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摘要:目的 建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析方法.方法 针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物.对该方法进行特异性验证,同时对大肠杆菌O157∶H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限进行测定,对61份牛肉样品进行RF-LAMP检测,并与GB 4789.36-2016方法进行比较,评价RF-LAMP方法的敏感性、特异性和准确度.结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果,21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该方法特异性良好.纯培养物检测的灵敏度为5.1 CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g.结论 本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避免了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义....
摘要:以河北地区蔬菜大棚秸秆生物反应堆土壤为原型,结合土壤材料MAT147模型、SPH算法和边界条件,利用ANSYS/LS_DYNA对纵向开沟过程进行数值模拟.在前进速度2 km/h、旋转速度540 r/min、耕深350 mm、刀辊倾斜角度45°参数条件下,前后处理软件LS_PREPOST仿真结果显示,SPH算法可以直观模拟纵向开沟刀辊切削土壤的整个过程,最大等效应力为43.21 MPa,主要集中在与刀辊接触的土壤上;刀辊切削过程显示,在螺旋板及刀片螺旋布置的旋转刀辊作用下,土壤去向主要分为轴向升土和周向抛土,开沟效果明显;刀辊切削应力云图显示,土壤所受的等效应力变化小且整个过程切削比较平稳;切削稳定时的功耗为8.23 kW,与试验中的纵向开沟装置功耗接近,验证了模拟的可靠性,为新型纵向旋转开沟装置及零部件的优化设计提供可靠依据....
摘要:研制了一种适用于不同水域、收割整齐和高效率的蒲草收割船割台,以解决现有白洋淀蒲草人工收割效率低、劳动强度大及一般水草类收割船蒲草收割凌乱的问题.收割船割台采用平行四杆机构控制整体水平升降,采用液压系统控制割刀刀架升降和扶禾机构扶禾角度,对蒲草收割船割台关键部件进行结构分析及参数设计,得出较优的工作参数,以此参数设计的机型进行收割实验,验证设计的合理性.经白洋淀水中试验表明:当割台工作速度为4km/h、扶禾高度为800mm、割幅为1200mm,收割蒲草合格率为91%、切割截面与水平面夹角9°时,完全满足设计需求.该种机型的研制对白洋淀蒲草的收割及后续蒲草编织等方面应用起到一定的作用,但对于其他地区不同结构蒲草有待于进一步研究....
摘要:转基因作物中插入外源基因拷贝数等分子特征是转基因生物安全评价的重要内容,但是以往的拷贝数鉴定方法存在操作性差等不足,因此亟需操作简单且准确的鉴定方法.应用微流滴数字PCR方法鉴定转基因水稻中插入目的基因的拷贝数,测试方法的可行性.实验结果表明,4个重复样品的目的/内标准基因的比值分别为674/662、516/541、737/759、528/571,均值为0.97,因此验证的目的基因拷贝数为1,与Southern杂交结果一致.微流滴数字PCR作为插入外源基因拷贝数鉴定的新方法,具有操作简单、准确度高、设计灵活等优点....
摘要:开沟是秸秆生物反应堆种植作业的重要环节,目前其开沟主要是人工劳动或微耕机作业,人工挖掘填埋劳动强度大、工作效率低,微耕机开沟浅,需要多次作业,不能满足开沟工艺要求.为提高开沟效率,完成秸秆生物反应堆开沟农艺要求,设计制造了一种纵向可调旋转式开沟装置.该装置的开沟刀纵向旋转进行开沟,抛出的土由挡土板引导落在沟的两旁,调节伸缩杆长度控制开沟刀轴倾角,其具有开沟深度可调、开沟效果好、工作效率高及结构简单等特点....
摘要:为解决秸秆反应堆开沟过程中传统开沟机存在的体积大、功耗大、深度不可调等问题,设计了1种机架固定支撑、万向节传动、液压缸深度调节、刀辊轴向升土和周向抛土的纵向旋转开沟机.以开沟机刀辊转速、前进速度、开沟深度、刀片折弯角为试验因素,机器的开沟前后体积比和功耗为试验指标,进行田间试验.结果表明:纵向旋转开沟机在刀辊转速为520 r/min,刀片折弯角50°条件下,前进速度为2.5 km/h、开沟深度为300 mm和前进速度为3.5 km/h、开沟深度为400 mm这2种工况下的功耗和开沟前后体积比,第1种工况测得的平均功耗为9.69 kW、体积比为95%,第2种工况测得的平均功耗为8.26 kW、体积比为92.6%,验证了开沟机的功耗低,开沟效果明显;最后选取3种开沟深度、2种前进速度和3种刀片折弯角组成18种工况进行试验,结果表明刀辊折弯角为50°时,功耗与开沟效果最佳.实验表明该机具有很好的开沟效果且功耗低的优点,该研究为秸秆反应堆开沟机具的研制和配备提供参考....
