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摘要:如何获得理想的牙周组织的再生修复依然是当前牙周炎临床治疗的挑战.3D打印技术是基于计算机辅助设计,经逐层叠加制作特定三维形态的材料,现已应用于牙周组织再生治疗,为实现理想的牙周再生带来希望.本文拟就3D打印技术在牙周组织再生领域中的应用进行综述.文献复习结果表明,3D打印技术可预先通过计算机软件设计三维结构,生产出具有特定三维结构的材料;3D打印技术主要包括选择性激光烧结、选择性激光熔化、挤压成形打印和3D生物打印;当前通过3D打印技术制备的支架材料有陶瓷材料、高分子材料和金属;高分子材料因其可调节性大而被广泛研究,而3D打印的个性化钛网已被应用于临床;利用3D打印技术制备的多相材料在动物试验上已可实现牙周组织再生,但应用于牙周炎患者疗效欠佳.3D打印牙周组织再生复合支架有待于进一步的研究....
摘要:目的:探讨大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为的差异.方法:体外培养大鼠颌骨与股骨成骨细胞(MOBs与FOBs),通过MTT比色法检测细胞的增殖能力,采用碱性磷酸酶染色与活性测定、茜素红染色与定量比较细胞的成骨能力.应用荧光定量PCR及ELISA检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况.结果:与FOBs相比,MOBs的增殖能力、成血管相关细胞因子Angpt-1和FGF-2的表达更强,但碱性磷酸酶的表达、体外矿化结节形成能力以及成骨相关基因ALP、RUNX2、Col-Iα1和OC的表达均较低.结论:MOBs与FOBs相比较,增殖力较强,分化能力较弱....
摘要:目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(BM SC)膜片体外构建过程中纤维连接蛋白(FN)的表达情况.方法 体外分离培养骨质疏松大鼠BMSC,采用含50μg/mL维生素C的培养基连续培养构建细胞膜片,通过倒置显微镜和组织学染色对细胞膜片进行形态学观察;利用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测细胞外基质中FN在基因和蛋白水平的表达情况.结果 采用含维生素C的培养基连续培养可获得含多层细胞及丰富胞外基质的BMSC细胞膜片.免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测结果显示所构建的细胞膜片高表达FN.结论 以浓度为50μg/mL的维生素C培养基连续培养可成功构建骨质疏松大鼠BM SC细胞膜片,膜片富含FN,有望应用于骨质疏松状态下牙槽骨缺损的治疗....
摘要:目的 体外分离培养骨质疏松大鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)并探讨其生物学行为.方法 采用双侧卵巢切除术建立大鼠绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMO)动物模型并分离培养骨质疏松大鼠BMMs.通过倒置显微镜和瑞氏-姬姆萨染色对细胞进行形态学观察;通过CCK-8法检测骨质疏松大鼠BMMs的增殖能力;运用免疫荧光染色及荧光定量PCR法分析骨质疏松状态下大鼠BMMs的极化及炎症相关因子的表达情况.结果 成功建立大鼠PMO模型并分离培养骨质疏松大鼠BMMs.骨质疏松大鼠BMMs主要呈多角形及煎蛋样.与假手术组相比,BMMs的增殖能力较高.免疫荧光染色可见骨质疏松大鼠BMMs高表达CCR7,低表达MRC1.荧光定量PCR检测结果提示,骨质疏松大鼠BMMs促炎因子TNF-α及IL-6的表达较高,而抗炎因子IL-10及TGF-β的表达相对较低.结论 去卵巢可影响大鼠BMMs的增殖能力、细胞表面极化标志物以及炎症相关因子的表达水平....
摘要:目的 探讨体外培养的大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子的表达情况. 方法 体外分离培养大鼠颌骨成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色(ALP)与矿化结节茜素红染色对细胞进行鉴定.应用实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况. 结果 体外培养的大鼠颌骨成骨细胞ALP及矿化结节茜素红染色均为阳性.颌骨成骨细胞在高表达成骨相关基因、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原和骨钙素的同时,在蛋白及基因水平均高表达成血管相关细胞因子血管内皮生长因子、血管生成素1和成纤维生长因子2. 结论 颌骨成骨细胞在成骨分化的同时可通过分泌成血管相关细胞因子参与血管化调控....
