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摘要:目的:建立体外三维血管生成模型,观察肿瘤细胞分泌的单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)/血管内皮生长因子(VEGF)对该模型血管生成的影响.方法:分别将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)及小鼠内皮细胞 SVEC4-10EE2包被于磁珠表面,与纤维蛋白原混合后接种于含有凝血酶的细胞培养板中进行培养,包被在磁珠上的内皮细胞在含有纤维蛋白凝聚物的三维空间中生长成脉管样结构,以建立体外血管生成的三维模型.在模型中分别加入肿瘤细胞(人乳腺癌细胞 MDA-MB-231和小鼠髓样乳腺癌细胞E0771)共培养,观察肿瘤细胞在体外对血管生成的影响.用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测肿瘤细胞培养上清液中影响血管生成的 MCP-1 和 VEGF的浓度,并在内皮细胞-肿瘤细胞共培养体系中加入 MCP-1受体 C-C趋化因子受体2(CCR2)的拮抗剂以及 VEGF受体的抑制剂司马沙尼(SU5416).观察其对血管生成的影响.收集肿瘤细胞刺激后的肿瘤细胞培养上清液作为条件培养液,加入到内皮细胞 HUVECs或 SVEC4-10EE2单独培养的血管生成系统中,在加入或不加入 CCR2的拮抗剂以及SU5416的情况下分别观察其对血管生成的影响.结果:在不加入任何影响血管生成的物质时,内皮细胞 HUVECs和 SVEC4-10EE2均能在体外培养基中形成多细胞组成的脉管样结构,即建立起体外三维血管生成模型:加入肿瘤细胞(MDA-MB-231和E0771)共培养,可显著促进脉管样结构形成(P < 0.05).ELISA检测结果显示,肿瘤细胞上清液中 MCP-1 和 VEGF水平显著增高(P <0.05),MCP-1具有体外促进三维培养体系中脉管生成作用,而在加入MCP-1受体 CCR2的拮抗剂以及 VEGF受体的抑制剂 SU5416之后,可显著抑制血管形成(P <0.05).条件培养液可促进内皮细胞体外脉管生成,而这一作用可以被 CCR2的拮抗剂以及 SU5416阻断(P<0.05).结论:成功建立了体外三维血管生成模型,肿瘤细胞共培养可以显著促进内皮细胞脉管形成,机制可能与其分泌的 MCP-1 和VEGF有关....
摘要:目的:探讨慢性缺氧应激对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响及可能机制.方法:将人乳腺癌MCF-7细胞分为缺氧组(1%O2、5%CO2和94%N2)和正常对照组(常氧)进行培养.利用MTT法、CCK-8实验、细胞直接计数法及细胞侵袭和迁移实验对MCF-7细胞活力、增殖及侵袭和迁移能力进行检测;用软琼脂集落形成实验及Matrigel 3D培养技术检测MCF-7细胞非锚定生长能力及极性改变情况;利用MCF-7细胞构建裸鼠皮下种植瘤模型,检测慢性缺氧应激对体内肿瘤生长及肺转移的影响;利用倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;Western blot检测低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)和磷酸化的糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在缺氧环境下表达水平的改变,以及E-钙黏连蛋白(E-cadherin)、N-钙黏连蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、MMP-9等上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果:与正常对照组相比较,慢性缺氧组MCF-7细胞活力、增殖能力及侵袭迁移能力增强,细胞非锚定生长能力提高且在3D培养系统更容易发生极性改变,呈现侵袭样生长,体内生长及转移能力增强;除了HIF-1被缺氧诱导表达升高外,GSK-3β呈现活化趋势,且上皮样标志物E-cadherin蛋白表达水平明显下降,而间充质样标志物N-cadherin、vimentin、MMP-3和MMP-9蛋白表达水平明显升高.结论:慢性缺氧应激促进了乳腺癌细胞恶性生物学行为,且其机制可能与EMT有关....
