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摘要:近20年来,转基因作物的种植面积持续增加,转基因产品的流通量和流通速度呈迅速上升趋势.在不同国家与地区间,非转基因产品内出现低含量转基因成分的问题,即转基因成分低水平混杂日趋严重.以此问题为立脚点,比较全面的阐述了7个不同国家与地区(组织)的转基因成分低水平混杂的定义,分析了共同特点;总结了各国的现行政策与允许值的规定;概述了低水平混杂问题对进出口贸易方面产生的影响,旨为我国制定低水平混杂的相关政策及检测标准提供基础资料....
摘要:通过3’端2次高效热不对称交互PCR (hiTAIL-PCR)和5’端4次hiTAIL-PCR及1次长链PCR获得了转基因抗虫棉材料06N-119的外源DNA插入片段的全序列.外源DNA插入片段全长11 578bp,由NptⅡ基因和Bt基因两个表达盒串联构成.插入位点处缺失75个碱基,未发生基因重组现象.根据3’端旁侧序列设计引物,特异性和灵敏度检测结果表明,建立的3’端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,最低检测限为每100ng模板量的0.05%,相当于11个靶标序列拷贝.本研究结果对转基因抗虫棉外源基因检测和生物安全评价具有重要意义....
[专利] 发明专利 CN201910482615.5
摘要:本发明公开了属于生物工程技术领域的一种定量检测转基因水稻中抗除草剂蛋白Bar的酶联免疫试剂盒及其检测方法,所述酶联免疫试剂盒由包被捕获抗体的微孔反应板、样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液和板贴组成,本发明试剂盒成本低,主要试剂均以工作液形式提供,操作简便,能同时快速检测大批样品;具有高灵敏度、高特异性的特点;是目前国内乃至国际首个能定量特异检测转基因水稻中抗除草剂蛋白Bar的试剂盒。
[专利] 发明专利 CN201910483419.X
摘要:本发明公开了属于生物工程领域的Bar单抗杂交瘤细胞株、产生的抗体及其制备方法。本发明利用工程菌株表达、纯化得到的高纯度抗除草剂蛋白Bar作为抗原,通过杂交瘤技术制备了分泌抗Bar的特异、灵敏单抗的Bar单抗杂交瘤细胞株(PA1‑18030030/1B8 3D6)和Bar单抗杂交瘤细胞株(PA1‑18030030/6F5 1D2),保藏编号依次为CGMCC No.17083和CGMCC No.17084。细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价分别为1:1024000和1:640000,抗体亚型均为IgG1,该单抗可以特异识别原核表达的重组Bar蛋白及转基因水稻中的内源Bar蛋白,分泌抗Bar抗除草剂蛋白的鼠单抗杂交瘤细胞株的构建为转基因水稻中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑。
[专利] 发明专利 CN201910201069.3
摘要:本发明公开了一种定量检测转基因水稻中抗虫蛋白Cry2A的酶联免疫试剂盒及其检测方法。所述酶联免疫试剂盒由包被捕获抗体的微孔反应板、样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液和板贴组成。本发明的检测方法具有操作简便、能同时快速检测大批样品,具有高灵敏度、高特异性的特点。
[专利] 发明专利 CN201910482631.4
摘要:本发明公开了属于生物工程技术领域的一种用于转基因水稻抗除草剂蛋白Bar的胶体金免疫层析速测卡及其使用方法,所述胶体金免疫层析速测卡包括卡壳和卡壳内的试纸条,所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫,所述金标垫包被抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体‑胶体金结合物。该速测卡特异性强,灵敏度高,并且,操作简便、快速、准确,适用于转基因水稻及其产品中抗除草剂蛋白Bar的现场快速检测以及安全性评价。
[专利] 发明专利 CN201910201070.6
摘要:本发明公开了杂交瘤细胞株1D11 1A5和2G4 1B8及其产生的抗体和制备方法。所述杂交瘤细胞株于2018年11月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.16696和CGMCC No.16695。所述细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价分别为1:768000和1:640000,抗体亚型分别为IgG2a和IgG1,所述单抗可以特异识别原核表达的重组Cry2A蛋白及转基因水稻中的内源Cry2A蛋白,为转基因水稻中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑。
摘要:表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)生物传感器是一种基于物理光学原理的新型生化分析系统.近年来,因其具有无需标记、高灵敏度、高特异性、实时和快速等优势而广泛应用于各个领域,如临床诊断、转基因成分定性及定量检测、病毒鉴定、环境微生物检测、药物筛选及遗传分析等.它在不需要标记甚至无需纯化生物组分的天然条件下,将核酸探针作为识别因子修饰到传感器芯片表面上,并可实时监测一些特殊的分子互作信息.然而,基于SPR技术的核酸传感器鲜有系统性的报道,因此对有关表面等离子体共振现象的形成及其作为核酸敏感检测手段的原理、应用及发展趋势等问题作了简要的介绍,旨在为生物传感研究提供相应的参考依据....
