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北大核心 CSTPCD CA
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摘要:用血凝抑制试验和间接ELISA两种方法检测乙脑阳性血清均呈阳性反应,检测乙脑阴性血清均呈阴性反应.用间接ELISA对来自9个猪场74份送检血清进行了猪乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)抗体检测,并与血凝抑制试验(HI)进行对比,两种方法检测总符合率为85.1%(63/74),经统计分析,检测结果差异不显著(P>0.05).对来自无猪乙脑病猪场24头健康猪的血清进行检测,两种方法结果均为阴性,符合率为100%.对10份阳性血清进行检测,ELISA检测效价较HI效价高,表明ELISA比HI敏感.结果表明,ELISA与HI检测结果相符,前者更适用于猪血清中乙脑IgG抗体的大规模检测....
摘要:本研究以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基因组RNA为模板,采用RT-PCR一步法扩增了PrM基因的全长cDNA(558 bp),用BamHI和 EcoRI双酶切PrM基因的扩增产物,回收目的基因后将其克隆至经同样酶切的伪狂犬病病毒通用转移载体pPgG-uni中,获得了转移载体pPgG-PrM,并对其外源片段进行了测序.序列分析结果表明:与已报道的乙型脑炎病毒SA14强毒株和SA14-14-2疫苗株的核苷酸序列比较, PrM基因的同源性为100%.以伪狂犬病病毒Ea株TK-/gG-/LacZ+突变株为载体构建了一株表达乙型脑炎病毒PrM基因的重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/PrM+,为进一步开展猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究奠定了基础....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:以乙型脑炎病毒SA14-14-2株基因组RNA为模板,采用RT-PCR一步法扩增prM/E基因的全长cDNA(约2kb),将其克隆至pMD18-T载体,获得了克隆质粒pTprM/E,并对其进行了测序.序列分析结果表明,与已报道的SA14强毒株和SA14-14-2疫苗株的核苷酸比较,prM基因的序列同源性为100%,E发生了4个点突变,其中1个为回复突变,并导致了3个氨基酸的改变.以伪狂犬病病毒Ea株TK-/gG-/LacZ+突变株为载体,构建了1株乙脑病毒prM/E基因的重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/prM/E+.乙脑病毒prM/E基因的克隆及重组伪狂犬病病毒的成功构建,为开展乙脑病毒分子生物学及猪伪狂犬病-乙脑二价基因工程疫苗的研究打下了坚实基础....
摘要:乙脑是经虫媒传播的人畜共患病毒病,该病引起种猪繁殖障碍,给畜牧业带来很大的经济损失,还严重危害人民身体健康[1],控制猪乙脑是防制乙脑、保障养猪业发展的重要措施,为此进行了猪乙脑乳胶凝集试验的研究,并在此基础上通过组装乙脑乳胶抗原、乙脑阳性血清、乙脑阴性血清和稀释液,研制出猪乙脑乳胶凝集试验抗体检测试剂盒,猪乙脑乳胶凝集试验检测猪乙脑抗体具有准确、灵敏度高、特异性强、简便实用的特点,是检测猪乙脑抗体的一种较为理想的方法[2].为了进一步了解猪乙脑乳胶凝集试验抗体检测试剂盒保存条件,将其在不同的温度条件下保存一段时间进行检测,结果表明该试剂盒稳定性较好,实验结果报告如下....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK-NS1.将pUSK-NS1与伪狂犬病毒Ea株TK /gG /LacZ+突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK /gG /NS1+.经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白.该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株....
摘要:用血凝抑制试验(HI)和乳胶凝集试验(LAT)两种方法检测乙型脑炎弱毒疫苗免疫猪血清,结果均呈阳性反应.用LAT对来自12个猪场的94份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与HI进行了对比,两种方法检测结果阳性符合率和总符合率分别为90.3%(56/62)和88.3%(83/94),两种方法检测结果差异不显著(p>0.05).对来自无乙型脑炎的12头健康猪血清进行检测,两种方法检测结果均为阴性.结果表明,用LST与HI检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:利用真核表达载体pCIneo和pcDNA3.1(+)分别构建了含有猪细小病毒VP1基因的pCIneo VP1和含有VP2基因的pCIneo VP2与pcDNA VP2三种真核表达质粒.将上述三种真核表达质粒分别转染IBRS-2细胞,利用间接ELISA检测表达情况,结果表明上述三种质粒均能在IBRS-2细胞表达,表达产物位于细胞中.在此基础上,利用这三种质粒分别以肌内注射的方式,间隔2周2次免疫小鼠,结果发现所有表达质粒均能诱导产生明显的细胞免疫和体液免疫,其中pCIneo VP1质粒诱导的体液免疫最强,与猪细小病毒灭活疫苗免疫组相当,pCIneo VP2诱导的细胞免疫应答强于PPV灭活组,pCIneo VP1和pCIneo VP2联合免疫并没有加强作用....
