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摘要:为了评估贾第虫γ贾第素(γ-giardin)和δ贾第素(δ-giardin)的免疫原性及免疫保护力,构建了截短型真核表达质粒pcDNA3.1-γ-giardin、pcDNA3.1-δ-giardin和pcDNA3.1-γ-δ-giardin,并将这3种质粒肌肉注射到BALB/c小鼠体内,通过血清抗体测定、脾淋巴细胞增殖试验、淋巴细胞检测、细胞因子测定和攻虫试验评价疫苗的免疫保护力.结果 显示,接种了这3种真核表达质粒的小鼠产生了特异性的体液和细胞反应,与对照组相比,IgG和IgG2a抗体水平显著提高,并且CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4 T细胞百分比显著提高,pcDNA3.1-γ-giardin和pcDNA3.1-γ-δ-giardin免疫组的细胞因子IL-4和IFN-γ水平显著提高,pcDNA3.1-δ-giardin免疫组的IFN-γ水平显著提高.攻虫试验结果显示,接种pcDNA3.1-γ-giardin、pcDNA3.1-δ-giardin和pcDNA3.1-γ-δ-giardin基因疫苗的小鼠的减虫率分别为39.1%、26.1%和18.3%,单一DNA(γ-giardin或δ-giardin)质粒和多基因DNA (γ-δ-giardin)质粒均可以诱导小鼠产生一定的免疫保护力....
摘要:为了对十二指肠贾第虫(简称贾第虫)γ贾第素(γ-giardin)进行原核表达及亚细胞定位,研究其生物学功能,提取贾第虫总RNA,反转录成cDNA,经PCR获得γ-giardin基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-γ-giardin,再转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)后,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE验证,并用切胶纯化法纯化.针对重组蛋白制备了多克隆抗体,并用ELISA测定其效价,Western-blot分析其免疫原性,并利用免疫荧光定位技术对γ-giardin进行定位.结果 表明,成功构建了原核表达质粒pET-28a-γ-giardin.表达的重组蛋白的分子质量约为38 ku,且以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白的纯度高达90%以上.ELISA和Western-blot结果显示,γ-giardin抗体具有良好的抗原特异性与优异的抗原结合活性.免疫荧光定位结果表明γ-giardin主要位于贾第虫滋养体的腹吸盘.本研究为今后探讨贾第虫致病机制、临床诊断和治疗奠定了理论基础....
[硕士论文] 石东东
兽医学;预防兽医学 东北农业大学 2019(学位年度)
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