[专利] 发明专利 CN201811612746.2
摘要:本发明公开了属于生物工程技术领域的一种定量检测抗虫蛋白Cry1C的酶联免疫试剂盒,所述酶联免疫试剂盒由包被捕获抗体的微孔反应板、样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液和板贴组成。本发明的试剂盒操作简便、能同时快速检测大批样品,具有高灵敏度、高特异性的特点。
摘要:大多数国家对转基因生物研究与产业化日趋积极,把发展生物技术作为支撑发展、引领未来的战略选择,力求抢占新一轮经济和科技革命的先机与制高点.随之而来的是公众对转基因产品安全性的关注.转基因生物成分分析作为安全性评价的重要内容,发挥着举足轻重的作用,而基于PCR技术的转基因产品核酸成分分析是最经典、最广泛使用的方法.虽然此方法己普遍应用,但国内外鲜有较为全面的阐述此类分析测试要素的报道.为此,本综述对国内外相关方法的文献资料进行了梳理、比对和研究,结合已有的分析测试实验室的经验,提出了PCR测试体系的关键要素主要是标准和指南、方法的确认、标准物质及能力验证等四个方面,且在文中简明扼要的论述了各个部分的要点,供转基因核酸成分分析及相关领域工作者参考....
[专利] 发明专利 CN201810746540.2
摘要:本发明公开了属于生物工程技术领域的一种Vip3Aa20兔多克隆抗体的制备方法,所述多克隆抗体的制备方法,包括以下步骤:a)通过原核表达得到Vip3Aa20重组蛋白;b)免疫动物:将Vip3Aa20重组蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔;c)效价检测;d)多克隆抗体纯化及western验证。所述多克隆抗体为实现抗虫蛋白Vip3Aa20在转基因玉米MIR162中的定性、定量检测奠定基础。
[专利] 发明专利 CN201810641569.4
摘要:本发明公开了一种质粒DNA分子标准物质量值修正的方法。该方法通过质粒分子DNA标准物质中加入非靶标DNA作为填充物,采用微滴数字PCR技术确定最佳填充物的种类,以此消除质粒DNA分子标准物质的理论值与实际测量值的偏倚问题。质粒DNA分子标准物质是核酸量值传递的重要载体,采用本发明的修正方法,可以为医疗诊断、司法鉴定、物种鉴定、基础生物学研究及转基因检测等核酸分析领域提供量值准确、稳定性良好、测量结果具有可靠性、可比性和溯源性的质粒DNA分子标准物质。
摘要:水稻作为最重要的粮食作物之一,其转基因安全性一直受到各国政府和人民的广泛关注.为了保障和引导公众对转基因水稻的正确而全面的认识,转基因生物安全检测工作必不可少.在目前的转基因检测工作中,核酸扩增技术是最为常用的检测方法.PCR技术是最成熟、应用最广泛的一种核酸扩增技术.然而,PCR技术对温控条件的极度依赖性制约它在田间的现场快速检测.本研究以转基因水稻PA1 10-15为对象,建立了重组酶聚合酶等温扩增及DNA试纸条联检的品系特异性检测方法,减少了对专用仪器的依赖,为快速现场转基因检测提供了新的解决方案....
摘要:依据全球转基因作物商业化的强势发展态势,转基因马铃薯的普遍商业化已呈大势所趋.马铃薯是世界第四大食用作物,仅次于水稻、小麦和玉米.目前,全球获批商业化种植的转基因马铃薯45种,主要涉及抗虫、抗病毒及品质改良等性状.转基因技术在给人们带来巨大经济效益的同时,也引起了人们的担忧,主要包括食品安全及环境安全问题等,由此转基因生物产品成分的检测及监管的重要性凸显.在转基因检测领域,标准质粒以容易获得、纯度高、成本低与稳定性好等优点逐渐被广泛应用.在调研了所有商业化的转基因马铃薯的重要信息的基础上,针对这些转基因马铃薯的主要外源基因类型,构建含有抗马铃薯甲虫cry3A基因、胭脂碱合成酶启动子P-nos基因、抗马铃薯Y病毒pvycp基因及内标准基因尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶PATA基因的多靶标质粒pBJGMM003.该质粒可用于大部分已批准转化体及部分在研转基因马铃薯的鉴定、检测与监管工作,解决了转基因马铃薯的阳性标准品匮乏等问题,保障了转基因马铃薯相关工作的顺利进行....
