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摘要:目的:研究乙酰肝素酶(HPA)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与临床特征之间的关系;并分析三者表达的相关性.方法:采用免疫组织化学检测45例非小细胞肺癌组织及10例正常组织中HPA、HGF及VEGF的表达水平.结果:非小细胞肺癌组织中HPA、VEGF的表达与正常组织表达、TNM分期有关.HGF的表达与正常组织的表达有关.三者中任意两者间在非小细胞肺癌组织中的表达均呈正相关性.结论:HPA、HGF与VEGF参与了非小细胞肺癌的发生、发展、浸润与转移;在非小细胞肺癌的发展过程中,三者之间可能存在协同作用....
摘要:3D打印技术是基于计算机三维数字成像技术及多层次连续打印的一种新兴应用技术.生物3D打印技术则是基于3D打印的基础上,以活细胞为原料结合生物材料、生命体材料的拓展延伸,打印活体组织与器官的一种技术.生物3D打印技术已在再生医学及器官移植方面取得了一定的成果,被应用于骨骼、皮肤、人造血管、心脏组织等再生与重建领域.本文主要从生物3D打印技术的方式及特点,生物3D打印技术的研究现状与应用,生物3D打印的发展前景的展望等几个方面进行简要的综述....
[博士论文] 王锦阳
人体解剖与组织胚胎学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:骨肉瘤是最常见的原发性骨肿瘤,最常见于儿童和青少年,其5年生存率仍不尽人意。众所周知,表皮生长因子受体(EGFR)与骨肉瘤TNM分期呈正相关关系,这表明EGFR在骨肉瘤进展中发挥重要作用。本研究的目的是探讨这种相关性的潜在机制。为此,我们发现EGF促进MG63细胞迁移和侵袭以及通过Rho A活化细胞应力纤维形成,并且可以通过抑制Rho A表达来逆转这些作用。此外,在RhoA下游的分子,包括ROCK,LIMK2和Cofilin,也在EGF诱导的MG63细胞中被激活,导致肌动蛋白应力纤维形成和细胞迁移。使用已知的抑制剂或shRNA抑制MG63细胞中的RhoA,ROCK,LIMK2或Cofilin可抑制肌动蛋白应力纤维形成和细胞迁移。因此,我们得出结论:信号通路RhoA/ROCK/LIMK2/Cofilin在EGFR活化后介导MG63细胞中的肌动蛋白微丝形成和细胞迁移。此信号通路为预防骨肉瘤进展和治疗骨肉瘤提供了有希望的靶点。
  1.EGF通过激活EGFR促进MG63细胞迁移
  (1)背景:
  受体酪氨酸激酶的表皮生长因子受体(EGFR)位于调节细胞增殖,存活,粘附,迁移和分化的复杂信号转导级联的头部。虽然生长因子诱导的EGFR信号传导对许多正常形态发生发展过程是必不可少的,并涉及许多额外的细胞反应,但该受体家族的成员的异常活化已显示在肿瘤细胞的发育和生长中起关键作用。
  (2)目的:
  本节的目的是探讨EGF是否可以激活MG63细胞中EGFR的表达,以及EGF对肌动蛋白应力纤维形成的影响。
  (3)材料方法和结果:
  用EGF处理MG63细胞2h后EGFR磷酸化显著增加,并且达到峰值,4h时开始减弱。与对照组相比,10ng/mL EGF诱导显著增加细胞侵袭(p<0.05)。此外,划痕实验显示,与对照组相比,10ng/mL EGF处理组在12,24,36和48h时MG63细胞的迁移显著增加(p<0.05)。肌动蛋白应力纤维在几种重要的细胞过程中(如迁移,胞质分裂和形态发生)提供力方面的基本作用。因此,观察用EGF处理后MG63细胞中肌动蛋白应力纤维的形成和分布,从6h开始,肌动蛋白应力纤维的分布和形成在MG63细胞的核周围达到峰值。
  (4)结论:
  EGF激活MG63细胞中的EGFR表达,并且其能够通过增加肌动蛋白应力纤维形成来促进细胞迁移。
  2.Rho A参与EGF诱导的MG63细胞迁移
  (1)背景:
  RhoA是Rho GTPase家族中研究最为广泛的成员,属于小G蛋白Ras超家族。它在信号转导中发挥重要作用,并且报道显示调节许多生物学活性,包括应力纤维基因转录、膜转运和粘着斑以及肿瘤发展的过程。
