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摘要:近年来在湖北省范围内人工养殖的克氏原螯虾暴发了严重的疾病,其中白斑综合征病毒(WSSV)已成为危害克氏原螯虾健康养殖的重要病原.2016年5月湖北省潜江市养殖区暴发了一种传染性疾病,为探究此次疾病病因和流行规律,将染病虾进行临床症状观察、对病料进行PCR检测、系统发育树分析、人工感染和组织病理学观察.结果显示,发病克氏原螯虾临床症状主要表现为摄食减少,活力下降,反应迟钝;组织病理学观察结果显示,克氏原螯虾的肝胰腺、肠、肌肉、鳃组织均出现不同程度变性和坏死以及炎性细胞浸润等典型病理学变化,与WSSV感染克氏原螯虾出现的病变相似;PCR检测患病克氏原螯虾样品,结果显示WSSV呈阳性,阳性检出率为55.56%(15/27),未检测到斑节对虾杆状病毒(MBV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV);检测产物测序并进行系统发育树分析,结果显示,该基因序列与WSSV的EG3株(KR083866.1)核苷酸序列同源性为100%.将病虾的肝胰腺、肠和肌肉组织投喂健康克氏原螯虾,投喂组均表现为急性死亡(累积死亡率为100%),并出现与自然发病虾相同的症状.WSSV的巢式PCR检测结果显示,人工感染病虾为WSSV阳性.根据以上显示,本次养殖克氏原螯虾大规模死亡的病原是WSSV....
摘要:为筛选潜在的保护性抗原基因研制鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)基因工程疫苗,实验利用特异性引物扩增分离自斑点叉尾(鲴)(Ictalurus punctatus)的Y.ruckeri外膜蛋白ompF基因并对其进行分子克隆,应用相关软件和程序对其核苷酸及氨基酸序列进行生物信息学分析,并进行了ompF蛋白的表达和免疫原性检测.结果显示,ompF基因全长1 095 bp(GenBank登录号KP159420),包含一个编码364个氨基酸的完整开放阅读框,其氨基酸序列具有极高保守性,与Y.ruckeri外膜穿孔蛋白ompF(GenBank登录号ADK27779.1)亲缘关系最近,序列一致性为99.2%,进化树聚为一支;具有1个革兰氏阴性菌穿孔蛋白保守结构域,存在1个信号肽和1个跨膜区,是一种跨膜蛋白;具有12个与免疫相关的抗原决定簇区域.SDS-PAGE分析发现该蛋白主要以包涵体形式表达在沉淀,经Western-bolt显示ompF蛋白具有较好的免疫原性.以上结果表明ompF基因可作为Y.ruckeri基因工程疫苗的候选抗原基因....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:利用特异性引物扩增了分离自斑点叉尾鲴的鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因并进行分子克隆,应用生物信息学工具对ompN2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分子特性分析,并进行了目的蛋白的原核表达和免疫原性检测.结果显示:ompN2基因全长1 122 bp(GenBank登录号为KP159419),包含1个完整的开放阅读框,编码373个氨基酸,其序列具有极高的保守性,与鮰爱德华菌外膜穿孔蛋白ompC同源性最高,序列一致性为100%,进化树聚为一支;具有1个革兰阴性菌穿孔蛋白(Gram-neg-porins)保守结构域,存在1个信号肽,不含跨膜区,是一种膜外蛋白;具有与蛋白翻译后修饰功能相关的磷酸化位点20个和N-糖基化位点4个;具有9个与免疫相关的抗原决定簇区域,表明可以作为潜在的候选疫苗.此外,SDS-PAGE检测发现,该蛋白主要以包涵体形式表达在沉淀中,Western-bolt结果显示重组蛋白表达成功,且具有较好的免疫原性.以上结果为筛选ompN2作为斑点叉尾鮰抵抗鮰爱德华氏菌感染的疫苗候选基因并进行相应蛋白的表达提供了理论依据,同时为研究ompN2蛋白的生物学功能,了解ompN2基因结构与功能的关系奠定了基础....
[专利] 发明专利 CN201910562030.4
四川农业大学 2019-08-23
摘要:本发明涉及一种治疗蛙类歪头病的组合物及其应用。该组合物包括磺胺嘧啶、甲氧苄啶、盐酸多西环素、碳酸氢钠和无花果多糖。其拌饵喂食患歪头病蛙后,能够达到80%以上的治愈率。该内服物拌饵喂食已感染病原菌但未发病的蛙后,能够将发病率从90%降低到2.5%以下。本发明克服了传统兽医学对蛙类歪头病的临床用药偏见,发现了该病符合联合用药指征,揭示了现有药物疗效不佳的根源——不能有效突破血脑屏障,真正实现了蛙类歪头病的全身性治疗,从而有效提高该病的治愈率。
[硕士论文] 秦振阳
基础兽医学 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:蛙类歪头病是一种以头部歪斜、眼球白内障、运动失调为典型症状的蛙类疾病,该病致死率高、传播迅速、连年发生、用药效果不佳,严重威胁蛙类养殖业。不同研究者从具有该类症状的病蛙中分离出至少9种具致病力的细菌,其中脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica)最多见。本研究从湖南岳阳发生歪头病的黑斑蛙脑部、眼球、肝脏、卵巢等多处组织器官分离到一株革兰阴性杆菌,经回归试验确认其致病性,通过细菌形态、生理生化特性、16s rDNA基因构建系统发育树等传统方法,认为其为脑膜炎败血伊丽莎白菌,但经全基因组测序,比对物种鉴定相关的非冗余蛋白质数据库(NR,Non-Redundant Protein Database),证实其为米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)。
  扫描电镜显示,菌体表面常具一凹陷,不同菌体之间有桥状结构连接,菌体平均大小1.72±0.6μm×0.48±0.7μm,透射电镜下可见菌体明显分三层。病原菌在BHI液体培养基,28℃、160r/min的培养条件下,第17h起进入平台期。该病原对对美福仙、链霉素、强力霉素、阿奇霉素、麦迪霉素、氟苯尼考、利福平等7种药物敏感。
  自然发病蛙的组织病理学观察显示:肝细胞肿大,多空泡出现,变性坏死;有心外膜炎;脑细胞轻度水肿,有炎症灶;眼球视杆视锥层细胞变性溶解;其他组织未见明显异常。这是病蛙歪头、运动失调、出现白内障的组织病理学基础。
  最后,本研究对米尔伊丽莎白菌分离株HNW1681进行了全基因组测序和分析,概览了其基因组基本情况,挖掘了其基因组中关于病原生存、致病、抗性产生、进化等多方面的基因信息并选取重点做了初步解读。
  通过以上研究,证实米尔伊丽莎白菌为引起本次黑斑蛙歪头病的病原,传统鉴定手段不能清晰区别米尔伊丽莎白菌和脑膜炎败血伊丽莎白菌。首次报道了本菌的透射电镜和扫描电镜观察结果。通过大体症状和病理学观察的联合解读,描述了其心脏、肝脏、脑、眼等不同程度的病理变化,揭示了该病各类症状的病理基础。在基因组研究中揭示出的病原特性,进一步揭示了该病原的致病机理。
摘要:为筛选潜在的目的抗原基因研制鮰爱德华氏菌基因工程疫苗,本试验利用特异性引物扩增了分离自斑点叉尾鮰的鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN2 基因并进行分子克隆,应用生物信息学工具对ompN2 基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分子特性分析,并进行了目的蛋白的原核表达和免疫原性检测。
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