绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 6 条结果
摘要:[目的]建立羽毛降解杆状链霉菌(Streptomyces bacillaris)S-28的遗传转化系统,并对其进行优化,为该菌株的遗传改造奠定基础.[方法]以大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1/pSET152为供体,羽毛降解杆状链霉菌S-28孢子为受体进行接合转移试验,并对影响接合效率的培养基种类、MgCl2浓度、热激温度、预萌发时间、供受体比例和接合转移时间等要素进行优化.[结果]确定筛选羽毛降解杆状链霉菌S-28菌株接合转化子的抗生素为安普霉素≥10 μg/mL或卡那霉素≥20 μg/mL;成功将pSET152转入到杆状链霉菌S-28中.优化的S-28菌株接合转移条件为:以MS为接合转移最适培养基,MgCl2浓度为10mmol/L,孢子萌发条件为40℃热激10 min且不进行预萌发处理,供受体比例为10∶1,接合转移时间18~20 h,此条件下接合转化效率最高达到10-4.[结论]建立并优化了羽毛降解杆状链霉菌S-28的遗传转化系统,接合转化效率最高可达到10-4.
摘要:密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统.本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体时,在改良2CMY培养基上进行接合转移,孢子预萌发条件为50℃热激10 min,阿普霉素质量浓度为10.0 mg/L,覆盖时间为18h,转化效率达到2.079×10-5.以抗阿普霉素基因为目的基因,通过PCR验证,成功地将质粒pSET152转入到Act12中.同时,利用该转化系统,成功敲出Act12基因组中一可能的负调控转录因子spa0520,并获得了次级代谢图谱明显变化的缺失突变株Aspa0520.所构建的Act12遗传转化系统,为后续对其生防活性机理的研究以及深入开发利用奠定了基础.另外,通过培养基的改良发现,Act12在氮源含有NO3-时产孢丰富,为后续研究提供了思路.
摘要:[目的]筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础.[方法]采用梯度稀释法,以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选,筛选可高效降解羽毛的细菌.通过菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA序列分析,对菌株进行分类鉴定,并探讨其最适发酵条件.利用硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)对目的菌株进行诱变,确定最适诱变条件,并进行原生质体融合,通过基因组改组选育角蛋白酶高产菌株.[结果]分离筛选到1株具有较强羽毛降解能力的菌株ZJT01,该菌落圆形凸出,革兰氏染色呈阳性,酪素水解、硝酸盐利用、柠檬酸利用等生理生化试验均呈阳性.结合菌株16S rDNA同源序列比对分析,初步鉴定其为节杆菌(Arthrobacter sp.).菌株ZJT01产角蛋白酶的最适发酵温度和时间分别为32℃和72 h.其DES最适用量为9 μL/mL,诱变时间为20 min;NTG的最适合质量浓度是0.6 mg/mL,处理时间为15 min.原生质体制备的最佳条件为:溶菌酶终质量浓度10 mg/mL,酶解温度37℃,酶解0.5h.经过硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)分别诱变处理,获得角蛋白酶活性提高的菌株DES-2和NTG-2;对其进行3轮基因组改组后,筛选到2株角蛋白酶活性比亲本菌株ZJT01提高了5.48倍的重组菌株,且其产酶活性可稳定遗传.[结论]通过基因组改组技术获得了2株角蛋白酶活性大幅提高的菌株F3-5和F3-6,这2株菌对羽毛的降解效果较亲本菌株ZJT01明显提高,具有较好的应用前景.
摘要:通过生物信息学分析,在本实验室分离得到的1株羽毛高效降解菌微白黄链霉菌Fea-10基因组中发现基因gm2886 (GenBank Accession Number:KY368946)可能编码一新的角蛋白酶,通过在该基因5'端和3'端分别连接红霉素抗性基因启动子(PermE)和组氨酸标签编码序列并构建在大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pSET 152上,接合转入密旋链霉菌Streptomyces pactum ACT 12,从而实现了异源表达,蛋白纯化后对其酶学性质进行了研究.实验结果表明,带有组氨酸标签编码序列的gm2886在密旋链霉菌ACT12中可以表达分泌得到1个大小约为36 kDa的蛋白.多种底物检测表明异源表达得到的重组蛋白GM2886-His6具有蛋白酶活性,可以降解水不溶性的天青角蛋白和羽毛粉;其最适温度和pH分别为50℃和pH 10.0.PMSF可抑制GM2886-His6的酶活,而EDTA不能,说明该酶为丝氨酸蛋白酶.本研究为从分子水平上解析羽毛高效降解菌Fea-10的活性机理,从而进一步开发其应用潜力提供了基础,同时可为该类蛋白酶的研究提供借鉴.