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北大核心 CSTPCD CSCD CBST
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摘要:转基因大豆GTS40-3-2转化体是种植面积最广的转基因大豆品种,根据GTS40-3-2转化体特异性序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对其进行快速扩增及可视化判断;同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了LAMP法与定性PCR方法检测的敏感性.结果表明:该方法仅对GTS40-3-2转化体产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%.所建立的GTS40-3-2转化体特异性现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于转基因大豆GTS40-3-2成分污染的现场可视化检测....
摘要:根据牛、羊线粒体中物种特异性序列设计引物,应用可视化环状等温扩增技术(visual loop-mediate isothermal amplification,vLAMP)对牛、羊源性成分进行快速扩增及可视化判断,同时建立牛、羊源成分人工污染的饲料模型,考察vLAMP检测方法的灵敏度.结果表明,牛源性引物和羊源性引物仅分别对牛、羊源性成分产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%.本试验所建立的牛、羊源性成分现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏度,操作简单、快速,可用于饲料中牛、羊源性成分污染和食品掺伪的现场可视化检测....
摘要:豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因是目前仅次于Bt基因的广谱性抗虫基因,常用于转基因水稻和转基因棉花的基因工程研究中。根据CpTI基因特异性碱基序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对转基因水稻科丰6号进行扩增,同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了 LAMP 法与定性PCR方法检测的敏感性。结果表明:该方法仅对CpTI基因产生特异性扩增,灵敏度达0.005%;所建立的CpTI基因现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于含有CpTI基因转基因成分污染的快速检测。...
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北大核心 CSTPCD CSCD CA
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摘要:苏云金芽胞杆菌(Bacillus tbutingiensis)WZ-9是从土壤中分离的对马铃薯瓢虫(Henosepilachna vigintioctomaculata)的幼虫有特异杀虫活性的新菌株.实验对WZ-9菌株的形态特征、生长特性、生物活性、基因型和蛋白型等进行了研究.结果表明,WZ-9菌株可产生菱形伴胞晶体,SDS-PAGE检测表达的主要蛋白条带分子量约为130 Kd;液体培养的生长周期是24 h,随菌株的生长培养基Ph发生较大波动,在潜伏期和稳定期,Ph变化较小,在对数生长期Ph呈先迅速下降、再缓慢回升的变化趋势;生物活性测定表明,WZ-9菌对马铃薯瓢虫2龄幼虫72 h校正死亡率达100%,LC50为2.95×107细胞/Ml;基因型鉴定表明,WZ-9菌株含有cry7基因,利用PCR扩增方法获得了1条总长为3 781 bp基因序列,其中包含了1个3 414 bp开放读码框,其编码蛋白由1138个氨基酸残基组成,与Cry7Ab2具有99.65%序列同源性,存在4个氨基酸差异,亲缘关系最近,被Bt杀虫晶体蛋白命名委员会命名为Cry7Ab3(登录号为BI1015188)....
摘要:从河北省土壤中分离了一株苏云金杆菌WZ-9,通过对其生物学特性和杀虫活性的研究发现,该菌株对马铃薯瓢虫幼虫具有特异性高效杀虫活性,LC50为2.95×107细胞/mL;而对鳞翅目的菜青虫、棉铃虫、玉米螟、甜菜夜蛾、黄粉虫等几种重要害虫均无效....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:利用PCR-RFLP技术分析了自河北省土壤中分离的苏云金杆菌新菌株WZ-7,结果表明该菌株含有cry1、cry2Ab、cry1Ia1型基因,其中cry1型基因的酶切片段类型不同于已发表的基因类型,有可能含有新的基因.SDS-PAGE分析结果出现130、79、73、66、60、58 kD左右的6种晶体蛋白,毒素蛋白类型属于II型.室内生测结果显示,该菌株对重要的农业害虫棉铃虫、甜菜夜蛾、小菜蛾、菜青虫、玉米螟等均有较高的杀虫毒力....
