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摘要:探讨低温保存对动脉管壁黏弹性的影响.使用美国TA公司的动态热机械分析仪(DMTA MarK IV)测定了低温保存家兔颈总动脉和新鲜对照组的松弛曲线,得到了低温保存动脉和新鲜对照组的归一化应力松弛函数.结果表明,控制应变水平为50%,低温保存动脉应力衰减明显快于新鲜对照组.经过约5min衰减后,新鲜对照组动脉尚(未)保持初始应力的40%到70%.而低温保存动脉只能保持初始应力的0~20%.
摘要:目的 探讨冷冻干燥法用于人类精子保存的安全性.方法 取健康志愿者合格精液 40 份,平均分为 4 组,其中 3 组分别加入不同的冻干保护剂 (ETBS;ETBS+海藻糖;ETBS+海藻糖+蛋黄) 后给予冷冻干燥处理,在 4℃冰箱中保存 3 周;1 组作为新鲜精液对照组.对 4 组标本分别以原位缺口末端标记 (TUNEL) 法和彗星试验进行DNA 断裂精子百分率检测.结果 ETBS、ETBS+海藻糖、ETBS+海藻糖+蛋黄组和新鲜精液组 DNA 断裂精子百分率以 TUNEL 法检测,分别为 (6.39±1.46)%、(5.75±1.29)%、(5.20±1.38)%、(4.94±1.86)%;以彗星试验检测,分别为 (6.48±1.58)%、(5.83±1.48)%、(5.28±1.42)%、(5.12±1.65)%.冷冻干燥保存后的各组与新鲜精液相比较,DNA断裂精子百分率差异均无统计学意义 (P>0.05).结论 以 ETBS 或 ETBS 加海藻糖、蛋黄为保护剂的冷冻干燥法对人精子 DNA 无明显损伤,可有效地保护人精子的DNA.
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北大核心 CSTPCD CSCD CA EI CBST
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摘要:使用DMA测定了3种降温速率低温保存的家兔颈总动脉的蠕变曲线.结果表明:1.5℃/min降温速率低温保存后,血管的粘弹性最接近新鲜对照组;而对应降温速率1.5,5,10℃/min,血管粘弹性依次降低.动脉的粘弹性极有可能是评估其低温保存效果的潜在评价指标.
摘要:通过组织工程构建出一种全新组织,移植或植入后替代丢失的或者功能不正常器官和组织.由生物可降解性、相容性细胞外基质为新组织的生长和构建提供支架,并通过多种途径调节、促进和保持细胞的粘附、生长增殖、分化和特异性基因的表达,在新组织的功能中发挥重要的作用.组织攻程细胞外基质的研究在组织发生生物学机制研究、组织器官移植和基因治疗等领域具有重要意义.
摘要:众所周知,离体的人体细胞、组织和器官在常规方式下不能长期保存.为保持这些离体生命材料的生物学功能,必须采用长期保存措施.而在生物医学研究中,比如细胞动力学、基因、干细胞治疗等,也希望某一阶段细胞能长期保持,以保证有充分的时间进行研究.本文简要讨论目前为止所发现的这些因素以及相应的低温损伤机制和预防措施.其中,包括最著名的Peter Mazur关于低温损伤的两点假定.
摘要:①目的研究4种不同的复温方法对深低温保存兔颈总动脉力学性能的影响.②方法深低温保存后的兔颈总动脉,随机分成4组,分别采用4种不同的复温方法复温:37 ℃水浴、空气复温、-20 ℃冰和液氮冰复温,以新鲜血管为对照.并分别测定4种方法复温后动脉的力学性能,包括轴向和周向弹性模数和断裂应力.③结果所有冷冻复温后的血管轴向和周向参数及断裂应力均小于新鲜血管(F=2.89~13.38,q=2.45~9.15,P<0.05).随着降温速率的降低,血管轴向弹性模数和断裂应力等参数基本是增加的.液氮冰中复温的血管,其上述参数最接近新鲜血管.④结论逐步慢速复温可以改善深低温保存复温后血管的力学性能,液氮冰复温可能是最好的复温方法.
摘要:①目的观察深低温保存后兔颈总动脉内皮细胞存在状态、平滑肌细胞存活与再生能力;观察并分析深低温保存后、体外培养后动脉血管壁的结构变化、血管力学性能变化.②方法获取兔子的颈总动脉并用含有1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)的低温保护剂深低温保存,复温时采用液氮中预冷的冰袋缓慢复温.以新鲜动脉作为对照.体外培养新鲜和冷冻复温后的动脉的平滑肌细胞(SMCs);同时将冷冻复温后的血管组织在体外培养6、12和24 h,以观察血管内皮细胞和SMCs的变化,以及血管壁的完整性(弹力膜或纤维的完整性)和这些血管的力学特性(弹性模量和断裂压力)的变化.③结果冷冻复温后血管SMCs在体外培养开始生长增殖所需的时间(24~36 h)几乎与新鲜血管相似,生长的速度也相似.冷冻复温后,血管内壁存留有少量的内皮细胞,平滑肌和血管壁结构没有明显变化.但是,血管力学性能显著降低(F=5.325~97.458,q=2.32~12.38,P<0.05、0.01).冷冻复温后的血管作为完整的组织体外培养后,所有的内皮细胞脱落,部分SMCs出现变性和坏死;弹力纤维和胶原出现不同程度的断裂,力学性能进一步降低(q=2.12~8.76,P<0.05、0.01).④结论本研究中应用的方法对于保护血管的SMCs是有效的,但是对于血管内皮细胞效果不好;冷冻复温过程和复温后体外培养损伤了血管壁的结构,降低了血管的力学性能.
