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摘要:为探讨过表达的第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)对犬乳腺肿瘤细胞系(CHMm)增殖及Bcl-2、Bax基因的影响,本研究构建了PTEN表达质粒pcDNA-PTEN,采用脂质体转染法将其导入CHMm细胞系,采用western blot检测PTEN蛋白表达情况,CCK-8法检测CHMm细胞增殖情况,荧光定量PCR检测Bcl-2和Bax的基因表达情况.结果显示,转染PTEN的CHMm细胞组的PTEN蛋白表达水平显著高于空载体组和未转染组;转染PTEN细胞组的细胞增殖显著低于空载体组和未转染组(P<0.05);转染PTEN的CHMm细胞组Bcl-2的mRNA表达水平显著低于空载体组和未转染组(P<0.05);转染PTEN的CHMm细胞组Bax的mRNA表达水平显著高于空载体组和未转染组(P<0.05).本实验将PTEN基因导入犬乳腺肿瘤细胞系(CmMm),抑制犬乳腺肿瘤细胞增殖,为寻找乳腺肿瘤基因治疗新方法提供依据....
摘要:为探究接触蛋白-1 (CNTN1)对体外培养的犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖及迁移能力的影响,本研究利用RNAi技术沉默CNNT1基因在犬乳腺肿瘤CHMm细胞中的表达,采用CCK8法检测CHMm细胞增殖能力、细胞划痕法检测CHMm细胞迁移能力,western blot检测CHMm细胞中E-cadherin蛋白含量.结果显示CNTN1沉默后,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖无明显影响,但能够导致使细胞迁移能力显著减弱,细胞中E-cadherin蛋白含量明显增加.研究表明CNTN1对犬乳腺肿瘤CHMm增殖调节无明显作用,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm作用主要是通过降低E-cadherin蛋白的表达增强体外培养的肿瘤细胞迁移力,为犬乳腺肿瘤的治疗提供新的靶点....
摘要:本试验采用腹腔镜微创技术构建用于动物临床实践教学的大动物疾病模型,试验选取6只杂种犬随机分为两组,3只犬制作胃内异物模型,用电刀在胃壁做一小切口,经过套管将5 cm左右的鸡骨放入胃中;另外3只造膀胱结石模型,将膀胱做一小切口,经过套管将相符合的石子放入膀胱中.术后6只犬均表现出呕吐、尿血、尿淋漓等典型症状.影像学检查显示,胃以及膀胱中的有明显异物存在.经过半个月术后护理,皮肤创口一期愈合,腹部长出被毛,与健康犬从外观上无差别.腹腔镜微创技术可成功建立犬的胃内和膀胱异物模型,将其应用到临床教学课程中能够提高学生对疾病的诊断和治疗水平....
摘要:分析犬乳腺肿瘤细胞系CHMp与CHMm中cyclinD1与p27kip基因表达及蛋白含量变化,并分析比较上述两种基因在不同类型的犬乳腺肿瘤中的表达情况.利用荧光定量PCR法,以正常乳腺组织作为参考,测定犬乳腺肿瘤细胞系CHMp与CHMm中cyclinD1与p27kip在基因层面上的变化;应用本试验室自备的犬cyclinD1及犬p27kip抗体,以正常犬乳腺组织做参考,测定犬乳腺肿瘤细胞系CHMp与CHMm中cyclinD1与p27kip蛋白变化,以及以免疫组化技术为基础,检测临床上不同类型的犬乳腺肿瘤的蛋白表达情况.结果显示,1.在对两种细胞系中的两种基因检测结果显示,cyclinD1与p27kip的mRNA的含量在不同的细胞系中情况有差异.2.CyclinD1在不同细胞系中的蛋白表达含量有极显著性差异(P<0.01);p27kip在两种细胞系中的蛋白表达有显著性差异(P<0.01).3.cyclinD1在良性与恶性肿瘤与正常乳腺组织相比有显著性差异.P27kip在肿瘤与正常组织比较差异显著.各类型肿瘤间的比较情况显示,cyclinD1在浸润性小叶癌与导管内癌肿瘤组织间差异显著,p27kip在混合样癌与导管内癌的差异有统计学意义,cyclinD1与p27kip间存在相关性.
摘要:p27基因是一种抑癌基因,编码的蛋白是细胞周期依赖性激酶抑制因子,此蛋白调控细胞是否进入S期,在细胞周期网络中具有十分重要的作用.为进一步研究p27的生物学功能,本研究欲制备犬p27单克隆抗体.本研究采用RT-PCR方法扩增出犬p27的基因片段,并成功构建原核重组质粒pET-28a(+)-p27,将构建的重组质粒转化至BL21大肠杆菌中,顺利表达融合蛋白p27-His.SDS-PAGE电泳.结果显示,重组蛋白为可溶性表达,蛋白分子量大小为30ku.Western blotting分析结果显示,表达的重组蛋白具有良好的反应活性.纯化后的p27-His蛋白免疫6周龄的SPF级BALB/c雌性小鼠,研磨小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,在PEG 4000融合剂的作用下与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选后获得共1株单克隆抗体细胞株3G8.结果本研究表达并纯化出具有良好反应原性的重组融合蛋白犬p27-His,并成功制备犬p27蛋白单克隆抗体,所获得的抗体对犬p27蛋白具有良好的反应原性和较高的特异性,为进一步研究p27的生物学特性提供研究材料.
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