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中国农业科学院兰州兽医研究所
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找到 153 条结果
[期刊论文] 郑海学 刘湘涛
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CSTPCD 北大核心
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摘要:口蹄疫病毒以“准种”状态生存和演变,具有群体庞大、复制突变率高、繁殖周期短等特征,是研究物种进化的最好模型之一.利用突变、遗传漂移、重组和基因迁移等多种机制以及在环境压力的作用下,口蹄疫病毒不断发生适应性进化,种群衍变分化导致其宿主嗜性、毒力、抗原性等表型出现差异,形成了具有明显区域特征的变异株系,展现出丰富的遗传多样性.现对口蹄疫病毒进化的源动力、进化方式及其结果进行综述,并对进化所产生的生物学效应进行介绍....
[期刊论文] 曹伟军 郑海学 杨帆
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CSTPCD 北大核心
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摘要:反向遗传学技术实现了在DNA分子水平上对RNA病毒基因组的人工操作,在深入阐明基因组结构与功能、筛选研制新型基因工程疫苗及基因治疗等方面显示出良好的应用前景.本文对反向遗传学技术及在肠道病毒71型病毒中的应用进行了综述....
摘要:一,口蹄疫简介 人类对口蹄疫(FMD)第一次较为确切的记载出现于1514年。17~18世纪欧洲曾多次流行FMD,1839年传人英国,但直至1880年FMD泛滥成灾才引起科学家和官方的注意。此后欧洲经历了漫长的口蹄疫控制与消灭过程,直到1991年才基本上消灭了FMD。期间共有过1901—1912年、1919—1921年、...
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北大核心 CSTPCD CSCD CA
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摘要:口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科,口蹄疫病毒属的典型成员,是一种基因组大约含有8 400个核苷酸的无囊膜单股正链RNA病毒.大量研究发现识别细胞表面受体并侵入细胞是FMDV感染宿主细胞非常重要的环节;对FMDV而言,利用哪种受体就决定了利用哪种內吞路径.近年来在口蹄疫病毒入侵宿主细胞方面进行了大量研究,在一定程度上解释了口蹄疫病毒感染机制方面的问题,为解决实际生产问题提供了重要依据.对前期工作进行阶段性总结,为后期深入研究口蹄疫病毒致病机制和探索更有效的防治措施提供参考....
摘要:鸟嘌呤核苷酸结合蛋白Ga12参与多种细胞反应的调节,但是在口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)方面的研究较少.本研究中,用FMDV感染PK-15细胞,发现Gα12的mRNA和蛋白水平都有所上调,预示Gα12可能与FMDV复制存在某种联系,需要进一步研究Gα12蛋白对FMDV在PK-15细胞上复制的影响.为此,在过表达Gα12和干扰Gα12表达的情况下,通过实时荧光定量、Western blot和TCIDso检测Gα12对FMDV复制的影响.结果 表明,过表达Ga12后,FMDV的mRNA水平、蛋白水平和病毒滴度都有所降低,然而,下调Gα12后,FMDV的复制呈相反的趋势,说明Gα12可以抑制FMDV在PK-15细胞上的复制.本研究首次发现Gα12具有抑制口蹄疫病毒复制的作用,为抗FMDV的研究提供了新思路和理论基础,对FMDV相关研究具有重要意义....
摘要:氯霉素和四环素发挥活性的一个途径就是阻碍细菌蛋白质的分泌,其分泌功能是由其氨基端的信号序列决定的,该序列能将蛋白质引导到由SecY,E,G和A组成的转运蛋白复合体上.蛋白的转运还取决于融合蛋白的折叠特点,蛋白质转运到周质后的错误折叠可导致毒素聚集体形成,快速折叠还会使转运复合体发生拥堵,使所有的蛋白质分泌都受到抑制,导致细胞死亡.抗生素氯霉素和四环素处理细菌后会导致转运复合体中SecY的降解,造成致命的蛋白拥堵.现就抗生素氯霉素和四环素的干扰细菌蛋白质合成的作用机制以及导致SecY的降解来发挥阻碍细菌蛋白质分泌活性的一个新模式进行概述,以期为探讨新的靶向细菌的治疗方法提供科学依据....
摘要:羊传染性脓疱(Orf)是由羊传染性脓疱病毒(orf virus,ORFV)感染引起的一种人兽共患传染病.VIR是OR-FV编码的抗干扰素基因.为比较分析ORFV疫苗弱毒株和野毒株编码的VIR基因的特征,本试验扩增并测定了ORFV疫苗株和野毒株的VIR基因序列,比较分析了两者核酸水平和氨基酸水平的变异情况以及二、三级蛋白结构.结果表明:本次测定的ORFV疫苗株与野毒VIR基因核苷酸序列相似性为94.6%,氨基酸序列相似性为91.8%,两者在Z-DNA结合结构域和ds-RNA结合结构域均有突变....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:羊传染性脓疱病毒(ORFV)是痘病毒科副痘病毒属的成员之一,引起严重的人兽共患传染病.该病毒基因组全长约134~139 kb,编码130多个蛋白,抗干扰素基因是ORFV编码的具有拮抗宿主干扰素功能的蛋白,在ORFV突破宿主免疫屏障过程中有重要作用.本文就抗干扰素基因的研究进展作一综述....
