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摘要:鼠李糖脂是最常见,研究最深入,应用最广泛的一类生物表面活性剂.从油田附近、沼气池旁的土壤中分离得到了25株菌,通过硫酸-苯酚反应,乳化实验,排油性实验,薄层色谱实验筛选产鼠李糖脂的菌株并表征产生的鼠李糖脂,通过16S rDNA序列确定细菌的种属.硫酸-苯酚反应显示有2株菌可能产鼠李糖脂;5株菌的发酵液具有明显的乳化效果,命名为"其红"这株菌的乳化指数可达58.97%;1株菌的发酵液上清稀释10倍后排油圈直径仍可达3.53 cm;薄层色谱实验也显示"其红"菌产鼠李糖脂.在四个实验中"其红"菌都检测到了鼠李糖脂,故确认"其红"菌可以产鼠李糖脂.16S rDNA序列分析表明"其红"菌属于希瓦氏菌属(Shewanella)并与腐败希瓦菌(S.putrefaciens LMG 26268(T))相似度最高....
摘要:通过田间试验研究使用壳寡糖对茶叶品质的影响.采用三种不同喷施方式A1(不同时间,喷施壳寡糖2次)、A2(不同时间,喷施壳寡糖3次)、A3(不同时间,喷施壳寡糖4次)对茶树进行处理.结果表明,施用壳寡糖对茶树新梢生长有影响,其中A3处理对促生效果最明显,净生长长度比对照提高7.36%,生长速率提高7.46%.三种处理方式均对茶叶品质显著改善,A3效果最佳:A3的水浸出物含量比对照提高44.41%,可溶性糖含量增加17.12%,茶多酚含量15.91%.上述田间试验结果说明,壳寡糖具有较好促生和提高品质效果,可应用于实际茶叶种植生产....
[硕士论文] 王江
水生生物学 大连海洋大学 2017(学位年度)
摘要:海洋中蕴藏着丰富的物质和微生物资源,其中,聚羟基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoate:PHA)是存在于海洋微生物体内的一种生物材料,具有生物可降解性,生物相容性等特性,可广泛地用于环保、医疗等领域。早在1926年,法国的科学家 Lemoigne首次在巨大芽孢杆菌中发现了 PHA的最常见单体:聚羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate:PHB),从此开启了PHA的研究之旅。本研究从海边土壤样品中分离得到了一株可以利用甲醇产PHB的菌株,对该菌株进行了鉴定,甲醇浓度的优化,对PHB合成途径中的三个基因进行了克隆、表达、纯化、酶活测定及关键酶的定点突变研究。
  从海洋土壤样品中分离得到了一株以甲醇为唯一能源和碳源合成PHB的菌株,提取其基因组,扩增该菌株的16S rRNA基因序列并用该序列构建了进化树,结果表明分离得到的这株菌属于Methylobacterium菌属,将其命名为Methylobacteriumsp.1805。探索了最适菌株生长的起始甲醇浓度,甲醇补加浓度,菌株对甲醇的耐受性及降解能力,最适PHB积累的甲醇起始浓度。结果表明:将菌接在含0.4%甲醇的生长培养液中,每天补加0.5%的甲醇最利菌的生长,在该条件下,菌株在72h OD600值可达7,进入稳定生长状态。该菌也有良好的甲醇耐受性,在含4%甲醇的培养液中仍能良好地生长,对甲醇的降解能力也很强。将菌接到含0.5%甲醇的产物积累培养液中,每天补加0.5%的甲醇,适宜菌株积累PHB。在优化的条件下,该菌株能够积累51.8%菌体干重的PHB,有工业应用的潜力。
  通过分析Methylobacterium中phaA、phaB、phaC三个基因的同源序列,设计引物,从Methylobacteriumsp.1805中扩增三个基因,测定其序列并将三个基因连接到pET-28a(+)表达载体上,诱导表达三个酶,测定酶活及动力学数据,并对三个酶进行生物信息学分析。用RF(restriction free)克隆的方式对PhaC潜在的关键氨基酸(341的Cys、496的Asp、524的His)进行定点突变,测定突变体的酶活。使用同源对比设计的引物,成功扩增出了三个基因,将其提交到NCBI数据库,登录号分别为KY229163、KY229164、KY229165。测定的PhaA酶活为0.41U,Vmax与Km值分别为0.15μM min-1mg-1和0.25mM,该酶属于cond-enzymes超家族,通过“ping pong”催化机制,将2分子乙酰辅酶A转化为一分子乙酰乙酰辅酶A,整个催化过程是由“Cys89-His348-Cys378”催化域完成。测定的PhaB酶活为1.64U,Vmax与Km值分别为0.48μM min-1mg-1和1.21mM,该酶属于NADB-Rossmann超家族中的短链醇脱氢酶。测定的PhaC酶活为33.51U,Vmax与Km值分别为0.1μM min-1mg-1和0.14 mM,属于PhaC-N超家族的I类PhaC,通过SWISS-MODEL对PhaC进行结构分析,结果表明克隆的PhaC与人类的胃脂肪酶仅有11.91%的相似性,与典型的I类PhaC没有相似性,对可能的三个关键氨基酸进行定点突变后发现酶活都提高了,表明新克隆的PhaC与典型的I类PhaC可能有不同的催化机制。
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