摘要:目的建立二乙基亚硝胺(diethylinitrosamine,DEN)诱导大鼠肝纤维化-肝癌模型,检测肝组织中磷酸化Smad3连接区(linker-phosphorylated Smad3)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)蛋白的表达.方法♂ SD 大鼠50只随机分为DEN 组和正常对照组, DEN组给予0畅2%DEN溶液灌胃,每周5次至14周.对照组给予溶媒.分别于4、8、12、16周结束时处死动物.进行肝组织苏木精-伊红(HE)染色和Van Gieson(VG)胶原纤维染色;分别采用免疫组化法和Western blot 法检测肝组织中pSmad3L及PAI-1蛋白的表达.结果对照组肝组织结构正常,DEN组4周时,肝细胞点状坏死及炎性细胞浸润;8周时,肝细胞严重脂肪变性、灶性坏死,门管区出现纤维组织增生;12周时,增生的胶原束包绕并分割肝小叶,正常的肝小叶结构被破坏,假小叶形成;到16周结束时,剩余存活大鼠均形成肝癌,肝癌细胞排列成条索状或团块状,异型性明显.免疫组化结果显示,pSmad3L和PAI-1在正常肝组织中几乎无表达,DEN组4周时肝组织中有少量阳性表达,8周和12周表达量逐渐增强,到16周时达到高峰,尤其是在肿...
摘要:目的:明确乳腺恶性肌上皮瘤的诊断.方法:采用苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色,对病变组织进行观察.结果:瘤细胞S-100蛋白、p63、细胞角蛋白、上皮膜抗原、平滑肌肌动蛋白、波形蛋白均阳性.结论:乳腺恶性肌上皮瘤临床表现不具有特异性,在组织学的基础上结合免疫组织化学等其它检查可以确诊....
摘要:目的:观察黄芪总苷(astragalosides, AST)对血吸虫虫卵抗原(soluble egg antigen, SEA)活化的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφs)TNFα mRNA表达及上清液中TNFα分泌的影响.方法:采用RT-PCR技术及放射免疫法检测在SEA(10 mg/L)的刺激下,AST与大鼠腹腔巨噬细胞共育6 h时,TNFα mRNA表达水平及上清液中TNFα分泌水平.结果:黄芪总苷(10,20 mg/L)能明显降低SEA(10 mg/L)刺激的大鼠PMφs中TNFα mRNA表达及上清液中TNFα分泌水平(P《0.05),且呈药物浓度依赖性趋势.结论:AST对SEA刺激引发的大鼠PMφs TNFα mRNA表达及分泌有明显的抑制作用....
[期刊论文] 胡敏 李锋 沈继龙
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北大核心 CSTPCD CA
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摘要:目的制备抗人脑14-3-3 zeta蛋白(31 ku)的多克隆抗体与单克隆抗体,为神经系统退行性疾病的诊断提供标志物.方法用纯化的rh14-3-3zeta蛋白免疫家兔,制备抗14-3-3多克隆抗血清;电洗脱、透析纯化rh 14-3-3/β-半乳糖苷酶融合蛋白,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗rh 14-3-3 zeta单克隆抗体;测定所得抗体效价及其特异性反应.结果得到大量纯化的表达产物;制备的多克隆抗血清双扩效价达1:8~1:64;获得 1株能稳定分泌抗rh 14-3-3 zeta单抗的杂交瘤细胞株,其亚型为IgG1型,该株单抗可与重组14-3-3蛋白发生特异性反应.结论获得了敏感、特异的抗rh 14-3-3 zeta多克隆抗血清及稳定分泌抗rh 14-3-3 zeta单抗的杂交瘤细胞株,为神经系统退行性疾病提供诊断标记....
[期刊论文] 李锋 胡敏 沈继龙
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北大核心 CSTPCD CSCD CBST
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摘要:目的制备日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白Sj14-3-3的多克隆抗体与单克隆抗体.方法将含Sj14-3-3重组蛋白的凝胶条带冻干磨粉,免疫家兔,制备抗Sj14-3-3多克隆抗血请;用电洗脱纯化的Sj14-3-3免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗Sj14-3-3单克隆抗体.测定所得抗体效价及特异性鉴定.结果获得大量纯化的表达产物;制备的多克隆抗血清双扩效价达1:8~1:64.获得1株能稳定分泌抗Sj14-3-3单抗的杂交瘤细胞株4D9,单抗亚类为IgG1.此株单抗能与重组Sj14-3-3蛋白发生特异性反应.结论获得了高度敏感、特异的抗Sj14-3-3多克隆抗血清及稳定分泌抗Sj14-3-3单抗的杂交瘤细胞....
摘要:14-3-3是一组主要存在于真核生物细胞中的信号转导蛋白,近年来研究发现脑脊液中14-3-3蛋白可作为一种敏感性及特异性的生物标记用于克雅氏病(Creutzfeldt-Jaob disease,CJD)等神经系统疾病的辅助诊断....