[期刊论文] 杨洋 杨帆 杨波 郑海学
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CSTPCD 北大核心
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摘要:为了获得对牛和猪低致病性或无致病性的口蹄疫(FMD)疫苗毒株,提高疫苗毒株的生物安全性,选择口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白酶编码基因SAP区域进行突变.利用反向遗传操作技术,构建FMDVSAP区域突变的A型病毒重组质粒prA-SAP-FMDV.利用脂质体将构建的重组质粒转染BHK21细胞,重组质粒能够致细胞病变(CPE).连续传代后,经RT-PCR鉴定和间接免疫荧光试验等,SAP突变的重组病毒rA-SAP-FMDV被成功拯救.另外,比较测定了该重组毒与亲本毒rA-WT-FMDV对BHK21细胞和乳鼠的致病性;结果显示,rA-SAP-FMDV的TCID50/mL为10-7.17,LD50为10-6.5/0.2 mL,与亲本毒株的生物学特性相似.这一突变SAP域的A型FMDV的获得为研发生物安全性高的A型FMD疫苗奠定了基础....
摘要:DEAD框解旋酶56(DDX56)是一种RNA解旋酶,能参与RNA代谢和核糖体的合成.为研究猪源DDX56对口蹄疫病毒(FMDV)复制和对病毒诱导的RLR通路的影响,首先通过免疫共沉淀试验筛选与猪源DDX56互作的FMDV蛋白;接着利用Q-PCR和Western blot检测过表达猪源DDX56对FMDV在PK-15细胞中复制的影响;然后利用双荧光素酶报告基因和Q-PCR检测猪源DDX56对病毒诱导的RLR通路的影响.结果 显示,猪源DDX56能与FMDV蛋白VP0、VP1、VP2和3A发生相互作用;过表达猪源DDX56能够促进FMDV的复制;过表达猪源DDX56能抑制仙台病毒(SeV)诱导的RLR通路的激活;猪源DDX56可以协同FMDV蛋白VP0、VP1、VP2和3A抑制病毒诱导的Ⅰ型干扰素的产生.总之,猪源DDX56能与FMDV蛋白VP0、VP1、VP2和3A互作而协同抑制Ⅰ型干扰素的产生,从而促进FMDV的复制....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:目的 确诊疑似羊衣原体感染的病例,分析羊衣原体分子特征.方法 从广东某羊场采集疑似羊流产嗜衣原体病例的子宫内羊水,采用现场病理解剖观察、病料触片吉姆萨染色、显微镜观察、特异性目的基因ompA扩增和序列测定及遗传进化关系分析等方法进行了该病例的确诊及病原分子特征分析.结果 现场解剖发现和羊流产嗜衣原体感染症状极其吻合,吉姆萨染色后显微镜观察可见衣原体特有的特征,自病料中扩增出特异性目的基因片段,表明该病例为山羊感染流产嗜衣原体引起.基因序列遗传进化分析表明该流产嗜衣原体(GenBank登录号KP984478)与2013年公布的中国贵州分离株KF130872遗传关系最近(同源性为99.1%),属于同一进化分支,与2002年公布的德国分离株AJ004873遗传关系最远(同源性为98.2%).结论 本研究为山羊流产嗜衣原体的最新流行病学动态奠定了基础....
[期刊论文] 吴琼 张艳 郑海学 殷宏
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:札幌病毒(Sapovirus)可感染人和动物,引起急性病毒性胃肠炎.随着分子生物学、病毒细胞培养和动物模型研究方面的进展,不同类群札幌病毒全基因组测序完成、病毒体外增殖和衣壳蛋白体外表达,从而对该病毒的特性有了一些新的认识.本文从札幌病毒的基因组结构与功能、流行病学、细胞培养、检测方法和疫苗发展5个方面人手,系统介绍了该病毒国内外的研究现状以及存在的问题,其中流行病学及其检测技术的研究成为研究的热点.本文还对札幌病毒分子进化、疫苗研制和病毒的传播等提出了新的观点....
摘要:羊口疮病毒((ORFV)属于痘病毒科副痘病毒属,可引起严重的人兽共患传染病.VIR是(ORFV编码的非结构蛋白之一,参与(ORFV的免疫逃避.仙台病毒(SeV)可以诱导干扰素的产生.为研究VIR蛋白对IFN α表达的影响,本研究以山羊成纤维上皮细胞(GSFs)为对象,使用SeV单独刺激、SeV与VIR共同刺激GSFs,定量ELISA方法检测GSFs上清中IFN α的质量浓度.结果显示,VIR蛋白对SeV刺激的IFN-α表达和分泌有明显的抑制作用.本研究为深入研究ORFV突破宿主细胞天然免疫屏障奠定了基础....
