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中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所
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摘要:松材线虫是松树萎蔫病的主要病原,为了筛选到具有较高杀线虫活性的苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis菌株,采用直接触杀法对苏云金芽胞杆菌发酵液进行杀线虫活性以及稳定性的检测,并对筛选出的高活性菌株通过扩增16S rDNA片段进行菌株的鉴定.结果表明,4个菌株中具有最高活性的菌株D发酵液处理松材线虫8h的死亡率超过70%,24 h其死亡率达到100%;在温度为-20、25、40、60、80和121℃条件下处理的菌株D发酵液,其对松材线虫的毒力都在85%以上;在pH 5.0~10.0时,菌株D发酵液对松材线虫的毒力都在85%~94%,并无显著的差异;将菌株D发酵液进行蛋白酶K处理后,其对松材线虫的毒力仍在98%以上;在4℃环境下保存50 d,菌株D发酵液的毒力没有明显下降.通过16S rDNA 1.5 kb片段的序列分析,初步得出菌株D可能是苏云金芽胞杆菌KNU-07.可见,菌株D发酵液具有耐热、耐储藏和对蛋白酶K稳定的特性,是一株具有开发潜力和应用前景的高毒力菌株....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:【目的】探讨适合DNA 提取的天牛成虫标本保存方法。【方法】采用SDS-蛋白酶K消化法对液氮中冷冻保存、无水乙醇-20℃冷冻保存、无水乙醇室温保存和干标本室温保存且保存时间在2年以上的松墨天牛Monochamus alternates Hope成虫标本基因组DNA进行提取,并对不同保存方式提取的DNA样本进行了质量比较和分析。【结果】在上述常见的松墨天牛成虫标本4种保存方式中,以液氮中冷冻保存效果最佳,其次为无水乙醇-20℃冷冻保存,插针干标本室温保藏效果最差。利用昆虫线粒体基因COⅠ和COⅡ的通用引物从上述DNA中均能够成功扩增出目的片段,测序结果证实扩增片段符合预期。【结论】液氮和无水乙醇-20℃冷冻保存适合松墨天牛成虫标本长期保存,且不影响后续的PCR扩增和测序。...
摘要:美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs)是一种对美国白蛾高效、 对环境无污染、对天敌及非靶标生物安全的生物杀虫剂.建立高效、 快速的定量检测方法对该病毒持续控制美国白蛾具有重要意义.将polh基因构建到pGEM-T-easy载体上,制备标准品质粒,构建标准曲线,对未知样品DNA进行定量PCR检测,根据标准曲线计算样品中美国白蛾核型多角体病毒含量.提取感染病毒不同时间段的美国白蛾幼虫基因组DNA,根据已建立的方法检测并计算每克样本病毒的基因拷贝数.利用TaqMan探针法成功建立了该病毒荧光定量PCR检测方法.以取食3.0×106 OBs/mL浓度病毒的美国白蛾幼虫基因组DNA为模版,进行荧光定量PCR,病毒在幼虫体内的含量在第5天开始出现大幅增长趋势,第6天时达到最高.TaqMan探针法实时荧光定量PCR能简便、 高效、 快速的检测出大量未知样本基因组DNA中病毒基因的拷贝数,为研究该病毒的传播和流行规律提供了可行的监测方法....
摘要:[目的]根据Ikdea对HycuNPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因.[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白.[结果]重组质粒pGEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功.通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38.2 kDa.优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1.0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高.[结论]成功构建了pGEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础....
摘要:[目的]探究伊氏杀线真菌苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对松材线虫的联合毒力.[方法]使用Esteya vermicola孢子悬浮液Bt发酵液处理松材线虫,通过线虫的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定E.vermicolaBt联合对松材线虫的影响.[结果]经过E.vermicola孢子悬浮液处理过的线虫会出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的E.vermicola孢子悬浮液Bt发酵液联合处理松材线虫可以明显地提高线虫的死亡率,最高可以达到100%;联合处理的线虫死亡速度较快,随着处理时间的延长,死亡率会一直呈上升的趋势.[结论]应用这两种生防微生物在合适的浓度下混配能够在较短时间内提高松材线虫的死亡率....
摘要:该文研究了不同碳浓度和碳氮比对松材线虫内寄生真菌Esteya vermicola菌丝生物量和孢子产量的影响.不同碳浓度和碳氮比的20种液体培养基培养E.vermicola 6 d后测定孢子产量和菌丝生物量,当碳浓度为12 g/L、碳氮比为40∶1时,孢子产量最高;碳浓度为12 g/L,碳氮比为5∶1时,菌丝生物量最高.从碳浓度为12 g/L,碳氮比为5∶1的培养基连续培养13 d的E.vermicola生长曲线中发现,培养第7天时菌丝体达到最大值,第11天时孢子产量最高.结果表明,碳浓度和碳氮比对真菌菌丝生长和产孢的影响是不同的....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CBST
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摘要:根据舞毒蛾核型多角体病毒(LdMNPV)的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(egt)设计一对特异性引物.成功建立了LdMNPV的PCR检测技术体系,其对LdMNPV基因组的灵敏度可达到1fg·mL-1.应用该技术体系从舞毒蛾带毒幼虫、卵、蛹的基因组中扩增出目的片段,证明了这一技术的可行性.对不同浓度的多角体悬液的扩增结果显示:其检测最低量为5 OBs·mL-1.形态学研究表明:从内蒙舞毒蛾体内分离到的LdMNPV中,少数表面有凹陷的孔洞,病毒粒子从这些孔洞中游离出来,这也阐明了此技术能够从多角体悬液中扩增出目的片段的原因.在将来LdMNPV的检测中,可用虫体进行研磨过滤离心得到的组织液作为模板进行扩增....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CBST
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摘要:从不同培养基、不同测定方法、不同菌株、不同孢子浓度4个方面测定内寄生真菌Esteya vermicola孢子对松材线虫的侵染活力,结果表明:该真菌离体分生孢子对松材线虫有侵染活力;PDA固体培养比PDB液体培养所得孢子能更有效的粘附和杀死松材线虫;在WA平板上,采用浸渍法测定孢子对线虫的侵染活力比其他处理效果好;在供试的3个菌株(CUN 120806、CBS 10082和CBS 115803)中,CBS 115803菌株对松材线虫具有较高侵染活性;4个不同浓度(1 ×109、1×10s、1×107、1×106个·mL-1)孢子对线虫的作用中,随着孢子浓度降低,孢子对线虫侵染能力也随之降低....
