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摘要:目的:探讨母鼠孕期感染流感病毒是否会导致子代小鼠行为异常.方法:孕鼠胚胎着床后,分为感染组(用流感病毒PR8滴鼻感染)和生理盐水组(用NS滴鼻),各自产下的5周龄子代小鼠(实验组和对照组)依次测试糖水消耗和旷场实验.结果:与对照组比,实验组小鼠糖水消耗量多,旷场实验进入中央区域次数少,中央活动路程和活动时间均长,差异均具有统计学意义.结论:母鼠孕期感染流感,会使子代小鼠具有多动,精神亢奋等躁狂样行为.提示孕期感染流感病毒会增加子代精神状态异常的风险....
摘要:目的:研究流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞在不同时期的极化状态.方法:建立小鼠流感病毒感染模型;20G静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;贴壁培养分离巨噬细胞并提取其RNA,荧光定量PCR测定其表达水平;取肺泡灌洗液,用ELISA试剂盒检测细胞因子(白细胞介素(IL)-12).结果:感染组体质量呈下降趋势,之后处于恢复期上升,对照组体质量平缓上升;感染组表达流感病毒PR8 M1基因,第5天显著升高(P<0.000 1),第14天没有检测出M1基因;感染组IL-1β和一氧化氮合酶2(NOS2)表达水平呈先上升后下降趋势,其第5天表达水平明显高于对照组(P<0.000 1);感染组IL-10表达水平在第5天高于第1天,且高于对照组(P<0.05);感染组精氨酸酶表达水平呈先上升后下降趋势,在第1天无检出并低于对照组,第5天达最高值(P<0.000 1);感染组第1天TGfβ表达水平与对照组比低于正常水平(P<0.05);感染组肺泡灌洗液中IL-12浓度在第5天最高(P<0.000 1).结论:流感病毒感染会致肺泡巨噬细胞极化,在早期肺泡巨噬细胞极化为M1型,随着时间推移,巨噬细胞极化亚型表现为M2型....
[专利] 发明专利 CN201611248913.0
摘要:本发明提供了一种重组肠道病毒表型混合系统的构建方法,是构建VP1重组细胞系,将减毒肠道病毒株在VP1重组细胞系中进行感染扩增即得重组肠道病毒表型混合系统;所述VP1重组细胞系为单独或同时表达肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型的VP1的一种或两种的细胞系;所述减毒肠道病毒株选自柯萨奇病毒B组3型、肠道病毒71型或者脊髓灰质炎病毒I型;减毒肠道病毒株感染VP1重组细胞系,细胞病变后收获子代病毒,获得含有多种不同来源肠道病毒VP1衣壳、含有减毒肠道病毒毒株基因组核心的混合表型重组减毒毒株;此种系统形成的子代病毒可激活宿主免疫,针对多种肠道病毒产生免疫保护,该表型混合系统具有实际和广泛的应用价值。
[硕士论文] 贺妍
免疫学 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  作为着丝粒重要组件,Zwint-1参与招募动力蛋白激酶和动力蛋白,促进染色体运动或调控纺锤体检查点,在着丝粒组装和有丝分裂中期适当沉默 SAC起到关键作用,以此确保染色体正确分离。通过进一步实验,来考察Cdc20与 Zwint-1之间的关系,以及 D-box序列在这其中发挥的作用,为进一步理解控制染色体分离的分子机制打下基础。
  方法:
  经PCR、双酶切鉴定等一系列实验技术来构建重组质粒pCMV-myc-Cdc20、pcDNA3-flag-Zwint-1、pcDNA3-flag-Zwint-1ΔD-box、pEGFP-Zwint-1和 pEGFP-Zwint-1ΔD-box;采用胸腺嘧啶双阻断法将HEK293T细胞同步化在 G1/S期,用流式细胞术通过碘化丙啶染色来确定细胞时相,用Western blot检测Zwint-1蛋白在细胞周期的表达水平;使用放线菌酮和MG132处理细胞,经Western blot检测来观察Zwint-1蛋白在体内的降解情况;对HEK293T细胞转染了质粒 pCMV-myc-Cdc20,即过表达 hCdc20,做了Cdc20与 Zwint-1之间的免疫沉淀实验;过表达 hCdc20和 RNA干扰 Cdc20,用Western blot来检测内源性Zwint-1蛋白质水平;将分别编码Zwint-1-flag、 Cdc20-myc和 Ub-HA的质粒共转染 HEK293T细胞,做了体内泛素化分析;删除了 Zwint-1的两个D-box基序(128 RTQL131和203 RDKL206),将突变序列亚克隆进pcDNA3-flag,与质粒pCMV-myc-Cdc20共转染,用Western blot来检测D-box缺失的Zwint-1蛋白质水平。
  结果:
  Zwint-1蛋白水平随细胞周期时相变化而变化;Zwint-1蛋白水平在用放线菌酮孵育8 h和16 h后显著降低,在用MG132孵育6 h和12 h后蛋白水平迅速增加;免疫沉淀结果为阴性;过表达 hCdc20使 Zwint-1蛋白质含量显著减少;RNA干扰抑制Cdc20活性时Zwint-1蛋白和cyclin B显著积累;当过表达Cdc20-myc时,Zwint-1蛋白多泛素化水平显著上升;缺乏D-box基序的Zwint-1不能被Cdc20识别降解。
  结论:
  Zwint-1的蛋白水平随细胞周期出现周期性变化;Zwint-1通过 APC/C-Cdc20途径泛素化降解;其机制是Cdc20识别Zwint-1的D-box基序。
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