摘要:以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558 bp特异性带.将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明我国疫苗株SA14-14-2的prM基因核苷酸序列与GenBank收录的完全一致.prM基因的获得为进一步研究该基因的免疫原性以及乙型脑炎病毒基因工程疫苗奠定了基础....
摘要:乙型脑炎是由黄病毒科的乙型脑炎病毒引起的一种人与动物共患的虫媒病毒性疾病.由于本病对人类和多种动物危害非常严重,因而对其进行确诊很重要.本文对乙脑的病原学和血清学断方法进行了较为全面的综述....
摘要:在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果.尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用....
摘要:本试验建立了一种以固相滤膜为载体,以红色胶体金颗粒标记的兔抗猪IgG作为探针,特异性地检测猪流行性乙型脑炎病毒抗体的斑点金免疫渗滤测定法(DIGFA).与血凝抑制试验(HI)对比检测了54份猪血清临床样本,两法的阳性符合率为71.4%、阴性符合率为65.5%、总符合率为81.4%.本法中抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,数分钟内即可用肉眼观查结果,具有快速,操作简单,敏感性高,特异性强,重复性好,易于判读等优点,特别适合于猪流行性乙型脑炎快速诊断和大规模血清流行病学调查....
[期刊论文] 王祥 陈焕春
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CSTPCD 北大核心
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摘要:流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.本文对JEV的基因组结构、结构蛋白、非结构蛋白及其功能、重组活疫苗和核酸疫苗的研究现状以及与常规疫苗相比所具有的优缺点等方面进行了较为详尽的综述,并且提出JEV复制的确切机制及其蛋白尤其是非结构蛋白的结构与功能尚需深入研究,以期为进一步改良JE新型疫苗打下基础....
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北大核心 CSTPCD CA CBST
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摘要:以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14-14-2的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增其NS 1基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,得到克隆质粒pMD18-T-NS1.pMD18-T-NS1经EcoRI和SalI酶切后,回收NS 1片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)EcoRI/SalI位点,构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)-NS1.转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导获得高效表达,产物经SDS-PAGE电泳结果显示,表达产物分子量约为45kD.Western blottmg分析表明表达产物具有抗原活性....
摘要:将羊经丙硫咪唑驱虫后隔离饲养,人工感染捻转血矛线虫第3期幼虫,当第26天从粪便中查出捻转血矛线虫虫卵后,由颈静脉、肌肉注射及经口灌服苏云金芽胞杆菌(B.t)伴胞晶体蛋白,每日1次,连续3次.以后隔日从羊直肠内采粪 ,用饱和盐水漂浮法查虫卵,并计算EPG(每克粪便中虫卵数).静注和肌注晶体蛋白后的羊 ,分别于注射后1周、2周、4周扑杀,口服和对照组羊4周后扑杀,从皱胃和小肠内查虫.结果表明,经静注(晶体蛋白量25 mg)或肌注(50 mg)的羊,在第16天时粪便中虫卵减少率均为 100%;第2周时粗计驱虫率分别为95.4%和90.8%;第4周时,粪中虫卵减少率和粗计驱虫率均为100%.而口服组和对照组羊粪便中虫卵无大的变化.本试验为开发用苏云金芽胞杆菌微生物制剂防制动物寄生虫病提供了依据....
摘要:用自然感染蠕虫的绵羊观察并确证氧阿苯哒唑对绵羊蠕虫的驱除效果.各试验组羊分别一次内服氧阿苯哒唑5、10、20mg/kg,药物对照组内服丙硫咪唑10mg/kg.结果是氧阿苯哒唑各试验组的精计驱虫率和粗计驱虫率对食道口线虫、奥斯特线虫和细颈线虫均为100%;高剂量对毛首线虫分别为100%和95%;中、高剂量对莫尼茨绦虫均为100%.给药后无毒副反应,剖检未见病理变化.表明氧阿苯哒唑对绵羊的抗蠕虫效果确实,且具有高效、广谱、显效快、作用强、无毒副作用等特点,比丙硫咪唑更适于推广应用....