[专利] 发明专利 CN201910760641.X
河北农业大学 2019-11-05
摘要:本发明公开了一种用于桑葚物种鉴定的特异性DNA区段和引物。所述DNA区段的基因序列如序列表SEQ ID NO:1所示,所述PCR引物为SS05‑F、SS05‑R,荧光定量PCR和数字PCR引物和探针分别为SS05‑QF,SS05‑QR,SS05‑QP,其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明利用了定性PCR技术、实时荧光PCR技术以及数字PCR技术,建立一套桑葚物种特异性定性及定量的检测方法,并针对桑葚纯果汁及桑葚果汁掺杂其他水果的源性成分的情况,建立了桑葚成分较为精准的定性和定量的检测方法。
[专利] 发明专利 CN201910760640.5
河北农业大学 2019-11-05
摘要:本发明公开了一种用于樱桃物种鉴定的特异性DNA区段、引物和探针。所述DNA区段的基因序列如序列表SEQ ID NO:1所示,所述PCR引物为C36‑F、C36‑R,所述荧光定量PCR和数字PCR引物和探针为C36‑QF、C36‑QR、C36‑QP,核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明利用了定性PCR技术、实时荧光PCR技术以及数字PCR技术,建立一套樱桃物种特异性定性及定量的检测方法,并对樱桃纯果汁及含樱桃等多种不同水果混合果汁,建立了较为精准的樱桃物种定性和定量的检测方法。
摘要:针对食品中樱桃成分的检测,应用生物信息学方法,对樱桃、苹果、中国白梨等13种常见水果的41套基因组进行BLAST序列比对得到樱桃的特异性序列,再进行NCBI-BLAST比对,从中挑选出最好的3条序列设计引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,经验证cherry3-F/R的扩增效果最优.对cherry3-F/R引物浓度在0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μmol/L,退火温度在52、54、56、58、60、62℃进行引物浓度和退火温度的优化,从而确定最佳的引物浓度为0.4 μmol/L,最佳的退火温度为58℃,利用优化后的体系能快速准确地检测出鲜榨果汁中的樱桃成分.此方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、结果直观等优点,有利于国家标准的完善,从而为食品检测提供依据....
摘要:为探索建立基因编辑农产品的检测方法,本研究以猪MSTN基因定点编辑位点为靶标,通过设计PCR-焦磷酸测序引物、优化测序碱基次序、构建标准曲线等步骤,建立基于焦磷酸测序技术的基因编辑产品定性和定量检测方法.结果 表明,该方法能够准确检测出MSTN基因第3外显子的AG缺失位点,具备基因分型定性判定和等位基因频率定量检测的功能,从而准确检测样品是否为MSTN基因编辑猪产品,以及样品基因编辑产品的含量....
摘要:研究建立了实时荧光环介导等温扩增技术(Real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RFLAMP)检测沙门氏菌(Salmonella)的方法.针对沙门氏菌侵袭蛋白(Invasion protein A,invA)基因验证该方法特异性,同时对灵敏度和人工污染肉品的检出限进行测定.结果 表明,沙门氏菌呈阳性结果,非沙门氏菌均呈阴性结果.该方法检测纯菌的灵敏度为56 CFU/mL,人工污染肉品的检出限为5.6×104 CFU/g.该方法特异性强、灵敏度高,可实时检测沙门氏菌,实现了对沙门氏菌的快速检测....
[专利] 实用新型 CN201720450129.1
河北农业大学 2017-11-28
摘要:本实用新型公开了一种纵向旋转开沟刀辊,包括刀座、开沟刀、螺旋板、六方管;所述刀辊包括8组轴向对称刀座、16把开沟刀、1组螺旋板,各组刀座采用每圆周方向旋转60°轴向增加70mm的方式对称焊接在六方管上,所述开沟刀通过螺栓固定在刀座上,所述螺旋板采用双螺旋焊接在六方管上且螺旋起点为端点两刀座中点,螺旋板回转直径取1/2刀辊直径值,该刀辊使纵向旋转开沟装置功耗小、结构简单、开沟效果好、使用方便。
[专利] 实用新型 CN201720141495.9
河北农业大学 2017-10-13
摘要:本实用新型公开了一种可调式圆盘开沟装置,包括刮土板、开沟圆盘、加强肋、左右同步伸缩液压缸、平行四杆机构、液压缸、液压马达、齿轮箱,所述平行四杆机构包括固定架、连接杆、活动架,固定架安装在外部工作车架上,活动架与刮土板、加强肋焊接在一起,平行四杆机构一侧安装有调节活动架升降的液压缸,开沟圆盘前端与液压马达轴向连接在一起,开沟圆盘后端通过销轴与活动架连接,开沟圆盘上端铰接左右同步伸缩液压缸,液压马达通过法兰盘与活动架连接。该装置使的圆盘开沟深度和宽度可调,适应性强,满足不同农艺要求。
[专利] 实用新型 CN201621449176.6
河北农业大学 2017-07-18
摘要:本实用新型公开了一种蒲草收割船,包括平行四杆机构、割台、分禾机构、扶禾机构、割刀、液压控制系统、纵向输送机构、横向输送机构、明轮、船体;船体前方右侧放置纵向输送机构,输送机构前方安装一组控制输送机构升降的液压缸,后端安装有驱动输送带的液压马达,船体前方左侧有割台,割台主要由扶禾机构、分禾机构、横向输送机构、液压缸、割刀、割台固定架等组成,割台固定架与船体通过平行四杆机构连接,固定架下方有两组液压缸,分别与扶禾架和割刀架连接,扶禾架前端安装有分禾机构,中间有扶禾机构,后端固定有横向传送结构,横向传送机构由输送链、液压马达、拨轮等组成,扶禾机构后端有调节倾角液压缸。该收割船使得蒲草收割连续、摆放整齐、收割灵活、满足不同水深、符合市场需求。
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