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摘要:在体外分离培养奶牛瘤胃上皮细胞,可为奶牛瘤胃生理功能和吸收机制研究和永生化奶牛瘤胃上皮细胞奠定基础.通过胰蛋白酶消化法从奶牛瘤胃组织中分离出瘤胃上皮细胞,并通过免疫细胞化学的方法检测细胞角蛋白,CCK-8检测细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞的衰老以及细胞染色体核型分析来鉴定瘤胃上皮细胞.结果表明:1)利用胰蛋白酶消化法可以稳定的培养出瘤胃上皮细胞并且能够在体外传代大约5代;2)通过在显微镜下进行细胞形态的观察呈单层“岛屿状”;3)在荧光显微镜下细胞角蛋白抗原能够发出绿色荧光;4)奶牛瘤胃上皮细胞传至第5代,β-半乳糖苷酶被染成蓝色,同时,细胞出现衰老和停滞生长;5)染色体核型分析表明奶牛瘤胃上皮细胞的染色体数为60条.研究发现通过酶消化奶牛瘤胃组织能够获得奶牛瘤胃上皮细胞,但只能传至5代....
摘要:为研究小肽转运蛋白对小肽转运和吸收机制提供细胞模型,在体外建立原代奶牛小肠上皮细胞分离的方法,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶混合消化液对奶牛小肠组织进行消化,通过2%山梨醇进行密度梯度离心以去除单核细胞、淋巴细胞和肌细胞;用刮除法、相差消化法和96孔板单克隆方法来纯化奶牛小肠上皮细胞,从细胞形态学、细胞角蛋白18免疫荧光染色和小肠上皮细胞特异性标志蛋白来鉴定奶牛肠上皮细胞.结果表明:1)采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶联合消化奶牛小肠组织,通过2%山梨醇密度梯度离心可以获得大量的细胞团且48 h发生贴壁,但是细胞贴壁不牢.2)48 h之后细胞团进一步向外辐射生长出细胞,细胞形态呈现典型的上皮细胞和铺路石形态.5~7 d细胞处于对数生长期,细胞大量增值,一部分成纤维细胞与小肠上皮细胞夹杂生长.3)通过96孔板能够单克隆奶牛小肠上皮细胞,细胞呈现均一的铺路石形态.4)奶牛小肠上皮细胞角蛋白18鉴定为阳性,荧光显微镜下能够发出绿色荧光.5)通过RT-PCR能够检测到奶牛小肠上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白、碱性磷酸酶和肠肽酶的表达,成功建立了奶牛小肠上皮细胞的分离和培养方法....
摘要:选用180只28日龄且体质量相近的扬州鹅,公母各半,将其随机分为3组(试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ),每组5个重复,每个重复12只,分别饲喂含有粉碎粒度为272.0、301.2和391.3μm的苜蓿草粉日粮,试验期为42 d,研究不同粉碎粒度苜蓿草粉对鹅生产性能、肉品质和血液生化指标的影响.结果表明:在49日龄,各组扬州鹅的末质量差异无统计学意义(P>0.05),试验组Ⅱ(粉碎粒度为301.2μm)的鹅平均日采食量和平均日增质量在统计学上显著高于试验组Ⅰ(粉碎粒度为272.0μm)(P<0.05);在70日龄,试验组Ⅰ的平均日增质量显著高于试验组Ⅲ(粉碎粒度为391.3μm)(P<0.05);试验组Ⅱ的屠体质量、胸肌质量和胸肌率显著高于试验组Ⅲ(P<0.05);胫骨质量、法氏囊质量和腿肌pH值试验组Ⅰ显著高于试验组Ⅱ(P<0.05);试验组Ⅰ的鹅心脏质量、肝脏质量和脾脏质量显著高于试验组Ⅲ(P<0.05);试验组Ⅰ和Ⅱ的胸肌剪切力显著高于试验组Ⅲ(P<0.05);试验组Ⅰ的胸肌系水力和胸肌剪切力显著高于试验组Ⅲ(P<0.05);试验组Ⅱ和Ⅲ的腿肌系水力显著高于试验组Ⅰ(P<0.05);试验组Ⅰ的鹅血清总胆固醇含量和低密度脂蛋白含量显著低于试验组Ⅱ和Ⅲ(P<0.05).综上表明,苜蓿草粉颗粒料能够提高扬州鹅屠宰性能,促进器官发育和改善血液生化指标.其中,以272.0μm苜蓿草粉碎粒度饲喂的效果最佳....