摘要:采用现场职业卫生学调查和采样检测相结合的方法对某企业职业病危害现状进行调查分析。结果显示,该企业主要的职业病危害因素有:苯乙烯、乙二醇、苯酐、顺酐、过氧化苯甲酰、二甲基苯胺、石灰石粉尘、煤尘、气相二氧化硅和噪声等。检测发现生产车间噪声强度合格率仅为60.0%,在岗期间职业健康检查发现8人存在岗位相关性异常。该企业应根据上述职业病危害因素应着重改善工作环境,加强防护,控制职业病危害因素的强度(浓度),防止职业病的发生。...
[期刊论文] 胡敏 吕强 刘惠亮 於四军
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 研究急性主动脉夹层(AAD)患者临床特点及院内死亡危险因素,建立风险预测模型.方法 回顾分析2004年1月至2016年5月武警总医院住院治疗的AAD患者病史资料,应用单因素及多因素Logistic回归分析确定患者院内死亡的独立危险因素,建立风险预测模型,并通过Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和受试者工作特征(ROC)曲线下面积判断该模型对AAD患者院内死亡的预测能力.结果 所有196例AAD患者中36例患者住院期间死亡,院内死亡率为18.4%.多因素Logistic回归分析显示,AAD院内死亡的独立危险因素包括:年龄≥65岁(OR=4.57,P=0.010),低血压(OR=9.58,P=0.001),急性肾损伤(OR=11.42,P=0.001),缺血性并发症(OR=6.35,P=0.001),神经系统症状(OR-7.60,P=0.020),A型夹层(OR=7.59,P=0.001),Hosmer-Lemeshow拟合优度检验P=0.18,ROC曲线下面积为0.92.结论 年龄≥65岁、低血压、急性肾损伤、缺血性并发症、神经系统症状及A型夹层为AAD患者院内死亡的独立危险因素....
摘要:总结了糖尿病足的中药足浴治疗与护理,主要包括中医对糖尿病的认识、中医药治疗糖尿病足的原则、中药方剂的选择、足浴的实施与护理. 认为通过足浴时热、药的双重作用,促进血液循环,扩张血管,改善周围组织营养,激发机体自身调节功能,值得在临床推广使用....
摘要:目的:探讨用Fastin带线锚钉治疗膝关节内侧副韧带断裂的临床效果.方法:对近期我院收治的26例膝关节内侧副韧带断裂患者的临床资料进行回顾性研究.这些患者入院后,对其均使用Fastin带线锚钉进行手术治疗.治疗结束后,对这些患者均进行随访,观察其进行治疗的效果.结果:进行随访的结果显示,在这26例患者中,有24例患者患肢的膝关节稳定,无压痛,可以进行正常的生活及工作.这26例患者均未出现锚钉松动、脱落的情况,其患肢膝关节的间隙对称.进行手术后,这26例患者Lysholm膝关节的平均评分明显高于进行手术前的水平,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:用Fastin带线锚钉治疗膝关节内侧副韧带断裂的效果显著.此治疗方法值得在临床上推广应用....
摘要:目的:对儿童锁骨远端损伤的诊断、分型及治疗进行探讨.方法:回顾性分析报道收治2例儿童锁骨远端损伤治疗结果.结果:患者随访肩部外观无畸形,肩关节活动良好.结论:儿童锁骨远端损伤表现类似于成人的肩锁关节脱位,但其创伤机制、解剖学改变、治疗方式均有所不同,临床需与成人肩锁关节真性脱位区别,方能进行相目应的治疗....
摘要:目的探讨开放性跟骨骨折临床治疗方法。方法回顾分析2010年8月~2015年6月收治开放性跟骨骨折9例10足临床治疗资料。结果本组9例患者术后随访12~18个月,平均14个月。跟骨骨折均愈合,按Maryland评分,优2足,良6足,可2足,优良率60%,其中1足发生慢性骨髓炎,经治疗后治愈,2例皮肤撕脱伤术后出现皮肤坏死缺损,二期手术以腓肠神经营养皮瓣转移覆盖消灭创面。4例待伤口愈合后,行骨折切开复位外侧支撑钢板内固定植骨术。结论开放性跟骨骨折处理较为棘手,预后较差,治疗上应重视首次清创的重要性,和对局部软组织的保护。...
