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[期刊论文] 唐艳 邓苏辛 张智亮
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 探讨幽门螺杆菌(HP)和细胞毒素相关蛋白毒力型HP (HP-CagA)感染对冠心病患者血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平的影响以及HP-CagA感染与冠心病冠状动脉病变的相关性.方法 选择冠心病患者105例,其中急性心肌梗死(AMI) 35例,不稳定型心绞痛(UAP) 35例,稳定型心绞痛(SAP组)35例,选择同期住院非冠心痛(NCA)患者35例,应用酶联免疫吸附法检测血清HP特异性IgG抗体阳性率、CagA特异性IgG抗体阳性率及MMP-9水平,并与冠状动脉造影Gensini评分进行相关性分析.比较HP感染的冠心病患者与非HP感染患者之间的差异,以及HP-CagA-IgG阳性患者与阴性患者之间的差异.结果 各组血清MMP-9水平差异有统计学意义,其中AMI组>UAP组>SAP组>NCA组(P均<0.05);与NCA组比较,AMI组、UAP组及SAP组Gensini评分均增大(P均<0.05);各组血清MMP-9水平与Gensini评分之间有明显的相关性(P均<0.05).SAP组、UAP组、AMI组及NCA组HP-IgG抗体的阳性率分别为40.0%、57.1%、74.3%和28.6%,其中AMI组>UAP组>SAP组>NCA组(P均<0.05);各组HP-IgG阳性患者的MMP-9水平均高于HP-IgG阴性患者(P均<0.05);各组血清HP-IgG抗体的阳性率与Gensini评分之间有明显的相关性(P均<0.05);SAP组、UAP组、AMI组及NCA组HP-CagA-IgG抗体的阳性率分别为17.1%、31.4%、40.0%和11.4%,其中AMI组>UAP组>SAP组>NCA组(P均<0.05);各组HP-CagA-IgG阳性患者的MMP-9水平均高于HP-CagA-IgG阴性患者(P均<0.05);各组血清HP-CagA-IgG抗体的阳性率与Gensini评分之间有明显的相关性(P均<0.05);其中血清MMP-9水平在HP-IgG(+)CagA-IgG(+)亚组>HP-IgG(+)CagA-IgG(-)亚组>HP-IgG(-)CagA-IgG(+)亚组(P均<0.05);血清HP-IgG抗体的阳性率及血清HP-CagA-IgG抗体的阳性率均与血清MMP-9水平及Gensini评分之间有明显的相关性,尤其以血清HP-CagA-IgG抗体的阳性率与血清MMP-9水平及Gensini评分之间关系最密切(均P<0.05).结论 冠心痛的发生发展可能与HP感染,尤其与HP-CagA感染有关,其可能是通过诱导内皮细胞大量分泌MMP-9所致,未来可能能作为预测冠状动脉病变程度的新指标....
[硕士论文] 邓苏辛
内科学(心血管内科) 南昌大学 2011(学位年度)
摘要:目的:神经调节蛋白-1在抗心肌细胞凋亡、促进心肌细胞增殖上以及心衰的发生发展发挥重要作用。由骨髓间充质干细胞诱导分化的内皮祖细胞在血管内皮修复和新生血管形成发挥重要作用,并且在心脏重构上发挥潜在的作用。本研究重点探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)基因转染内皮祖细胞(EPCs)后的条件培养液以及未转染rhNRG-1的EPCs条件培养液对心肌细胞凋亡、增殖及相关细胞因子的影响。
   方法:(1)分离扩增培养及鉴定大鼠EPCs,应用PCR技术体外合成NRG-1对应的基因组片段,定向克隆到pGC-FU-GFP慢病毒载体,构建大鼠NRG-1真核表达载体。将pGC-FU-GFP-rhNRG-1慢病毒载体转染入第二代的EPCs。分别于转染后第2、4、6天后,应用荧光显微镜下观察转染效率,并于转染后第6天应用RT-PCR及Western Blot法检测NRG-1的mRNA及蛋白的表达。
   (2)分离培养及鉴定大鼠心肌细胞,用TNF-alpha,建立心肌细胞凋亡模型。实验分为实验A和实验B两部分。
   实验 A:1、检测NRG-1基因转染EPCs后的条件培养液以及未转染NRG-1的EPCs条件培养液对心肌细胞凋亡的影响。实验分三组,空白组:乳鼠心肌细胞+TNFα(50ng/ml);对照组:乳鼠心肌细胞+TNFα(50ng/ml)+EPCS培养液上清;实验组:乳鼠心肌细胞+TNFα(50ng/ml)+转染NRG-1后的EPCs培养液上清。24h后Hoechest33342-PI双染色法及Annexin-FIFC/PI流式细胞法检测各组心肌细胞凋亡率。2、检测NRG-1基因转染EPCs后的条件培组,空白组:乳鼠心肌细胞。对照组:乳鼠心肌细胞+EPCs培养养液以及未转染NRG-1的EPCs条件培养液对心肌细胞增殖的影响。实验分三液上清。实验组:乳鼠心肌细胞+转染NRG-1后的EPCs培养液上清。24h后应用MTT法检测各组心肌细胞增殖率。
   实验 B:检测NRG-1基因转染EPCs后的条件培养液以及未转染NRG-1的EPCS条件培养液对心肌细胞细胞因子的影响。实验分三组,空白组:乳鼠心肌细胞。对照组:乳鼠心肌细胞+EPCs培养液上清。实验组:乳鼠心肌细胞+转染rhNRG-1后的EPCs培养液上清,48小时后应用qRT-PCR以及Western Blot法检测各组心肌细胞中ANP、BNP、TGF-β1和CRP的mRNA及蛋白的表达。
   结果:(1)PCR鉴定及DNA测序表明,NRG-1真核表达载体构建成功。
   (2)培养原代内皮祖细胞,细胞纯度达95%,呈典型的铺路卵石样结构。免疫荧光结果显示90%以上的EPCs表达内皮细胞特征性标志物CD31、Ⅷ,符合EPC特征。
   (3)NRG-1基因转染EPCs后第2天,80%以上的EPCs表达绿色荧光蛋白,转染后第6天应用qRT-PCR和Western blot法检测NRG-1mRNA及蛋白的表达,结果显示转染NRG-1基因的EPCs的NRG-1mRNA及蛋白表达明显上调。与未转染rhNRG-1相比具有统计学差异(P<0.05)。
   (4)实验A:Hoechest33342/PI以及Annexin V-PI流式细胞法检测并计算各组心肌细胞凋亡指数,结果显示:与对照组相比,实验组细胞凋亡指数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,对照组细胞凋亡指数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测各组心肌细胞增殖率,结果显示:与对照组相比,实验组细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,对照组细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
   (5)实验B:qRT-PCR及Western blot法检测各组心肌细胞细胞因子的表达。
   结果显示实验组较对照组较心肌细胞ANP、BNP、CRP的mRNA及蛋白的表达均下调,TGF-β1的mRNA及蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,对照组心肌细胞ANP、BNP、CRP的mRNA及蛋白的表达均下调,TGF-β1的mRNA及蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。
   结论:NRG-1转染EPCs后的条件培养液及EPCs条件培养液均能抑制心肌细胞凋亡以及促进其增殖,并且能下调心肌细胞中ANP、BNP及CRP表达并上调TGF-β1表达,尤以NRG-1转染EPCs后的条件培养液更为显著,为NRG-1治疗心脏病提供前期基础。
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