摘要:通过粒-巨噬细胞集落刺激因子( GM?CSF)和白细胞介素-4( IL?4)体外诱导外周血单核细胞为树突状细胞,为利用树突状细胞免疫疗法治疗奶牛乳房炎奠定基础和提供细胞模型。利用淋巴细胞分离液分离获得奶牛外周血单核细胞,在6孔板内培养2h后,弃掉含有大量的T细胞和B细胞上清液,贴壁的基本上是单核细胞,磷酸盐缓冲液清洗5次,加入含有GM?CSF和IL?4的2 mL培养基进行3 d诱导。之后,从培养基顶部小心吸弃1.4 mL的培养基,然后再补加含有GM?CSF和IL?4的1.8 mL培养基继续诱导3 d。每天通过显微镜观察细胞形态。第7天经流式检测细胞表面抗原 CD11c、CD14、主要组织相容性复合体Ⅱ( MHCⅡ)、CD40、CD80、CD86的表达。结果表明:1)第2天,一些细胞表面可以生长出刺突并伴随着伪足的生长。第3天,细胞表面的刺突和伪足越来越多。第4、5天,一些带有刺突和伪足的细胞开始聚集和融合。第6天,单核细胞基本被诱导为树突状细胞,细胞表面含有大量清晰可见的刺突和伪足。2)经流式检测,CD14、CD11c、MHCⅡ阳性表达细胞分别占诱导细胞的6.8%、65.0%、75.9%,CD80和CD86阳性表达细胞分别占诱导细胞的2.0%和1.2%。综上所述,采用奶牛外周血单核细胞经体外诱导能够获得一定纯度的奶牛树突状细胞。...
摘要:研究苜蓿草不同粉碎粒度饲料对扬州鹅养分利用率和血液生化指标的影响.选用180只28日龄、体重相近(出壳时间和体重基本一致)健康的扬州鹅,随机分为3组,每组5个重复,每个重复12只.分别饲喂苜蓿草粉碎粒度为272.0 μm(试验Ⅰ组)、301.2 μm(试验Ⅱ组)和391.3μm(试验Ⅲ组)制成的日粮.结果表明:试验Ⅰ、Ⅱ组的总能、粗纤维、无氮浸出物利用率显著高于试验Ⅲ组;试验Ⅰ组对钙利用率显著高于试验Ⅱ、Ⅲ组;试验Ⅲ组对粗灰分利用率显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组;各组间扬州鹅血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶和尿酸含量差异不显著;苜蓿草粉碎粒度为272.0 μm和301.2 μm时,能够提高29~70日龄扬州鹅的饲料消化率....
摘要:为探究泌乳奶牛日粮中添加米糠和玉米胚芽粕对奶牛瘤胃发酵及微生物菌群的影响,选择24头健康荷斯坦奶牛,其胎次、产奶量和泌乳天数相近,将24头奶牛分为4组(完全随机区组),以NRC (2001)为参照依据,以奶牛基础日粮干物质为基础,对照组(CK组)不添加米糠和玉米胚芽粕,试验A、B、C组日粮中分别添加3.40%米糠和6.80%玉米胚芽粕、6.65%米糠和13.30%玉米胚芽粕、9.98%米糠和19.98%玉米胚芽粕.分别于07:30、14:30和20:30饲喂,试验期包括预饲期(14 d)和正饲期(42 d),试验期共56 d.结果 表明:不同处理间泌乳奶牛的瘤胃pH值、氨态氮、挥发性脂肪酸和微生物蛋白无显著差异;试验A组可提高黄色瘤胃球菌和溶纤维丁酸弧菌基因相对表达量,促进瘤胃中纤维降解菌和蛋白降解菌群,提高瘤胃对养分的吸收利用效率....
摘要:1 发酵液体饲料的概述 发酵液体饲料(Fermented liq-uid Feed, FLF)最早出现在20世纪80年代的荷兰,发酵液体饲料是指通过人为控制发酵条件下,有益微生物通过代谢活动将饲料中的抗营养因子分解或转化,产生适口性好,营养水平高的饲料原料 [1]....
