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摘要:目的:建立肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染ICR乳鼠模型,为该病毒疫苗和抗病毒药物的研究提供实用的动物模型.方法:将本课题组自行分离鉴定的EV71 G03株经颅内接种感染1日龄SPF级ICR小鼠,定期对濒死的小鼠实施安乐死,采集心肌、肺组织、骨骼肌、小肠和脑组织,RT-PCR检测病毒RNA、HE染色观察病理形态学、免疫组织化学分析及蛋白质印迹鉴定病毒VP1蛋白表达.结果:经颅内途径感染ICR乳鼠后,小鼠出现消瘦、精神麻痹、弓背、肢体麻痹瘫痪、死亡等症状;病理学观察发现,在感染后小鼠的心肌、肺组织、骨骼肌、小肠和脑组织等出现特定的病理变化,如出血、炎症细胞浸润等.免疫组化显示感染后所取小鼠的5种组织都有EV71病毒特异性分布.蛋白质印迹分析显示EV71 VP1蛋白在所取小鼠5种组织均有表达.结论:成功建立了EV71感染1日龄ICR乳鼠模型....
摘要:目的:研究miR-1271在卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药形成中的作用.方法:采用实时定量PCR法检测卵巢癌SKOV3/DDP细胞和母代SKOV3细胞中miR-1271的表达,并通过蛋白质印迹法检测上述细胞X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的表达.构建XIAP 3′UTR荧光素酶报告质粒验证miR-1271的靶基因,在耐药细胞株中瞬时转染miR-1271模拟物以观察上调miR-1271对卵巢癌SKOV3/DDP细胞XIAP表达及顺铂耐药的影响,并运用流式细胞术检测转染miR-1271模拟物后SKOV3/DDP细胞的凋亡率.结果:miR-1271在卵巢癌SKOV3/DDP细胞中呈低表达,抗凋亡蛋白XIAP在卵巢癌SKOV3/DDP细胞中呈高表达,荧光素酶报告实验证实XIAP是直接受miR-1271调控的靶基因,在耐药株中上调miR-1271显著抑制XIAP蛋白表达水平,显著增加细胞对顺铂的敏感性,并显著增加细胞对顺铂诱导的凋亡.结论:miR-1271靶向抑制XIAP表达可增加卵巢癌SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性....
摘要:目的 分析100株金黄色葡萄球菌的耐药谱、耐药基因、毒力基因分布及其相关性.方法 收集2014年10-12月江苏大学附属人民医院临床分离的100株金黄色葡萄球菌,采用VITEK 2 compact进行细菌鉴定及药敏试验,聚合酶链反应技术(PCR)检测常见的9种耐药基因及10种毒力基因.结果 共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 52株,检出率52%,未检出替加环素、万古霉素、利奈唑烷及喹努普汀/达福普汀耐药株,对庆大霉素、左氧氟沙星、红霉素、利福平、环丙沙星、莫西沙星、克林霉素、四环素和复方新诺明的耐药率分别在12%~64%之间.实验共检出7种耐药基因和7种毒力基因,其中最常见的耐药基因组合为aacA-aphD+ ermC+ tetM,另外,检出的耐药基因与其表型并不完全一致.毒力基因hla、RNAⅢ及psmα在所有的菌株中均表达,而eta、etb和edin C在所有菌株中均未表达.pvl、seb、sec和tst-1毒力基因阳性率分别为7%、47%、64%和4%.其中MRSA与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)相比,MRSA多重药物的耐药率明显增高,且部分毒素基因分布存在差异.结论 临床标本分离的金黄色葡萄球菌存在多重耐药性,且部分菌株毒力较强,需加强监控....
[硕士论文] 秦闫燕
免疫学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:手足口病是由多种微小RNA肠道病毒引起的急性传染病,多发生于三岁以下儿童,其表现主要是轻度流感样症状和手、足、口腔等部位的皮疹和疱疹,通常具有自限性,但传染性极强,常常在幼儿园和托儿所流行。一般预后良好,但是个别重症患者可出现严重的神经系统并发症,甚至死亡。
  引起手足口病的病原体属于微小RNA病毒科肠道病毒属,主要包括:柯萨奇病毒 A组4、5、7、9、10、16型;柯萨奇病毒 B组2、5型;埃可病毒以及肠道病毒71(EV71)型,其中CA16和EV71为主要病原体。自1969年首次从美国一名患有脑膜炎的手足口病患儿中分离出EV71型病毒以来,手足口病在世界各国出现多次爆发和流行,尤其是亚太地区,中国大陆2008年到2012年报道有7,200,092例手足口病患者,死亡2457例。2008年台湾报道387例由EV71导致的重症病例,其中14例死亡。
  目前肠道病毒感染除了脊髓灰质炎病毒有疫苗外,其余肠道病毒感染包括EV71病毒感染并没有特殊的治疗药物,其中一个很重要的原因就是缺少稳定的动物模型来有效地评估疫苗。目前最常用的模型有猿猴模型和乳鼠模型,猿猴模型虽然早期被认为是较好的动物模型,但是由于价格昂贵,并且缺乏心力衰竭和肺水肿的表现,而这些表现常常是人类手足口病重要的死亡原因,所以限制了其应用。乳鼠模型由于价格低廉,制备简单,神经系统感染表现与人类疾病相似,因此适用于了解EV71致病机制、评价疫苗效价。现阶段,我国手足口病爆发流行的病毒株亚型主要是C4亚型,而在以往的研究中,大多数动物模型对C4亚型的EV71病毒株不敏感,导致感染后不能出现典型的手足口病的症状,尤其是神经系统感染症状。
  本研究对来自江苏省疾病预防控制中心4株EV71临床分离株进行了小鼠攻毒实验,筛选出1株能引起小鼠后肢瘫痪的临床毒株。对该株进行了细胞培养、传代、克隆,建立了稳定的G03 EV71病毒株,并对该毒株进行了全基因序列的测定和分析,结果表明该病毒株为C4亚型的EV71病毒株。用分离的G03 EV71病毒株通过颅内途径感染1日龄ICR小鼠制备动物模型,每天观察动物的临床表现,了解EV71感染的规律和致病特点,同时定期处死动物,采集各器官组织进行动物体内病毒半定量分析、病理形态学观察、免疫组织化学分析及利用Western blot鉴定病毒蛋白的表达等。
  病理学观察发现,在感染G03后小鼠的心肌、肺组织、骨骼肌、小肠、脑组织等器官出现特定的病理变化,比如出血、炎症细胞浸润等。免疫组化显示感染后所取小鼠的上述五种组织都有EV71病毒特异性分布。Western blot分析发现EV71 VP1蛋白在小鼠五种组织都有表达,以上结果都显示成功建立了EV71感染小鼠模型,为下一步体内干预实验研究奠定了良好的基础。
  综上所述,本研究通过筛选EV71临床敏感株实验,筛选出合适的临床毒株,并对其进行了培养,同时利用此毒株建立了一日龄乳鼠模型,也建立了相应的检测方法,为EV71发病机制、病毒疫苗的研制等研究提供了实验工具。
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