[硕士论文] 胡敏
内科学(心血管) 安徽医科大学 2017(学位年度)
摘要:背景及目的:褪黑素(melatonin,MEL)及其代谢产物具有很强的自由基清除能力,在哺乳动物各组织器官的缺血再灌注损伤过程中具备潜在的治疗作用。挤压综合征(crush syndrome,CS)是指各种重力创伤使肢体骨骼肌遭受持续性挤压,当这种持续性挤压解除后相应肢体骨骼肌出现的缺血及再灌注损伤,并引起横纹肌溶解、高钾血症、代谢性酸中毒、急性肾损伤等临床症状。挤压综合征多发生在战争灾害、恐怖袭击、地震、山体滑坡等灾害性事件中。缺血再灌注损伤是挤压综合征病理生理改变的使动环节。缺血再灌注过程中大量形成的氧自由基、炎症因子释放不仅影响局部组织活性及功能,还会引起全身炎症反应综合征(Systemic inflammation reaction syndrome,SIRS),因而会继发心脏、肾脏、肺等远隔器官的损伤。该实验应用止血带挤压大鼠双下肢构建挤压综合动物模型,通过外源性褪黑素干预处理,一方面观察其对挤压综合征模型大鼠酸碱平衡紊乱、氧化应激损伤、横纹肌溶解及存活率等方面的影响,另一方面观察其对动物模型心肌酶、心肌氧化应激损伤、炎性细胞因子、心肌损伤病理改变等的影响。实验分为两部分,一、褪黑素对挤压综合征动物模型骨骼肌缺血再灌注损伤疗效评估。二、褪黑素对挤压综合征动物模型继发心肌损伤的保护作用。
  方法:第一部分:将 Isamu Murata等挤压综合征造模方法加以利用改进,利用5%的戊巴比妥钠溶液以50mg/kg剂量腹腔麻醉大鼠,利用卡式止血带挤压大鼠后肢根部,止血带拉力等同于3kg重物的压力,5小时后撤除止血带恢复挤压肢体血流灌注。将wistar雄性大鼠按照保证在再灌注6小时后各组存活10只造模大鼠的原则,随机分为四组:空白组(SHAM组)、模型组(CS组)、扩容组(NS组)及褪黑素组(MEL组),检测大鼠后肢再灌注6小时血清中钾离子(K+)、肌酸激酶同工酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)含量,再灌注6小时检查动脉血气,同时观察各组大鼠腓肠肌光镜下苏木精伊红(Hematoxylin eosin,HE)染色病理改变;另外将81只大鼠分为SHAM组(n=10)、CS组(n=30)、NS组(n=25)、MEL组(n=16),观察再灌注48小时各组大鼠死亡的时间点以进行生存曲线分析。第二部分:根据第一部分造模及分组方法,同样以保证在再灌注12小时后存活10只造模大鼠的原则,将雄性wistar大鼠随机分为四组:SHAM组、CS组、NS组及MEL组,检测各组大鼠后肢再灌注12小时血清肌钙蛋白I(TnI),肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶、丙二醛水平,炎性细胞因子 TNF-α、IL-1β水平,观察各组大鼠心肌组织光镜下HE染色病理改变。
  结果:再灌注6小时,CS组动脉血气提示明显的代谢性酸中毒,而MEL组酸碱平衡紊乱较CS组明显改善。与SHAM组比较,CS组血清中K+、CK、LDH的含量显著上升,GSH-Px、SOD、CAT的活性显著升高;与CS组比较,MEL组血清中CK、LDH、K+的含量显著降低,GSH-Px、SOD、CAT的活性显著下降。CS组中血清中MDA的含量较SHAM组显著升高;而MEL组血清中MDA含量较CS组显著降低。SHAM组腓肠肌纤维间未见水肿及炎症细胞浸润,肌肉纤维正常分布;CS组、NS组腓肠肌纤维间质水肿明显,肌纤维结构严重破坏,骨骼肌横纹紊乱;MEL组肌肉纤维间可见轻度水肿,纤维组织稍紊乱,其形态结构明显好于CS组与NS组。SHAM组大鼠的生存率为100%,CS组大鼠的生存率为20%,NS组大鼠的生存率29.2%,MEL组大鼠的生存率为56.3%。