摘要:①目的用二甲基亚砜(Me2SO)和1,2-丙二醇(PROH)深低温保存兔颈总动脉,评价两种保护剂对深低温保存复温后血管平滑肌细胞再生能力和超微结构的影响.②方法将兔颈总动脉用含有1.5 mol/L的Me2SO或1.5 mol/L PROH的低温保护剂深低温保存,并在冰袋中缓慢复温,新鲜血管作为对照.复温后和新鲜血管的平滑肌细胞进行体外培养,观察平滑肌细胞的再生能力;同时在透射电镜下观察平滑肌细胞的超微结构.③结果体外培养结果显示,新鲜血管的平滑肌细胞体外培养24 h后开始生长,PROH保存血管的平滑肌细胞在培养24~36 h后开始生长;Me2SO保存血管的平滑肌细胞体外培养36~48 h开始生长,而且再生细胞的数目显著少于前者,生长速度慢.透射电镜下,与新鲜血管的平滑肌细胞相比,PROH或Me2SO冷冻保存后血管的平滑肌细胞的线粒体等细胞器均无显著变化.但是Me2SO保存血管的平滑肌细胞核染色质的电子密度发生显著变化,异染色质的电子密度明显降低,与新鲜或PROH深低温保存血管平滑肌细胞核常染色质的低电子密度和异染色质的高电子密度明显不同.④结论 1.5 mol/L PROH能够有效地保持平滑肌细胞的活性,并且对细胞的再生能力没有明显的损伤作用.Me2SO损伤平滑肌细胞的再生能力,同时引起平滑肌细胞核染色质超微结构的变化.
摘要:使用新型的电子粒子计数仪(EPC)(Electronic Particle Counter, MultisizerTM 3, Beckman Coulter Inc., USA)测定了人RBC(红细胞)在不同渗透压的NaCl溶液中的体积, 并使用冷冻过程细胞模型预测了RBC在生理盐水(0.9% NaCl溶液)中平衡冷冻的体积变化. 假定温度对RBC的体积的影响相对渗透压而言可以忽略, 则通过NaCl-H2O二元溶液的相图可获得不同温度下NaCl溶液的渗透压值(通过质量百分比浓度换算得到), 从而将计算的体积值与以上测量值相互验证.
[博士论文] 王沛涛
生物化学与分子生物学 中国科学技术大学 2004(学位年度)
摘要:  本文研究了热休克和冷休克后HELA细胞的热休克蛋白(HSPs)表达情况,比较热休克和冷休克细胞在经历冷冻-复温过程后细胞的存活率,探讨热休克蛋白在细胞深低温保存过程中的作用。文章按不同处理方法对HELA细胞进行分组,处理后细胞恢复培养2、4和8小时。对照组:细胞不做任何处理,直接进行实验观察。Northern和Western杂交结果显示,热休克处理后,HELA细胞HSP70和HSP90的表达水平明显提高,而冷休克处理后,HSP70和HSP90的表达水平显著降低。本研究结果证实,热休克诱导HELA细胞热休克蛋白的高表达,而冷休克后细胞的热休克蛋白表达水平降低;热休克处理可能对细胞造成一定程度和一定时间内的损伤,并影响深低温保存后细胞存活率。通过本研究,我们认为,在细胞的深低温保存过程中,诱导性高表达的热休克蛋白能够改善细胞对低温保护剂(二甲基亚砜)细胞毒性作用和冷冻-复温损伤的耐受能力,提高复温后细胞的存活率。  
[成果] hg06126776 山东
R31 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2006
成果简介:本研究通过系统的细胞活性测定、组织病理学评价、超微结构观察和力学性能测定,对深低温保存并体外灌注培养后血管的总体质量进行分析研究,分析不同成分的变化与血管总体性能变化的关系。同时,通过不同学科研究方法的结合与交叉,本研究取得了非常有价值的实验数据,得出了可信的研究结论。结果显示:深低温保存后血管的内皮细胞存在、结构形态正常;平滑肌细胞体外生长能力良好,与新鲜血管相似;深低温保存复温后血管的力学性能显著降低,不同复温方法对血管的力学性能的影响有显著性。深低温保存复温后血管体外灌注培养后,血管的细胞活性和血管壁的构成发生显著变化,血管的力学性能有一定程度降低。
摘要:本研究使用基于动态力学分析仪(DMA-2980,TA Instruments,New Castle,Delaware,USA)的蠕变行为来评估低温保存动脉的粘弹性优劣,试图从粘弹性力学角度为动脉的临床应用提供新的评估标准.与新鲜动脉比较而言,经低温保存的动脉,其粘弹性均有损失;随降温速率从1.5,5至10℃/min,低温保存动脉的粘弹性损失趋于增加.结果 表明,1.5℃/min为本研究中最佳降温速率.动脉的蠕变行为与理论模型的相符程度,可作为评价其粘弹性好坏的标准.低温保存动脉的粘弹性与其生物学功能的最大保留是否需要相似的低温保存程序,尚需进一步研究.
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