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摘要:目的:研究Egr-1对Cathepsin L的调控在鱼藤酮(Rotenone)诱导的多巴胺能神经元PC12凋亡的作用,初步探讨Egr-1与CathepsinL的关系及机制.方法:常规培养PC12细胞,分别取1μM,2μM的Rotenone处理,用倒置显微镜观察细胞的形态变化;确定敏感性最强的浓度后再在不同的时间点下用Western blotting检测Egr-1、CathepsinL蛋白表达情况;采用Egr-l siRNA转染PC12细胞,空载体siVector转染PC12细胞,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Western blotting检测各处理组中Egr-1、Cathepsin L蛋白的表达情况.结果:Western blotting结果显示,经Rotenone刺激过的PC12细胞在2μM的浓度下最敏感,其Egr-1和CathepsinL蛋白的表达量显著增加,且Egr-1在15 min就有明显的增加,而Cathepsin L在30 min才明显增加,说明Egr-1的确是出现在Cathepsin L蛋白的上游;Egr-lsiRNA转染的PC12细胞的Cathepsin L表达量明显低于于空载体转染PC12细胞.结论:多巴胺能神经元PC12在Rotenone刺激下,细胞内Cathepsin L的表达与细胞内Egr-1蛋白水平有关,并且在抑制Egr-1的表达后,细胞内CathepsinL的表达也相应的降低.所以我们得出Egr-1对CathepsinL可能有调控作用,从而来调控多巴胺能神经元的凋亡....
[硕士论文] 袁诗宇
药理学 苏州大学 2017(学位年度)
摘要:哺乳动物的 CLOCK基因对生物节律的调控和生殖功能方面起着非常重要的作用。然而,Clock在斑马鱼生物钟及生殖中的作用尚未被探索。
  在本文中我们发现clock1a敲除的斑马鱼性成熟较野生型斑马鱼晚,并且产卵量也远小于野生型。在实验室条件下,野生型斑马鱼通常以7天周期产卵;而clock1a突变体则不能以7天为周期产卵。当我们延缓这个7天的周期到10天时,我们发现突变体的产卵量有所增高,而且与野生型的产卵量相近。通过石蜡切片和 H&E染色观察卵巢形态,我们也发现了在斑马鱼交配后,clock1a突变体卵巢中不成熟的卵细胞很多,直到10天后其成熟卵细胞才大量出现。为了寻找生物钟的调控机制,我们在先前我们进行的转录组分析结果中发现在细胞分裂中起作用的激酶plk1在clock1a突变体中是下调的。我们假设生物钟通过减数分裂的过程某一环节在生殖中起到关键性的作用。我们发现plk1是由生物钟通过E’-box介导调控。Rec8蛋白也是减数分裂中的关键性蛋白,它决定着减数分裂过程的结束并且可被Plk1磷酸化并降解。Clock1a的缺失导致plk1下调,进而造成Rec8不能降解而使得减数分裂不能正常进行。其次,往野生型雌性斑马鱼腹腔注射Plk1的抑制剂 BI2536也能导致卵巢中Rec8的积累和产卵量的下调。综上所述,这些结果表明了,在斑马鱼中Clock1a对生殖功能方面起着非常重要的作用, Clock1a是通过调控 plk1介导的对减数分裂关键性蛋白 Rec8磷酸化降解作用来延缓其产卵周期的。
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