摘要:目的 通过体内、外实验对抗菌钛合金 Ti6Al4V-6Cu的生物安全性进行初步探讨,为抗菌钛合金Ti6Al4V-6Cu的临床应用提供实验依据. 方法 采用选择性激光熔化技术制备抗菌钛合金 Ti6Al4V-6Cu.通过体外细胞毒性试验、短期全身毒性实验和溶血实验对抗菌钛合金的生物安全性进行评价. 结果 选择性激光熔化技术制备抗菌钛合金Ti6Al4V-6Cu无细胞毒性,不引起大鼠体质量减轻及肝、肾病理性改变,溶血率较低.结论 选择性激光熔化技术制备抗菌钛合金Ti6Al4V-6Cu具有良好的生物安全性,有望将来应用于临床....
摘要:目的 探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖与成骨分化能力的影响.方法 建立去卵巢大鼠骨质疏松模型,分离培养假手术组和去卵巢组颌骨成骨细胞并进行形态学观察.采用CCK-8法检测假手术组和去卵巢组大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力差异.通过碱性磷酸酶染色与活性测定、矿化结节茜素红染色与定量、成骨相关基因及蛋白表达检测,探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖及成骨分化能力的影响.结果 假手术组和去卵巢组大鼠均可成功分离培养颌骨成骨细胞,两组细胞均可贴壁生长,细胞形态未见显著差异.与假手术组相比,去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力,碱性磷酸酶染色与活性均显著增高;但去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的Runx2和OC在mRNA与蛋白水平的表达上及体外矿化结节形成能力方面皆显著低于假手术组.结论 去卵巢可影响大鼠颌骨成骨细胞的增殖与成骨分化能力,研究结果将为探讨颌面部骨组织骨质疏松的发病机制与防治提供实验依据....
摘要:目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞膜片的构建及基本生物学特性.方法 建立大鼠绝经后骨质疏松症(PMOP)模型,分离培养骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(O-rBMSCs),并以O-rBMSCs为种子细胞构建细胞膜片.通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜及透射电镜对细胞膜片进行形态学检测;以免疫组织化学染色检测细胞外基质相关蛋白的表达情况.结果 成功建立了大鼠PMOP模型,体外分离培养的O-rBMSCs具有多向分化潜能.显微镜下可见细胞复层生长,采用富含维生素C的培养基连续培养10 d左右即可获得白色膜样结构,该细胞膜片具有较好的弹性,HE染色及扫描电镜观察发现O-rBMSCs膜片由多层细胞及丰富的细胞外基质组成.透射电镜下可观察到细胞间连接.免疫组织化学染色示O-rBMSCs膜片高表达Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白.结论 O-rBMSCs体外采用富含维生素C的培养基连续培养可构建细胞膜片,该细胞膜片富含细胞外基质,有望应用于骨质疏松机体的组织再生....
