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[硕士论文] 王桂萍
细胞生物学 山东师范大学 2016(学位年度)
摘要:雌性哺乳动物生殖生物学研究内容包括:卵巢发育、卵子发生、受精、胚胎发育和着床以及妊娠维持等多个过程,这些过程受到多个基因和信号分子的严密调控。非洲爪蟾激活素信号转导者1(Xenopus forkhead activin signal transducer1,xFAST1)是发现的第一个Smad蛋白转录协助者。FAST2是FAS相关蛋白在小鼠中的同系物,属于叉头框(forkhead box,Fox)蛋白家族,由foxh1基因编码。FAST2主要在胚胎发育的早期阶段表达,在原肠胚形成、前脑和心脏等发育过程中发挥重要功能。foxh1缺失小鼠的胚胎中线结构、前端原条、节点、脊索中胚层、脊索和内胚层等无法正常形成。但是对于FAST2在小鼠卵巢及着床前胚胎发育中的功能还不甚了解。在本实验中,我们以新生雌性小鼠卵巢、外源促性腺激素诱导的未成熟雌性小鼠卵巢、美洛昔康(meloxicam,MEL,前列腺素合成酶2活性抑制剂)处理的外源促性腺激素诱导的未成熟雌性小鼠卵巢、GV期卵母细胞和着床前胚胎为研究对象,利用免疫组织化学技术和免疫印迹等实验方法,研究FAST2在小鼠卵巢卵泡和着床前胚胎发育过程中的表达。
  免疫组化结果显示,FAST2表达在出生后1天小鼠卵泡卵母细胞和出生后第8天卵母细胞和膜细胞中,并且在随后不同时间点卵泡卵母细胞和膜细胞中持续表达,但是在颗粒细胞中表达为阴性。在外源促性腺激素(PMSG和hCG)诱导卵泡成熟和排卵过程中,FAST2定位在PMSG24 h和PMSG48 h有腔卵泡和成熟卵泡卵母细胞、膜细胞以及hCG24 h排卵后形成的新生黄体中。伴随着黄体退化(hCG48 h和hCG72 h),FAST2表达量降低。免疫印迹分析显示,FAST2在PMSG24 h到hCG24 h阶段(卵泡成熟排卵并黄体形成阶段)维持高水平表达,在hCG48 h和hCG72 h黄体退化阶段表达量显著减少,这与免疫组化结果相符。用美洛昔康处理外源促性腺激素诱导的未成熟雌性小鼠卵巢, HE染色结果显示,在hCG注射后的18 h、24 h和36 h,对照组中形成许多黄体,而MEL处理组排卵受到抑制,在完整卵泡中出现黄体化颗粒细胞和滞留的卵母细胞。免疫组化结果显示,FAST2定位在对照组黄体和MEL处理组卵泡膜细胞、黄体化颗粒细胞和滞留的卵母细胞中。免疫印迹结果显示,FAST2在两组中的表达量没有显著性差异。共聚焦结果显示,FAST2在除核仁以外的整个GV期卵母细胞中表达,在胚胎早期1-8细胞阶段的表达模式和GV期卵母细胞相似。在随后发育阶段中,FAST2表达在桑椹胚和囊胚内细胞团的细胞质中。
  综上所述,FAST2可能在卵泡发育成熟、排卵、黄体化及着床前胚胎发育过程中发挥重要作用。
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