[专利] 发明专利 CN201711329942.4
摘要:本发明公开了杂交瘤细胞株及其产生的抗体和制备方法,杂交瘤细胞株1F9‑1F5和杂交瘤细胞株2G3‑1D7,已依次于2017年10月11日和2017年11月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号依次为CGMCC No.14725和CGMCC No.14733,所述杂交瘤细胞株的制备方法,包括以下步骤:a)通过原核表达得到Vip3Aa20重组蛋白;b)免疫动物:将Vip3Aa20重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠;c)细胞融合:收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合;d)细胞建株:通过有限稀释法进行亚克隆,亚克隆5‑7天进行ELISA检测,直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存,所述杂交瘤细胞株分泌的单抗为实现抗虫蛋白Vip3Aa20在转基因玉米MIR162中的定性、定量检测奠定基础。
[专利] 发明专利 CN201711394634.X
摘要:本发明首次公开了将重组酶聚合酶等温扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)及DNA试纸条联检应用于检测含有转基因水稻PA110‑15品系及其衍生品种成分的引物及探针组合,其正向引物序列如SEQ ID NO1所示,反向引物序列如SEQ ID NO2所示,探针序列如SEQ ID NO3所示。本发明还公开了一种检测含有转基因水稻PA110‑15品系及其衍生品种的方法,提供了适用于转基因水稻PA110‑15品系特异性的RPA‑DNA试纸条联用检测方法。
摘要:马铃薯是仅次于水稻、玉米、小麦的世界第四大食用作物.马铃薯主粮化已经成为时下热议的话题之一,其核心优势是产量高、耐瘠薄、消耗水资源少、易于加工等.在耕地和水资源相对紧缺的中国,这些优点无疑具有非常大的吸引力.目前,全球共批准商业化种植的转基因马铃薯40余种,主要性状为:抗病、抗虫和品质改良等,其中部分产品即将在我国申请转基因生物安全证书.详细阐述了转基因马铃薯主要性状的特点、国内外研究进展、审批情况与安全评价的政策,以期为我国政府部门的安全监管及检测标准制定提供参考....
[硕士论文] 董美
生物化学与分子生物学 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:伴随着测序技术的高速发展,下一代测序(Next Generation Sequencing,NGS)是目前核酸序列分析领域的主流测序技术,被广泛用于各类组学的研究。NGS是一种通量高、覆盖度广、快速有效的全基因组重测序手段,为生物技术作物分子特征解析提供了新的选择。分子特征是对生物技术作物在基因组上的改变及其产生的影响进行全面准确的描述。本研究以生物技术水稻作为实验材料,构建生物技术作物分子特征解析的数据分析体系。主要研究内容与结果如下:
  1、建立了生物技术作物分子特征解析的NGS分析方法。以抗虫水稻科丰2号为研究材料,利用NGS技术初步建立生物技术作物分子特征解析的数据分析体系。分析结果与hiTAIL-PCR方法获得的科丰2号水稻分子特征结果一致,证明了该分析体系的可行性及可靠性。同时,该分析体系提供了一种较为简单的分子特征解析策略,即只需利用NGS解析插入位点,采用PCR扩增获得插入位点处的外源DNA全长序列。对于外源DNA片段相对较短的情况,这种方法简单易行、适用性强。
  2、获得了T1C-19和T2A-1两种水稻的分子特征信息,并进一步完善了基于NGS的分子特征解析体系。针对两种材料外源片段结构的复杂性,采用了个性化分析的方式,通过测序数据的挖掘分析、外源片段拷贝数预测,获得了两种材料的分子特征:T1C-19水稻的外源插入片段为2个拷贝的T-DNA同向串联重复,采用PCR验证了此结构;T2A-1水稻ubiquitin基因部分序列反向互补,采用PacBio三代测序验证了此结构。因此,该分析体系提供了另一种分子特征解析策略,即利用NGS获得分子特征信息,利用PCR扩增、三代测序等进行验证,该解析策略对解决外源DNA串联重复问题提供了参考方法。此外,对于单株作物获得的测序数据,直接可以对其纯合及杂合状态进行判定,为生物技术作物的遗传选育、品种鉴定提供服务。
  综上,本论文的研究结果显示,基于NGS技术的生物技术作物分子特征解析体系,克服了传统分析方法的不足,对于生物技术作物的审批、监管、追溯和标识等方面具有重要意义,此外,也为生物技术作物成分检测技术的发展提供技术支持。
[专利] 发明专利 CN201711328797.8
摘要:本发明公开了用于转基因玉米抗虫蛋白Vip3Aa20的胶体金免疫层析速测卡及其使用方法,所述胶体金免疫层析速测卡包括卡壳和卡壳内的试纸条,所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫,所述金标垫包被抗虫蛋白Vip3Aa20单克隆抗体‑胶体金结合物,从而适用于转基因玉米及其产品中抗虫蛋白Vip3Aa20的现场快速检测以及安全性评价。
[专利] 发明专利 CN201711329696.2
摘要:本发明公开了定量检测转基因玉米中抗虫蛋白Vip3Aa20的酶联免疫试剂盒及其检测方法,所述酶联免疫试剂盒由包被捕获抗体的微孔反应板、样品处理液、生物素标记的检测抗体、标准品、辣根过氧化物酶标记的亲和素、生物素标记的抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液、终止液和板贴组成,从而具有操作简便、能同时快速检测大批样品,具有高灵敏度、高特异性的特点。
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