[硕士论文] 许雄程
口腔临床医学 福建医科大学 2018(学位年度)
摘要:牙周炎是由菌斑微生物所致的慢性炎症性疾病,可破坏牙周支持组织。如何利用引导性组织再生术(guided tissue regeneration,GTR)实现重度牙周炎患者牙周组织的再生,尤其是在患牙拔除后余留形态不良的骨缺损上进行引导性骨再生术(guided bone regeneration,GBR),是临床医生长期以来关注的重点。随着工程技术的发展,采用3D打印技术之一的选择性激光熔化技术(selective laser melting,SLM)有望根据患者牙周组织缺损的形态制备个性化钛网作为屏障膜应用于重度牙周炎患牙的GTR及患牙拔除后的GBR治疗,以期最大程度地获得牙周组织的再生。
  目的:
  采用SLM制备含铜钛合金,并与巨噬细胞RAW264.7、成骨细胞MC3T3-E1、骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠的巨噬细胞和成骨细胞共培养,探讨该含铜钛合金对上述细胞生物学行为的影响。
  方法:
  1.采用SLM制备含铜钛合金Ti6Al4V-Cu,通过SEM、XRD、EDS、ICP与XPS对材料的性能进行检测。2.将Ti6Al4V-Cu与巨噬细胞RAW264.7共培养,检测Ti6Al4V-Cu对细胞增殖、黏附、细胞极化和炎症相关因子的表达;通过RANKL诱导材料表面RAW264.7细胞向破骨细胞分化,荧光显微镜观察破骨细胞的发生,Real-time PCR检测细胞中破骨分化基因的表达。3.将Ti6Al4V-Cu与成骨细胞MC3T3-E1共培养,观察MC3T3-E1细胞在Ti6Al4V-Cu表面的黏附,检测MC3T3-E1细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和成骨相关基因的表达。4.采用双侧卵巢切除术建立SD大鼠OP模型,分离培养OP大鼠巨噬细胞与成骨细胞,并分别与Ti6Al4V-Cu共培养。5.检测Ti6Al4V-Cu表面OP巨噬细胞的增殖、黏附与极化,通过Real-time PCR、ELISA、western blot和免疫荧光染色在基因与蛋白水平检测炎症因子与巨噬细胞极化标志物的表达。6.采用RANKL破骨诱导对Ti6Al4V-Cu表面OP巨噬细胞进行破骨诱导,观察破骨细胞的形成,通过real-time PCR、western blot和免疫荧光染色检测破骨分化相关基因与蛋白的表达。7.观察Ti6Al4V-Cu表面OP成骨细胞的黏附与增殖,并检测细胞成骨分化基因的表达,通过real-time PCR、western blot和免疫荧光染色检测成骨细胞胞外基质I型胶原(collagen1α1,Col-1α1)和赖氨酸氧化酶(lysyl oxidase,LOX)的表达。
  结果:
  1.SLM制备的含铜钛合金Ti6Al4V-Cu中铜以Ti2Cu的形式存在,铜离子可从Ti6Al4V-Cu中析出,其表面氧化膜中的铜以Cu2O或TiCuOx的形式存在。2.Ti6Al4V-Cu抑制巨噬细胞RAW264.7的激活、增殖以及促炎细胞因子的表达,促进抗炎细胞因子的表达,在下调M1型巨噬细胞标志物的表达的同时可上调M2型巨噬细胞标志物的表达。3.Ti6Al4V-Cu可抑制巨噬细胞RAW264.7细胞分化形成破骨细胞以及破骨分化相关基因的表达。4.Ti6Al4V-Cu对成骨细胞MC3T3-E1的黏附、增殖与成骨分化功能无显著影响。5.Ti6Al4V-Cu可抑制OP大鼠巨噬细胞的增殖与黏附,下调细胞促炎细胞因子和M1型巨噬细胞标志物的表达,上调细胞抗炎细胞因子和M2型巨噬细胞标志物的表达。6.Ti6Al4V-Cu可抑制OP大鼠巨噬细胞分化为破骨细胞,下调OP大鼠巨噬细胞破骨分化相关基因与蛋白的表达。7.Ti6Al4V-Cu不影响OP大鼠成骨细胞的黏附、增殖及成骨分化,可上调细胞胞外基质Col-1α1和LOX的表达。
  结论:
  1.采用SLM可成功制备含铜钛合金Ti6Al4V-Cu。2.Ti6Al4V-Cu可抑制巨噬细胞炎症反应与破骨分化,不影响成骨细胞的增殖与成骨分化,促进成骨细胞胞外基质的形成。3.Ti6Al4V-Cu有望应用于个性化屏障膜的制备,对重度牙周炎患者尤其是伴有OP的牙周炎患者的GTR及GBR治疗具有潜在的应用价值。
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