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摘要:近年来,干细胞治疗在相关疾病中已经进入临床试验阶段,但免疫排斥现象如影随从,是干细胞治疗技术的绊脚石.半乳糖凝集素1 (Gal-1)在鹿茸干细胞、大多数间充质干细胞及多数肿瘤中被发现高表达,而相应的这些细胞中均出现免疫抑制现象.Gal-1作为免疫调控因子,推测其很可能参与了干细胞的免疫调控.本文综述了Gal-1在几种于细胞中免疫调控中的作用,以期为干细胞治疗提供理论支持....
摘要:为研究鹿茸再生过程中的分子调控机制,利用荧光标记的甲基化敏感扩增多态性(Fluorescence-labeled methylation sensitive amplified polymorphism,F-MSAP)方法,分别从组织和细胞水平检测致敏区角柄骨膜(Potentiated pedicle periosteum,PPP)和休眠区角柄骨膜(Dormant pedicle periosteum,DPP)的基因组DNA甲基化水平.结果表明:无论在组织还是细胞水平,PPP的DNA甲基化水平均低于DPP,并且差异显著(P<0.05).通过人工制造致敏区角柄骨膜(artificial PPP,aPPP)对试验结果进行了功能验证,证明鹿茸再生过程中,DNA甲基化是重要的分子调控机制,DNA去甲基化是激活鹿茸角柄骨膜再生能力的先决条件....
摘要:鹿茸干细胞中半乳糖凝集素1(galectin-1,GAL-1)基因被发现高表达,推测其是鹿茸再生中的一个重要调控因子.为研究GAL-1在鹿茸干细胞中的表达及可能的生物学功能,本研究以东北梅花鹿(Cervus nippon)鹿茸的干细胞组织,即生茸区骨膜和角柄骨膜(致敏角柄骨膜与休眠角柄骨膜)以及对照组织面部骨膜为材料,克隆了梅花鹿的GAL-1基因CDS区序列,并对该序列进行生物信息学分析;利用Western-blot及qRT-PCR技术检测了GAL-1生鹿茸干细胞中的相对表达量.结果显示:梅花鹿GAL-1ORF全长为408 bp(GenBank No.MG882483),编码134个氨基酸;相对分子质量为14.69 kD,氨基酸序列与牛(Bos taurus)、羊(Ovis aries)高度接近;主要定位于细胞外,无跨膜区,无糖基化位点,有两个磷酸化位点,二级结构主要为β-折叠与无规卷曲;三级结构与牛的三级结构相似;GAL-1在面部骨膜中表达量更高.本研究预测了梅花鹿GAL-1蛋白的结构特点,检测了GAL-1蛋白在鹿茸干细胞中的表达情况,为进一步研究鹿茸再生提供数据支持....
摘要:YWHAEA (assignment of the human 14-3-3 epsilon isoform)基因编码14-3-3ε蛋白,此蛋白在发育的生茸区骨膜中特异性高表达.为了克隆梅花鹿(Cervus nippon) YWHAE基因编码区序列,预测其蛋白结构和功能,并研究其在梅花鹿发育过程中的表达特性.本研究以梅花鹿生茸区骨膜为材料,采用RT-PCR技术克隆梅花鹿YWHAE基因编码区序列,利用生物信息学手段预测其结构与功能.实验结果表明,梅花鹿YWHAE基因编码区全长768 bp (GenBank No.KY797653),编码255个氨基酸,氨基酸水平上与牛(Bos taurus)相似性高达99.6%;氨基酸序列分析表明,鹿YWHAE基因编码的14-3-3蛋白相对分子量为29 163.86 D,主要定位在细胞质内,属于水溶性蛋白;预测鹿14-3-3蛋白具有19个磷酸化位点、不存在糖基化位点;该蛋白的二级结构主要为螺旋结构,其三级结构呈现出递进螺旋状态.预测14-3-3蛋白的结构特点,本研究为探究14-3-3蛋白与其他蛋白的相互作用提供理论依据,同时为进一步研究鹿茸发育的调控机理提供基础依据....