[博士论文] 王祥
作物遗传育种 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:蛋白质的三维结构决定了其功能,解析蛋白质的三维结构是揭示其功能的基础。本研究利用X射线晶体学解析了细胞质雄性不育蛋白WA352以及甲基转移酶复合体METTL3-METTL14复合体的晶体结构,对其功能的深入研究奠定了基础。
  野败型细胞质雄性不育是三系杂交水稻育种中应用最广泛的不育系,对其不育机理研究具有重大理论价值和生产意义。已有研究表明WA352是野败型细胞质雄性不育的不育基因。WA352通过与COX11互作引起活性氧的爆发,并最终导致花粉败育,然而WA352与COX11互作的机制尚不清楚。本文解析了WA3521.3(A)的高分辨率晶体结构,结构对比发现WA352是一种全新的折叠形式。综合结构与序列保守性分析,发现两个WA352三维空间上的保守区域。通过分子动力学模拟,本研究构建了WA352与COX11复合体的结构并提出了WA352影响COX11铜离子转运的模型。以上研究加深了对WA352结构和功能的理解,为进一步研究细胞质雄性不育奠定了基础。
  在细胞中,RNA的化学修饰了发挥许多重要的功能。m6A是mRNA和lncRNA中丰度最高的一种修饰,m6A分布非常广泛,在病毒,细菌,酵母,植物和哺乳动物中都能检测到m6A的存在。通过影响如前体mRNA加工,mRNA翻译,mRNA降解以及miRNA的产生等方面,m6A调控了生殖发育、细胞周期、细胞命运、热激反应等众多生命过程。m6A可以分别被RNA甲基转移酶和去甲基酶动态修饰或去除。在人类中,METTL3和METTL14两个甲基转移酶形成稳定的异源二聚体来催化甲基转移。但关于RNA甲基转移酶METTL3-METTL14复合体的催化机制还不清楚。本研究报道了METTL3-METTL14不含配体、结合AdoMet、AdoHcy的三个晶体结构。分析结构可知,METTL3和METTL14的构象属于第一类甲基转移酶。METTL3和METTL14由大量的氢键形成了稳定的相互作用,在相互作用区包含一个富含正电荷的沟槽。有意思的是,AdoMet仅存在METTL3的活性口袋中,而不在METTL14的活性口袋。综合生物化学实验结果,我们认为在m6A甲基转移酶复合物中,METTL3亚基是催化中心,而METTL14主要起到稳定结构和结合RNA的作用。METTL3-METTL14复合体晶体结构为m6A的功能研究奠定了基础。
[硕士论文] 王祥
农业推广 华中农业大学 2016(学位年度)
摘要:稻米作为地球上1/3以上人口日常食用的粮食,食味品质是其食用价值和商品价值的重要决定因素。怎样科学客观地评价水稻稻米的食味品质,为育出食味品质好的品种提供选择的依据,一直以来是育种家重点关注的问题。本文用米饭食味计测量了黄华占与双桂36的重组自交系的食味值,分析了其与稻米直链淀粉含量、碱消值、胶稠度等相关理化指标之间的相关性,并对食味值、碱消值、胶稠度、直链淀粉含量等性状进行数量性状位点(QTL)定位分析,旨在为黄华占衍生后代优良食味品种的选育建立一套客观、简便可靠的评价方法,利用QTL定位发掘的连锁标记加快黄华占衍生后代优良食味品种的选育速度。
  本研究主要内容包括:⑴黄华占/双桂36重组自交系群体的表型分布分析表明,所考察的7个性状在RIL群体表现为连续分布的数量性状遗传特征,变异幅度大。食味值和直链淀粉含量的分布表现为明显的双峰分布,可能存在少数主效位点影响这两个性状。黄华占与双桂36在食味值、垩白粒率、垩白度、胶稠度、直链淀粉含量等7个品质性状上存在显著差异。⑵在黄华占/双桂36重组自交系中,米饭食味值与稻米垩白粒率、垩白度、碱消值、直链淀粉含量极显著负相关,与胶稠度极显著正相关,与蛋白质含量相关不显著。⑶利用QTL IciMapping3.1对稻米食味值、垩白与淀粉理化指标性状等性状进行了QTL定位,并分析其加性效应。共检测到18个具有显著加性效应的QTL,分布于6条染色体上。其中,食味值主效QTL2个,垩白粒率主效QTL3个,垩白度主效QTL4个,碱消值主效QTL1个,胶稠度主效QTL4个,直链淀粉含量QTL2个,蛋白质含量QTL2个。
摘要:目的研究85头德国牧羊犬的10个基因座多态性.方法选用美国应用生物系统公司的10个商用犬微卫星基因座荧光标记复合扩增试剂盒进行PCR、并进行统计学分析.结果对85头德国牧羊犬的10个基因座的多态性研究表明,10个基因座累积DP值在0.9999972,非父排除率在0.9399,微卫星DNA基因座PEZ6、PEZ8、FHC2054的等位基因数均在8个以上,DP值接近或超过0.9,杂合度接近或超过0.7,能有效地应用犬的个体识别和亲权关系鉴定,其它7个基因座均未达到理想的个体识别和亲权鉴定使用条件.结论联合使用多个犬微卫星基因座,可以用于犬的个体识别和亲权鉴定....
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