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中山大学
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[硕士论文] 肖茹
药理学 中山大学 2004(学位年度)
摘要:为探索Nor-1在神经元中的功能及作用机制,我们首先必须明确其在神经元损伤过程中蛋白表达的情况,因此作为工具抗NOR-1抗体的制备是必须的.为此,我们运用原核基因融合表达系统表达Nor-1的部分蛋白,以此作为抗原制备抗NOR-1多克隆抗体;使用这种抗体检测Nor-1在小脑颗粒神经元低钾诱导的凋亡模型及缺氧模型中蛋白的表达情况,并在模型中给予forskolin、MK801和海洋甾体YC-1这些神经元保护药物,观察Nor-1的表达与神经保护及与神经元存活的关系.我们发现,这些药物在神经元损伤模型中促神经元存活的同时,诱导Nor-1蛋白的表达上调,提示Nor-1可能参与这些药物促神经元存活作用的信号转递.这些药物的神经元保护作用机制的研究已经较为深入,而我们的实验为这些药物的神经保护机制的研究提供了新的线索和思路.抗NOR-1多克隆抗体的获得为Nor-1的生物学功能研究奠定了良好的基础.作为新的促神经元存活的基因,明确Nor-1在小脑颗粒神经元损伤模型中蛋白表达的情况为探索新的神经元保护信号转导通路打下基础.第一章大鼠Nor-1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备选取Nor-1中能表达较好特异性及免疫原性蛋白的一段基因,构建其原核表达系统,在大肠杆菌中高效表达GST-NOR-1融合蛋白并以此制备抗NOR-1的特异性抗体.第二章Nor-1在小脑颗粒神经元损伤模型中表达的研究利用制备的抗NOR-1多克隆抗体探讨Nor-1在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡模型及小脑颗粒神经元缺氧模型中的表达情况,分别加入forskolin,NMDA受体抑制剂MK801,及海洋甾体化合物YC-1等药物处理,观察药物对模型中Nor-1表达的影响.
摘要:目的观察胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1, IGF-1)对苯妥英(100 μmol·L-1)处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granular neurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系.方法体外培养8 d的小脑颗粒神经元,同时给予100 μmol·L-1苯妥英和1 μmol·L-1 IGF-1,48 h后行凋亡分析,观察 IGF-1对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的保护作用;采用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002(50 μmol·L-1)预先与小脑颗粒神经元孵育30 min,再加1 μmol·L-1 IGF-1和100 μmol·L-1苯妥英共孵育48 h,测定神经元存活率,观察 IGF-1与PI3K/Akt通路的关系;Western blot法检测苯妥因处理不同时间小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平及总Akt的表达量,并观察 IGF-1对磷酸化Akt水平的影响,进一步探讨 IGF-1的作用是否经PI3K/Akt通路.结果①1 μmol·L-1 IGF-1可明显抑制100 μmol·L-1苯妥英引起的小脑颗粒神经元的凋亡,明显提高小脑颗粒神经元的存活率,使其凋亡特征消失.②PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002可取消 IGF-1的保护作用.③苯妥英使小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平明显降低,但不影响总Akt表达量.④IGF-1可明显恢复被苯妥英抑制的磷酸化Akt的水平.结论 IGF-1保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡,这种保护作用经PI3K/Akt通路依赖性机制,可能与恢复Akt的活性有关....
摘要:目的 探讨磁共振propeller LAVA和MR胰胆管成像(MRCP)对原位肝移植术后移植肝及其血管、胆管并发症、门静脉高压血液动力学变化的诊断价值.资料与方法 11例原位肝移植术后患者均用MRI常规序列扫描(Fiesta、Dual-Echo、FSPGR,FS FSE RT,DWI)及propeller LAVA薄层动态增强、MRCP检查,利用图像工作站对MRCP及propeller LAVA原始图像进行多平面重组(MPR),最大密度投影(MIP)等图像后处理.结果 (1)移植肝:肝实质动脉期异常灌注5例;肝淋巴回流受阻3例,肝局灶性坏死、肝包膜下少许积血、炎性病变、胆汁瘤形成各1例;(2)血管并发症:肝动脉吻合口狭窄3例,肝动脉略迂曲2例,移植动脉迂曲、节段性管腔狭窄2例,移植血管、门静脉吻合口狭窄各1例;(3)门静脉高压血流动力学变化:脾大5例,肝脾包膜下少量积液3例,合并脾包膜下灶性梗死1例,脾静脉、食管胃底静脉轻度曲张4例,脾肾分流1例,胃-肾静脉分流1例;(4)胆管并发症:缺血性胆管炎4例,胆总管吻合口狭窄7例,合并肝内胆管炎6例,胆囊管残端囊性扩张3例,胆总管多发小结石1例.结论 结合常规MRI,propeller LAVA和MRCP作为无创性"一站式"影像检查方法,在肝移植术后临床诊断及治疗方案的制定中具有重要价值....
