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摘要:目的 探讨片仔癀对裸鼠人骨肉瘤肿瘤干细胞移植瘤的抑制作用及其对ABCB1、ABCG2蛋白表达的影响.方法 48只裸鼠皮下接种肿瘤干细胞建立人骨肉瘤肿瘤干细胞移植瘤模型.依照随机数字表法将其分为对照组、阿霉素组、片仔癀组、片仔癀与阿霉素联合组,每组各12只,分别予以相应的干预,4周后处死裸鼠,测量瘤体体积及称取其重量,计算肿瘤体积及重量抑制率;免疫组织组化学(SP法)及Western blot检测瘤体内ABCB1、ABCG2的表达.结果 与对照组比较,阿霉素组、片仔癀组、联合组瘤体体积及重量明显降低(P<0.05),与片仔癀组比较,联合组生长受到明显抑制(P<0.01);与对照组比较,片仔癀组、联合组可明显降低ABCB1、ABCG2的表达(P<0.05),且联合组较片仔癀组明显下调(P<0.05).结论 片仔癀可明显抑制人骨肉瘤肿瘤干细胞裸鼠移植瘤的生长,且能够增强阿霉素的作用,其作用机制与抑制膜转运蛋白ABCB1、ABCG2的表达相关....
摘要:目的:观察退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片治疗急性痛风性关节炎的临床疗效和安全性。方法:将60例急性痛风性关节炎患者随机分为2组,每组30例,分别采用口服退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片、口服秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片治疗。退癀消肿汤每袋200 mL,每日早、晚餐后30 min 服用1袋;洛索洛芬钠片每次60 mg,每日2次,饭后服用;秋水仙碱片每日服用3次,开始负荷剂量为1.0 mg,1 h 后服用0.5 mg,12 h 后服用0.5 mg;上述药物连续服用2周。分别于治疗前和治疗结束后2周比较2组患者白细胞介素(interleukin -1,IL -1)、IL -6及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor -α,TNF -α)的血清含量,并于治疗结束后2周比较2组患者的临床疗效及并发症发生情况。结果:①炎性因子血清含量。治疗前2组患者 IL -1、IL -6、TNF -α血清含量比较,组间差异均无统计学意义[(50.33±6.26)μg·g -1,(51.12±8.32)μg·g -1,t =-0.614,P =0.094;(43.27±7.14)μg·g -1,(41.35±8.27)μg·g -1,t =1.775,P =0.081;(55.23±9.71)pg·mL -1,(56.31±6.76)pg·mL -1,t =-0.587, P =0.075]。治疗结束后2周,退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片组 IL -1血清含量与秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片组比较,差异无统计意义[(34.28±4.57)μg·g -1,(35.16±6.73)μg·g -1,t =-0.701,P =0.176];退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片组 IL -6、TNF -α血清含量均低于秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片组[(24.25±3.36)μg·g -1,(30.21±3.13)μg·g -1,t =-11.619,P =0.000;(41.16±5.39)pg·mL -1,(47.57±2.31)pg·mL -1,t =-8.741,P =0.000];2组患者 IL -1、IL -6、TNF -α血清含量均低于治疗前(t =56.716,P =0.000;t =28.734,P =0.000;t =25.524,P =0.000;t =12.062,P =0.000;t =23.538,P =0.000;t =18.330,P =0.000)。②临床疗效。治疗结束后2周,参照《中医病证诊断疗效标准》中痛风的疗效评定标准,退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片组痊愈18例、显效6例、有效4例、无效2例,秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片组痊愈10例、显效8例、有效6例、无效6例;退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片组的临床疗效优于秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片组( Z =-2.176,P =0.030)。③安全性。退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片组1例患者出现胃肠道反应;秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片组16例患者出现胃肠道反应,1例患者血常规异常,1例患者肝功能异常,1例患者肾功能异常。退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片组不良反应发生率低于秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片组(χ2=24.300,P =0.000)。结论:退癀消肿汤联合洛索洛芬钠片治疗急性痛风性关节炎,可以减轻关节炎症,缓解关节红肿和疼痛,不良反应轻微,其疗效和安全性优于秋水仙碱片联合洛索洛芬钠片,值得临床推广应用。...
摘要:目的:探讨片仔癀对人骨肉瘤耐药株M G63/ADM增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:采用大剂量间隙干预建立骨肉瘤阿霉素(ADM)耐药细胞MG63/ADM,MTT检测其耐药性;不同浓度片仔癀(0、0.4、0.8、1.2mg/mL)作用MG63/ADM细胞后,MTT检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;WesternBlot检测PTEN、Akt、p-Akt、PARP、Cleaved-PARP蛋白表达情况.结果:MG63/ADM细胞对阿霉素明显耐药,IC50为(1.98±0.58) μβ/mL,耐药指数为11.47,同时对紫杉醇(PTX)、顺铂(DDP)耐药;片仔癀能明显抑制MG63/ADM的增殖,呈时间和剂量依赖性(Pp<0.01),Hoechst 33342染色显示片仔癀作用48h后细胞出现细胞核染色质浓聚,凋亡小体等细胞凋亡形态的表现;Wester Blot显示片仔癀作用后PTEN蛋白及Cleaved-PARP表达明显上调,p-Akt蛋白的表达降低,呈浓度依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:片仔癀在体外可明显抑制M G63/ADM细胞的增殖,其机制可能与通过上调PI3K/Akt通路中PTEN的表达,抑制Akt蛋白的磷酸化,从而促进PARP蛋白的裂解,发挥诱导细胞凋亡的作用....
