E3缓冲液,南蛇藤组各药物浓度分别为10、20、40、80、160滋g·mL-1;给药24 h后,以Western Blotting法检测mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,南蛇藤提取物各浓度组明显增加E-cadherin的表达量,降低vimentin和mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结论:南蛇藤提取物能在一定程度上逆转人肝癌细胞EMT ,其分子机制可能与mTOR信号通路相关,mTOR可作为临床治疗肝癌的新靶点。...
摘要:目的:构建高表达抑癌基因Maspin的人胃癌MGC803细胞,研究不同浓度的南蛇藤提取物能否增强Maspin抑制胃癌细胞的侵袭能力。方法:克隆重组GV208-Maspin-EGFP慢病毒表达载体,感染人胃癌MGC803细胞。加入不同浓度的南蛇藤提取物(10、20、40μg·mL-1),Transwell小室法检测药物对高表达Maspin的人胃癌MGC803细胞侵袭能力的影响。结果:成功构建高表达Maspin的人胃癌MGC803细胞模型。各药物组Transwell小室下方穿膜细胞的数目减少,呈现一定的药物浓度依赖性。结论:南蛇藤提取物可增强抑癌基因Maspin抑制人胃癌细胞株MGC803侵袭的能力。...
摘要:毛奇龄是明末清初学术颇具代表性的人物,其才华卓越,淹贯群籍,但性格乖戾,傲睨一世,又纵横博辩,多臧否人物,因而多所怨家,毁誉参半。然而瑕不掩瑜,其人虽品格低劣,但其在学术上的成就仍被许多学者所推崇。...
摘要:目的:探讨华蟾素对人胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移的影响及其分子机制.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L-)对人胃腺癌MGC-803细胞增殖的抑制影响;transwell小室法检测华蟾素对MGC-803细胞侵袭与迁移能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经华蟾素作用后的MGC-803细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测经华蟾素处理后的MGC-803细胞中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2的mRNA表达情况.结果:①MTT比色法结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L-)对胃腺癌MGC-803细胞的增殖具有显著抑制作用(P<0.01),并且华蟾素对MGC-803细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖.②transwell实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg· L-1)对胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移能力具有不同程度的抑制作用(P<0.05)③Real-time PCR和Western blot实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg· L-1)能够下调MMP-2,MMP-9蛋白和mRNA的表达,上调TIMP-1,TIMP-2蛋白和mRNA的表达.结论:华蟾素能明显抑制胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移,其机制可能与上调TIMP-1,TIMP-2的转录水平,进而下调MMP-2,MMP-9蛋白水平有关....
摘要:目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨.方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L-1),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P<0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P<0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P<0.05).结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关.本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制....
摘要:目的:探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抑制胃癌侵袭转移的作用及其机制.为胃癌的中医药预防与治疗寻求新的靶点,为开发有效的抗胃癌中药奠定理论和实验基础.方法:利用前期蛋白质二维电泳技术,在胃癌中筛选出COE作用于胃癌的差异大的靶点蛋白.然后利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE(20,40,80 mg·L-1)干预后细胞中丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)水平的表达情况.最后利用分子克隆技术,将胃癌细胞株BGC-823中的CFL1表达抑制,然后联合COE进行干预,检测COE是否能影响胃癌细胞的侵袭转移.结果:在前期实验基础上经过细胞水平的验证,CFL1能够在胃癌细胞中稳定高表达;Western blot结果显示,COE能抑制胃癌细胞中CFL1的表达,经不同质量浓度COE(20,40,80 mg·L-1)处理24 h的BGC-823细胞,其CFL1的水平受到了不同程度的抑制.随着COE的浓度递增,CFL1的表达逐渐减弱.与空白组比较,COE40,80 mg·L-1组CFL1表达显著减少(P<0.01);利用小干扰RNA(siRNA)技术干扰胃癌BGC-823细胞株后,CFL1表达受到明显抑制,与空白组比较,siRNA-CFL1慢病毒转染组BGC-823细胞中CFL1受到显著抑制(P<0.01);细胞侵袭实验(transwell)显示COE能显著减少胃癌BGC-823细胞敲低表达后细胞的透膜细胞数(P<0.01).结论:COE能明显抑制胃癌BGC-823细胞的转移,其机制可能与抑制CFL1的过度表达有关....