  再灌注12小时,CS组血清中TnI,CK-MB含量显著升高,褪黑素干预后的MEL组血清中TnI,CK-MB较CS组明显降低;CS组血清及心肌SOD活性较SHAM组显著降低,血清及心肌MDA、TNF-α、IL-1β水平显著升高,MEL组血清及心肌SOD活性较CS组显著升高,血清及心肌MDA、TNF-α、IL-1β水平显著降低。通过HE染色评估心肌损伤病理改变,SHAM组心肌细胞结构完整、心肌横纹清晰可见;CS组心肌坏死和炎性细胞浸润明显,心肌横纹消失;MEL组心肌组织损伤较CS有所减轻。
  结论:利用卡式止血带能成功建立挤压综合征动物模型,在下肢恢复血流灌注前利用褪黑素早期干预,对挤压综合征模型骨骼肌缺血再灌注损伤具有保护作用;褪黑素能有效的抑制缺血再灌注过程中氧化应激损伤,减轻横纹肌溶解;并能提高挤压综合征模型大鼠生存率,改善缺血再灌注腓肠肌损伤。同时挤压综合征模型能引起心肌损伤,褪黑素通过其对心肌酶、内源性抗氧化酶活性、炎性细胞因子、心肌组织的改变发挥对心肌组织的保护作用,减轻挤压综合征模型的心肌损伤。
摘要:在疾病治疗的同时,营养支持治疗被视为基础治疗方法之一.临床营养支持有肠内与肠外两大类,肠内营养的最大优点是有食物通过肠道,有助于改善门静脉系统循环,改进腔肠的功能,特别是肠道的血液灌注与氧的供给,促进肠蠕动,促进肠道激素与免疫蛋白的释放,利于肠黏膜的渗透性,维护肠黏膜屏障功能,减少多器官功能障碍综合征(MODS)的发生.并且肠内营养治疗过程中的并发症相对于肠外营养较少,故其广泛运用于烧伤患者营养支持治疗中....
摘要:目的 探讨孕妇焦虑抑郁症的发生现状及其相关危险因素,并提出预防对策.方法 随机抽取2010年1-12月在宿州市妇幼卫生保健所门诊进行产前检查的孕妇进行问卷调查,采用焦虑自评量表(self-rating anxiety scales,SAS)、抑郁自评量表(self-rating depression scales,SDS)衡量孕妇焦虑及抑郁状况.应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析.结果 被调查的292名孕妇中具有焦虑症状的64例,占21.9%.其中轻度45例(70.3%),中度17例(26.6%),重度2例(3.1%);孕妇具有抑郁症状的61例,占20.9%,其中轻度46例(75.4%),中度15例(24.6%).孕妇同时具有焦虑和抑郁症状的40例,占13.7%.通过多因素logistic回归分析结果显示,在控制孕妇年龄、文化程度、家庭收入和户籍等混杂因素后,孕妇焦虑相关的主要危险因素为人工流产史(OR =5.372)、未进行产前检查(OR =6.674);孕妇抑郁相关的危险因素为孕期服用药物(OR =2.905).结论 孕妇存在明显的焦虑和抑郁负性情绪,以轻、中度为主.应对孕妇进行心理保健、咨询、指导,加强孕产期健康教育,疏导孕妇心理压力.对孕产妇的心理支持应提前到孕期乃至孕前,提高孕妇身心健康....
