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摘要:为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.Coli Rossetta中表达;采用SDS PAGE检测其表达效果;采用Dot ELISA和淋巴细胞转化试验分别检测其与抗体反应特性和淋巴细胞增殖情况.结果表明:所克隆的P23抗原基因大小为342 bp;重组质粒表达蛋白的大小为40 kDa(含26 kDa的融合蛋白GST),以1、5、10 μg剂量的重组蛋白rP23均能刺激鼠脾脏淋巴细胞增殖,并能够与感染猴血清中的抗体明显地发生反应....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:目的 对犬粪中新发现的环孢子虫进行分子鉴定.方法 在GenBank中登录的环孢子虫18S和5.8S rDNA序列的保守区设计一对引物ITS-1+F/ITS-1+B,扩增犬源环孢子虫ITS-1+序列;将扩增产物纯化并连接到质粒载体pMD19-T,克隆转入感受态细胞JM109,挑选阳性克隆测序并进行相似性比较和种类鉴定.结果 犬源环孢子虫ITS-1+序列长为547bp,包含58bp的18S rDNA序列,333bp的ITS-1序列和156bp的5.8S rDNA序列.其中的18S rDNA和5.8S rDNA与艾美耳科原虫的相似性最大;其中的ITS-1序列与人源环孢子虫、牛源环孢子虫、狒狒源环孢子虫均不相同.结论 该犬源环孢子虫可能为环孢子虫属的一个新种....
摘要:环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫.为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测.结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法(饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法)提高2.3%~3.4%.可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值....
摘要:菲莱氏温扬球虫是鸭球虫病的重要病原之一,为了寻找种特异性的遗传标记,本研究采集广东省某鸭场的新鲜鸭粪,通过Sheather's蔗糖漂浮法收集球虫卵囊,经形态学鉴定为菲莱氏温扬球虫;提取该球虫DNA样品,经过PCR扩增,首次获得了该虫的18S rDNA基因部分片段;对该基因进行了克隆和测序,比较了该虫株与其他原虫的亲缘关系.结果显示,对菲莱氏温扬球虫序列与艾美耳科其他球虫关系较近,系统进化树分析属于艾美耳科的另一分支.表明18S rDNA基因在鸭菲莱氏温扬球虫的分类鉴定上是一种有效的分子标记....
摘要:应用PCR技术对在鸭粪中发现的疑似环孢子虫的18 S rDNA部分基因和ITS-1+基因进行了扩增,将扩增出的片段纯化后连接至pMD-18T载体上,选取阳性克隆进行序列测定,并利用NCBI在线BLAST程序和MEGA 4软件对测序结果进行了同源性比较和系统发育树构建.结果显示,测得的18 S rDNA序列与环孢子虫的相似性最高(98%),且在系统树中位于同一分支上;测得的ITS-1序列高度特异,在GenBank中未发现同源性序列,可以确定其为环孢子虫的一个新种,暂命名为鸭源环孢子虫....
摘要:目的 对犬粪中的疑似环孢子虫卵囊进行形态学和分子鉴定.方法 对首次在犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊的形状、大小、抗酸染色、孢子化和自发荧光等形态特征进行了观察.根据GenBank已发表的环孢子虫序列设计并合成3条引物,对犬源环孢子虫18SrDNA部分序列进行巢氏PCR扩增,将扩增产物纯化并克隆至载体pMD19-T,挑选阳性克隆测序并进行同源性及系统进化分析.结果 该疑似环孢子虫卵囊与人的环孢子虫卵囊形态特征相似,扩增的18SrDNA片段大小为715bp,与预期目的片段一致.序列同源性和系统发育分析显示该犬源环孢子虫与环孢子虫间的相似性最高,系统进化树中处于同一分支.结论 首次从犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊可以确定为环孢子虫....
摘要:目的 建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法.方法 根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应.用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较.结果 所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8 ng)左右.临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/2),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22).结论 本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高....
摘要:为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定.利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微镜观察对其进行形态学鉴定;并采用PCR方法扩增其卵囊壁蛋白(cowP)基因和18S rRNA基因,扩增产物克隆至pMD-18-T载体中,对阳性克隆进行测序并作进化树分析.结果表明:抗酸染色和荧光检查结果与所报道的人隐孢子虫的结果一致.PCR扩增产物经电泳检测,明显地出现554 bp和370bp大小的片段,与预期结果一致;两种基因的序列分析结果显示该猴源隐孢子虫与C. hominis的相似性均为100%.由此可认为本次分离的隐孢子虫为C.bominis....
摘要:为了建立犬源环孢子虫的PCR检测方法,根据该环孢子虫18 S rDNA基因序列,设计1对特异性引物;通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行了特异性和敏感性试验;并对临床样品进行了检测.结果显示,该PCR检测方法能特异性地扩增出犬源环孢子虫18 S rDNA中379 bp的片段,与牛源环孢子虫、柔嫩艾美耳球虫、人隐孢子虫、蓝氏贾第虫、刚第弓形虫、毛首线虫、大片吸虫、犬弓首蛔虫等8种虫体基因组DNA无交叉反应;最低能检测到84 fg的阳性参照DNA,检测的157份临床样品中8份为阳性,比传统镜检方法多出3份.结果表明,建立的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬环孢子虫的临床检测....
摘要:采用饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法和孢子化试验首次从广东某猴场的猴粪中分离到疑似环孢子虫卵囊.为了对其进行分子鉴定,采用巢式PCR和普通PCR方法,针对环孢子虫属18 S rDNA和ITS基因设计了3对引物,扩增其目的片段,并进行了序列分析.结果显示,卵囊大小为7.5~10 μm,经改良抗酸染色的卵囊染色程度不一,孢子化卵囊内含2个孢子囊,每个孢子囊内含有2个子孢子.通过PCR扩增,获得的18 S rDNA目的片段长712 bp,测序结果表明该猴源环孢子虫18 S rDNA基因与Cyclospora colobi、狒狒环孢子虫、人环孢子虫的相似率较高,在进化树上位于同一分支.获得的ITS-1+片段长760 bp,其中ITS-1序列高度特异,在GenBank中未见同源性序列.结果表明,从猴粪中分离的疑似环孢子虫卵囊应属于环孢子虫....
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