摘要:目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据.方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,设空白组和COE组,应用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法观察COE对细胞活力的抑制作用;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,BrdU)标记检测COE对U251细胞增殖的影响;Annexin V/碘化丙啶(PI)双标法检测COE对U251细胞凋亡的作用;透射电镜下观察经COE干预后U251细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对凋亡标志基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响.结果:与空白组比较,COE能够明显抑制U251细胞的增殖(P<0.05);诱导U251细胞的早期凋亡,电镜下可见到凋亡小体,影响并改变U251细胞超微结构;COE能促进Caspase-3,Bax蛋白表达,降低Bcl-2,Bcl-2/Bax蛋白表达(P<0.05).结论:COE能有效抑制胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2和Caspase-3表达有关....
摘要:目的:探讨南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:MTT法检测不同质量浓度的南蛇藤提取物作用于TE-8细胞24、48h后细胞的增殖情况.南蛇藤提取物作用TE-8细胞24h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;JC-1试剂盒检测线粒体膜电位的损伤;TUNEL法检测DNA损伤情况;Western blot法检测丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况.结果:南蛇藤提取物能明显抑制人食管鳞癌TE-8细胞的增殖,呈时间及浓度依赖;南蛇藤提取物能促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位,诱导细胞内DNA损伤,阻断MAPK信号通路的表达,呈浓度依赖.结论:南蛇藤提取物能够抑制TE-8细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物抑制MAPK信号通路的表达有关....
[博士论文] 金凤
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本课题共分为四部分研究内容。
  第一部分:南蛇藤提取物通过DJ-1抑制人食管鳞癌细胞迁移、侵袭及肿瘤干样细胞增殖目的:观察COE对人食管鳞癌细胞的侵袭、迁移能力、EMT进程及干细胞转录因子mRNA水平的影响;构建食管鳞癌干细胞模型,筛选COE作用于人食管鳞癌肿瘤干细胞模型的蛋白靶点。
  方法:体外培养人食管鳞癌细胞ECA-109及TE-8细胞,不同浓度(10,20,40,80,160,320μg/mL)的COE对作用于细胞24h、48h、72h后,MTT法检测COE对细胞生长增殖的影响。普通显微镜观察COE对细胞形态的影响。Transwell小室实验、western blot及RT-qPCR分别检测分别检测COE对两株细胞侵袭、迁移能力及细胞中蛋白水平与mRNA表达的影响。通过无血清培养基(serum-free medium,SFM)悬浮培养富集人食管鳞癌干样细胞,并以CD90、CD133及SOX2、Nanog、OCT4的mRNA表达变化及细胞在裸鼠体内成瘤能力来鉴定其干性。
  结果:不同浓度的COE作用ECA-109及TE-8细胞24h、48h、72h后,细胞的生长呈现不同程度的抑制,并呈一定的浓度及时间依赖性(P<0.05);其24h IC50分别为139.17±13.95μg/mL,153.74±10.72μg/mL。20、40、80μg/mL浓度的COE及阳性对照药5-Fu作用ECA-109及TE-8细胞24h后,随着COE浓度的增加,细胞形态呈凋亡状改变。且COE能抑制ECA-109及TE-8细胞迁移及侵袭能力,并呈浓度依赖(P<0.05)。随着COE浓度的升高,E-cadherin表达而逐渐上调,而N-cadherin表达逐渐下调,提示COE可以抑制EMT的发生。RT-qPCR结果提示COE可以降低干细胞转录因子SOX2、Nanog及OCT4的mRNA水平,呈浓度依赖(P<0.05)。成功富集人食管鳞癌干样细胞(ECA-109-S),且富集后第14天细胞内CD90及CD133表达及SOX2、Nanog及OCT4的mRNA水平较正常血清培养中的细胞高(P<0.05)。