[博士论文] 胡敏
药理学 安徽医科大学 2014(学位年度)
摘要:引言:Keap1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1)和转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor2,Nrf2)形成一个Keap1/Nrf2信号通路,使细胞能够抵御一系列内在的和外来的损害。在生理状态下,细胞质内的Keap1通过一个含有E3的Cul3泛素连接酶的泛素连接作用与Nrf2相结合,使Nrf2作为目标被蛋白体酶所降解。当氧化应激反应出现时,Keap1作为一个氧化还原反应的传感器,它末端敏感的半胱氨酸残基被氧化还原反应产生的高效分子(比如亲电子试剂)所修饰,导致其构象发生变化,从而使Nrf2从泛素结合区脱落,进入细胞核内,与它的配体蛋白(如小Maf蛋白)形成异二聚体,依次转录激活一组基因,编码细胞保护分子,包括解毒酶、谷胱甘肽合成酶、抗氧化蛋白等。这些分子共同对抗氧化应激反应,使细胞的内稳态得以恢复。随后,Keap1转位进入细胞核内,与Nrf2一起出核并使Nrf2在胞浆内持续被蛋白酶降解,Nrf2水平下降,激活终止。此外,Keap1能够和其它蛋白之间产生相互作用,Nrf2的活性也能够在转录水平或者通过磷酸化而被调控,这提示它们在不同的生物学和病理学过程中具有独立的功能和作用。
  有报道指出,Nrf2缺失可使再生的肝脏由于氧化应激介导的胰岛素/类胰岛素生长因子抵抗和Notch1信号减弱而引起损伤。这些少量的研究指出Nrf2参与了肝再生过程中肝细胞增殖的调节。然而Keap1/Nrf2信号通路是怎样调控肝细胞增殖的过程目前并不清楚,也没有相关系统研究的报道。
  目的:我们研究的目的是进一步深入探讨Keap1/Nrf2信号通路在肝再生过程中的作用,特别是要明确Keap1/ Nrf2通路是否参与肝再生过程中复制肝细胞的细胞周期进程,以及如果参与其中,是通过怎样的方式进行调控。
  方法:利用Keap1+/+和Keap1+/-小鼠,以及Nrf2+/+和Nrf2-/-小鼠进行2/3肝部分切除术(partial hepatectomy,PH),并且在手术后多个时间点利用免疫组织化学、免疫荧光、qRT-PCR、Western blotting等方法,对肝细胞增殖、细胞周期蛋白、促有丝分裂信号分子的功能状态、肝氧化还原状态等方面进行评估。
  结果:Keap1基因单等位体敲除可以引起复制的肝细胞进入 S期延迟,进而扰乱S期进程,以及有丝分裂的节律性丧失,但并不会对肝脏切除术后整体的肝细胞再生过程产生影响。这些现象的产生是由于Keap1基因单等位体敲除导致再生肝脏c-Met和EGFR的磷酸化减少,Akt1和p70SP6K活性异常调节,以及CyclinA2、CyclinB1表达异常引起。令人惊讶的是,我们发现在 PH后肝细胞复制的第一个回合内,Keap1+/+小鼠再生肝脏在G1/S期交界处展现出一个非常明显的氧化还原反应起伏波型,随后在S期出现两个附加的逐渐减弱的波型,同时Nrf2并没有被激活。Keap1基因单等位体敲除引起肝细胞氧化还原反应的严重破坏以及再生肝脏肝细胞周期的异常调节,这两者密切相关。
  虽然在PH术后7天缺损的肝组织最终可以被修复,但是Nrf2-/-小鼠的肝脏再生表现迟缓。在 PH术后肝细胞复制的第一个波型内,Nrf2缺乏造成肝再生过程中过多的Cyclin A2蛋白积聚以及Wee1/Cdc2/Cyclin B1通路的异常调节,从而引起肝细胞有丝分裂的延迟。值得注意的是,在PH后60 h,绝大多数缺乏Nrf2的肝细胞明显变小,肝细胞祖细胞标记物(CD133,TWEAK受体和trefoil家族蛋白3)被激活,使一组对它们功能起关键作用的基因表达下降,这些变化伴随着p70S6K的灭活。因此,缺乏Nrf2表达的肝细胞经历了暂时而广泛的去分化,作为对肝组织缺失的反应。
  结论:我们证实了Keap1/Nrf2信号通路在肝再生过程中具有非常重要的调节作用。在肝细胞再生过程中,Keap1表达精密的调控肝细胞的增殖,使细胞能够顺利的进入并通过S期,展现出有丝分裂的节律。Nrf2对于复制的肝细胞及时地进入M期以及对新生的肝细胞保持分化状态是所必需的。
[硕士论文] 胡敏
病理学与病理生理学 安徽医科大学 2007(学位年度)
