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摘要:目的 构建并筛选能高效沉默大鼠垂体瘤转化基因(Rpttg)的shRNA慢病毒重组载体.方法 设计并合成4组特异性针对大鼠PTTG基因的sbRNA序列将其构建到慢病毒载体Pgcl-GFP中;评估慢病毒重组载体在大鼠肾细胞中的转染效率并运用real time PER技术检测各组重组载体对目的基因的沉默效果.结果 PER及测序结果显示,目的 片段插入正确,重组载体构建成功,慢病毒重组载体转染效率达70%以上;4组shRNA序列均有基因敲减效果,并且第4组sllRNA(4# shRNA)序列效果最为明显(>80%).结论 成功构建了高效沉默Rpttg基因的慢病毒载体;验证了慢病毒栽体作为RNAi栽体工具转染效率的可靠性;实验显示4# shRNA能高效抑制内源性Rpt-TG基因表达....
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