  结论:COE可以抑制人食管鳞癌ECA-109及TE-8细胞增殖、侵袭、EMT及ECA-109干样细胞增殖,其作用的蛋白靶点为可能是α-tubulin、SLP-2、Prohibitin、DJ-1、HSP27等靶点蛋白单独或共同参与的结果。
  第二部分:DJ-1通过Wnt/β-catenin信号通路促进人食管鳞癌细胞增殖及转移
  目的:该部分主要探讨DJ-1在人食管鳞癌细胞增殖及转移中的作用,并对其潜在机制进行了探讨。
  方法:通过免疫组织化学检测DJ-1,Vimentin和E-cadherin在84例人食管鳞癌标本中的表达水平,分析各蛋白的表达与临床病例基线资料是否有统计学意义及这三个蛋白之间的相关性。利用TGF-β1建立EMT模型,分析DJ-1的表达水平。利用慢病毒载体构建DJ-1过表达及低表达细胞模型,并用Wnt/β-catenin抑制剂XAV939干预过表达DJ-1的细胞,通过Edu增殖实验、克隆实验、transwell小室实验及western blot分别检测细胞增殖、克隆、迁移、侵袭能力和细胞中各蛋白水平。
  结果:在84例食管鳞癌标本中,DJ-1的表达与淋巴结转移和远处转移密切相关,而Vimentin和E-cadherin与肿瘤细胞分化、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)。且DJ-1的表达水平与Vimentin表达呈正相关,r=0.739,P<0.001,而与E-cadherin表达呈负相关,r=-0.770,P<0.001。在TGF-β1诱导的ECA-109细胞EMT模型中,DJ-1表达水平较ECA-109细胞明显增高(P<0.01)。成功构建过表达DJ-1的重组细胞株ECA-109-LV-DJ-1,沉默表达DJ-1的细胞株ECA-109-LV-siRNA-DJ-1及其各自的阴性病毒对照组细胞。ECA-109-LV-DJ-1细胞增殖、克隆、迁移、侵袭能力均强于对照组细胞(P<0.05)。在ECA-109-LV-DJ-1细胞中,E-cadherin表达降低,而N-cadherin和Vimentin表达增加;Wnt/β-catenin信号通路中LRP6、p-LRP6、β-catenin表达水平增高,Axin1表达水平降低(P<0.05)。
  结论:DJ-1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进人食管鳞癌ECA-109细胞增殖、黏附、迁移、侵袭和EMT进程。
  第三部分:DJ-1通过促进线粒体生成及呼吸维持人食管鳞癌细胞干细胞特性
  目的:该部分主要探讨DJ-1在维持人食管鳞癌细胞干细胞特性中的作用,并对其潜在机制进行了探讨。
  方法:通过免疫组织化学检测DJ-1、SOX2和Nanog在84例人食管鳞癌标本中的表达水平,并分析其相关性。利用无血清培养建立肿瘤干细胞模型、慢病毒载体构建DJ-1过表达及低表达细胞模型。细胞成球实验、流式细胞分析、RT-qPCR分别用于检测细胞成球能力、细胞表面标记CD90、CD133的表达及干细胞转录因子SOX2、Nanog及OCT4的变化。Mito-Tracker Red染色用于分析线粒体质量,荧光观察及流式分析用于线粒体膜电位的测定,透射电镜用于观察各组细胞内的线粒体数目及结构,ATP检测试剂盒用于检测细胞内总ATP产量,流式细胞分析用于检测DCFH-DA标记的细胞内总ROS含量,western blot用于检测细胞中各蛋白水平。
  结果:在84例人ESCC组织标本中,SOX2的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远处转移密切相关,而Nanog的表达与肿瘤细胞的分化、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关。且DJ-1的表达与干细胞转录因子Nanog (r=0.685,P<0.001)和SOX2(r=0.620,P<0.001)的表达正相关。过表达DJ-1后,细胞具有更强的成球能力及体内成瘤能力,及更高水平的CD90、CD133标记及Nanog、OCT4、SOX2 mRNA表达(P<0.05)。而DJ-1表达减弱后,以上能力均减弱。无血清培养后的细胞具有更强的线粒体质量、数量,更高表达的PGC-1αmRNA、ATP产量、线粒体膜电位(P<0.05),而细胞内总ROS含量并无明显变化。此外,线粒体质量、P GC-1αmRNA、ATP产量在过表达DJ-1细胞中增加而在低表达细胞中明显减弱(P<0.05)。过表达DJ-1细胞中线粒体数目增多(P<0.05),低表达DJ-1细胞中线粒体数量没有明显变化,但是线粒体形态出现明显破坏,表现为线粒体的肿胀,嵴排列紊乱并消失。且削减DJ-1表达的细胞中总ROS含量明显增多。同时DJ-1过表达可以增加线粒体相关蛋白PGC-1α、VDAC、Cyt-C的表达,而削减DJ-1表达后,PGC-1α、VDAC、Cyt-C表达明显降低(P<0.05)。