摘要:血吸虫病是一种在热带或亚热带国家和地区广泛传播并严重危害人类健康的寄生虫病,肝纤维化是其严重的病变后果。纤维化的形成是通过巨噬细胞、淋巴细胞、纤维细胞和其它细胞产生的细胞因子动态调节的过程<'[1,2]>。TNF-a 作为重要的炎症介质可直接参与肝纤维化中的关键细胞肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化,促进其增殖。黄芪总苷(astrogalosides,AST)是黄芪抗肝纤维化的主要成份,研究已证实AST具有显著的抗炎和抗肝纤维化等作用。本文观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)体外刺激巨噬细胞后,TNF-a表达和分泌的改变以及SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(soluble egg antigeninduced macrophage conditioned medium,SEA-MCM)对 HSC 增殖刺激胶原合成的影响,并在此基础上,观察AST对其的作用。 1SEA诱导大鼠腹腔巨噬细胞活化和TNF-α表达及AST对其影响制各 SEA(0.17g·L<'-1>),采用HE染色、免疫细胞化学染色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及放射免疫法,观察在SEA(10 mg/L)的刺激下,AST与大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PMΦ)在体外共育3h、6h和9h后,大鼠PMΦs形态改变及对TNF-a表达的影响。结果显示:(1)SEA(10 mg/L)作用3h、6h和9h 可明显刺激 PMF 活化和增加TNF-a的表达;(2)AST(10,20 mg/L)能明显降低SEA(10 mg/L)刺激的 PMF TNF-a 的表达。提示SEA体外可以活化PMF,使其增加TNF-a的表达,AST可抑制这种TNF-a的表达。 2.SEA-MCM诱导HSC活化及AST对其抑制作用大鼠腹腔注射 SEA(0.17mg·ml<'-1>,0.2ml/只),制备SEA-MCM。利用肝星状细胞株HSC-T6细胞,采用MTT和<'3>H-脯氨酸掺入法,观察SEA-MCM诱导HSC-T6细胞增殖和胶原合成的作用及AST对其影响。结果显示:(1)不同稀释度的SEA-MCM(终稀释比1∶2、1∶4、1∶8、1∶16)均可明显促进HSC-T6细胞增殖和胶原合成;(2)AST(10和20 mg/L)呈浓度依赖性抑制SEA-MCM(1∶4)刺激的HSC-T6细胞增殖和胶原合成。表明SEA可以通过活化的巨噬细胞促进HSC增殖和胶原合成,这种作用可被AST抑制。 3.抗TNF-α抗体对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖和胶原合成影响在SEA-MCM(1∶4)中加入不同稀释度TNF-a抗体,采用MTT、免疫印记(Western blotting)和放射免疫法检测SEA-MCM对HSC-T6细胞增殖和胶原合成的作用。 结果显示:TNF-a抗体(1∶100和1∶200)均可明显抑制SEA-MCM对HSC-T6细胞的增殖和胶原合成作用,且呈浓度依赖性趋势。表明SEA通过巨噬细胞分泌TNF-a 促进 HSC 的增殖和产牛胶原可能是日本血吸虫性肝纤维化的重要机制之一。
[硕士论文] 胡敏
病原生物学 安徽医科大学 2003(学位年度)
摘要:目的 制备抗人类神经元信号蛋白14-3-3zeta的多克隆抗体与单克隆抗体,为细胞信号传导及神经系统退行性疾病的诊断提供标志物.方法用纯化的重组人脑14-3-3信号蛋白(rh14-3-3 zeta)免疫家兔,制备抗rh14-3-3 zeta多克隆抗血清,以免疫双扩散法测定血清抗体效价,并以盐析法对多克隆抗血清进行初步纯化;电洗脱、透析纯化rh14-3-3zeta蛋白,免疫BALB/c小鼠3-4次后,取致敏的脾细胞和HGPRT-SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中选择培养,间接ELISA法筛选阳性克隆,挑取分泌抗体的杂交瘤细胞株;用有限稀释法进行亚克隆,再用间接ELISA筛选,Western-blot进行鉴定,最终获得抗rh14-3-3zeta的阳性杂交瘤细胞株F7株;将细胞株注入小鼠腹腔,得到小鼠腹水后,经盐析法初步纯化该单克隆抗体;测定所得抗体效价及其特异性反应.结果获得大量纯化的rh14-3-3zeta表达产物;制备的多克隆抗血清双向免疫扩散效价达1:8~1:64;获得一株能稳定分泌抗rh14-3-3zeta单抗的杂交瘤细胞株,其亚型为IgG1型,腹水效价达到1x10<'6>.该株单抗经Western-blot等鉴定可与rh14-3-3zeta蛋白发生特异性反应.结论获得了敏感、特异的抗rh14-3-3zeta多克隆抗血清及稳定分泌抗rh14-3-3zeta单抗的杂交瘤细胞株,为细胞信号转导及神经系统退行性疾病的诊断提供分子标记.
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