摘要:目的 探究紫花苜蓿黄酮在体外抑制肿瘤细胞活性的研究.方法 采用四氮甲基唑蓝(MTT)法测定紫花苜蓿黄酮在体外的抗肿瘤活性;流式细胞术检测紫花苜蓿黄酮对人胃癌细胞MGC-803周期和凋亡的影响;Western blotting方法检测相关细胞蛋白的表达情况.结果 MGC-803细胞经紫花苜蓿黄酮预处理后,细胞存活率显著降低(P<0.05).流式细胞术检测发现紫花苜蓿黄酮能够诱导细胞凋亡;引起细胞周期紊乱,使细胞阻滞在G0/G1期.Western blotting实验结果表明它能够活化促凋蛋白Caspase-9,Caspase-3,RARP,抑制抑凋蛋白Bcl-2的表达;引起相关细胞周期蛋白Cy-clinD1,CDK4,CDK6的表达量下调.结论 紫花苜蓿黄酮能够通过诱导MGC-803细胞凋亡途径和调节正常周期活动来抑制MGC-803细胞增殖,并且这种抑制作用还存在着时间和剂量依赖效应....
[硕士论文] 赵倩明
动物营养与饲料科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:采用瘤胃尼龙袋法和饲养实验相结合的方法,研究了玉米胚芽粕和米糠在奶牛中的瘤胃降解特性及在泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛生产性能、瘤胃发酵和血清生化指标的影响,试验方法与结果如下:
  试验一研究了玉米胚芽粕和米糠在泌乳奶牛瘤胃中的降解特性。选用4头安装永久瘤胃瘘管的泌乳中期荷斯坦奶牛,采用尼龙袋法评定玉米胚芽粕和米糠的干物质(DM)、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解率和有效降解率。结果表明:玉米胚芽粕的DM、CP、NDF和ADF的有效降解率分别为30.47%、31.87%、27.64%和20.70%;米糠的DM、CP、NDF和ADF的有效降解率分别为53.85%、55.61%、53.45%和52.86%。
  试验二研究了泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛生产性能的影响。本试验选用24头胎次、产奶量及泌乳天数相近的健康荷斯坦奶牛,按完全随机区组设计分为4组,以NRC(2001)为参照依据,以奶牛饲粮干物质基础上添加0%玉米胚芽粕和0%米糠为对照组,以添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠、13.30%玉米胚芽粕和6.65%米糠、19.98%玉米胚芽粕和9.98%米糠为试验组,即试验A组、B组和C组。每天3次饲喂(7∶30、14∶30、20∶30),试验期共56天,其中预试期14天,正试期42天。结果表明:泌乳奶牛日粮中添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组、13.30%玉米胚芽粕和6.65%米糠组极显著提高奶牛的DMI(P<0.01),明显提高产奶量和4%标准乳产量(P<0.1);泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛饲料效率、乳脂率、乳糖率、乳总固形物、乳尿素氮和各养分表观消化率均无显著影响(P>0.1);添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组经济效益最佳,每头牛每天净收入提高12.61元。
  试验三研究了在泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛瘤胃发酵及微生物菌群的影响。试验设计同试验二,晨饲后2h采集奶牛瘤胃液。结果表明:泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对瘤胃pH值、氨态氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)和挥发性脂肪酸无显著差异(P>0.05);添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组提高了黄色瘤胃球菌和溶纤维丁酸弧菌基因相对表达量(P<0.1)。
  试验四研究了泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛血清生化指标的影响。试验设计同试验二,晨饲后2h尾静脉采集血样。结果表明:泌乳奶牛日粮中添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组能够降低血清ALP、NEFA和BHBA浓度(P<0.05),提高血清CHO和HDL浓度(P<0.05),对其他血清生化指标无显著性影响(P>0.1)。
  结论:在泌乳中期奶牛日粮中添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠最有利于降低饲料成本,提高奶牛产奶量,提高经济效益。
[专利] 发明专利 CN201610700713.8
扬州大学 2016-10-26
摘要:本发明提供了一种永生化山羊小肠上皮细胞系及其建立方法。该方法步骤以下:通过组织块培养原代山羊小肠细胞,随后永生化原代培养的细胞,并通过标记刮除法纯化山羊小肠上皮细胞,最后建立永生化的山羊小肠上皮细胞系。该永生化山羊小肠上皮细胞在培养的过程中无需添加任何细胞生长因子,操作方便简单,且比原代细胞培养节省大量的成本;现有技术中通常采用先纯化再永生化细胞的方法,本发明方法采用标记法来逐步刮除纯化永生化的山羊小肠上皮细胞,避免了现有技术中因培养时间延长使山羊小肠上皮细胞衰老,最终造成细胞永生化失败的缺陷。
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