摘要:目的:通过实验观察龟甲胶、鹿角胶合药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞促增殖作用以及两种含药血清对JNK及p38 MAPK基因表达的影响,揭示龟甲胶及鹿角胶治疗膝骨关节炎的作用机制.方法:分别用龟甲胶、鹿角胶、盐酸氨基葡萄糖(GHC)含药血清及生理盐水对3月龄豚鼠骨关节炎软骨细胞进行干预,MTT法比较含药血清对软骨细胞的促增殖情况,QPCR检测含药血清干预后软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达情况.结果:用含药血清浓度为5%的各组培养液干预后(时间72 h),龟甲胶组、鹿角胶组、氨基葡萄糖组和空白对照组MTT法检测OD值分别为0.468±0.017,0.425±0.010,0.337±0.017,0.276±0.027,结果显示差异有统计学意义(P<0.05).QPCR检测龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和空白对照组JNK mRNA相对表达量分别为0.162±0.096,0.333±0.165,0.653±0.141,1.000±0.000,差异有统计学意义(P<0.05).QPCR检测龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和空白对照组p38 MAPK mRNA相对表达量分别为0.058±0.025,0.229±0.057,0.441±0.090,1.000±0.000,结果显示差异有统计学意义(P<0.05).结论:龟甲胶和鹿角胶都能有效减少豚鼠骨关节炎软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达,对软骨细胞作用为促增殖,对其凋亡产生抑制作用,从而一定程度上减缓骨关节炎的病损进展....
[硕士论文] 郭文韬
中医骨伤科学 福建中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本课题组在前期行体外实验证实了片仔癀可以通过抑制骨肉瘤细胞中ABCB1、ABCG2的表达,有效抑制骨肉瘤的生长并逆转其耐药性的基础上,通过体内实验进一步探讨片仔癀对人骨肉瘤CSCs裸鼠移植瘤的作用及对ABCB1、ABCG2蛋白表达的影响。
  方法:
  1、人骨肉瘤肿瘤干细胞移植瘤模型的建立
  对数期MG63/ADM细胞胰酶消化制成单细胞悬液,采用无血清培养基悬浮培养的方式,连续传代3次,富集MG63/ADM细胞中的肿瘤干细胞。48只裸鼠皮下接种肿瘤干细胞建立人骨肉瘤肿瘤干细胞移植瘤模型。依照随机数字表法将其分为对照组、阿霉素组、片仔癀组、片仔癀与阿霉素联合组。
  2、测量瘤体体积及称重,计算肿瘤体积及重量抑制率
  末次给药24h后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离裸鼠皮下瘤体,测量瘤体体积及称重,计算肿瘤体积、重量抑制率。
  3、HE观察瘤体病理情况
  使用HE染色,在光镜下观察各组瘤体病理情况。
  4、免疫组织组化学法(SP法)及western blot检测瘤体内ABCB1、ABCG2的表达。
  采用免疫组织化学法检测不同组间瘤体中ABCB1、ABCG2阳性积分光密度的表达情况;Western blot法检测不同组间瘤体中ABCB1、ABCG2蛋白的表达。
  结果:
  1、片仔癀对骨肉瘤肿瘤干细胞裸鼠移植瘤体积及重量的影响:与对照组比较各用药组瘤体体积及重量均有减少(P<0.05),与阿霉素组比较,片仔癀组肿瘤体积抑制率及重量抑制率高(P<0.05),与片仔癀组比较,联合组瘤体体积抑制率及重量抑制率明显增高(P<0.01)。
  2、HE下观察片仔癀对骨肉瘤细胞的影响:HE染色后,在光镜下可见对照组中细胞形态各异,核仁大小不同,存在异形巨核,细胞核浓染,可见处于分裂期的骨肉瘤细胞;片仔癀组肿瘤细胞大小和形状相似,可见少量骨肉瘤细胞凋亡,出现细胞核分解现象;阿霉素组中拥有较多的异形细胞,可见被破坏的组织;联用组中细胞形态较小,可见组织坏死,细胞异型性少,部分核缩小、凝聚,染色质紧贴细胞核,胞浆浓缩色深。
  3、免疫组化检测片仔癀对裸鼠移植瘤ABCB1、ABCG2表达的影响:对照组中阳性目标积分光密度大量表达,阿霉素组中阳性目标积分光密度也表达较多,片仔癀组表达较少,联合组最低;阿霉素组中阳性目标积分光密度与对照组比较差异无统计学意义;片仔癀组、联合组与对照组比较,阳性目标积分光密度明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),联合组阳性目标积分光密度最低,与片仔癀组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
  4、Western blot检测片仔癀对裸鼠移植瘤ABCB1、ABCG2表达的影响:Western blot结果表明,与对照组比较,阿霉素组ABCB1、ABCG2蛋白表达无显著性差异;片仔癀组和联合组的ABCB1、ABCG2蛋白表达降低,与对照组比较有统计学差异(P<0.01)。
  结论:
  片仔癀可明显抑制人骨肉瘤肿瘤干细胞裸鼠移植瘤的生长,且能够逆转阿霉素耐药作用,其作用机制与抑制膜转运蛋白ABCB1、ABCG2的表达相关。
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