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北大核心 CSTPCD CA
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摘要:建立了一种利用反相高效液相色谱法检测18种氨基酸的方法.以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生剂,使用TIANHE Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)反相色谱柱,采用二元梯度洗脱,流动相A相为0.05mM醋酸钠缓冲液(pH5.3),B相为乙腈-水(v/v=1∶1).在该条件下,各氨基酸线性回归方程相关系数均大于0.9991,18种氨基酸的加样回收率均在95%~103%范围内,该法快速、可靠,并将其应用于丙酸菌发酵液中的氨基酸检测....
摘要:氨基酸分析技术在生命科学、食品科学、临床医学等领域研究中都起着至关重要的作用.近年来,人们越来越重视氨基酸分析方法的革新和改进,氨基酸分析的速度、灵敏度、仪器自动化水平提高至一个崭新的水平,使氨基酸分析方法发展成为一种具有广泛适应性的分析方法.本文综述了氨基酸分析检测的常用方法及其研究进展,主要介绍了柱后衍生阳离子交换色谱法(HPCEC)、柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)、积分脉冲安培检测法(HPAEC-IPAD)、超高压液相色谱法(UPLC)及毛细管电泳法(CE),探讨了其各自的优缺点,比较了常用的柱前衍生剂,并对氨基酸分析方法的发展趋势进行了展望,为建立氨基酸分析方法提供了参考....
[硕士论文] 耿涛华
生物化工 河北科技大学 2013(学位年度)
摘要:谢氏丙酸杆菌(Propionibacterium shermanii)是厌氧发酵VB12常用的产生菌株。发酵过程中,氨基酸充当着重要的有机氮源和生长因子,能够有效促进了谢氏丙酸杆菌的生长及其VB12生物合成。本文通过高效液相色谱检测了谢氏丙酸杆菌VB12发酵过程中氨基酸、有机酸、VB12的变化情况,找到了几种影响VB12产量的关键氨基酸,优化了培养基配方,达到增加谢氏丙酸杆菌VB12产量的目的。
   主要研究成果总结如下:
   (1)建立了一种反相高效液相色谱法,可以同时测定多种游离氨基酸,以DNFB作为氨基酸柱前衍生试剂,通过优化色谱条件,使19种氨基酸在30min内分离效果良好。利用该方法检测了谢氏丙酸菌发酵液中游离氨基酸的含量,获得了同样良好的分离效果,说明该分析方法准确、可靠,满足分析要求。
   (2)建立了同时检测几种有机酸的高效液相色谱法,采用阳离子交换树脂预处理发酵液,去除杂质峰,处理后样品直接进行液相分析,有机酸组分无损失,获得了同时检测发酵液乙酸、丙酸、琥珀酸的良好效果。
   (3)建立了一种不需转化氰钴胺,直接测定发酵过程中腺苷钴胺素的液相色谱分析方法。采用萃取法提取丙酸菌胞内VB12,提取物不需转化可以直接进行液相分析。
   (4)基于液相分析方法,通过对谢氏丙酸杆菌VB12发酵过程中氨基酸、有机酸和腺苷钴胺素含量的检测,对谢氏丙酸杆菌VB12发酵过程有了更深入的了解,特别是发酵过程发现了多种优先利用的氨基酸。单因素实验表明Tyr、Asn、Asp和Met四种氨基酸单独添加都可以提高10%VB12产量,进一步进行正交试验,考察了这几种关键氨基酸对VB12产生的影响,结果显示四种氨基酸对VB12产量影响顺序为:Tyr>Asn>Asp>Met,发酵培养基中添加Tyr600μg/mL、Asn400μg/mL、Met600μg/mL和Asp400μg/mL,可以使VB12产量较对照组提高了17%。
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