[期刊论文] 吴琼 孙英军 张艳 郑海学
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 为了探讨质粒DNA体外刺激淋巴细胞的增殖状况,建立了一种方便可靠的评价豚鼠细胞免疫水平的试验方法.方法 用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(cFsEl染色豚鼠全血,经植物血凝素(PHA)和质粒DNA刺激培养,利用流式细胞术分析细胞的增殖状况.结果 豚鼠全血经PHA和DNA刺激,淋巴细胞增殖能力不同;未免疫组经DNA和PHA刺激后增殖的差异显著,免疫组差异不显著.DNA质粒在体内外均可作为刺激源刺激淋巴细胞增殖.结论 建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的豚鼠全血淋巴细胞增殖试验方法,可方便、快速、有效地评价细胞免疫水平....
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CSTPCD 北大核心
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摘要:[目的]研究膜联蛋白A1 (AnnexinA1,ANXA1)对Ⅰ型干扰素(I-IFN)表达及口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响.[方法]开展过表达及Knockdown实验,检测ANXA1对FMDV复制的影响.利用双荧光素酶报告系统检测ANXA1对ISRE和IFN-β启动子元件活化的影响.双荧光素酶报告系统鉴定ANXA1调控I-IFN通路活化靶分子.Western blotting检测ANXA1对干扰素调解因子3(IRF3)磷酸化的影响.Real-time PCR检测ANXA1对干扰素刺激基因(ISGs)的影响.[结果]过表达ANXA1显著抑制FMDV的复制;下调ANXA1表达促进FMDV复制(P<0.01或P<0.05);ANXA1促Ⅰ型干扰素通路活化,呈现剂量依赖性(P<0.01).ANXA1显著增强IRF3的磷酸化,促进ISGs的表达(P<0.01或P<0.05).[结论]ANXA1促进I-IFN表达,抑制FMDV的复制....
[期刊论文] 张岩 胡永浩 杨帆 郑海学
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:伴随着对口蹄疫病毒(FMDV)蛋白结构功能的深入研究,发现FMDV能够表达外源基因片段.通过对FMDV的基因进行改造和修饰研究,进而实现了不同应用目的,如提高病毒滴度、引入标记、提高免疫应答、降低致病性等.文中主要从FMDV接受外源基因插入位点角度来介绍现阶段关于FMDV表达外源基因相关进展....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:纳米抗体是一种新型抗体,与普通抗体相比较特异性更高、亲和力以及结合抗原的能力更强.纳米抗体呈椭圆形、体积小,相对分子质量仅为单克隆抗体的1/10.纳米抗体可用于肿瘤等疾病的治疗、疾病的检测、疫苗的研发等.本文主要从纳米抗体发展史、研究现状、纳米抗体作为治疗和诊断工具以及纳米抗体的新产品和生产方式进行阐述,为纳米抗体在畜牧兽医领域的应用提供一定的理论基础和借鉴....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA
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摘要:近年来,亚单位疫苗、DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现,这些疫苗纯度高、特异性强.但其分子小,免疫原性较差,难以诱导机体产生有效的免疫应答,需添加佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答.免疫学的研究阐明了固有免疫如何调节适应性免疫.随着固有免疫学的发展和生化技术的提高,开发特异性更强、生物安全性更高的免疫佐剂越来越受到重视.对佐剂的分类、作用机理,固有免疫学的研究进展进行了综述,并就未来发展趋势提出自己的观点,为临床应用和进一步研制高效、低毒的免疫佐剂提供了参考....
摘要:塞内卡病毒A(SVA)作为一种新发病病原,致病机制仍不清楚.通过显微镜观察发现,SVA感染PK-15细胞后能使细胞产生明显的细胞病变(CPE),同时伴随着严重的细胞凋亡.为了深入研究SVA诱导凋亡的情况,在验证SVA各蛋白真核质粒正常表达后,通过Annexin V-FITC/PI双染流式方法检测SVA各蛋白诱导凋亡的情况,Annexin V-FITC/PI和Hoeehst染色后显微镜观察磷脂酰丝氨酸和核凝聚程度,通过Western blotting和RT-PCR技术分析SVA-VP1对凋亡通路中主要调控分子Caspase3、Caspase8和Bax蛋白质和mRNA水平的影响,发现SVA-VP1能够显著诱导细胞发生早期和晚期凋亡,并且能够促进凋亡蛋白Caspase3、Caspase8及Bax蛋白和mRNA水平的上调.本研究结果为深入研究SVA调控宿主细胞凋亡的分子机制和致病机制奠定了理论基础....
摘要:为了克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因,根据GenBank中登录的PEDV (CV777株)的N基因序列设计1对特异引物,提取阳性临床样品的总RNA,通过RT-PCR方法获得PEDV的N基因.将N基因定向克隆至表达载体pET-28a-His Sumo中,酶切和测序鉴定表明获得了阳性重组表达质粒pET-28a-His-Sumo-N.将阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,并进行IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析.SDS-PAGE检测结果表明获得了60.0 ku的表达产物,与目的蛋白大小符合;Western-blot结果显示,纯化后的目的蛋白能与PEDV阳性血清发生特异反应.表明成功对PEDV-N蛋白进行了原核表达,且纯化后的蛋白质具有良好的反应原性....
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