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摘要:目的 研究BRF2在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及意义.方法 收集山东大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科2016至2017年慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)手术标本37例及单纯鼻中隔偏曲手术标本18例,采用免疫荧光染色检测BRF2在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及定位;脂多糖(LPS)刺激体外培养人鼻黏膜上皮细胞后,采用免疫荧光检测BRF2在细胞中的表达及定位,Western bloting及实时荧光定量PCR检测BRF2和内质网应激相关蛋白GRP78在细胞中的表达.结果 BRF2在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中表达量上调并在胞浆中的分布增多;在体外,LPS刺激可诱导鼻黏膜上皮细胞中BRF2表达上调并在胞浆中的分布增多,并发现内质网应激相关蛋白GRP78表达上升.结论 BRF2可能介导了内质网应激,从而参与了慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉的发病过程....
摘要:目的 观察日常生活可遇低强度噪声多次暴露对豚鼠耳蜗带状体突触的损失和恢复,以及对听觉功能的影响.方法 对豚鼠行95dB声压级白噪声环境下4h/d暴露,连续暴露7d,于噪声后1d、1周、1个月分组行听力学检查,并与对照组动物比较(每组10只),以免疫荧光法双标法对突触前膜Ctbp2和突触后膜PSD95进行标记并计数.结果 长时程、低强度噪声暴露后听觉脑干诱发电位阈值提高(P<0.05),豚鼠内毛细胞排布、形态、数量均无明显改变,但内毛细胞带状突触数量有明显减少(P<0.05)并有不完全恢复.结论 "安全剂量"低强度噪声多次暴露后可造成可逆听觉阈值升高,伴随内毛细胞带状体突触的明显减少和不完全恢复....
[硕士论文] 甘彬
耳鼻咽喉科学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:背景及目的:
  慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是一种病程超过12周的、鼻窦黏膜的炎症性疾病,且多与鼻炎同时存在。按照CPOS-2007的分类方法,CRS分为不伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)和伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)。CRS的病因学十分复杂,细菌感染、变态反应、鼻部解剖学异常被认为是该病的三大主要致病因素,并且三者是相互联系相互影响的。CRSsNP通常以非感染性、非变应性的炎症过程形式存在,CRSwNP则多与变应性因素有关。BRF2蛋白由BRF2基因(位于染色体8p12位置)转录翻译产生,是转录因子ⅢB上的亚基,参与RNA聚合酶Ⅲ催化小分子RNA生成。BRF2被广泛报道在肺癌、乳腺癌等多种癌症患者的肿瘤组织中高表达,并有研究表明BRF2的高表达与肺癌患者的预后存在相关关系。综上推测,BRF2基因与转录因子ⅢB之间的关系可能决定了BRF2蛋白在疾病发生发展过程中存在重要的调控作用。多项研究表明,炎症、氧化应激、内质网应激三者是相互联系的。Gouge J等发现BRF2参与调控细胞的氧化应激,而细胞的氧化应激与内质网应激高度相关。蛋白GRP78是一种内质网应激标示物。故我们猜想BRF2在CRSwNP中的作用可能与蛋白GRP78有关。本实验目的在于探讨BRF2在CRSwNP发生发展中的意义。
  方法:
  选取山东大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)住院并手术的患者37例,收集手术中获得的鼻息肉组织作为实验组(即CRSwNP组);选取未患CRS,鼻息肉及过敏性鼻炎的鼻中隔偏曲患者18例,于鼻内镜手术中取得下鼻甲粘膜作为对照组。采用免疫荧光染色检测BRF2在CRSwNP组中的表达与定位;脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激体外培养的人鼻粘膜上皮细胞后,采用免疫荧光检测BRF2在细胞中的表达及定位,western blot及实时荧光定量pcr检测BRF2和GRP78在细胞中的表达。
  结果:
  (1)组织免疫荧光结果显示,相对于对照组,BRF2在CRSwNP组中的表达显著上调,差异具有统计学意义(P=0.001)。此外,在CRSwNP组中BRF2在胞浆内分布明显多于对照组,差异有统计学意义(P=0.002)。(2)细胞免疫荧光结果显示:在正常培养的人鼻粘膜上皮细胞(对照组)中,BRF2主要表达于核内,在经LPS刺激后的人鼻粘膜上皮细胞(6h组除外)中,该蛋白的表达明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05),且在细胞浆中表达量(6h组除外)明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)在体外培养的人鼻粘膜上皮细胞中,经LPS作用后,BRF2(6h组除外)及GRP78的蛋白相对表达量显著高于未加LPS刺激的对照组,差异有统计学意义(P<0.05);BRF2及内质网应激标志物GRP78的mRNA(6h组除外)的相对表达量明显高于未加LPS的对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  本实验证明了BRF2在CRSwNP息肉组织中表达上调且在胞浆中的分布明显增多;在体外,LPS刺激可诱导鼻粘膜上皮细胞中BRF2表达上调,内质网应激相关蛋白GRP78表达上升,内质网处于应激状态。故BRF2可能出核,介导内质网应激,从而参与了CRSwNP的发病过程。
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