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摘要:为研究乌苏里貉IgG Fc与犬IgG间的免疫交叉源性,本研究采用斑点酶联免疫吸附法(dot-ELISA)初步确定犬与乌苏里貉血清抗体间存在较强免疫交叉反应源性;通过RT-PCR成功克隆乌苏里貉IgG Fc片段基因,构建pcDNA3.1 IgG(Fc)真核表达质粒,转染HEK293T细胞,借助间接免疫荧光试验(IFA))证实该蛋白成功表达(大小约为22 000),免疫印迹(Western blot)试验证明该蛋白与抗犬IgG存在免疫结合反应.结果表明,乌苏里貉IgG Fc与犬IgG间存在强烈的免疫交叉源性,应用犬源高免血清或犬免疫球蛋白治疗貉犬瘟热具有可行性,同时为今后构建特定抗原基因与IgG Fc基因融合表达载体,研究DNA疫苗及Fc的生物佐剂提供了理论依据.
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒.分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC).采用RT PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对.结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%.血凝素(H)基因序列分析表明,CDV ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T).致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据.
摘要:本文主要对巴氏杆菌当前比较流行的诊断技术进行了汇总,并且引用了当前国内外的一些研究成果并进行了分析.对该菌的分子生物学诊断技术的灵敏度和特异性进行了介绍,对此病原菌的实验室研究提供了多种方法,最后展望了其分子生物学方法应用于实践的前景和存在的问题,为进一步开展基础研究提供了思路.
摘要:在孵化场进行1日龄免疫,易于操作、省时省力,目前正在逐步被养殖企业接受.传统免疫学理论认为母源抗体会干扰疫苗毒株在雏鸡体内的繁殖,因此1日龄接种仅能起到诱导低水平母源抗体雏鸡产生保护性抗体.但是根据笔者初步研究发现新城疫弱毒疫苗毒株在母源抗体水平较高的雏鸡体内仍然可以在气管等局部组织繁殖;在生产实际中,1日龄接种疫苗的鸡苗也越来越受到广大养殖户的欢迎.
摘要:选择新泰市某养殖公司两个结构相同、饲料和管理相同的鸭舍,19日龄樱桃谷肉鸭,分为对照组和实验组,实验组服用与饮水按1∶500混合的益生素,5d后观察氨气浓度,然后采集实验组和对照组的鸭粪各5g放入干燥器中,将干燥器分别放在20℃、25℃、30℃中进行检测,每隔10min读一次数,测三次,统计结果.结果表明,服用益生素5d后鸭舍氨气浓度下降,在干燥器中20℃、25℃时降低氨气浓度的效果最明显.
摘要:为了了解泰安地区猪源大肠杆菌对氟苯尼考耐药性及floR基因.本实验从泰安地区4个规模化养猪场分离的45株耐氟苯尼考大肠杆菌的耐药性测定,并对其floR基因进行分析,结合蛋白分析软件分析其序列结构.结果表明泰安地区猪源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药检出率为71.4%,且呈多重耐药性,同时应用泵抑制剂有效的降低了细菌的耐药能力,同时发现分离菌株存在多个核苷酸位点和氨基酸位点的变异,与已经报道的大肠杆菌内氟苯尼考抗性基因floR基因序列(DQ206638.1)的同源性高达98%以上.通过TMHMM软件对氨基酸序列的跨膜螺旋结构区域进行分析,发现floR基因序列编码的404个氨基酸中,有12个疏水性的跨膜螺旋结构区域.本研究对大肠杆菌氟苯尼考耐药性的研究提供一定的理论基础,对临床合理用药以及控制细菌耐药性发展均具有重要意义.
摘要:沙门氏菌是肠杆菌科中最重要的人畜共患病原菌,是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌。通过两种检测方式发现,检测结果并不一致,玻片凝集检测的阳性血清,在ELISA检测中呈现阴性结果,在ELISA检测为阳性的血清,玻片凝集试验为阴性,两者的检测结果并不统一,这有可能与沙门氏菌血清型众多,各家公司制作抗体和试剂盒是采用的血清型不同造成的,因此在日常普通检测中,不能仅依靠一种检测方式进行检测,要结合多种检测方式,但是这样的多重检测会使检测成本增高,给养殖户带来不便,因此找到一种快速高效简便的检测方式尤为重要。虽然通过对某种禽场死亡鸡胚分离沙门氏菌的结果来看,并没有沙门氏菌感染,可见沙门氏菌并不是鸡胚死亡原因,但是仍然不能轻视沙门氏菌的存在,防止沙门氏菌水平传播,做好日常的防范工作仍然是很重要的。
摘要:应用Vero细胞从山东省诸城市疑似犬瘟热感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒.分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应,经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及基因测序、回归动物试验证实为犬瘟热病毒,命名为ZC株.采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因组序列并测序,依次拼接得到全基因组序列进行序列比对分析.结果表明,CDV-ZC株全基因(GenBank登录号KJ994343)与美洲基因型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%-92.0%.血凝素基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1基因型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子受体结合区的542-544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点.致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,对CD的有效预防、诊断及控制具有指导意义.
