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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的:构建人附睾蛋白4( HE4)的原核表达系统,纯化重组蛋白并检测其活性。方法:提取卵巢透明癌细胞总RNA,利用RT-PCR技术扩增HE4基因,分别构建pGEX-4T-1-HE4和PET26b-HE4两种原核表达系统。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导重组蛋白表达,最后采用SDS-PAGE和HE4商品化免疫分析试剂盒对表达产物进行鉴定。结果:成功构建了两种HE4融合蛋白的重组表达质粒,表达产物经SDS-PAGE鉴定,分别在相对分子量约38000处和12000处见到表达条带,并可与HE4单克隆抗体特异性结合。结论:采用原核表达方法获得了HE4的两种融合蛋白,为下一步开发免疫分析诊断试剂奠定了基础。...
摘要:目的 原核表达并纯化人心肌肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB,CK-MB).方法 分别从含CK-M、CK-B基因片段的质粒SC319293和SC119007中扩增CK-M、CK-B基因,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,经GST亲和层析柱纯化后,ELISA法检测其抗原性.结果 重组表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组CK-MB蛋白相对分子质量约110 000,表达量占菌体总蛋白的57%,主要以包涵体形式存在;纯化的CK-MB蛋白纯度大于90%,可与兔抗CK-B、CK-M多克隆抗体特异性结合.结论 成功原核表达并纯化了重组CK-MB蛋白,为其大量生产奠定了基础....
摘要:目的制备人心肌肌钙蛋白 I免疫层析试纸条,建立一种快速检测人心肌肌钙蛋白 I的检测方法.方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记肌钙蛋白I单克隆抗体,喷于玻璃纤维纸上制成胶体金结合物垫.将另一株肌钙蛋白I单克隆抗体和抗鼠二抗分别喷于试纸条的检测线和质控线处,组装成试纸条并进行灵敏度、特异性及临床样品测定.结果该试纸条检测灵敏度为1μg/L ,15 min内可判断结果;与C‐反应蛋白、人心肌脂肪酸结合蛋白、肌酸激酶、人心肌肌红蛋白无交叉反应;测定健康人血清样本40例,结果均为阴性;测定14例心肌梗死患者血清,结果均为阳性,且T线显色程度与发光法测定值呈正相关.结论该试纸条灵敏度高、特异性强、操作简便,结果判断直观,可用于急性心肌梗死的早期筛查....
摘要:目的 建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法.方法 采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定.用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析.结果 本方法测定范围0.3 ~ 100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8% ~ 111.1%;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90%~6.71%,7.66%~10.34%;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925.结论 该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值....
摘要:用针对抗氟喹诺酮类( fluoroquinolones,FQs)药物的广谱性单克隆抗体建立了可以同时检测11种FQs药物的胶体金免疫层析方法.该试纸条用20 nm的胶体金标记单抗,将诺氟沙星一卵清蛋白喷涂在检测线上,羊抗小鼠二抗喷涂在质控线上.该胶体金试纸对猪肉和虾中环丙沙星、恩诺沙星和氧氟沙星的检测限都是30ng/g,对诺氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、麻保沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星和二氟沙星8种药物在以上两种样品中添加浓度为100 ng/g时都可被检出,整个检测过程包括样品前处理的时间可在20 min内完成.试验结果表明符合对这11种FQs药物在鸡肉和虾中残留现场大量筛查的要求....
摘要:采用两株催乳素(PRL)单克隆抗体,一株包被化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,研制了测定人血清PRL浓度的酶促化学发光免疫分析试剂盒.本试剂盒测定范围50~4 000 mIU/L,灵敏度4.26 mIU/L,批内、批间变异系数分别小于10%、15%,回收率 90.3%~100.8%;血清样品倍比稀释后的测定值和稀释度的相关系数为1;本试剂盒正常参考值范围:女性43.2~513.1 mIU/L(n=52), 男性54.8~334.3 mIU/L(n=68)....
摘要:采用双抗体夹心一步检测法和鲁米诺-过氧化氢发光体系建立了血清促黄体生成激素(LH)的酶促化学发光免疫分析方法.结果显示,本方法测量范围为1.5~200 IU/L,灵敏度为0.08 IU/L,批内变异系数<9%,批间变异系数<11%,回收率为96.3%~112.1%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.995.与进口酶促化学发光免疫分析试剂盒测定的临床值进行比较,线性相关方程为y=0.967x+0.068 9,相关系数r=0.975,相关性良好.方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求....
摘要:采用双抗体夹心法建立了测定人血清FSH酶促化学发光免疫分析方法.本方法的测量范围为1.5~100 IU/L,灵敏度为0.36 IU/L,批内变异系数为1.0%~1.6%,批间变异系数为4.0%~4.6%,回收率为90.6%~117.8%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.990.与TSH的交叉率<0.23%,与LH和HCG的交叉率分别<0.16%和<0.27%.与贝克曼化学发光免疫分析方法测定的临床值进行比较,相关性方程为y=0.85x-0.03,相关系数r=0.954.与免疫放射分析试剂盒进行比较,相关性方程为y=0.97x+5.29,相关系数r=0.965,与放射免疫分析试剂盒,进行比较,相关性方程为y=0.95x-3.82,相关系数r=0.954.方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求....