  (2)目的:
  本节的目的是确认RhoA是否参与EGF诱导的MG63细胞迁移。
  (3)材料方法和结果:
  为了确定RhoA在MG63细胞迁移中的作用,进行了pull-down实验。我们发现GTP-结合的Rho A在用EGF处理后6~12h显著增加。为了进一步探索RhoA在EGF诱导的MG63细胞迁移中的作用,观察RhoA shRNA干扰作用。实验结果显示在RhoA shRNA处理后的MG63细胞中RhoA及其下游ROCK的蛋白表达与mCherry对照组相比显著降低。Transwell实验结果显示Rho A shRNA与mCherry对照组相比MG63细胞迁移显著减慢。此外,在Rho A shRNA处理组中,肌动蛋白应力纤维的重组也受到抑制。Rho抑制剂C3转移酶以浓度依赖性方式抑制Rho A和ROCK的磷酸化,同时C3转移酶处理则可减少应力纤维的形成。在24,36和48h时,与EGF-单独处理组相比,用EGF与C3转移酶处理的MG63细胞显示迁移减少。
  (4)结论:
  RhoA参与EGF诱导的MG63细胞迁移,并且抑制RhoA的能够抑制应激纤维的形成和MG63细胞的迁移。
  3.RhoA激活ROCK信号介导MG63细胞迁移
  (1)背景:
  Rho相关蛋白激酶(ROCK)是属于丝氨酸-苏氨酸激酶的AGC(PKA/PKG/PKC)家族的激酶。它主要通过作用于细胞骨架来调节细胞的形状和运动。ROCK在广泛在不同细胞中发挥作用,ROCK是小GTP酶Rho的下游效应蛋白,是细胞骨架的主要调节剂之一。
  (2)目的:
  本节的目的是确定ROCK是否作为RhoA下游参与EGF诱导的MG63细胞迁移及其应力纤维重组。
  (3)材料方法和结果:
  ROCK是Rho A的主要下游效应器,其主要作用是通过作用于细胞骨架来调节细胞的形状和运动。因此,检测Rho A是否通过ROCK促进了EGF诱导MG63细胞中的应力纤维形成和细胞迁移。利用ROCK抑制剂Y27632预处理MG63细胞2h,然后用EGF处理,结果显示ROCK磷酸化从2h开始增加,并在6h达到最大值,12h后ROCK磷酸化恢复至基线水平。与没有Y27632预处理的组相比,Y27632预处理组中的应力纤维的重组明显受到抑制。此外,划痕实验显示对照组和Y27632处理组之间MG63细胞迁移没有显著差异。然而,EGF+Y27632组迁移的MG63细胞数量与单用EGF组相比下降(p<0.05)。
  (4)结论:
  ROCK是Rho A的主要下游效应子,能够促进MG63细胞迁移并参与应力纤维重组,抑制ROCK表达,导致EGF诱导的MG63细胞迁移减少和应力纤维表达降低。
  4.ROCK激活LIMK2/Cofilin信号介导MG63细胞迁移
  (1)背景:
  Cofilin是一种广泛分布的细胞内肌动蛋白调节蛋白,可以结合和解聚丝状F-肌动蛋白并以pH依赖性方式抑制单体G-肌动蛋白的聚合。它参与肌动蛋白-丝切蛋白复合物从细胞质向细胞核的转位。
  (2)目的:
  确定ROCK是否通过激活下游LIMK2/Cofilin信号传导介导MG63细胞迁移。
  (3)材料方法和结果:
  试图确定ROCK是否通过激活的LIMK2/Cofilin信号传导介导MG63细胞迁移。实验结果显示LIMK2磷酸化显著增加并且在6h达到峰值,然后在EGF刺激后12h下降。Cofilin磷酸化表现出类似的趋势,2h后增加并且在6h达到峰值。此外,EGF诱导的LIMK2和Cofilin1的磷酸化被ROCK抑制剂Y27632抑制,表明EGF通过ROCK诱导LIMK2和Cofilin激活。利用LIMK2和Cofilin1的siRNA转染细胞,结果发现LIMK2和Cofilin1在MG63细胞中的表达被其各自的siRNA明显地抑制,同时siLIMK2和siCofilin1抑制应力纤维形成。
  (4)结论:
  LIMK2和Cofilin1作用于Rho A/ROCK的下游,以调节MG63细胞中EGF诱导的应激纤维形成。
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