[专利] 发明专利 CN201610587236.9
摘要:本发明公开了一种美国白蛾核型多角体病毒水分散粒剂及其制备方法和应用,该水分散粒剂含有美国白蛾核型多角体病毒、高岭土、甘油和氯化钠;所述美国白蛾核型多角体病毒的含量为5.0×1010‑2.5×1011PIB/g,以100重量份的所述水分散粒剂为基准,所述高岭土的含量为80‑90重量份,所述甘油的含量为1‑7重量份,所述氯化钠的含量为0.3‑1.0重量份。该水分散粒剂相对于传统的液体制剂具有有效成分高、加水后崩解性好、对环境污染小、杀虫效果好的优点,且便于储存和运输,是一种理想的绿色环保型制剂。
[专利] 发明专利 CN201810750293.3
摘要:本发明提供一种星天牛幼虫人工饲料及星天牛的传代饲养方法,该星天牛幼虫人工饲料由如下成分组成,胚芽粉,酪酸钠,韦氏盐,蔗糖,木质粉,乙醇,山梨酸,维生素B6,烟酸,胆固醇,琼脂和水。本发明提供的人工饲料完全不含寄主植物,成分来源简单,容易取得,不受地区、四季变化等因素的限制,可有效地保证室内星天牛的连续饲养,由本饲料饲养的星天牛幼虫,其各虫态的生长期都比野外有所缩短。
[专利] 发明专利 CN201310642065.1
摘要:本发明公开了一种伊氏杀线真菌生产工艺及其制剂和生产装置,生产工艺采用液固双相培养方法进行伊氏杀线真菌的大量生产,通过液体发酵可以先获得大量的菌丝体、芽生孢子及少量的分生孢子,再转到固体培养基上使其产生大量的气生分生孢子,经本工艺可最终制得伊氏杀线真菌的丸剂或粉剂以便于储存,使用时在0.1M柠檬酸钠溶液中溶解或加水稀释即可;生产装置包括一盘体,盘体的底盘上打有若干孔,至少有一层可将所有孔罩住的金属网固定在底盘上,该装置保证了伊氏杀线真菌固体培养所需要的氧气、湿度,又有效地防止了杂菌污染,大大提高了伊氏杀线真菌的产孢量。
[专利] 实用新型 CN201320788050.1
摘要:本实用新型公开了一种伊氏杀线真菌固体发酵装置,包括一盘体,所述盘体的底盘上打有若干孔,用铜钉将至少一层可将所有孔罩住的金属网固定在底盘上;还配设有可铺在盘底上以覆盖住铝制网的保鲜膜和可包封住盘口的保鲜膜。其具有良好的透氧性和透湿度,利于发酵,且整个装置可彻底灭菌,以杜绝污染。
[专利] 发明专利 CN200810226064.8
国家林业局科技发展中心 中国农业大学 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 2010-06-16
摘要:本发明公开了一种抗旱相关转录因子及其编码基因应用。该转录因子是如下a)或b)的蛋白:a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;b)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且抗旱相关的由a)衍生的转录因子。所述蛋白的编码基因是如下1)或2)或3)的基因:1)其核苷酸序列是序列表中序列1;2)在严格条件下1)限定的DNA片段杂交且编码抗旱相关的转录因子的DNA分子;3)1)或2)的基因具有90%以上的同源性,且编码抗旱相关的转录因子的DNA分子。用所述基因培育的拟南芥抗旱性明显增强。
摘要:松材线虫病是一种由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus(Steiner et Burher))引起的松树快速枯萎死亡、连片毁灭的森林病害.但由于松材线虫的隐蔽性,直接针对松材线虫的防治研究较少,其中直接利用真菌孢子侵染松材线虫的活力测定也未见报道.而Esteya vermicola是世界上第一个被报道的松材线虫内寄生真菌,其能产生新月形和杆状两种形态的分生孢子,仅新月形孢子能粘附并侵染松材线虫.平板生测显示生长在活体菌丝上的分生孢子对松材线虫有很高的侵染活力,为了探索能否采用E.vermicola孢子悬浮液防治松材线虫,通过本研究测定内寄生真菌E.vermicola离体分生孢子对松材线虫的侵染活力,从而为松材线虫的直接防治提供理论参考和打下深入研究的基础.本文从不同培养基,不同测定方法,不同菌株,不同孢子浓度四个方面测定该真菌离体分生孢子对松材线虫的侵染活力.结果表明,该真菌离体分生孢子对松材线虫有侵染活力.另外,PDA固体培养较之PDB液体培养所得孢子更能有效的粘附和杀死松材线虫.在水琼脂(WA)平板上采用浸渍法测定孢子对线虫的侵染活力较之其他处理效果最好.在供试的3个菌株(CUN 120806、CBS 120806和CBS 115803)中CBS 115803菌株对松材线虫具有较高侵染活性.4个不同浓度(1×109、1×108、1×107、1×106个.mL-1)孢子对线虫的作用中,随着孢子浓度降低,孢子对线虫侵染能力也随之降低.
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