摘要:[目的]对生防密旋链霉菌Act12中的四氢嘧啶合成基因簇进行鉴定及功能分析.[方法]对田间生防效果良好的密旋链霉菌Act12进行盐耐受能力检测,采用体积分数80%的乙醇抽提其胞内四氢嘧啶,分别通过TLC和HPLC进行定性及定量检测四氢嘧啶.通过Act12全基因组分析,克隆得到Act12中四氢嘧啶生物合成基因簇ectABC,将其与表达载体pET-28a连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,检测工程菌株的盐耐受能力.[结果]密旋链霉菌Act12可在NaCl质量分数为0%~10.0%的条件下生长,且能够生产相关耐盐相容性溶质四氢嘧啶.当NaCl质量分数为2.5%时,密旋链霉菌Act12胞内的四氢嘧啶积累量达到最大值,为72.39 mg/L.生物信息学分析结果表明,组成ectABC基因簇的3个基因ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,分别编码二氨基丁酸乙酰基转移酶、二氨基丁酸氨基转移酶和四氢嘧啶合成酶.通过克隆得到长2 408 bp的ectABC基因簇,并使其成功在大肠杆菌中实现异源表达,通过Ni柱纯化得到了EctA蛋白.但含pET28a-ectABC的大肠杆菌BL21(DE3)在本试验条件下,其盐耐受能力并无明显改善.[结论]生防链霉菌Act12中存在四氢嘧啶合成基因簇ectABC,且能够在大肠杆菌中成功异源表达.
[硕士论文] 舒伟学
微生物学 西北农林科技大学 2017(学位年度)
摘要:家禽养殖场和屠宰场每年会产生几万吨的羽毛废弃物,这些羽毛废弃物中含有丰富的且有价值的角蛋白和氨基酸,其主要成分是角蛋白。角蛋白巾含有丰富的二硫键,而使其在羽毛废弃物很难被降解。微生物降解羽毛角蛋白目前已经成为一个吸引人的方法,用于处理角蛋白废弃物。
  本试验从陕西省杨凌区崔西沟养鸡场采集了样本土样,在以羽毛为唯一碳氮源的培养基中,共分离出13株细菌。对分离的菌株进行16S rDNA PCR-RFLP分析,并对不同类群的代表菌株进行16S rDNA序列进行测定和降解能力的测定,最终获得1株对羽毛降解能力最强的菌株,该菌株能够能在7天内将10 g/L羽毛完全降解。通过形态学和分子生物学方法鉴定,该菌株与节杆菌G2-1T(Arthrobacter nitroguajacolicus G2-1T)相似度最高(100%),并结合生理生化,初步将该菌株鉴定为Arthrobacter sp.ZJT01。
  对菌株ZJT01产角蛋白酶的酶学性质进行了初步的研究,结果表明:菌株ZJT01最适发酵温度是30℃,最适发酵时间为3天;粗酶液的最适pH为8,最适温度是35℃;异丙醇、二甲基亚砜(DMSO)、CaCl2和KCl对角蛋白酶具有一定的抑制作用,MgCl2能够促进角蛋白酶的酶活。该角蛋白酶能够被PMSF抑制,所以该角蛋白酶属于丝氨酸类角蛋白酶。
  为提高其角蛋白酶的活性,我们通过基因组改组的方法来获得高产菌株。首先通过硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)诱变获得突变体库,然后通过原生质体融合使多亲本基因组发生重组,使角蛋白酶活性获得提高。
  通过DES和NTG对菌株ZJT01分别进行诱变,确定了最佳的诱变条件。DES最适浓度为9μL/mL,诱变时间为20 min,NTG的最适合浓度是0.6 mg/mL,处理时间为15min。然后对突变株进行筛筛选,经过三轮诱变后得到了5个突变株,其角蛋白酶活性都有所增加,其角蛋白酶活分别为13.4 U/mL、15.5 U/mL、14.2 U/mL、15.7 U/mL、13U/mL,相对原始菌株(10.6U/mL)提高了26.4%、46.2%、33.96%、48.1%、22.6%。
  通过单因素试验研究了原生质体制备的最适条件,结果表明:向菌悬液中加入10mg/mL溶菌酶,酶解温度在37℃条件下酶解处理30 min,原生质体形成率最高。以DES和NTG突变体为亲本库进行原生质体融合,通过筛选,三轮基因组改组后获得6个突变菌株,其中F3-5和F3-6角蛋白酶活较高,分别为68.3 U/mL和68.7 U/mL,和原始菌株相比提高到6.48倍。菌株传代5代后,菌株F3-5和F3-6遗传性稳定。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部