摘要:本文旨在研究海兰褐蛋鸡饲粮中使用益生素后对蛋鸡生产性能、排泄物指标的影响.试验选择56周龄、体重相近的健康的海兰褐蛋鸡1440只,分成4组,对照组为480只鸡,试验组设三个重复,每个重复为480只,试验期为45d,对照组正常饲喂,试验组的饲粮中添加2%益生素.试验结果表明:使用益生素后试验组2组和3组的蛋重与对照组的差异显著(P<0.05)试验组的蛋重比对照组的蛋重大1.87-3.5g;在次(破、软)蛋率上,实验2组和3组与对照组相比差异显著(P>0.05),试验组比对照组降低23.9%-28.4%;;在料蛋比上,试验1组和3组与对照组相比差异显著(P<0.05),试验组比对照组降低4.6%.试验后期,试验组灰分、Ca的含量与对照组差异显著(P<0.05),试验组的灰分百分含量比对照组高了4.4个百分点,试验组的Ca百分含量小于对照组,比对照组低了1个百分点;P的含量差异不显著(P>0.05),但从数据上看,试验组的百分含量小于对照组.试验组的ND、H5、H9的抗体效价比对照组的高;使用益生素后在肠道分离出芽孢杆菌,证明了有益菌在肠道的存在.
摘要:本研究对山东某白羽肉鸡种禽场所产种蛋p27抗原,ALV-A/B、ALV-J抗体进行了跟踪检测,以确保该种禽场AL得以净化。近年来,不同鸡群感染ALV的报道在我国越来越多,ALV的感染引起的种鸡场与其下游客户之间的纠纷也引起了舆论和社会的高度关注。一些大型种鸡场不得不加强对鸡群感染的监测并开始实施严格的净化措施。对ALV的鉴别诊断方法国内外己有很多报道,目前适用于大规模流行病学调查和净化的检测方法主要还是针对保守抗原p27的酶联免疫吸附试验(ELISA)。此方法由于无法区分内外源检测结果在用于诊断鸡群感染状态时只有参考意义。然而也有研究表明在某些特定样品如蛋清中,由于内源性ALV引起的假阳性的结果极少,不会影响禽白血病的检测。该种禽场虽然检出了1例种蛋抗原阳性但其种鸡群及其下游客户均未见感染的出现,这有可能是内源性的干扰,也可能是感染极其轻微不足以形成的增殖和流行。因此在进行种蛋采集时必须保证足够的数量,这样才能减少检测误差,提高评估的准确性。ELISA检测试剂盒,是通过检测鸡群中ALV-J的抗体水平高低,来判断鸡群中是否感染ALV-J,由于ELISA检测只能检测ALV-J的抗体水平,因此即使检测结果是阳性样品,也只能说明该鸡群曾经感染过ALV-J,不能明确判断鸡群中现在是否还存在ALV-J的感染。但是也可以通过抗体及抗原双重检测来剔除阳性鸡只,从而达到在净化鸡群中AL的目的。
摘要:本研究根据GenBank上发布的水貂IgG (L07789.1)和犬IgGγ(AF354264.1、AF354265.1、AF354266.1、AF354267.1)的序列,设计合成两对引物,从乌苏里貉脾脏中提取总RNA,RT-PCR分别扩增两端保守基因,获得大小约535 bp和464bp的片段,将其连接PMD 18-T载体并测序拼接获得966bp的片段,首次成功克隆乌苏里貉的IgGγB基因(GenB ank:KM010191),通过蛋白结构分析及与犬、人、小鼠等遗传进化对比分析,结果显示乌苏里貉IgGγB基因与犬IgGγ(A、B、C、D)四个亚型基因序列同源性最为接近分别为88.8%、93.6%、87.2%、87.3%,与犬氨基酸序列同源性分别为82.2%、91%、81.9%、79.5%,同时对乌苏里貉IgGγB蛋白结构有了较为清晰的认识,从而为用犬的诊断试剂或犬血清检测治疗乌苏里貉疾病提供一定的理论依据.
摘要:细菌菌蜕是通过调控噬菌体PhiX1 74的裂解基因E在革兰氏阴性细菌中表达而形成的无细胞浆和繁殖能力的细菌空壳,是一种理想的新型疫苗体系。本研究成功构建溶菌质粒载体,并将其转入迟缓爱德华菌,通过温度诱导制备出迟缓爱德华菌菌蜕疫苗。分别用1×105cells/ml(A组)、1×106cells/ml(B组)、1×107cells/ml(C组)的迟缓爱德华菌菌蜕疫苗和PBS (D组)免疫黑鲷30尾,在免疫后的第0、3、7、14、21和28 d采样,并测定血清抗体水平和白细胞吞噬活性。
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