  结论:DJ-1通过促进线粒体生成及呼吸维持人食管鳞癌细胞干细胞特性。
  第四部分:南蛇藤提取物通过DJ-1介导的线粒体生成调控人食管鳞癌干样细胞侵袭转移
  目的:观察COE对人食管鳞癌干样细胞干性能力及侵袭转移的影响,并探索其可能的作用机制。
  方法:细胞分为野生细胞对照组,干样细胞阴性对照组及干样细胞加各浓度药物组。Transwell小室实验分别检测不同浓度COE对细胞侵袭、迁移能力的变化。Western blot及RT-qPCR分别用于检测各组细胞中蛋白及mRNA水平的变化。透射电镜用于观察各组细胞内的线粒体数目及形态结构,Mito-Tracker Red染色用于分析线粒体质量,流式分析用于线粒体膜电位的测定。构建裸鼠腹腔转移瘤模型,将注射ECA-109-S细胞的裸鼠随机分为对照组(含1% DMSO的生理盐水溶液),COE低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40mg/kg)剂量组,替吉奥(10 mg/kg)组,各组裸鼠均灌胃给药,观察各组裸鼠的腹膜种植转移的情况。
  结果:食管鳞癌干样细胞的迁移及侵袭能力明显强于野生细胞,而COE可以抑制食管鳞癌干样细胞的迁移及侵袭能力,并呈浓度依赖,并上调细胞中E-cadherin的表达,下调N-cadherin及Vimentin的表达(P<0.05)。透射电镜结果显示80 μg/mL COE可以减少干样细胞中线粒体的数量(P<0.05),并使线粒体结构发生改变,表现为线粒体肿胀,内膜消失,嵴排列紊乱。Mito-Tracker Red染色结果显示80 μg/mL COE可明显降低线粒体质量(P<0.05)。COE可以降低ECA-109-S细胞中的线粒体膜电位,并减少DJ-1及线粒体相关蛋白PGC-1α、HSP60、VDAC等的表达,呈浓度依赖(P<0.05)。体内实验显示,COE各剂量组中裸鼠的活动及生长状态均明显好于对照组。COE各剂量组中,肿瘤在大网膜、肠系膜、肝脏的转移发生率明显小于对照组(P<0.05)。免疫组化结果表明COE可明显上调移植瘤组织中E-cadherin的表达,下调DJ-1、Nanog及PGC-1α蛋白的表达。
  结论:COE可抑制人食管鳞癌干样细胞侵袭及转移,其作用机制可能与COE调控DJ-1介导的线粒体生成有关。
[硕士论文] 金凤
中国古典文献学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:毛奇龄是清初经学的一位巨匠,其淹贯群籍,学问赅博,本可因此享誉学界,但因其好辨善詈,务欲胜人,在学界颇受争议。其为攻驳朱熹而作《四书改错》,竟言“四书无一不错”,并系统地对朱注进行纠驳改错,虽有精妙之改,但也不乏舛误之处,故而学界亦对其褒贬参半。
  目前对《四书改错》研究的面世成果,基本停留在宏观层面,偶有文章观照《四书改错》条目分类,但也只停留在体例划分的科学性层面,对于毛氏所改的正误及价值意义并没有作详细的梳理。本文拟从纠偏正误、错改误判、画蛇添足等几个层面对《四书改错》进行具体举证分析。
  《四书改错》对《四书章句集注》中的人、事、物、地、史、典章制度等,确有详考详证、正本清源之处,对朱熹错疏误注进行了纠偏正误。对《四书章句集注》中所涉的部分字形音义进行了训形辨音释义,引经据典,校正讹误,有理有据。
  《四书改错》存有诸多弊端。对于朱熹《四书章句集注》中的部分注解,毛奇龄未证先断,大呼其错。其所改或无证或无定论,此类实属画蛇添足。朱熹《四书章句集注》部分条目,有考有证,结论可信,历来备受学者推举。而毛奇龄意气用事,有的无考臆改,有的理据不足,强辩强改。又因毛奇龄先入为主,对朱熹《四书章句集注》未载之言,无事生非,张冠李戴,指摘诬告,极不严谨。更有甚者,《四书改错》存有强词夺理、颠倒是非之改。
  毛奇龄《四书改错》驳朱改错,虽囿于成见,有不必、不确和错误之改,但也不乏纠偏匡正之改。通过对《四书改错》较为细致梳理,可知朱注、毛改是非皆存,瑕瑜互见。毛氏精当之改,应该称道。朱熹所遭冤情诬告,亦应还其清白。在对《四书改错》进行较为客观全面梳理的基础上,可以断言,毛奇龄“四书无一不错”之说,乃属不实之言。
[专利] 发明专利 CN201610960451.9
扬州大学 2017-02-22