摘要:目的: 生物信息学分析与脑缺氧密切相关的新蛋白质YZ-2, 以及制备其多克隆抗体.方法: 根据生物信息学分析预测出YZ-2蛋白质的二级结构、亲水性、抗原性等理化特性, 以这些分析预测为依据, 经过同源性检索后设计出一段由22个氨基酸组成的多肽, 免疫家兔得到多克隆抗体, 并用ELISA、 Western blot等方法鉴定其特异性和滴度.结果: ①成功分析预测其抗原性和亲水性;②制备了抗YZ-2蛋白多克隆抗体;③以此多克隆抗体经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹, 检测YZ-2蛋白的表达, 证实此抗体效价较高、特异性强.结论: 利用生物信息学较好地预测出YZ-2的亲水性和抗原性, 并成功制备了其较高特异性的多克隆抗体....
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北大核心 CSTPCD CBST
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摘要:目的 探讨肝移植术后巨细胞病毒(CMV)肺炎的高分辨率CT(HRCT)表现,提高对其认识水平.方法 回顾性分析11例肝移植术后CMV肺炎的HRCT表现.结果 毛玻璃影10例,多发结节8例,斑片状实变影4例.所有病例见到多种形态病灶共同存在:毛玻璃影与多发结节4例,毛玻璃影与实变影3例,实变影与多发结节1例,毛玻璃影、实变影与多发结节三者共同存在3例.所有病变均累及双肺,9例病灶分布于肺内外带,仅分布于外带和内带各3例.病变累及下叶11例,累及中叶与上叶分别为10例、9例.4例胸膜增厚,3例少量胸腔积液和1例少量心包积液.所有病例均未见到肺门及纵隔肿大淋巴结.结论 肝移植术后CMV肺炎的HRCT表现主要为双肺混合存在的毛玻璃影、多发结节及斑片实变影,这些征象可作为诊断肝移植术后CMV肺炎的重要依据....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CBST SA
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摘要:目的 探讨移植术后肝实质缺血性损伤的多层CT表现及CT诊断价值.方法 多层CT检查发现43例肝动脉或门静脉狭窄或血栓,其中23例接受血管造影(DSA)检查,17例经病理组织学或随访复查诊断肝实质缺血或梗死.分析肝实质缺血或梗死的CT表现;并以DSA为对照分析CTA的病因学诊断价值.结果 所有肝实质缺血或梗死区位于肝包膜下,平扫呈片状或楔形低密度灶,增强后缺血区强化减低,梗死区不强化,相应部位肝动脉或门静脉分支稀少、纤细或不强化.所有肝实质缺血或梗死患者CTA均发现不同程度血管病变,其中肝动脉病变占70.59%,门静脉病变5.88%,肝动脉合并门静脉病变23.53%,缺血性损伤分布与血管病变部位有关.以DSA为对照,CTA诊断肝动脉主干及门静脉狭窄和血栓的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值均为100%;诊断肝动脉分支病变上述值分别为100%、80.00%、72.73%、100%.结论 多层CT动态增强结合CTA不仅能正确诊断移植肝缺血性损伤,还能准确评价导致移植肝缺血的血管病变,肝动脉病变为移植肝缺血性损伤的主要原因....
摘要:目的 探讨门脉系统血栓及其继发性病变的多层CT表现.方法 回顾性分析经手术病理证实或经临床综合诊断的37例门脉系统血栓患者的多层CT表现,分析门脉血栓及肝内外继发性病变的CT表现特征,并与50例经病理证实的肝癌门脉癌栓做对照.结果 门脉血栓的直接征象:除3例机化性血栓外,其余34例血栓边缘光滑、界限清楚、形态规则,局部门脉管壁见线样强化征,而所有癌栓未见线样强化征;动脉期血栓平均强化(9.32±5.32)Hu,与癌栓(43.08±14.05)Hu比较具有显著性差异(t=15.59, P<0.01);动脉期所有血栓未见强化血管影,而19/50例癌栓见肿瘤滋养动脉影;此外,癌栓更易导致管腔完全性阻塞(癌栓组100%,血栓组32.43%)和门静脉管腔显著扩张(癌栓组68.00%,血栓组8.11%).门脉血栓继发性病变包括:①肝实质缺血4例;②肝动脉灌注增加14例:门脉主干栓塞者以外周带为主(9/10),分支栓塞者按肝叶或肝段分布(4/4);③门脉海绵样变7例:④肠壁淤血水肿4例;⑤脾脏淤血性损伤4例.结论 多层CT对诊断门脉系统血栓具有特征性,能与癌栓鉴别,并进一步反映肝内外继发性病变,对临床制定治疗方案具有重要意义....
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