[硕士论文] 赵志峰
特种经济动物饲养 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:近年来,干细胞治疗在相关疾病中已经进入临床试验阶段,但免疫排斥现象如影随从,是干细胞治疗技术的绊脚石。半乳糖凝集素1(Galectin-1,GAL-1)在大多数间充质干细胞、多数肿瘤及鹿茸干细胞中被发现高表达,而相应的这些细胞中均出现免疫抑制现象。GAL-1作为免疫调控因子,推测其很可能参与了干细胞的免疫调控。
  鹿茸是唯一能够在失去后还能完全再生的哺乳动物器官。研究表明,鹿茸再生是一个基于干细胞的过程,鹿茸干细胞中高表达GAL-1基因,推测其是鹿茸再生中的一个重要调控因子。为研究GAL-1在鹿茸干细胞中的表达及可能的生物学功能,本论文以东北梅花鹿鹿茸的干细胞组织,即生茸区骨膜和角柄骨膜(致敏角柄骨膜与休眠角柄骨膜)以及对照组织面部骨膜为研究材料,克隆了梅花鹿的GAL-1基因CDS区序列,利用软件或网站,对GAL-1蛋白进行生物信息学分析;利于Western-blot及Q-PCR技术检测了GAL-1在鹿茸干细胞中的相对表达量。结果显示:梅花鹿GAL-1ORF全长为408bp,编码134个氨基酸;相对分子质量为14.69KDa,氨基酸序列与牛羊高度接近(95%>);主要定位于细胞外,无跨膜区,无糖基化位点,可能有两个磷酸化位点,二级结构主要为β-折叠与无规卷曲;三级结构与牛的结构相似;GAL-1在面部骨膜中表达量更高。本研究预测了梅花鹿GAL-1蛋白的结构特点,检测了GAL-1蛋白在鹿茸干细胞中的表达情况,为进一步研究鹿茸再生提供数据支持。
  鹿茸生茸区骨膜干细胞被归类为一种间充质干细胞,是鹿茸发生的基础。GAL-1蛋白在生茸区骨膜干细胞中发生异常表达。为探究GAL-1基因在干细胞中的具体功能,本实验采取了RNAi技术,经Q-PCR,Western-blot测定干扰效率约为62%。通过PI法与CCK8法分别检查细胞周期和增殖;Q-PCR检测IL-6和CMYC的表达量;与CFSE染色的外周血淋巴细胞共培养4d后,显微镜下观察并用流式细胞仪检测。结果干扰后的细胞S期占比上升,G1期占比下降;细胞增殖速度加快;IL-6被上调约1倍,CMYC被上调约5倍;淋巴细胞分裂速度加快。这表明干扰后,细胞中GAL-1含量降低,导致大部分细胞进入分裂期,分裂速度加快。IL-6和CMYC等免疫相关因子被上调,刺激免疫细胞活化增殖。推测GAL-1是鹿茸再生过程中细胞增殖与免疫调控的关键抑制因子。
摘要:目的 测定不同种类鹿茸尖部和基部水溶性成分含量,并分析其含量差异.方法 对传统方法加工的鹿茸进行水溶性成分提取,采取凝胶过滤层析方法,以细胞色素C为内参,采用SuperdexTM75 10/300 GL凝胶过滤层析柱,缓冲液使用O.05mol· L-1PBS +0.3 mol·L-1NaC1,流速0.5ml/min,检测波长280 nm,通过峰下面积积分,计算水溶性成分含量.结果 实验建立了水溶性成分含量的计算方法.经计算水溶性成分含量分别为梅花鹿二杠茸尖部30.50%,基部为6.77%;梅花鹿三杈茸尖部29.69%,基部为5.98%;马鹿四杈茸尖部28.27%,基部为3.22%.结论 水溶性成分含量在鹿茸尖部和基部差异明显,梅花鹿二杠茸、梅花鹿三杈茸和马鹿四杈茸的尖部分别为基部的4.5倍,5倍和9倍;从不同种类鹿茸的水溶性成分含量上看,梅花鹿二杠茸优于梅花鹿三杈茸优于马鹿四杈茸,与传统分类相一致....
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