摘要:本发明属于中医中药领域,涉及一种治疗痛风的中药复方。该复方的组分及重量配比如下:土茯苓1份、鬼箭羽1份、生苡仁1份、徐长卿1份。本发明对高尿酸血症和急性痛风性关节炎的治疗效果显著,而且无严重的毒副作用。临床使用结果统计及动物实验研究表明,该发明专利可以明显缓解高尿酸血症和痛风性关节炎带来的病痛,并且能显著降低患者和大鼠的血尿酸水平,而且无明显的毒副作用。该发明专利复方具有的效果好,价格低廉,副作用小等优点,满足了患者对于理想化治疗痛风药物的最朴实的三点基本要求,即该专利发明复方所具有的明显缓解患者病痛的作用,减轻患者因服药而带来的副作用,同时减轻患者服药的经济负担。
摘要:目的 研究南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT的影响.方法 TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞造模,设阴性对照组、模型组和不同浓度COE实验组.MTT法检测细胞毒作用和生长抑制作用;Transwell小室法检测细胞的侵袭和转移能力;Western blot法检测细胞EMT生物标志分子(biomarker)E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和相关的丝切蛋白1(Cofilin 1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases2,MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平;TRITC-标记的鬼笔环肽细胞骨架荧光染色,激光共聚焦显微镜检测细胞骨架.结果 与模型组相比:COE能下调人胃癌SGC-7901细胞的Cofilin 1蛋白水平和EMT标志蛋白N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达水平,同时上调E-钙黏蛋白的表达水平,显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的EMT进程,呈明显的剂量依赖性;COE能降低人胃癌SGC-7901细胞的穿膜细胞数;另外COE(10、20、40mg/L)能下调人胃癌SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;COE能明显抑制细胞骨架发生改变.结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞EMT进程,降低细胞侵袭和转移能力,其机制可能与抑制细胞骨架改变和降低Cofilin 1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平有关....
摘要:目的:利用高表达抑癌基因maspin的人胃癌MGC-803细胞探讨南蛇藤提取物对其凋亡的影响.方法:以人胃癌MGC-803细胞为研究对象,不同质量浓度20,40,80,160,320 mg·L-1南蛇藤提取物作用于MGC-803细胞24,48 h后,MTT法检测南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞增殖的影响;以不同质量浓度COE组(0,20,40,80 mg·L-1)及32 mg·L-1的5-FU阳性对照处理24 h后,TUNEL法检测南蛇藤提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测对maspin,Bcl-2,Bcl-2L12及Bax蛋白表达的影响.结果:南蛇藤提取物(20,40,80,160,320 mg·L-1)能明显抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,呈现时间及浓度依赖性;与空白组比较,不同质量浓度的南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)作用24 h后,镜下显示,随着药物浓度升高,细胞数目减少,形态变圆,胞浆浓缩,出现凋亡小体,TUNEL结果表明南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)能促进细胞凋亡,Western blot结果显示南蛇藤提取物(20,40,80,160 mg·L-1)可呈浓度依赖性地增加抑癌基因maspin蛋白的表达,降低Bcl-2,Bcl-2L12的表达,均具有明显的统计学差异(P<0.05,P<0.01).结论:南蛇藤提取物能够抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物促进抑癌基因maspin的表达以及抑制Bcl-2,Bcl-2L12的表达有关....
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