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[期刊论文] 李碧春 程少泽
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北大核心
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摘要:生殖细胞在有性繁殖的生物中肩负着将遗传信息在世代中传递的重要任务,通过精卵结合产生新的个体.对于具有这些特殊性质的生殖细胞,科学家们早在十年前就致力于体外培养和诱导分化成精子和卵子的研究,试图使得精子和卵子能源源不断地通过体外分化产生,这一研究一旦取得成功,将对了解生殖细胞的发生、调控机理、遗传修饰以及对临床治疗不育疾病产生深远意义的影响.而雄性生殖细胞的生长发育过程的调控研究从未停止过,其中包括内源性调控因素以及外源性活性物质,其主要涉及到关键基因、信号通路等因素的调控.本文总结鸡雄性生殖细胞分化调控的研究现状进展,阐述了关键基因对鸡雄性生殖细胞分化的影响以及鸡雄性生殖细胞生成过程中不同信号通路的调节机制,明确了参调控的关键基因和信号通路....
摘要:本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据.基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP (chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率.Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%.通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除....
摘要:前言Cas9介导的基因编辑工具已经广泛的用于人、小鼠、斑马鱼等物种,而且在植物上也有广泛的应用,但是该方法在家禽中的应用尚未见报道。自1997年以来,本实验室一直致力于鸡的胚胎发育和鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的调控机制研究,已经完成鸡雄性生殖细胞发育分化过程中的转录组测序筛选到参鸡雄性生殖细胞生成的关键基因和信号通路。为了进一步验证这些关键基因和信号通路的功能,在家鸡中建立有效的体外基因编辑系统就显得尤为迫切和必要。
摘要:[目的]本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目基因的定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。[方法]基于NCBI 数据库提供的CDS 序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC,C2EIP)基因全长,并根据基因序列中APM 的位置设计特异性gRNA1,gRNA2 和gRNA3 并构建cas9/gRNA 载体;将设计好的cas9/gRNA 转染状态良好的DF-1,利用luciferase SSA 重组检测法、T7E1 酶切法以及TA 克隆测序法检测gRNA 在DF-1 细胞中基因的敲除效率。
摘要:本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SSC 诱导分化体系提供新的依据。以RNA-Seq 技术对鸡ESC、原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGC)和SSC进行测序分析,筛选出显著性差异以及特异性表达的候选lncRNAs,以qRT-PCR 对候选lncRNAs在三种细胞中表达趋势变化进行验证,通过BLAST 和RNAplex 软件对候选lncRNAs 进行靶基因预测,同时以DAVID 数据库、WEGO 以及STRING 等在线软件进行功能和蛋白网络互作分析。
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