摘要:采用大鼠白蛋白免疫绵羊制得羊抗大鼠白蛋白抗血清,建立了大鼠白蛋白酶联免疫分析方法.本方法的测量范围为1~50 mg/L,灵敏度为0.42 mg/L,回收率为85.0%~106.0%,批内、批间变异系数分别<8.9%和<12.8%,高浓度大鼠尿样系列倍比稀释后测定,实测值和计算值呈线形相关,相关系数r=0.999.本方法学与放射免疫分析(RIA)方法学的相关性方程为y=0.92x+0.08,r=0.976,两种方法的相关性良好.方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求,大鼠白蛋白酶联免疫试剂盒的研制为肾病药物的开发及肾损伤的研究提供了方便....
摘要:采用抗恩诺沙星单克隆抗体建立酶联免疫吸附法(ELISA)用以检测恩诺沙星在动物源性食品中的残留.经方法学鉴定,本方法的检测范围为0.5~50 μg/L,灵敏度为0.2 μg/L,批内变异系数<10%,批间变异系数<20%.鸡肉、鱼肉、虾和蜂蜜样品的回收率分别为95.5%~107.5%、80.0%~101.3%、105.7%~122.7%和93.3%~111.3%.方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA EI CBST
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摘要:C-反应蛋白是动脉粥样硬化血栓形成的生物标志物.定期检测血液中C-反应蛋白含量的变化对预测心血管疾病的发生和发展有重要意义.本研究开发的C-反应蛋白放射免疫分析试剂盒的测量范围为1~50 mg/L,灵敏度为0.30 mg/L,回收率为91.7%~114.0%,批内、批间平均变异系数分别为3.4%和6.3%;高浓度血样系列倍比稀释后测定,实测值和计算值呈线性相关,相关系数>0.990.这将为检测心血管疾病的发生、治疗及预后提供方便....
摘要:应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法.该方法测量范围为1.5~80μg/L,灵敏度为0.12/μg/L,批内变异<5%,批间变异<15%.回收率为83.8%~118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999.本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97....
摘要:利用CA125抗原免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,建立分泌抗CA125抗体的杂交瘤细胞株.将CA125单克隆抗体应用到化学发光免疫分析和免疫放射分析方法中,病理值的测定结果和进口试剂盒测定值相关方程分别为y=0.85x+11.1,r=0.932和y=0.87x-12.8,r=0.983;正常血样测量值范围分别为3.3~26.7和1.5~27.0 U/mL.CA125单克隆抗体制备的包被板和包被管在37℃下可稳定存放14 d,且不影响分析结果....
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北大核心 CSTPCD CA
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摘要:采用两株胰岛素单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯试管作为固相抗体、另一株标记125I,建立了测定胰岛素的免疫放射分析方法.本方法的灵敏度为2.8 mIU/L,测量曲线范围为5~160 mIU/L;批内、批间变异系数分别<5%和<10%,回收率92.3%~112.6%;将高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关(r=0.996);39例健康人血清样品测定值为4.7~14.3 mIU/L.该方法与胰岛素放射免疫分析法的相关性良好(r=0.981)....
摘要:采用两株抗胰岛素单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯板、另一株标记辣根过氧化物酶,建立了测定人胰岛素的双抗体夹心酶联免疫分析法.方法学研究表明,本方法的灵敏度为1.7 mIU/L,曲线范围5~160.mIU/L,批内、批间变异系数分别小于11%、15%,回收率96.4%~111.1%;高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.998;38例健康人血清样品测定值为3.6~10.8 mIU/L.该方法与人胰岛素放射免疫分析法测定结果的相关性良好,r=0.97....
摘要:为获得可用于免疫分析的人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的单克隆抗体,用基因重组的cTnI免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用ELISA法筛选,有限稀释法进行克隆化.经2次融合,获得12株分泌cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株.ELISA法测定腹水滴度大于1:1×105,亲和常数大于1×108L/mol;此12株单克隆抗体与人心肌组织来源的cTnI可特异性结合,与cTnT、肌钙蛋白C(TnC)、人骨胳肌肌钙蛋白I(skTnI)、人骨胳肌肌钙蛋白T(skTnT)均无交叉反应.在这12株单克隆抗体中,有3株单抗可相互进行配对.该抗体的获得,为cTnI免疫诊断试剂的研发奠定了基础....
摘要:C-反应蛋白是动脉粥样硬化血栓形成的生物标志物。定期检测血液中C-反应蛋白含量的变化对预测心血管疾病的发生和发展有重要意义。本研究开发的C-反应蛋白放射免疫分析试剂盒的测量范围为1~50 mg/L,灵敏度为0.30 mg/L,回收率为91.7%~114.0%,批内、批间平均变异系数分别为3.4%和6.3%;高浓度血样系列倍比稀释后测定,实测值和计算值呈线性相关,相关系数>0.990.这将为检测心血管疾病的发生、治疗及预后提供方便。
[硕士论文] 贾娟娟
核技术及应用 中国原子能科学研究院 2005(学位年度)
摘要:采用杂交瘤技术获得了三株分泌抗胰岛素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中编号为INS49F1的抗体亲和性较好,在酶联免疫分析中得到了初步的应用。 研究并建立了不同模式的胰岛素酶联免疫分析方法。采用两株可相互配对的抗胰岛素单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯板、一株标记辣根过氧化物酶、生物素,分别建立了胰岛素双位点夹心酶联免疫分析法。其方法学灵敏度为1mIU/L;批内、批间变异系数分别为4.6%~5.5%和13.5%~14.8%;回收率96.6%~110.6%;高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.9999;34例健康人血清样品测定值为0.9~7.4mIU/L,该方法与胰岛素放射免疫分析法的相关性方程为y=0.70X-2.22,r=0.957,n=90。采用多抗及酶标二抗的方法对竞争法的包被、标记、反应条件等进行了初步探索。本工作为今后进一步开发胰岛素酶联免疫分析试剂盒奠定了基础。
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